糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白1基因表达的影响

为探讨糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞表达单核细胞趋化蛋白 1基因的影响 ,体外分离培养大鼠主动脉平滑肌细胞 ,然后用不同浓度葡萄糖 (0、5、2 0、5 0和 80mmol L)制备的糖基化终产物 BSA(2 0 0mg L)干预 2 4h和用葡萄糖浓度为 5 0mmol L孵育的糖基化终产物 BSA干预 0、12、2 4和 36h ,逆转录聚合酶链反应检测细胞中单核细胞趋化蛋白 1mRNA表达水平。结果发现 ,葡萄糖浓度 2 0mmol L、5 0mmol L和 80mmol L孵育的糖基化终产物都增加单核细胞趋化蛋白 1mRNA的表达 ,其中 5 0mmol L组作用最明显 (P <0 .0 0 5 ) ,干预 12h、2 4h、36h后单核细胞趋化蛋白 1mRNA表达均较未干预组明显增加 (P <0 .0 0 1)。结果提示 ,糖基化终产物促进大鼠主动脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白 1基因的表达     

糖基化终产物对平滑肌细胞增殖及纤溶酶原激活物抑制剂1基因表达的影响

目的探讨糖基化终产物对大鼠平滑肌细胞增殖以及纤溶酶原激活物抑制剂1基因表达的影响。方法体外分离培养大鼠平滑肌细胞,以不同浓度(50、100、200和400mg/L)糖基化终产物作用于平滑肌细胞不同时间(0、4、8、16、24、48、72和96h),MTT法观察糖基化终产物对平滑肌细胞增殖的影响,逆转录聚合酶链反应测定纤溶酶原激活物抑制剂1基因的表达。结果不同浓度的糖基化终产物作用8h均对平滑肌细胞增殖无影响,以后各时间点不同浓度的糖基化终产物均导致平滑肌细胞增殖,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。糖基化终产物作用不同时间均可使平滑肌细胞表达纤溶酶原激活物抑制剂1基因水平升高,且随着浓度升高而增加(分别为0.85±0.05、0.97±0.05、1.08±0.12和1.41±0.05),与对照组(0.80±0.03)比较差异有显著性(P<0.05)。结论糖基化终产物诱导血管平滑肌细胞增殖并增加纤溶酶原激活物抑制剂1基因表达是糖尿病患者易患动脉粥样硬化的可能原因。     

糖基化终产物通过EMMPRIN/MMPs途径对Ⅰ型胶原代谢的影响

目的探讨糖基化终产物是否通过EMMPRIN/MMPs途径影响Ⅰ型胶原的代谢。方法利用小鼠成骨样细胞(MC3T3E1)和小鼠巨噬细胞(RAW264.7)构建共培养体系。应用AGE-BSA(50mg/L)、EMMPRIN抗体(5mg/L)、AGE-BSA+EMMPRIN抗体分别干预共培养体系24h,用ELISA法检测上清液中Ⅰ型胶原含量。不同浓度AGE-BSA(0、50、100、200、400mg/L)干预共培养细胞24h,收集细胞及上清液,用半定量RT-PCR法检测成骨细胞Ⅰ型胶原mRNA表达,用明胶酶谱法测定上清液中MMP-2和MMP-9的分泌量。结果加入AGE-BSA(50mg/L)干预后上清液中Ⅰ型胶原含量显著降低(P<0.05),EMMPRIN抗体使Ⅰ型胶原含量增加(P<0.05),EMMPRIN抗体+AGE-BSA组使Ⅰ型胶原水平显著增加(P<0.05)。不同浓度AGE-BSA干预共培养体系后,Ⅰ型胶原mRNA表达与对照组相比显著增加(P<0.05),且随AGE-BSA干预浓度增加而增加(P<0.05)。MMP-2、MMP-9分泌水平均较对照组显著增加(P<0.05),并随AGE-BSA干预浓度增加而增加(P<0.05)。结论在体外AGEs可增加成骨细胞Ⅰ型胶原的合成,同时促进Ⅰ型胶原的降解,提示AGEs可能通过打破Ⅰ型胶原合成与降解之间的平衡使降解多于合成,进而降低骨强度。     

