狂犬病毒糖蛋白和核蛋白主要免疫活性位点的质粒载体构建

目的 为进一步研究狂犬病毒糖蛋白和核蛋白免疫活性位点的免疫特性，构建了大肠杆菌重组质粒载体。方法 参考有关献及用蛋白质亲疏水性分析程序分析狂犬病毒糖蛋白、核蛋白，以确定目的基因，用分子克隆的方法将目的基因片段插入质粒载体，最后测定重组质粒的核酸序列。结果 在大肠杆菌质粒PUC18多克隆位点EcoR I和BamH I之间，根据其阅读框架，插入了含有狂犬病毒糖蛋白主要免疫活性位点的目的基因合成片段：GⅡ免疫活性位点的第149～160位氨基酸残基及GⅢ免疫活性位点的第331～340位氨基酸残基所对应的碱基序列。在KS质粒多克隆位点EcoRI和BamH I间，插入了狂犬病毒核蛋白一免疫活性位点第374～383位氨基酸残基所对应的碱基序列。结论 为深入研究狂犬病毒免疫活性位点的免疫特性及其基因免疫打下基础。     

中国狂犬病毒糖蛋白及其结构蛋白基因核苷酸序列测定和分析

从分子水平上探讨狂犬病毒基因及表达产物的特性和作用并分析其毒株间的变异对疫苗筛选以及诊断甚至治疗都有重要的指导意义。本研究对我国狂犬病毒疫苗(3aG株)的G蛋白、N蛋白M蛋白和NS蛋白以及广西野毒株(CGX89-1株)的G蛋白基因进行测序，并选择相应的载体系统进行了克隆和表达。     

河南省两株狂犬病毒核蛋白和糖蛋白基因的序列分析

目的分析河南省2株狂犬病毒核蛋白及糖蛋白的基因序列,了解狂犬病毒街毒株与人用及兽用狂犬病疫苗株间的差异。方法以免疫荧光法检测2004年采自河南省的100只犬脑标本,取阳性犬脑组织悬液接种鼠脑分离病毒。以RT-PCR法扩增病毒核蛋白及糖蛋白全基因,克隆测序后进行遗传学分析。结果分离到2株狂犬病毒,分别命名为Henan Hb1与Henan Sq1,序列分析表明2株病毒均为基因1型狂犬病毒,2株病毒的N基因与G基因核苷酸的同源性分别为99.3%和98.9%,氨基酸的同源性分别为98.7%和98.4%。2株病毒与CTN疫苗株同源性较高,N基因与G基因的核苷酸同源性分别为89.1%和85.6%～85.7%,氨基酸同源性分别为97.6%～98.0%和92.3%。与已知的基因1型狂犬病毒相比,2株病毒与印度尼西亚从犬中分离到的2株病毒同源性最高,N基因与G基因核苷酸同源性分别为92.1%～93.2%和91.9%～92.1%,氨基酸同源性分别为97.5%～98.6%和96.0%～96.2%。Henan Sq1株病毒在糖蛋白关键的毒力位点333位由W替换了R。系统发育分析表明Henan Hb1与Henan Sq1与印度尼西亚株、疫苗株CTN、中国分离株,以及泰国与马来西亚分离株进化关系最近,而与疫苗株3aG、PV、ERA及攻击毒CVS株等进化关系较远。结论2株狂犬病毒是基因1型狂犬病毒,但无论是N基因还是G基因的核苷酸序列,以及推导出来的氨基酸序列与已知的1型狂犬病毒株及疫苗株均有一定的差异。     

汉坦病毒包膜糖蛋白细胞融合活性研究进展

汉坦病毒(HV)是人类重要的致病病毒,在临床上引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒肺综合征(HPS),对人类健康造成很大的威胁。包膜糖蛋白(glycoprotein,GP)是HV的主要结构蛋白,GP分子上存在着中和抗原位点、血凝抗原位点、细胞融合位点等,具有良好的免疫原性,可刺激机体产生中和抗体,是设计新型疫苗的首选靶点。细胞融合是包括HV在内的许多包膜病毒侵入细胞、复制、释放、传播和致病的重要生物过程,也是细胞间信息传递的重要步骤,是决定病毒毒力的重要因素。     

γ射线诱发GPA基因位点突变的剂理效应关系研究

60Coγ射线照射能引起人红白血病K562细胞株的血型糖蛋白A基因发生随机突变,通过对其第3外显子上的SacI内切酶位点进行分析,发现其基因突变率与受照剂量有着较好的线性关系,这与染色体畸变分析法所得的结果一致。分析基因突变率有可能推知受照剂量。     

栉孔扇贝糖蛋白的肿瘤抑制活性和对免疫功能的影响

目的 :　通过观察栉孔扇贝糖蛋白 [Chlamys ( Azumapecten) farreri glycoprotein,FGP]的肿瘤抑制作用和对细胞免疫功能的影响 ,探讨肿瘤抑制作用与免疫功能之间的关系。方法 :　采用小鼠 S180 实体瘤模型观察 FGP的体内抑瘤作用 ,并进行了免疫学指标测定。结果 :　FGP能显著抑制瘤重 ,并能提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和 NK细胞的活性 ,增加小鼠免疫器官的重量。结论 :　FGP具有显著的肿瘤抑制作用 ,这种作用可能通过增强小鼠细胞免疫功能而实现。     

