大鼠心肌细胞培养方法的改良及PE诱导心肌肥大

心肌肥大是指心室体积和重量的增加，是心肌细胞对外界环境改变的一种适应性反应，可在短时问内增加心输量、提高泵血功能，使机体适应外界环境的变化。但心肌细胞持续肥大，会导致心肌收缩力下降，最终引起心力衰竭。心肌肥大作为心血管疾病中危害人类健康的主要因素之一，探讨其发病机制，对于预防和治疗心肌肥大具有重要意义。大鼠心肌细胞对于研究心肌肥大非常重要，可使某种单个影响因素只作用于相互分离的心肌细胞，简化研究系统的复杂性。这对于研究治疗心肌肥大药物的药理学作用极其重要，有利于深入研究其药理学方面的分子机制，为今后的临床应用提供有力证据。现今研究者多数是使用胰酶消化液多次反复消化来分离心肌细胞。该方法由于胰酶对心肌细胞有很大损伤，影响了心肌细胞的生长。使用胶原酶替代胰酶进行大鼠心肌细胞消化提取，可获得具有较高细胞活力的心肌细胞。     

吡格列酮体外对大鼠心肌肥大的改善作用

目的　探讨噻唑烷二酮 (TZD)类药物吡格列酮在体外对心肌肥大的影响。方法　新生大鼠的原代培养心肌细胞和非心肌细胞 ,以血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )刺激建立体外心肌肥大模型 ,并用不同浓度的吡格列酮作用细胞。采用RT PCR法检测心肌肥大特征性基因心钠肽 (ANP)和脑钠肽(BNP)的mRNA表达 ,以MTT比色法和3 H TdR参入实验检测非心肌细胞增殖情况 ,以3 H 亮氨酸参入实验检测心肌细胞蛋白合成速率 ,并用软件分析心肌细胞表面积。结果　肥大模型出现后 ,心肌细胞表面积、ANP和BNP的mRNA表达以及蛋白合成速率增加 ;非心肌细胞增殖活跃 ,但ANP和BNP的mRNA表达没有变化。吡格列酮可以逆转这些变化 ,同时下调非心肌细胞的ANP和BNP的mRNA表达 ,并呈一定的剂量依赖性。结论　吡格列酮体外对大鼠心肌肥大有改善作用 ,预示着TZD类药物具有防治心肌肥大等心血管疾病的药理作用     

慢性心力衰竭心脏间质重塑

慢性心力衰竭(CHF)是各种心脏疾病终末阶段临床综合征，不同原因致心肌损害引起心肌结构和功能的变化，最终导致心脏泵血功能低下。心力衰竭是一种进行性病理过程，其发生发展的核心是心室重塑。多种神经内分泌和细胞因子的长期、慢性激活促进心室重塑，加重心肌损伤和心功能恶化。心肌细胞的肥大、凋亡，心肌收缩蛋白的结构、功能异常，钙转运异常研究资料较多，心脏间质重塑在心力衰竭中的作用近来日受关注。     

扩张型心肌病的病理形态特征及其临床意义

目的探讨扩张型心肌病的病理形态特征及其临床意义。方法对广东省普宁市华侨医院2005年至2010年期间收治的38例扩张型心脏病患者的临床资料进行分析,观察其光镜和超微结构下心肌活检的病理形态,探讨扩张型心肌病病理形态的临床意义。结果扩张型心肌病的患者,其心肌细胞发生肥大,并出现肥大的心肌细胞与萎缩的心肌细胞并存的现象;同时心肌细胞核的形态参数发生改变,也出现肥大、浓染和畸形核,与肿瘤细胞核的变化类似;细胞质出现疏松化,收缩带失去规律性;心肌间质发生纤维化,并随着病情进展纤维化程度逐渐加重;心肌细胞排列紊乱;平滑肌细胞增生并心内膜增厚。结论尽管目前认为病理学观察对扩张型心肌病的诊断缺乏特异性,但是其病理形态的变化可以反映心肌细胞损伤程度,对判断临床治疗效果及预后有重要的参考价值。     