体外制备的晚期糖基化终产物对内皮祖细胞数量的影响

目的观察体外制备的晚期糖基化终产物对内皮祖细胞数量的影响。方法人血清白蛋白与葡萄糖共同孵育90d后,行Bradford检测法蛋白定量和荧光值测定。从正常成人外周血中分离提取单个核细胞,培养7d后,流式细胞仪鉴定细胞表型,分别加入浓度为2mg/L、20mg/L和200mg/L的晚期糖基化终产物并设置对照组,干预不同的时间(0h、24h、48h和72h),200倍光学显微镜下随机取10个视野计数。结果该方法制备的晚期糖基化终产物具有荧光性。细胞培养7d,CD34/CD133/KDR单克隆抗体流式细胞仪鉴定细胞,结果发现表达KDR达78.60%±2.20%、CD34为8.60%±2.00%和CD1332.80%±0.60%,提示大部分细胞为内皮祖细胞。以不同时间(0h、24h、48h和72h)和浓度(2mg/L、20mg/L和200mg/L)晚期糖基化终产物干预内皮祖细胞生长,对比0h组每个视野下细胞数量(186.0±6.7),干预24h细胞数量减少(146.67±4.98),72h降至最低(73.67±3.76)(P<0.001),呈现明显的时间效应(r=0.9658,P<0.01);终浓度为2mg/L或20mg/L晚期糖基化终产物干预内皮祖细胞72h后,与同时培养72h的对照组无显著差异(P>0.05),但随着浓度加大,浓度效明显(r=0.9988,P<0.01)。结论此方法制备的晚期糖基化终产物符合文献所述的特性,晚期糖基化终产物能抑制内皮祖细胞生长,具有时间效应和浓度效应。     

糖基化终末产物对大鼠平滑肌细胞钠/氢交换蛋白1活性的影响

目的 观察糖基化终末产物对大鼠血管平滑肌细胞钠/氢交换蛋白1活性的影响.方法 采用组织贴块法原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞.用体外制备的外源性糖基化终末产物和血管平滑肌细胞共孵育24 h,利用BCECF通过荧光分光光度计检测细胞上钠/氢交换蛋白1活性.结果 不同浓度糖基化终末产物(1、5和10mg/L)与血管平滑肌细胞共孵24 h后,能显著增强钠/氢交换蛋白1的活性,分别使钠/氢交换蛋白1的活性从0.66±0.05升高至0.71±0.03、0.80±0.07和0.88±0.06(P<0.05或P<0.01),使钠/氢交换蛋白1 mRNA表达从0.77±0.07分别升高至0.88±0.08、1.23±0.06和1.33±0.08(P<0.05或P<0.01);预先使用糖基化终末产物受体阻断剂5 mg/L,钠/氢交换蛋白1活性比糖基化终末产物处理组明显降低(0.68±0.04比0.90±0.05,P<0.05);使用不同浓度的丝裂原活化蛋白激酶阻断剂PD98059(1、10和25 μmol/L),使钠/氢交换蛋白1活性从0.94±0.05分别降至0.86±0.06、0.74±0.05和0.66±0.07(P<0.05或P<0.01).结论 外源性糖基化终末产物能诱导血管平滑肌细胞上钠/氢交换蛋白1活化,其机制可能与糖基化终末产物激活糖基化终末产物受体,引起丝裂原活化蛋白激酶信号通路活化有关.     

糖基化终末产物对活化肝星状细胞合成前胶原及致纤维化细胞因子的影响

目的探讨不同浓度的糖基化终末产物（AGEs）对肝星状细胞（HSC）活性的影响。方法体外合成糖基化牛血清白蛋白（AGE-BSA）,以不同浓度的AGE-BSA刺激HSC,观察AGE受体（RAGE）、转化生长因子（TGFβ1）,结缔组织生长因子（CTGF）、Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA;ELISA法检测细胞上清液TGFβ1及Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白的水平。结果高浓度的AGE-BSA（100μg/ml）培养24 h便能促进RAGE、TGFβ1、CTGF和Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达,并随着时间延长而升高,细胞上清液蛋白水平有同样改变。结论一定浓度的AGEs能促进HSC前胶原及致纤维化细胞因子的表达,并呈时效性改变。AGEs对肝纤维化可能起到促进作用。     

