脑源性神经营养因子基因工程细胞脑内移植治疗帕金森病大鼠的实验研究

目的观察脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）基因工程成肌细胞脑内纹状体移植对帕金森病大鼠的治疗作用。方法建立逆转录病毒介导的ＢＤＮＦ表达质粒并转染成肌细胞,筛选阳性细胞进行脑内移植。结果基因工程成肌细胞脑内移植可明显提高帕金森病大鼠黑质酪氨酸羟化酶（ＴＨ）阳性神经元的存活率,使纹状体多巴胺含量明显增加,动物的旋转行为改善约５０％,并持续２个月之久。结论脑源性神经营养因子基因工程成肌细胞脑内纹状体移植可明显改善动物的旋转行为并可促进黑质神经原的存活,为帕金森病的治疗提供了一种新的有效的治疗方法     

脑源性神经营养因子基因工程细胞脑内移植治疗帕金森病大鼠的实 …

目的观察脑源性神经营养因子基因工程成肌细胞脑内纹状体移植对帕金森病大鼠的治疗作用。方法 建立逆转录病毒介导的ＢＤＮＦ表达质粒并转染成肌细胞，筛选阳性细胞进行脑内移植。结果 基因工程成肌细胞脑内移植可明显提高帕金森病大鼠黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元的存活率，使纹状体多巴胺含量明显增加，动物的旋转行为改善约５０％，并持续２个月之久。结论脑源性神经营养因子基因工程成肌细胞脑内纹状体移植可明显改善动物的旋转     

转基因成肌细胞脑内移植后帕金森病大鼠纹状体多巴胺含量的变化

为评价转鼠酪氨酸羟化酶（TH）基因的成肌细胞脑内移植对偏侧帕金森病（PD）大鼠模型纹状体区多巴胺及代谢产物含量的影响，应用6－羟多巴胺损毁SD大鼠单侧黑质制备偏侧帕金森病臣模型。模型稳定必个月后，移植转TH基因的成肌细胞（n＝24）或未转基国的成肌细胞（n＝10）于偏侧PD鼠损毁侧纹状体。移植治疗后6个月，用高效液相色谱电化学法（HPLC－ECD）检测偏侧PD鼠模型纹状体区多巴胺、3，4－二羟苯乙酸（DOPAC）以及高香草酸（HVA）含量。结果转TH基因成肌细胞植入组PD鼠纹状体区多巴胺及代谢产物含量明显增高（P＜0．01），其中多巴胺含量从治疗前平均39．20Pg／mg提高至治疗后的985．71Pg／mg，相当于正常侧纹状体的49．99％．对照组植入未转基因的成肌细胞后纹状体多巴胺及代谢产物含量无明显变化（P＞0．05）。可见转鼠TH基因的成肌细胞脑内移植能够部分改善偏侧PD鼠模型纹状体区多巴胺的缺乏，成肌细胞是PD基因治疗的合适靶细胞之一。     

转基因成肌细胞移植治疗帕金森病的实验研究

评价转基因成肌细胞移植治疗帕金森病（ＰＤ）的疗效。方法移植转酪氨酸羟化酶（ＴＨ）基因的成肌细胞（ｎ＝２４）和未经遗传修饰的成肌细胞（ｎ＝１０）于偏侧ＰＤ鼠损毁侧纹状体。用阿朴吗啡（ＡＰＯ）诱发旋转行为，反向聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、ＴＨ免疫组化检测ＴＨ基因的表达和ＴＨ蛋白的合成以及高效液相色谱仪－电化学检测器（ＨＰＬＣ－ＥＣＤ）检测纹状体多巴胺及代谢产物含量以此评估基因治疗的效果。结果治疗组移植治疗后ＡＰＯ诱发的旋转行为明显改善（Ｐ＜０．０１），且可持续１３个月，而对照组ＡＰＯ诱发的旋转行为无改善（Ｐ＞０．０５），应用ＲＴ－ＰＣＲ、ＴＨ免疫组化和ＨＰＬＣ－ＥＣＤ在治疗组移植部位检测到ＴＨ基因的表达、ＴＨ蛋白的合成和移植侧纹状体部多巴胺及其代谢产物含量增高。结论遗传修饰的成肌细胞能够在体内长时间、有效地表达ＴＨ，并改善ＰＤ鼠的病理行为，是ＰＤ基因治疗的合适靶细胞之一。     

帕金森病基因治疗的实验研究

帕金森病(PD)的主要病理特征是中脑黑质多巴胺能神经元变性,表达的酪氨酸羟化酶(TH)减少或者活性降低。目前外源性多巴是最有效的抗PD药物,但常在数年后失去其有效的治疗作用。用胚胎脑细胞移植虽有效果,但胚胎脑来源困难。因此需要探索新的有效治疗方法。本研究将遗传修饰的成肌细胞植入偏侧PD鼠模型纹状体进行基因治疗。移植转TH基因的成肌细胞(治疗组,n=24)和未经遗传修饰的成肌细胞(对照组,n=10)于偏侧PD鼠损毁侧纹状体。用阿朴吗啡(APO)诱发旋转行为,RT-PCR、TH免疫组化检测TH基因的表达和TH蛋白的合成以及HPLC-ECD检测纹状体多巴胺及代谢产物含量以此评估基因治疗的效果。治疗组移植治疗后APO诱发的旋转行为明显改善(P<0.01),且可持续13个月,而对照组APO诱发的旋转行为无改善(P>0.05),应用RT-PCR、TH免疫组化和HPLC-ECD在治疗组移植部位检测到TH基因的表达、TH蛋白的合成和移植侧纹状体部多巴胺及其代谢产物含量增高。遗传修饰的成肌细胞能够在体内长时间、有效地表达TH,并改善PD鼠的病理行为,是PD基因治疗的合适靶细胞之一。     