阿托伐他汀对体外心肌细胞肥大的抑制作用

目的探讨阿托伐他汀体外抑制心肌肥厚的药理作用。方法体外培养新生大鼠的心室肌细胞,用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥厚模型,以不同浓度的阿托伐他汀作用于心肌细胞,用软件分析测量心肌细胞表面积,3H-亮氨酸参入法检测心肌细胞蛋白合成速率及使用RT-PCR半定量测定心钠素(ANP),脑钠素(BNP)和特异分布于心脏的丝氨酸蛋白酶(Corin)的表达变化。结果AngⅡ可成功诱导体外培养的新生大鼠心室肌细胞肥大,表现为心肌细胞面积和3H-亮氨酸的参入增加,ANP、BNP、Corin表达升高等特征性改变,从而分析阿托伐他汀对心肌肥厚的作用。阿托伐他汀可逆转上述变化并呈剂量依赖性,而作为溶剂的DM-SO对肥大的心肌细胞差异无显著性。结论阿托伐他汀抑制AngⅡ介导的体外心肌细胞肥大,预示其具有降脂以外的其他重要药理作用。     

先天性心脏病室间隔缺损心肌细胞超微结构与临床意义

目的 研究先天性心脏病室间隔缺损患者病理特征与临床相关性。方法 采用透射电子显微镜观察40例先天性心脏病室间隔缺损病人心肌细胞超微结构改变并摄片，结果 40例室缺心肌组织在心肌细胞直径、组织学及超微结构改变上表现为三类：肥大心肌、萎缩心肌和不肥大心肌。心肌肥大在早期，线粒体代偿性增加在晚期，其体现缩小。结论 提示先天性心脏病室间隔缺损尽早手术治疗是必要的。轻度退行性变，如缺氧状态解除，则组织结构能很快恢复，中度退行性变时，如缺氧状态解除，则组织结构恢复减缓。手术前电镜检查，可以评估病人术后心功能状况和远期疗效。     

化橘红对大鼠糖尿病心肌病的防治作用及其机制研究

目的探讨化橘红提取物(extract of exocarpium citri grandis)对链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠糖尿病心肌病的防治作用及其机制。方法 SD大鼠建立实验性2型糖尿病心肌病模型,随机分为模型对照组、化橘红高、中、低剂量治疗组、PPARγ激动剂吡格列酮治疗组(每组各15只),正常大鼠15只作为正常对照。观察不同剂量化橘红口服10、20、40mL/(kg·d)治疗对心肌结构功能损伤程度的影响;HE染色检测心肌组织结构改变,免疫印迹法检测心肌组织p 38 MAPK和cleaved caspase-3的表达,透射电镜观察心肌细胞超微结构。结果与正常对照组比较,模型组大鼠心脏组织心肌凋亡增多,HE染色可见心肌肥大、胶原沉积,心肌细胞超微结构损伤显著;化橘红干预组能减轻心肌凋亡、心肌肥大、胶原沉积等,同时能明显抑制p-p38 MAPK和cleaved caspase-3的表达。结论化橘红能防治糖尿病心肌病心肌结构功能损伤,其机制可能与抑制心肌p38 MAPK信号通路有关。     

血管紧张素Ⅱ致心肌肥大及机制

心肌肥大是一个适应性的生理过程,它可以引起呼吸困难、心绞痛、晕厥、头晕、心悸等症状.无论是血压还是血容量增加都会造成左心室的肥大(LVH),这种肥大是以心脏和血管结构改变以及心肌重建为特征的.左心室肥大过程中细胞的紊乱是心室组织两类主要细胞即心肌细胞和纤维原细胞改变引起的.大部分关于心肌肥大的研究,都常使用培养的新生大鼠心室细胞(NRVMs).在心脏病变过程中,心肌细胞的肥大使心脏变大,同时伴随着单个细胞的增大,使收缩蛋白质如肌球蛋白重链的含量增加,并使诸如编码心钠素(ANF)的胚胎基因等过度表达.     