肝细胞生长因子对糖基化终产物诱导内皮细胞凋亡的影响

目的探讨糖基化终产物对内皮细胞的凋亡作用,以及肝细胞生长因子对内皮细胞凋亡的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,予不同浓度糖基化终产物及肝细胞生长因子干预,分为实验对照组及100 mg/L、200mg/L4、00 mg/L糖基化终产物组和400 mg/L糖基化终产物 100μg/L肝细胞生长因子组,采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定各组内皮细胞生长抑制率,通过吖啶橙荧光染色观察细胞形态学变化,流式细胞术测定Annexin V-FITC/PI双染标记的细胞凋亡率,检测肝细胞生长因子对糖基化终产物诱导内皮细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹法分析各组凋亡基因Bax、Bcl-2蛋白的表达及酶联反应法测定细胞凋亡蛋白酶3的活性。结果肝细胞生长因子能明显降低糖基化终产物对内皮细胞生长的抑制作用(P<0.01);糖基化终产物诱导培养的内皮细胞出现明显的凋亡形态学改变,在一定浓度范围内,内皮细胞凋亡率与糖基化终产物的浓度和作用时间呈依赖关系,肝细胞生长因子干预后可显著降低不同时间的内皮细胞凋亡率(P<0.05);肝细胞生长因子作用内皮细胞抗凋亡基因Bcl-2表达明显升高(P<0.01),而促凋亡基因Bax表达无明显变化(P>0.05);细胞凋亡蛋白酶3活性显著降低(P<0.05)。结论糖基化终产物诱导人内皮细胞凋亡,而肝细胞生长因子抑制糖基化终产物诱导的内皮细胞凋亡,其作用机制可能是上调抗凋亡基因Bcl-2水平、抑制细胞凋亡蛋白酶3的激活。     

糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α表达的影响

目的　探讨糖基化终产物 (AGEs)对大鼠主动脉平滑肌细胞巨噬细胞炎性蛋白 1α(MIP 1α)mRNA及蛋白表达的影响。　方法　将培养的大鼠主动脉平滑肌细胞用不同浓度 (10 0、2 0 0、4 0 0mg/L)的AGEs孵育 2 4h及同一浓度 (4 0 0mg/L)AGEs孵育 0、12、2 4、36h ,采用RT PCR方法及流式细胞仪检测MIP 1αmRNA及蛋白的表达水平。　结果　对照组平滑肌细胞内MIP 1α呈弱表达 ,10 0、2 0 0、4 0 0mg/LAGEs培养平滑肌细胞 2 4h显著增高MIP 1αmRNA的表达 ,其电泳条带相对积分吸光度值分别为对照组的 1 36、1 75、2 4 5倍 (P <0 0 5 ) ;10 0、2 0 0、4 0 0mg/LAGEs孵育2 4h后 ,各组平滑肌细胞MIP 1α蛋白的平均荧光强度分别为 197± 3、2 6 0± 6及 375± 6 ,分别为对照组(15 8± 4 )的 1 2 4、1 6 3、2 37倍 (P <0 0 5 )。 4 0 0mg/LAGEs培养 12、2 4、36h后 ,各组平滑肌细胞MIP 1αmRNA的表达也明显增高 ,其电泳条带相对积分吸光度值分别为 0h组的 1 5 2、2 38、2 5 3倍(P <0 0 5 ) ;4 0 0mg/LAGEs孵育 12、2 4、36h后 ,各组平滑肌细胞MIP 1α蛋白的平均荧光强度分别为 2 4 4± 5、375± 6及 4 2 5± 3,分别为 0h组 (170± 5 )的 1 4 3、2 2 1、2 4 9倍 (P <0 0 5 )。　结论　糖基化终产物以时间及剂量     

糖基化终产物对人血管内皮细胞过氧化体增殖物激活型受体γ基因表达的影响

为探讨糖基化终产物对人血管内皮细胞表达过氧化体增殖物激活型受体γ基因的影响 ,体外培养人血管内皮细胞株 (ECV30 4 ) ,分别用不同浓度葡萄糖 (0、2 0、5 0和 80mmol L)孵育的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白(2 0 0mg L)、不同浓度的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白 (5 0、10 0、2 0 0和 4 0 0mg L)干预 2 4h和葡萄糖浓度为 5 0mmol L孵育的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白干预细胞 0、12、2 4、36、4 8和 72h ,逆转录聚合酶链反应检测细胞中过氧化体增殖物激活型受体γmRNA的表达水平。结果发现 ,葡萄糖浓度为 2 0、5 0和 80mmol L孵育的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白及浓度为 5 0、10 0、2 0 0和 4 0 0mg L的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白都减少过氧化体增殖物激活型受体γmRNA的表达 (P <0 .0 0 1) ,干预 12、2 4、36、4 8和 72h后过氧化体增殖物激活型受体γmRNA表达均较未干预组明显减少 (P <0 .0 0 1)。此结果提示 ,糖基化终产物可抑制人血管内皮细胞过氧化体增殖物激活型受体γ基因的表达。     

