PI3K抑制剂LY294002对鼠前脂肪细胞分化和C/EBPα及PPARγ表达的影响

目的：研究磷脂酰肌醇激酶（PI3K）抑制剂LY294002对小鼠前脂肪细胞分化和CCAAT增强子结合蛋白α（C/EBPα）及过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）表达的影响,探讨胰岛素受体底物（IRSs）/PI3K信号通路在前脂肪细胞分化中的作用。方法：小鼠3T3-L1细胞分为实验组和对照组,实验组加入LY294002（25 μmol/L）,对照组加入同体积DMSO。应用0.5 mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、10-6 mol/L地塞米松和5 μg/mL胰岛素诱导两组前脂肪细胞分化,在培养的0 d、2 d、4 d、8 d分别收集细胞,实时PCR法及Western blot法检测细胞中C/EBPα和PPARγ表达水平。培养8 d油红O染色,观察细胞分化情况。结果：小鼠3T3-L1细胞基础状态下两组C/EBPα及PPARγ表达差异无统计学意义（P＞0.05）;诱导分化时实验组C/EBPα及PPARγ表达低于对照组（分别P＜0.05,P＜0.01）。油红O染色示实验组细胞无明显脂滴。结论：PI3K抑制剂LY294002能抑制小鼠前脂肪细胞分化及C/EBPα和PPARγ的表达,提示IRSs/PI3K信号通路可通过调节PPARγ和C/EBPα的表达在3T3-L1前脂肪细胞的分化中发挥重要作用。     

Serabelisib抗人肝母细胞瘤HepG2细胞的作用及其机制探讨

目的探讨小分子抑制剂Serabelisib抑制PI3K-Akt信号通路活性及对人肝母细胞瘤细胞系增殖、凋亡的效应作用及其相关机制。方法采用不同浓度的小分子抑制剂Serabelisib(0μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L)处理人肝母细胞瘤细胞Hep G2细胞,通过四氮唑盐比色法检测Serabelisib对细胞增殖的抑制作用,采用流式细胞仪检测细胞凋亡变化情况,采用蛋白质免疫印迹检测Serabelisib处理后Hep G2细胞中PI3K信号通路活性及凋亡相关蛋白表达变化情况。结果当Serabelisib浓度≥4μmol/L时,对人肝母细胞瘤细胞系Hep G2细胞增殖具有显著抑制作用,随着Serabelisib浓度增加,其对Hep G2细胞增殖的抑制率逐渐增大,具有剂量和时间依赖性。随着Serabelisib浓度增加,Hep G2细胞凋亡率明显升高,同样具有剂量依赖性。蛋白质免疫印迹检测发现Serabelisib处理后的Hep G2细胞中PI3K信号通路中关键激酶Akt磷酸化水平降低,促凋亡蛋白PARP 89KD裂解片段表达增加。结论Serabelisib通过抑制PI3K/Akt信号转导通路,抑制人肝母细胞瘤Hep G2细胞增殖,并诱导凋亡。     