κ受体激动剂对异丙肾上腺素诱导大鼠乳鼠心肌肥厚的作用机制研究

目的：利用体外培养的大鼠乳鼠心肌细胞,研究异丙肾上腺素（ISO）诱导肥大心肌细胞中κ阿片受体（κ-OR）的作用及其机制。方法：新生大鼠心肌细胞培养,Lowry’s法测心肌细胞的蛋白含量;用消化分离法,利用计算机图像分析系统测心肌细胞的体积;[3H]leucine掺入法测定心肌细胞蛋白的合成,Western blot法测细胞外信号调节激酶（ERK）磷酸化水平。结果：在给予ISO诱导心肌肥大的情况下,ERK通路抑制剂U0126可减少肥大心肌细胞的蛋白质含量、体积、蛋白合成和ERK磷酸化程度;κ-OR激动剂U50,488H（U50）能够减少肥大心肌细胞的蛋白含量、体积和蛋白合成,但与U0126共同作用时（U0126先孵育30min）,其抑制心肌肥大作用一定程度上减小。结论：ISO激活引起ERK磷酸化增加,抑制ERK可以阻断ISO的致肥大作用;κ-OR激活能够抑制ISO所诱导的心肌细胞肥大,其作用机制与ERK相关。     

黄芪多糖对异丙肾上腺素诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的保护作用

目的探讨黄芪多糖(APS)对异丙肾上腺素(isoprot-erenol,Iso)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的保护作用及机制。方法以原代培养乳鼠心肌细胞为模型,应用Iso 10μmol.L-1诱导心肌细胞肥大,观察不同浓度的黄芪多糖及L型钙通道阻滞剂维拉帕米(Verapamil,VER)对心肌肥厚的影响。用Lowry法测心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统测细胞体积;RT-PCR法检测心肌细胞ANP的mR-NA表达;以Fluo-3/AM为荧光探针,采用激光共聚焦显微镜观察细胞内[Ca2+]i的变化。结果 APS和VER均能够有效抑制Iso诱导的心肌细胞肥大,表现为蛋白质含量降低,体积减小,ANP mRNA表达降低和细胞内钙离子浓度降低,且APS的作用呈一定的剂量依赖性。结论黄芪多糖对Iso诱导乳大鼠心肌细胞肥大有保护作用,其机制可能与降低[Ca2+]i有关。     

短链脂酰辅酶A脱氢酶与心肌肥大关系的初步探索

目的研究心脏能量代谢脂肪酸β氧化过程中关键脱氢酶之一的短链脂酰辅酶A脱氢酶(short-chain acly-coen-zyme A dehydrogenase,SCAD)与心肌肥大之间的关系,探索治疗心血管疾病的新靶点。方法利用自发性高血压大鼠(spontaneous hypertension rats,SHR)和异丙肾上腺素皮下注射两种心肌肥大动物模型,以及苯肾上腺素(PE)刺激的心肌细胞肥大模型,检测SCAD在蛋白水平和mRNA水平上表达量的改变;并采用siRNA对SCAD进行干扰,观察对肥大分子指标的影响。结果以上动物模型和细胞模型中SCAD的蛋白表达水平都有明显的下降,mRNA水平表达量也有一定程度的下降。针对SCAD的siRNA干扰后可导致心肌细胞SCAD的表达明显下降,而肥大标记因子ANF、BNP的表达明显上调,进一步明确了SCAD与心肌细胞肥大的关系。结论心肌肥大时SCAD的蛋白水平和mRNA水平均明显下降,干扰SCAD后心肌细胞肥大指标上升,说明SCAD的下降可能参与心肌肥大的病理过程,上调SCAD有可能成为干预心肌肥大的重要环节之一。     