糖基化终产物对小鼠巨噬细胞基质金属蛋白酶诱导物表达、分泌及基质金属蛋白酶9活性的影响

目的 探讨糖基化终产物对小鼠巨噬细胞基质金属蛋白酶诱导物表达、分泌及基质金属蛋白酶9活性的影响.方法在培养的小鼠巨噬细胞株(J774A.1)中分别加入不同浓度(50、100、200及400 mg/L)的糖基化终产物干预24 h和同一浓度(200 mg/L)的糖基化终产物干预12、24及48 h,以无血清培养基和相应浓度的牛血清白蛋白为对照.用逆转录聚合酶链方法检测基质金属蛋白酶诱导物mRNA的表达,用酶联免疫吸附法检测上清中基质金属蛋白酶诱导物蛋白水平,用酶谱法检测上清中基质金属蛋白酶9的活性.结果 糖基化终产物干预组的基质金属蛋白酶诱导物mRNA表达水平和上清中蛋白水平与对照组比较差异有显著性,且随时间和浓度增加而增加(P<0.05).糖基化终产物干预组的上清中基质金属蛋白酶9的活性与对照组比较差异有显著性,且随时间和浓度增加而增加(P<0.05).结论 糖基化终产物促进小鼠巨噬细胞基质金属蛋白酶诱导物mRNA表达、蛋白分泌及基质金属蛋白酶9的活性;提示糖基化终产物可能通过调节巨噬细胞基质金属蛋白酶诱导物表达、分泌及基质金属蛋白酶9的活性而影响糖尿病动脉粥样硬化斑块的稳定性.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ对糖基化终产物诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

目的观察吡格列酮对糖基化终产物（AGEs）刺激下大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的作用及对过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）基因及蛋白表达水平的影响,探讨PPARγ在AGEs诱导VSMCs增殖中的作用。方法（1）MTY法观察不同浓度、不同时间的AGEs对VSMCs增殖的影响及吡格列酮（1．0、10、100μmol／L）与AGEs共孵育对VSMCs增殖的干预作用。（2）用半定量逆转录聚合酶链反应测定VSMCs中PPARγ mRNA的表达。（3）用Western blot法检测PPARγ的蛋白表达。结果AGEs作用导致VSMCs增殖,AGEs抑制PPARγ mRNA和蛋白表达水平,这种抑制作用随着AGEs干预的时间延长和浓度的增加而增强（P〈0．05）。PPARγ激活剂吡格列酮通过增加PPARγ的表达,抑制AGEs诱导的VSMCs增殖。结论PPARγ表达的下降可能是糖尿病易患动脉粥样硬化的重要原因之一。     

Endothelin-1, via ETA receptor and independently of transforming growth factor-beta, increases the connective tissue growth factor in vascular smooth muscle cells

Endothelin (ET)-1 is a potent vasoconstrictor that participates in cardiovascular diseases. Connective tissue growth factor (CTGF) is a novel fibrotic mediator that is overexpressed in human atherosclerotic lesions, myocardial infarction, and experimental models of hypertension. In vascular smooth muscle cells (VSMCs), CTGF regulates cell proliferation/apoptosis, migration, and extracellular matrix (ECM) accumulation. Our aim was to investigate whether ET-1 could regulate CTGF and to investigate the potential role of ET-1 in vascular fibrosis. In growth-arrested rat VSMCs, ET-1 upregulated CTGF mRNA expression, promoter activity, and protein production. The blockade of CTGF by a CTGF antisense oligonucleotide decreased FN and type I collagen expression in ET-1-treated cells, showing that CTGF participates in ET-1-induced ECM accumulation. The ETA, but not ETB, antagonist diminished ET-1-induced CTGF expression gene and production. Several intracellular signals elicited by ET-1, via ETA receptors, are involved in CTGF synthesis, including activation of RhoA/Rho-kinase and mitogen-activated protein kinase and production of reactive oxygen species. CTGF is a mediator of TGF-beta- and angiotensin (Ang) II-induced fibrosis. In VSMCs, ET-1 did not upregulate TGF-beta gene or protein. The presence of neutralizing transforming growth factor (TGF)-beta antibody did not modify ET-1-induced CTGF production, showing a TGF-beta-independent regulation. We have also found an interrelationship between Ang II and ET-1 because the ETA antagonist diminished CTGF upregulation caused by Ang II. Collectively, our results show that, in cultured VSMCs, ET-1, independently of TGF-beta and through the activation of several intracellular signals via ETA receptors, regulates CTGF. This novel finding suggests that CTGF could be a mediator of the profibrotic effects of ET-1 in vascular diseases.     