人参皂苷Rb1对川崎病小鼠冠状动脉损伤的作用

目的 探讨人参皂苷Rb1对川崎病（KD）小鼠模型冠状动脉损伤（CAL）的治疗作用及信号通路。方法 将BALB/C小鼠随机分为对照组、模型组、阿司匹林组、人参皂苷Rb1低剂量组（50 mg/kg）和高剂量组（100 mg/kg）,每组12只。除对照组外的其他各组均采用间断性腹腔注射10%牛血清白蛋白溶液进行造模;阿司匹林组、Rb1低剂量组和高剂量组分别在造模后给予相应药物灌胃20 d。苏木精-伊红染色观察冠状动脉组织病理变化;ELISA法检测各组小鼠血清和冠状动脉组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6和IL-1β等相关炎症因子;Western blot法检测各组小鼠冠状动脉组织中调控自噬信号通路（AMPK/mTOR）和氧化应激信号通路（PI3K/AKT）相关蛋白的相对表达水平。结果 病理切片结果显示,与模型组相比,高剂量Rb1显著改善了CAL小鼠的血管壁增厚、内膜水肿、纤维断裂和内皮细胞炎性浸润等症状。和对照组相比,模型组、Rb1低剂量组小鼠血清及冠状动脉组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均显著增加（P < 0.05）;模型组小鼠冠状动脉组织中P-AMPK/AMPK、P-mTOR/mTOR和P-P70S6/P70S6表达水平均显著增加（P < 0.05）;而模型组小鼠冠状动脉组织中P-PI3K/PI3K、P-AKT/AKT和P-GSK-3β/GSK-3β表达水平均显著下降（P < 0.05）。和模型组相比,阿司匹林组、Rb1高剂量组小鼠血清及冠状动脉组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均显著下降（P < 0.05）;Rb1低、高剂量组小鼠冠状动脉组织中P-AMPK/AMPK、P-mTOR/mTOR和P-P70S6/P70S6表达水平均显著下降（P < 0.05）,且两个剂量组之间有剂量依赖性（P < 0.05）;Rb1低剂量组小鼠冠状动脉组织中P-PI3K/PI3K表达水平差异无统计学意义（P > 0.05）,P-AKT/AKT和P-GSK-3β/GSK-3β表达水平增加（P < 0.05）,而Rb1高剂量组上述3种蛋白相对表达水平均显著增加（P < 0.05）。和Rb1低剂量组相比,阿司匹林组和Rb1高剂量组小鼠血清及冠状动脉组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均显著下降（P < 0.05）;Rb1高剂量组的P-PI3K/PI3K和P-AKT/AKT表达水平均显著增加（P < 0.05）。结论 人参皂苷Rb1可有效减轻KD小鼠模型CAL,疗效与Rb1使用剂量有关。其作用机制可能与通过调控自噬信号通路AMPK/mTOR/P70S6抑制CAL炎症,同时调控氧化应激信号通路PI3K/AKT/GSK-3β发挥保护冠状动脉内皮细胞生物学活性有关。     

人参皂苷Rb1对川崎病小鼠冠状动脉损伤的作用

目的 探讨人参皂苷Rb1对川崎病（KD）小鼠模型冠状动脉损伤（CAL）的治疗作用及信号通路。方法 将BALB/C小鼠随机分为对照组、模型组、阿司匹林组、人参皂苷Rb1低剂量组（50 mg/kg）和高剂量组（100 mg/kg）,每组12只。除对照组外的其他各组均采用间断性腹腔注射10%牛血清白蛋白溶液进行造模;阿司匹林组、Rb1低剂量组和高剂量组分别在造模后给予相应药物灌胃20 d。苏木精-伊红染色观察冠状动脉组织病理变化;ELISA法检测各组小鼠血清和冠状动脉组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6和IL-1β等相关炎症因子;Western blot法检测各组小鼠冠状动脉组织中调控自噬信号通路（AMPK/mTOR）和氧化应激信号通路（PI3K/AKT）相关蛋白的相对表达水平。结果 病理切片结果显示,与模型组相比,高剂量Rb1显著改善了CAL小鼠的血管壁增厚、内膜水肿、纤维断裂和内皮细胞炎性浸润等症状。和对照组相比,模型组、Rb1低剂量组小鼠血清及冠状动脉组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均显著增加（P < 0.05）;模型组小鼠冠状动脉组织中P-AMPK/AMPK、P-mTOR/mTOR和P-P70S6/P70S6表达水平均显著增加（P < 0.05）;而模型组小鼠冠状动脉组织中P-PI3K/PI3K、P-AKT/AKT和P-GSK-3β/GSK-3β表达水平均显著下降（P < 0.05）。和模型组相比,阿司匹林组、Rb1高剂量组小鼠血清及冠状动脉组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均显著下降（P < 0.05）;Rb1低、高剂量组小鼠冠状动脉组织中P-AMPK/AMPK、P-mTOR/mTOR和P-P70S6/P70S6表达水平均显著下降（P < 0.05）,且两个剂量组之间有剂量依赖性（P < 0.05）;Rb1低剂量组小鼠冠状动脉组织中P-PI3K/PI3K表达水平差异无统计学意义（P > 0.05）,P-AKT/AKT和P-GSK-3β/GSK-3β表达水平增加（P < 0.05）,而Rb1高剂量组上述3种蛋白相对表达水平均显著增加（P < 0.05）。和Rb1低剂量组相比,阿司匹林组和Rb1高剂量组小鼠血清及冠状动脉组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均显著下降（P < 0.05）;Rb1高剂量组的P-PI3K/PI3K和P-AKT/AKT表达水平均显著增加（P < 0.05）。结论 人参皂苷Rb1可有效减轻KD小鼠模型CAL,疗效与Rb1使用剂量有关。其作用机制可能与通过调控自噬信号通路AMPK/mTOR/P70S6抑制CAL炎症,同时调控氧化应激信号通路PI3K/AKT/GSK-3β发挥保护冠状动脉内皮细胞生物学活性有关。     