吡格列酮对糖尿病大鼠心肌肥厚的改善作用

目的探讨噻唑烷二酮(th iazolid ined ione,TZD)类药物吡格列酮对糖尿病大鼠心肌的保护作用。方法应用链脲佐菌素(streptozotoc in,STZ)诱导大鼠糖尿病模型后,吡格列酮组按20 mg.kg-1.d-1混入大鼠饮用水中。大鼠治疗5wk后,检测左心室重量指数(LVI)、心肌细胞面积及横径、心肌组织羟脯氨酸含量和胶原容积分数(CVF);行HE染色观察实质细胞肥大情况,MASSON染色观察胶原纤维增生情况;透射电镜观察心肌超微结构变化。结果吡格列酮组较糖尿病模型组LVI、心肌细胞面积及横径、左心室羟脯氨酸含量及CVF明显降低(P<0.05);光镜下,吡格列酮组较糖尿病模型组心肌实质细胞肥大和间质胶原蛋白增生程度都明显降低;电镜观察,糖尿病模型组心肌细胞明显肥大、间质胶原纤维大量增生、线粒体肿胀,吡格列酮组结构明显改善。结论吡格列酮对早期糖尿病大鼠心肌肥厚有改善作用。     

内源性中叶素可减轻血管紧张素Ⅱ诱导的乳鼠心肌细胞肥大

目的研究内源性中叶素(IMD)与心肌细胞肥大间的相互作用关系。方法血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)孵育乳鼠心肌细胞构建心肌肥大模型。应用Western blot及放射免疫法测定心肌细胞IMD产生和分泌,实时定量PCR(Real-timePCR)方法检测心肌细胞IMD及其受体系统降钙素受体样受体/受体活性修饰蛋白(CRLR/RAMPs)基因表达的变化。并以[3H]-亮氨酸([3H]-Leu)摄入及脑钠素(BNP)基因表达作为心肌细胞肥大的指标。结果 AngⅡ孵育下调心肌细胞IMD生成、表达,并影响其受体系统的基因表达。反过来,利用IMD抗体及其受体阻断剂阻断内源性IMD的生物学效应可增强AngⅡ诱导的心肌细胞肥大反应。结论内源性IMD及其受体系统参与了心肌肥大的发生、发展,对其生成、表达的干预有可能成为今后防治心肌细胞肥大的新途径。     

Nampt对ERK1/2的调控在病理性心肌肥大中的作用研究

目的研究烟酰胺磷酸核糖基转移酶(Nampt)调控细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)在病理性心肌肥大中的作用和机制。方法采用苯肾上腺素(PE)刺激原代心肌细胞24 h,在细胞水平上建立心肌细胞肥大模型;SD大鼠连续3周皮下注射ISO,或进行腹主动脉结扎(AAC)8周诱导心肌肥大或心衰模型。采用Western blot检测蛋白变化;RT-qPCR检测mRNA变化;采用质粒瞬时转染过表达Nampt;而加入干扰RNA降低其表达,或使用FK866来抑制其酶活性。结果在细胞水平成功建立心肌肥大模型,在整体动物水平成功诱导心肌肥大和心衰模型,均发现Nampt的mRNA和蛋白表达水平上调;过表达Nampt可缓解PE导致的NAD⁺含量降低、ERK1/2磷酸化水平增加及心肌细胞肥大反应;敲低Nampt或抑制其酶活性则显示相反的效应。结论Nampt可能通过上调NAD⁺并抑制ERK1/2磷酸化,从而发挥抗心肌肥大的作用。     

不同程度甲亢对妊娠后期母鼠心脏的影响

目的探讨不同程度甲亢对妊娠后期母鼠心脏的影响。方法通过建立不同程度的妊娠合并甲亢模型,于孕20d剖腹取出心脏,称重,取心室组织做石蜡切片,masson染色镜下观察并测量心肌细胞直径和心肌细胞长度。结果随着甲亢的病程加重,妊娠后期母鼠心肌肥大加重。结论甲亢对孕鼠心脏的影响与甲亢程度呈正相关。     