重组腺病毒介导的人p27kip1基因高表达对体外培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞迁移的影响

目的　探讨重组腺病毒介导的p2 7kip1基因及其蛋白产物高表达对血管平滑肌细胞 (VSMCs)迁移的抑制作用。方法　将含人p2 7kip1cDNA的重组腺病毒 (Adhp2 7kip1)及含 β 半乳糖苷酶基因的重组腺病毒 (AdLacZ)在体外转染原代大鼠主动脉VSMCs,用Westernblot及Boyden趋化小室检测外源性p2 7kip1蛋白在细胞内的表达及对VSM Cs迁移的影响。结果　转染后 2 4h ,Adhp2 7kip1转染的VSMCs内p2 7kip1蛋白高表达 ,而AdLacZ转染的VSMCs内仅显示极低水平的内源性p2 7kip1蛋白表达 ;Boyden趋化小室检测显示未转染的VSMCs、AdLacZ及Adhp2 7kip1转染的VSMCs血清诱导后的迁移细胞数分别为 139± 2 6、10 6± 16及 6 8± 14。结论　外源性p2 7kip1基因及蛋白产物在VSMCs内高表达可显著抑制VSMCs的迁移     

高血压对大鼠血管平滑肌细胞结缔组织生长因子表达水平的影响及其意义

目的:探讨大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)结缔组织生长因子(CTGF)表达水平在高血压血管重构中的变化及其意义。方法:以4周龄及16周龄的自发性高血压大鼠(SHR)为模型,以相同周龄的Wistar-Kyoto(WKY)大鼠为正常对照,采用tail cuff法测量SHR及WKY大鼠尾动脉收缩压。开胸后分离胸主动脉,分别测量胸主动脉中层厚度(M)和管腔内径(L),并计算二者的比值(M/L)。应用免疫荧光技术结合激光共聚焦显微镜观察,对CTGF的表达进行定位及定量检测。采用Western blot分析和实时定量RT-PCR,检测不同周龄的SHR主动脉组织内CT-GF、III型胶原(Col III)蛋白及其mRNA的表达。结果:4周龄SHR主动脉M、L、M/L以及ColⅢ蛋白与mRNA表达水平较同龄的WKY相比,均无显著性差异;但CTGF蛋白及mRNA表达水平均明显增高(P<0.05)。16周龄的SHR与同龄的WKY大鼠相比,胸主动脉的M无明显变化;而L显著增高,M/L显著降低(P<0.01);CTGF和ColⅢ的表达亦显著升高(P<0.01)。结论:实验结果提示,异常的血流动力学因素可调节VSMCs中CTGF的表达,从而引起细胞外基质释放增加,导致血管重构的发生。     

血管紧张素II介导的大鼠血管平滑肌细胞STAT1激活与核转位

目的检测血管紧张素II（Ang II）介导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖过程中信号转导和转录活化因子-1（STAT1）的激活与核转位。方法本文采用Western印迹、非同位素凝胶电泳（EMSA）和免疫荧光染色的方法,观察Ang II刺激大鼠主动脉VSMC前后,细胞中STAT1的活化状态与定位。结果VSMC经Ang II干预后,胞内磷酸化的STAT1（p-STAT1）蛋白表达增加（P<0.01）,达峰后随时间梯度逐渐下降,Ang II干预15 min后检测到胞核内有蛋白-DNA复合物形成。这一反应可被血管紧张素II 1型受体（AT1）阻滞剂Losartan以及Jak2抑制剂AG490抑制（P<0.01）。免疫荧光染色结果也显示Ang II干预后p-STAT1主要在胞核内表达。结论Ang II可以通过和AT1受体结合,激活Jak/STAT通路,在Ang II介导的大鼠VSMC增殖过程中发挥作用。     