肾小球足细胞自噬与PI3K/Akt信号通路的研究进展

自噬是细胞利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质的过程,是广泛存在于自然界中的一种生命现象,对于维持细胞结构及功能的稳定性起着重要的作用。研究表明,参与多个生理及病理过程的PI3K/Akt信号通路是影响细胞自噬的重要信号通路之一。近年来研究发现,肾小球足细胞自噬活性水平以及足细胞病的产生都与PI3K/Akt信号通路存在密切关系。文章主要介绍肾小球足细胞自噬与PI3K/Akt信号通路的关系。     

PI3K/Akt信号通路及PTEN与缺氧缺血性脑损伤

PI3 K/Akt是经典的抗凋亡、促存活信号传导途径,对脑缺氧缺血后神经细胞的凋亡起重要调控作用.PTEN基因是迄今为止发现的第一个具有双重特异性磷酸酶活性且高度保守的抑癌基因,其编码蛋白PTEN能特异性地使磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸去磷酸化,拮抗PI3 K/Akt信号通路,表现为对细胞存活和增殖的负性调控作用.该文综述PI3K/Akt信号通路及PTEN的结构与功能及其在缺氧缺血性脑损伤中的作用等方面的研究进展.     

TrkB-BDNF信号通路对神经母细胞瘤细胞分泌血管内皮生长因子的影响

目的探讨TrkB-BDNF信号通路对神经母细胞瘤(NB)细胞SH-SY5Y分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法 Western blot方法检测全反式维甲酸(ATRA)诱导前后SY5Y细胞TrkB蛋白表达及脑源性神经营养因子(BDNF)刺激后SY5Y细胞磷酸化-TrkB(p-TrkB)蛋白表达;ELISA技术检测ATRA、BDNF、特异性酪氨酸激酶抑制剂K252a及PI3K抑制剂LY294002处理后SY5Y细胞培养上清中VEGF含量。结果 ATRA诱导前,SY5Y细胞中未检测到TrkB蛋白表达;1,10,100 nM/L ATRA处理后,SY5Y细胞中可检测到TrkB蛋白表达,且TrkB蛋白表达水平随ATRA浓度增加逐渐升高,差异有统计学意义。10 nM/L ATRA单独处理组未检测到p-TrkB表达,ATRA+BDNF组可检测p-TrkB蛋白表达。ATRA+BDNF组的VEGF含量明显高于对照组及ATRA组(P<0.01);ATRA+K252a+BDNF组VEGF含量明显低于ATRA+BDNF组(P<0.05);ATRA+LY294002+BD-NF组VEGF含量亦明显低于ATRA+BDNF组(P<0.01)。结论激活TrkB-BDNF信号通路可促进NB细胞合成、分泌VEGF;用K252a阻断TrkB-BDNF信号通路或用LY294002阻断TrkB-BDNF信号下游通路PI3K/Akt均可有效抑制NB细胞合成、分泌VEGF。     