16例扩张型心肌病临床分析报道

目的探讨性分析扩张型心肌病的诊断与治疗效果。方法查找近1年来我院就诊的16例扩张型心肌病患者的临床资料,进行分析。结果扩张型心肌病的患者,其心肌细胞发生肥大,并出现肥大的心肌细胞与萎缩的心肌细胞并存的现象;同时心肌细胞核的形态参数发生改变,也出现肥大、浓染和畸形核,与肿瘤细胞核的变化类似。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大及p-ERK表达的影响

目的：观察丹参酮ⅡA磺酸钠（STS）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌肥大及p-ERK表达的影响。方法：培养新生大鼠心肌细胞，考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量、[H^3]-亮氨酸掺入法测定蛋白合成速率作为心肌肥大指标；用West—ern-blot测定p-ERK表达。结果：STS能显著降低AngⅡ诱导的心肌细胞总蛋白含量、蛋白合成速率上升，同时对p-ERK表达具有剂量、时间依赖性抑制作用。结论：STS可以抑制AngⅡ诱导的心肌肥大，机制与抑制p-ERK表达有关。     

腺苷对肿瘤坏死因子-α诱导乳鼠心肌细胞肥大及核因子-κB的影响

目的探讨腺苷对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis fac-tor,TNF-α)诱导心肌细胞肥大及核因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法以原代培养乳鼠心肌细胞为模型,应用TNF-α100μg.L-1诱导心肌细胞肥大,观察不同浓度腺苷对心肌肥大的影响。用考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量;RT-PCR检测心肌细胞心钠素(atrial natriuretic peptide,ANP)mRNA的表达;Western blot法检测心肌细胞p65和IκBα的蛋白含量;ELISA法检测细胞外液白介素-1β(IL-1β)的含量。结果腺苷能够有效抑制TNF-α诱导的心肌肥大,表现为蛋白含量减少,ANPmRNA表达降低,并且能抑制TNF-α诱导的NF-κB活化,表现为细胞内p65蛋白表达减少,IκBα蛋白表达增加和细胞外液IL-1β表达降低。结论腺苷对TNF-α诱导的心肌肥大有保护作用,可能与腺苷抑制心肌细胞NF-κB活化有关。     

参附注射液对慢性压力超负荷大鼠心功能、心肌组织及心肌细胞超微病理结构的影响

目的:研究参附注射液对慢性压力超负荷大鼠的血流动力学、左室重量、心肌组织病理学及心肌细胞超微病理结构的影响。方法:腹主动脉部分缩窄法制作慢性压力超负荷大鼠模型,多导生理记录仪检测血流动力学指标,苏木精-伊红检测心肌组织病理学变化,透射电镜观察心肌细胞超微结构变化。结果:腹主动脉部分缩窄后大鼠 LVSP 明显降低,LVEDP 显著升高,心肌组织结构变化明显,左室重量增加;应用参附注射液治疗4周后,慢性压力超负荷大鼠心肌细胞超微病理结构与组织病理学变化均较模型组有明显改善,与依那普利组病理学检测结果相似;参附组大鼠 LVSP 有一定程度的下降,与模型组有显著性差异(P<0.05),模型组与各治疗组 LVEDP 均有不同程度升高,但参附组及依那普利组与模型组相比有非常显著性差异(P<0.01)。结论:参附注射液能明显减轻腹主动脉部分缩窄后慢性压力超负荷引起的大鼠心肌组织超微结构及病理性改变,从一定程度上改善心肌重塑进程,纠正心脏收缩舒张功能障碍。     

心肌缺血不同阶段超微结构及肌红蛋白缺失的观察

本文应用透射电镜、免疫组化及形态计量分析方法，观察了失血性休克早期不同阶段兔心肌超微结构、肌红蛋白（Ｍｂ）含量的变化。结果发现：①心肌细胞间盘两侧心肌纤维呈特殊的区带性病变及细胞内、外水肿；②心肌细胞内Ｍｂ不同程度地缺失。本文还讨论了这些改变的发生机理及意义