输卵管糖蛋白：潜在的免疫避孕靶抗原

哺乳动物输卵管上皮细胞的特异分泌物－－输卵管糖蛋白（ＯＧＰ），作为新的潜在的免疫避孕靶，正日益受到生殖生物学界的关注。本文依据近年来的相关文献，综述了ＯＨＰ的若干分子特征、可能的促精子与透明带（ＺＰ）或卵结合和促早胚发育功能以及它在计划生育领域的应用前景。     

狂犬病毒疫苗免疫后抗体水平二种检测方法的比较

狂犬病已被卫生部列为乙类传染病 ,由于它的高病死率 ,以及近年来狂犬病发病率的上升 ,已引起人们的高度重视。由于犬等动物伤害病人全程免疫注射 ( 5针 )后 ,血清中IgG抗体不可能达到 10 0 %的保护率。因此 ,目前国内大多对免疫注射 5针后的病人进行血清学检测 ,以观察病人的抗体保护水平 ,如若达不到保护水平 ,则对该病人加强 2针 ,以确保病人的安全。为此 ,对病人抗狂犬病毒IgG抗体水平检测方法的可靠性至关重要。IFA和ELISA两种方法是目前国内应用于检测抗狂犬病毒抗体水平的主要方法。本实验室建立的间接免疫荧光方法 (IFA) [1] …     

γ射线诱发GPA基因位点突变的剂量效应关系研究

60Coγ射线照射能引起人红白血病K562细胞株的血型糖蛋白A基因发生随机突变.通过对其第3外显子上的SacI内切酶位点进行分析,发现其基因突变率与受照剂量有着较好的线性关系,这与染色体畸变分析法所得的结果一致.分析基因突变率有可能推知受照剂量.     

家犬血清抗狂犬病毒抗体水平监测

报告了监测家犬血清抗狂犬病毒抗体免疫水平50例,其中2例未免疫犬血清抗狂犬病毒抗体为阴性、48只免疫犬有44只血清抗体阳性,疫区与非疫区及雌雄之间,免疫抗体的产生差异均无显著性,2年以上的成年犬,易激活产生保护性抗体,连续免疫2年,已有足够的保护性抗体产生.     

单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白D基因的原核表达及鉴定

[目的]构建单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）糖蛋白D原核表达载体并鉴定其表达产物。[方法]用PCR方法特异性扩增HSV-2糖蛋白D基因片断,经双酶切后将其克隆到融合蛋白原核表达载体pGEX-1λT中。将重组表达载体转化大肠杆菌后进行诱导表达,表达产物进行Western-blot鉴定。[结果]重组表达载体诱导表达产物用SDS-PAGE证明含有相对分子质量（Mr）约60kD的糖蛋白D/GST融合蛋白。Western-blot分析证实纯化之后表达产物在相对分子量为60kD处有明显的阳性杂交带。[结论]重组原核表达载体诱导表达出的HSV-2糖蛋白D具有较好的抗原性,为以后的HSV-2糖蛋白D基因工程亚单位疫苗研究打下了基础。     

乙型肝炎病毒基因在宫内传播中的选择性

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）基因突变与宫内传播的关系。方法采用聚合酶链反应（PCR）方法从HBsAg阳性孕妇及其新生儿血清中扩增得到包括HBV前C／C区和前S／S区基因的2．5kb基因片断或前S／S区1．2kb基因片断,克隆、测序,分析测序结果,比较母婴HBV基因序列的差异。结果4对发生宫内感染的母婴HBV序列共得到43株,都属于HBVC基因亚型、adr血清亚型。HBV前S／S区序列中,新生儿序列的差异性低于母体（P〈0．05）。4对母婴问序列的平均相似率分别为99．47％、99．39％、99．37％和99．46％;母婴序列具有高度一致性;每对母婴序列间的进化距离都比较小,核苷酸差异率分别为0．4、0．8、1．2和0．3。母婴序列间均存在1个或数个核苷酸位点的差异,母体内的优势株和新生儿体内的优势株不完全相同。结论母体内的优势株或弱势株都可以通过宫内传播感染新生儿,可能与其基因突变有密切关系。提示HBV的宫内传播存在基因选择性。     

一对父亲与胎儿所携乙型肝炎病毒前S基因的序列分析

目的：筛选一位父亲HBsAg,HBeAg,抗HBc均阳性的慢性携带者和母亲无任何乙型肝炎病毒（HBV）标志的子宫内受染胎儿为研究对象,分析父、儿所携带HBV前S基因的基因序列,探讨HBV男性垂直传播的存在。方法：应用半套式PCR检测父亲、胎儿的PreS1/S2基因,将扩增的片段克隆到PGEM－T载体进行克隆测序,并与文献中的中国人参照株序列相比较,结果：父、儿血清中均扩增出前S基因,测序结果表明二者的基因同源性达99％以上,且均有183bp的PreS1基因缺失,而与中国人参照株序列的同源性为89％,结论：父、儿前S序列的高度一致性表明HBV极可能存在男性垂直传播。