PI3K/AKT通路在二烯丙基二硫诱导K562细胞凋亡中的作用机制研究

目的 研究PI3K/AKT 信号通路在二烯丙基二硫（DADS）诱导K562 细胞凋亡中的作用。方法 用 10、20、40、80 mg/L DADS 处理K562 细胞48 h,采用吖啶橙/溴化乙啶（AO/EB）染色法倒置显微镜观察细胞形态学变化;AnnexinV-FITC/PI 双染法检测细胞凋亡率;Western blot 技术检测AKT、p-AKT、Caspases-3 蛋白的表达,并设置空白对照组和溶媒对照组。结果 DADS 作用K562 细胞48 h 后,细胞出现体积缩小、形态不规则、胞膜突出等凋亡特征。AO/EB 染色显示：随DADS 浓度增加,胞体缩小、胞核呈固缩状或圆珠状,染色质凝集,核染色呈橘红色的凋亡细胞数增多,以40 mg/L DADS 组最明显。10、20、40、80 mg/L DADS 组的凋亡率均高于对照组（P P > 0.05）;随DADS 浓度增加,p-AKT 蛋白逐渐下降、Caspases 3 蛋白逐渐升高,差异有统计学意义（P 结论 DADS 诱导K562 细胞发生凋亡,其机制可能与DADS 抑制PI3K/AKT 信号通路的表达相关。     

MiR-125a-5P 通过靶向生长因子受体结合蛋白-10调控髓母细胞瘤表皮生长因子受体信号通路北大核心CSCD

目的：探索 miR-125a-5P 在髓母细胞瘤表皮生长因子受体（EGFR）信号通路中的调控机制。方法利用 TargetScan 和 Sanger 软件在 EGFR 信号通路中预测 miR-125a-5P 的潜在靶点,脂质体介导细胞基因转染,共分3组：对照组、无义组和 miR-125a-5P 组。荧光素酶实验验证 miR-125a-5P 与细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂-2B（CDKN2B）、E2F 转录因子3（E2F3）、丝裂原活化蛋白激酶-14（MAPK14）和生长因子受体结合蛋白-10（GRB10）间的靶矢关系;转染髓母细胞瘤 D341细胞 miR-125a-5p 寡核苷酸,反转录聚合酶链反应检测D341细胞中 miR-125a-5p 的表述水平,噻唑蓝法绘制细胞生长曲线,Transwell 实验检测瘤细胞迁移能力, Western blot 法检测 GRB10、EGFR、磷脂酰肌醇-3-羟基激酶（PI3K）和 Ras 的蛋白表达水平。结果荧光素酶实验结果显示,GRB10是所检测基因中唯一的 miR-125a-5P 靶基因;获得 miR-125a-5P 转染后 D341细胞增殖速度减慢。miR-125a-5P 组的细胞迁移率与对照组[（38.16±7.47）％]和无义组[（36.79±8.94）％]比较, miR-125a-5P 组最低[（13.59±4.41）％],3组间比较有统计学差异（χ2＝11.495,P 约0.05）。miR-125a-5P 转染可致 EGFR 蛋白表达水平升高1.67倍,GRB10、PI3K 和 Ras 的水平分别降低至23％、61％和42％。结论miR-125a-5P 通过靶向沉默GRB10的表达抑制髓母细胞瘤EGFR 下游信号通路,发挥肿瘤生长抑制作用。     

肠三叶因子对新生鼠NEC模型PI3K和caspase-3/9的影响

目的 利用PI3K的特异性抑制剂Wortmannin阻断PI3K/Akt细胞信号转导通路,观察ITF对新生鼠NEC模型caspase-3及caspase-9水平的影响,探讨ITF对NEC的保护作用机制.方法 建立NEC模型,对新生一日龄Wistar大鼠予100%氮气,1 min后放4℃冷环境中持续10min,每日2次,随后放回自制的保温箱内人工喂养,第四天处死,取肠组织待检.新生鼠50只随机分为5组,每组10只,A组为NEC模型后予以腹腔注射生理盐水0.2 ml;B组NEC模型后予以腹腔注射ITF0.2 mg;C组为NEC模型后腹腔内注射wortmannin(0.1 mg/kg);D组为NEC模型后腹腔内注射ITF+wortmannin;E组为正常对照组.取近回盲部1～2 cm肠道组织固定包埋、切片、HE染色做病理学检查,其他肠道组织制备组织匀浆取上清液应用ELISA试剂盒检测PI3K的含量及用分光光度法检测caspase-3/9的活性.结果 病理切片显示A组HE染色见肠壁损伤轻重不一,可见全肠黏膜绒毛坏死,病理评分中位积分3分;B组病变明显减轻,肠上皮细胞少量脱落,顶端绒毛坏死,病理评分中位积分1分;C、D组病理评分中位积分3分.A组组织匀浆中PI3K的含量(pg/ml)较E组略升高(P<0.05),与D组差异无统计学意义(P>0.05);B组PI3K表达水平较其他组显著升高(P<0.01);C组与E组比较显著降低,差异有统计学意义(P<0.01).Caspase-3及caspase-9活性在A组较B、E组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),C组更加明显升高(P<0.01),A、D组及B、E组之间,差异无统计学意义(P>0.05).结论 通过腹腔注射ITF可以减轻NEC后的肠道炎症反应,ITF有可能为治疗NEC提供新的方法 ;PI3K/Akt细胞信号转导通路参与了NEC发病过程,并起着信号转导作用.而ITF可能是通过激活PI3K/Akt信号转导途径来下调caspase-3/9的水平,从而保护新生Wistar大鼠NEC模型肠道损伤.     