结缔组织生长因子腺病毒载体的构建及其对血管平滑肌细胞迁移的影响

目的构建结缔组织生长因子(CTGF)腺病毒载体并观察其对血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移的影响。方法将CTGF基因整合入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,构建重组穿梭质粒pAdTrack-CTGF,线性化后与pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,获得含目的基因的重组体质粒pAd-CTGF,酶切后用转染HEK293细胞包装成重组体腺病毒Ad-CTGF,扩增和纯化后PCR鉴定。应用Ad-CTGF感染VSMCs,划痕实验观察上调CT-GF表达对VSMCs迁移的影响。结果 Ad-CTGF感染HEK293细胞后,随时间增加HEK293细胞表达绿色荧光的量也增加。PCR鉴定重组腺病毒Ad-CTGF电泳结果显示,1 047 bp附近有一条带,与目的片段相符合,CTGF碱基序列经测序正确。Ad-CTGF感染VSMCs后CTGF高表达,创口愈合指数明显提高,VSMCs迁移受到明显提升。结论成功构建了携带CTGF基因的重组腺病毒载体,上调CTGF表达可以明显增加VSMCs的迁移能力。     

全反式维甲酸对培养的大鼠动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究全反式维甲酸(ATRA)对培养的大鼠动脉平滑肌细胞(VSMCs)的影响。方法 血管平滑肌细胞采用组织贴块法培养。ATRA(2.5×10-6mol/L)分别作用于经PDGF—BB(10 ng/ml)和20％FCS刺激后的VSM—Cs,作用24h后分别行3H—TdR,3H—Leucine掺入实验测定。结果 ATRA明显抑制由PDGF—BB(10ng/ml)和20％FCS促进的VSMCs的DNA和蛋白质合成。结论ATRA具有抑制VSMCs增殖的作用。     

Modulation of CD36 protein expression by AGEs and insulin in aortic VSMCs from diabetic and non-diabetic rats

Background and aimIn type 2 diabetes, the interplay between cells and inflammatory mediators up-regulates CD36 expression in macrophages. The aim of this work was to investigate advanced glycation end products (AGE)-induced CD36 expression and its regulation by insulin in aortic vascular smooth muscle cells (VSMCs) from Goto–Kakisaki (GK) rats, a non-obese insulin model of both insulin resistance and type 2 diabetes. The context of overexpression of CD36 in aortas was also evaluated.Methods and resultsVSMCs were isolated and cultured from the aortas of GK rats and non-diabetic rats. The expression of proteins was evaluated by Western blot. The aortic production of superoxide anion (O₂^·−) was measured by luminescence on isolated tissue. AGEs and advanced oxidation protein products (AOPPs) were determined in plasma by fluorescence spectroscopy and spectrophotometry, respectively.AGE receptor (RAGE), NF-κB, and CD36 protein expression as well as O₂^·− production were higher in GK aortas than in control aortas, and AGEs and AOPPs were higher in GK plasma. In VSMCs from non-diabetic rats, insulin was able to reduce (10 nM) or suppress (100 nM) the protein overexpression of CD36 induced by AGEs–BSA. In contrast, in VSMCs from GK rats, insulin was unable to reduce AGEs–BSA-induced CD36 overexpression.ConclusionsThe results suggest an overexpression of CD36 in VSMCs from GK rats and impaired control by insulin. In the context of increased plasma AGEs, aortic RAGE overexpression and increased oxidative stress markers, the data are compatible with an AGEs induced CD36 overexpression in diabetes.     

全反式维甲酸对血管平滑肌细胞增生和细胞周期素依赖激酶抑制蛋白P27蛋白表达的影响

目的：探讨全反式维甲酸对细胞周期素依赖激酶抑制蛋白P27蛋白表达，血管平滑肌细胞DNA合成和增生的影响。方法：取Wistar大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞培养，用^3H—TdR掺入率检测血管平滑肌细胞DNA合成和增生，用western—blotting印迹和图像分析方法检测细胞周期素依赖激酶抑制蛋白P27蛋白表达。结果：全反式维甲酸（2．5μmol／L）明显抑制胎牛血清（20％FBS）诱导的血管平滑肌细胞P27蛋白表达；全反式维甲酸明显抑制胎牛血清诱导的血管平滑肌细胞增生和DNA合成。结论：全反式维甲酸具有抗血管平滑肌细胞增生作用，其机制与促进P27蛋白表达有关。