子宫内海洛因暴露对小鼠前额叶皮层海马和伏核p-ERK1／2表达的影响

目的：观察子宫内海洛因暴露对小鼠前额叶皮层（PFC）、海马（HP）和伏核（Acb）脑区磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）表达的影响,探讨ERK MAPK细胞信号转导通路是否参与了发育期海洛因暴露导致小鼠神经行为缺陷的分子机制。方法：于胚胎鼠9～18日龄时,每天给孕鼠皮下注射海洛因10 mg/kg一次,建立宫内海洛因暴露小鼠模型。按出生前处理将小鼠分为海洛因组（Her）和盐水组（Sal）。RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测两组小鼠前PFC,HP和Acb三个脑区组织p-ERK1/2的表达变化。结果：与Sal组相比,Her组小鼠的体重无明显变化;p-ERK1/2 的mRNA和蛋白表达在三个脑区无明显改变。 结论：发育期10 mg/kg海洛因暴露未损伤小鼠的体格发育,海洛因可能通过ERK1/2 MAPK信号通路以外的机制导致神经行为缺陷。［中国当代儿科杂志,2009,11（4）：306-309］     

Toll样受体2对肠上皮细胞屏障通透性的保护作用及机制

目的 肠上皮细胞屏障的损伤与多种胃肠道疾病的发生密切相关,有效维持屏障功能是治疗这些疾病的关键.本研究试图通过体外实验探讨Toll样受体2(toll-like receptor,TLR2)对肠上皮细胞屏障通透性的保护作用及其机制.方法 正常组将未转染Caco-2细胞,TLR2基因沉默Caco-2细胞,TLR2基因过表达Caco-2细胞培养21d形成单层,检测跨膜电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)值,其反应上皮细胞屏障的通透性.炎症组3类细胞分别于培养第19d给予10 ng/ml IL-1β刺激48 h,于第21d检测TEER值.抑制剂组3类细胞分别在IL-1β前再给予PI3K/Akt通路抑制剂处理1h,于第21 d检测TEER值.结果 TLR2基因沉默能够显著减低Caco-2细胞单层的TEER值(P＜0.01),而TLR2基因过表达能够升高TEER值,但不具有统计学意义.TLR2能够防止IL-1β造成的TEER值下降(P＜0.01),此作用在给予PI3K/Akt通路抑制剂后消失.结论 TLR2对肠上皮细胞屏障通透性具有调节作用,并且能够防止炎症造成的通透性增高,这种保护作用由PI3K/Akt通路参与介导.     

脑源性神经营养因子及信号传导通路与缺氧缺血性脑损伤

脑源性神经营养因子(BDNF)是神经营养因子家族中最重要的一员,在神经系统分布广泛.BDNF通过激活酪氨酸受体激酶B(TrkB)及其信号传导通路对神经元的存活、生长、功能、形态和可塑性等起着重要的作用.PI3K/Akt和MAPK/ERK细胞内信号传导通路是BDNF发挥神经保护作用的两条主要途径.近年研究发现,BDNF及其TrkB水平的变化与缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的病理生理和治疗机制有着密切的关系.因此,可以通过改变内部或外部条件来增加BDNF的表达,减轻HIBD的损伤.     

PI3K／Akt信号通路与小儿恶性实体肿瘤研究进展

小儿恶性实体肿瘤包括神经母细胞瘤、肾母细胞瘤、肝母细胞瘤、横纹肌肉瘤等，是严重危害儿童健康的重要疾病之一。目前研究表明，细胞的存活、凋亡、分化或信号传导异常可能导致恶性肿瘤发生发展，其中以细胞信号传导异常尤为重要。已发现多条信号通路（如PI3K／Akt、MAPK通路，Ras途径等）与肿瘤关系密切，     

脑源性神经营养因子及信号传导通路与缺氧缺血性脑损伤

脑源性神经营养因子(BDNF)是神经营养因子家族中最重要的一员,在神经系统分布广泛.BDNF通过激活酪氨酸受体激酶B(TrkB)及其信号传导通路对神经元的存活、生长、功能、形态和可塑性等起着重要的作用.PI3K/Akt和MAPK/ERK细胞内信号传导通路是BDNF发挥神经保护作用的两条主要途径.近年研究发现,BDNF及...     

酪氨酸激酶受体B-脑源性神经营养因子信号传导通路对神经母细胞瘤细胞分泌血管内皮生长因子及基质金属蛋白酶-9的影响

目的 探讨酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,TrkB)-脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)信号传导通路对神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞SH-SY5Y分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的影响.方法 用全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导SH-SY5Y细胞表达TrkB,加入外源性BDNF,从而激活TrkB-BDNF信号传导通路及其3条下游信号通路.再用特异性酪氨酸激酶抑制剂K252a阻断TrkB-BDNF信号传导通路;用磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-hydrox y kinase,PBK)抑制剂LY294002、磷脂酶C抑制剂U73122、丝裂原活化蛋白激酶抑制剂U0126分别阻断TrkB-BDNF的3条相应下游信号传导通路.采用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中VEGF及MMP-9含量.结果 ATRA+ BDNF组VEGF[(485.89±109.99) pg/ml]及MMP-9[(15.73±1.72) pg/ml]含量明显高于对照组及ATRA组(P ＜0.05);ATRA+ BDNF+ K252a组VEGF[(272.42±86.33) pg/ml]及MMP-9[(5.25±1.44) pg/ml]含量明显低于ATRA+ BDNF组(P＜0.05),与对照组及ATRA组比较差异无统计学意义(P＞0.05);ATRA+ BDNF+ LY294002组VEGF[(314.12±24.68) pg/ml]及MMP-9[(4.91±1.08) pg/ml]含量明显低于ATRA+ BDNF组(P＜0.05),与对照组及ATRA组比较差异无统计学意义(P ＞0.05);ATRA+ BDNF+ U73122组VEGF[(444.08±64.49) pg/ml]及MMP-9[(13.28±3.38) pg/ml]含量与ATRA+ BDNF组比较差异无统计学意义(P＞0.05).ATRA+ BDNF+ U0126组VEGF[(429.97±19.95) pg/ml]及MMP-9[(13.96±4.45) pg/ml]含量与ATRA+ BDNF组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 激活TrkB-BDNF信号传导通路可促进NB细胞合成、分泌VEGF及MMP-9.TrkB-BDNF信号传导通路可能通过进一步激活其下游PI3 K/Akt通路来促进VEGF及MMP-9的合成及分泌,用K252a阻断TrkB-BDNF信号通路、LY294002阻断其下游PI3K通路均可有效抑制NB细胞合成及分泌VEGF及MMP-9.     

磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶信号通路对异丙肾上腺素所致大鼠心肌损伤的作用

目的通过使用盐酸异丙肾上腺素(ISO)制备心肌损伤模型,探讨磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路是否参与心肌损伤的发病机制。方法 20只雄性Wistar大鼠随机分成心肌损伤模型组(ISO组)和对照组。ISO组大鼠每天背部皮下注射ISO 20 mg.kg-1.d-1,对照组大鼠每天注射等量9 g.L-1盐水,均连续注射7 d。采用全自动生化检测仪检测2组大鼠血浆中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)和α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)水平。采用蛋白印迹法定量检测大鼠心肌组织中PI3K、p85-PI3K、p55-PI3K、AKT及p-AKT蛋白表达。结果与对照组比较,ISO组大鼠血浆LDH、CK及α-HBDH水平均显著上升,差异有统计学意义(Pa<0.05),证明采用ISO建模成功;与对照组比较,ISO组大鼠心肌组织中PI3K和AKT蛋白水平未见明显变化,但其磷酸化p85-PI3K、p55-PI3K和p-AKT蛋白水平均显著上调,差异有统计学意义(Pa<0.05)。结论在ISO所致的心肌损伤中,PI3K和AKT的磷酸化水平上调,PI3K/AKT信号通路参与ISO所致心肌损伤的发病机制。     

胚胎大鼠心脏发育中转化生长因子β1/Smad3信号通路的意义

目的观察胚胎Wistar大鼠心脏发育过程中转化生长因子(TGF)-β1、Smad3的表达,探讨其在胚胎心脏发育的意义。方法 28只月龄、体质量均相当的Wistar大鼠,随机分为7组,每组4只,分别在妊娠E12、E13、E14、E15、E16、E17、E18时麻醉,行剖宫术取出胎鼠,取其心脏,液氮保存。采用RT-PCR法检测其TGF-β1、Smad3在妊娠E12～E18胚胎心脏中的表达。结果妊娠E12～E18时,TGF-β1和Smad3表达由弱到强再减弱;TGF-β1表达高峰出现在E14,Smad3高峰出现在E17。结论 TGF-β1/Smad3信号通路对大鼠胚胎的心脏发育起一定的调控作用。     

miR-92a-3p在小鼠胚胎神经管闭合中的作用及机制

目的探讨miR-92a-3p与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4,NOX4)之间的相互作用,以及两者在神经管畸形(neural tube defect,NTD)中对细胞迁移的影响。方法 实验动物采用C57BL/6J小鼠,孕鼠随机分为NTD组与对照组,每组30只,NTD组采用全反式维A酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导NTD模型,于E9.5采集胚胎样本。实验所用细胞系为小鼠神经干细胞C17.2,转染NOX4过表达质粒、miR-92a-3p模拟物/抑制剂、模拟物对照/抑制剂对照。采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测胚胎和C17.2细胞中miR-92a-3p表达,采用蛋白质印迹法检测NOX4的表达。通过双荧光素酶报告基因实验明确miR-92a-3p对NOX4的结合及靶向调控关系。采用细胞划痕实验与Transwell实验观察miR-92a-3p和NOX4对细胞迁移活动的影响。统计学方法采用单因素方差分...     

环状RNA在小鼠肺发育中的连续表达及功能预测

目的 探讨环状RNA（circRNA）circ4:150439343|150477468和circ15:73330849|73343359在小鼠肺发育中的连续表达及潜在功能。方法 根据肺发育分期,取孕16.5 d（E16.5 d）、孕18.5 d（E18.5 d）及生后2 d（P2 d）胎鼠及新生小鼠的肺组织,利用苏木精-伊红染色观察肺组织形态学;利用qRT-PCR技术检测晚期肺发育过程中circ4:150439343|150477468和circ15:73330849|73343359的表达情况;应用miRanda和TargetScan软件预测circRNA的靶向miRNA,然后对靶基因进行GO和KEGG分析并预测相应circRNA功能。结果 在E16.5 d小鼠肺组织切片中观察到Ⅱ型肺泡上皮细胞,且逐渐增多,P2 d时肺泡迅速扩张,间质变薄,肺泡结构逐渐成熟;qRT-PCR结果显示circ4:150439343|150477468相对表达量随时间推移持续上调（P < 0.05）,circ15:73330849|73343359的相对表达量先下调再上调（P < 0.05）;宿主基因功能预测显示circRNA可参与Notch、PI3K-Akt和NF-κB等信号通路。结论 circ4:150439343|150477468和circ15:73330849|73343359可通过Notch等信号通路参与肺发育的调控。