止颤汤干预神经干细胞移植帕金森病大鼠脑内多巴胺及其代谢产物的变化*

背景：如何促进脑内多巴胺含量的增加以及减少多巴胺的代谢,是治疗帕金森病的热点所在。 目的：从多巴胺代谢途径角度观察止颤汤对神经干细胞移植帕金森病大鼠的脑黑质中多巴胺及其代谢产物含量的变化。 方法：以大鼠脑立体定位和1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶建立帕金森病大鼠模型。应用高效液相色谱法测定帕金森病大鼠中脑多巴胺及其代谢产物的含量。 结果与结论：止颤汤可以提高神经干细胞移植后帕金森病大鼠中脑多巴胺及其代谢产物双羟苯乙酸的含量,但对代谢产物高香草酸无明显影响。通过促进帕金森病大鼠干细胞移植后神经干细胞的存活,使之定向分化为多巴胺能神经元并分泌多巴胺,同时抑制多巴胺分解达到治疗作用。     

胎儿肾上腺髓质脑内移植术临床应用研究

本研究自1986年应用同种异体胎儿肾上腺髓质脑内纹状体移植,治疗重症震颤麻痹7例。术后随访长达二年半,5例显著进步,2例进步;术后半年内症状改善明显,脑脊液中多巴胺代谢产物—高香草酸(HVA)明显增高(P<0.001)。胎儿肾上腺髓质脑内移植治疗重症帕金森病有临床意义和推广价值。     

帕金森病的细胞治疗

帕金森病（PD）是一种中脑黑质多巴胺能神经元进行性退化导致黑质-纹状体通路受损的中枢神经系统退行性疾病。目前主要治疗方式是多巴胺能药物和深部脑刺激（DBS）,但这两种治疗方案只能暂时缓解症状并不能完全根治且有不良反应。干细胞具有自我更新和多向分化的潜能,干细胞移植能够修复受损的组织,为PD的治疗带来了曙光。本文介绍了细胞移植治疗帕金森病的研究进展。     

脑功复得治疗帕金森病的实验研究

目的：探讨脑功复得治疗帕金森病的作用。方法：应用神经毒素６－羟多巴立体定向注射成年大鼠单侧黑质，选择性毁损儿茶酚胺类神经元及纤维末梢，制作帕金森病模型，然后对模型鼠给予脑功复得灌胃３周，不同时相点观察ＰＤ鼠旋转行为改变，３月后处死大鼠，用高效液相色谱－电化学法检测纹状体区多巴胺含量。结果：２周、１月、２月、３月治疗组ＰＤ鼠旋转行为明显改善，３月后，治疗组黑质纹状体区多巴胺含量增高。结论：脑功复得是一种治疗ＰＤ的有效中成药。     

脑内植入APA-BCC的偏侧帕金森病样猴的多巴胺D2受体功能影像观察

目的 观察海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊化牛肾上腺嗜铬细胞(APA-BCC)脑内移植后偏侧帕金森病(PD)样猴行为的改善及纹状体区D2受体的活性。方法 1只MPTP诱发右侧PD样猴接受右侧脑纹状体区APA-BCC植入；观察移植后的行为变化；于移植后48个月时行^11C-raclopride标记多巴胺D2受体活性的PET检查。结果 APA-BCC脑内移植后48个月时，偏侧PD样猴的异常行为仍得到明显纠正；脑PET三维图像显示移植侧纹状体区D2受体活性较对侧明显增高。结论 APA-BCC脑内移植可长时间地纠正偏侧PD样猴的异常行为并升高移植区突触后膜多巴胺D2受体的活性。     

被动吸烟对帕金森病大鼠旋转行为和纹状体多巴胺含量的影响

目的：观察被动吸烟对帕金森病（PD）大鼠的影响,以验证流行病学研究的结论,为PD研制提供一新的线索。方法：用6－羟基多巴胺（6－OHDA）立体定向注入大鼠一侧黑质致密部和中脑被盖腹侧区建立侧侧PD模型,观察术前4周开始始予的被动吸烟（持续6周）和术后2周对成功模型给予的被动吸烟（持续2周）对阿朴吗啡诱发的旋转行为及纹状体DA含量的影响。结果：术前4周开始被动吸烟的大鼠旋转行为有减少趋势,受损侧纹状体DA含量较对照组升高,术后2周,成功模型给予的被动吸烟对PD大鼠的旋转行为及纹状体DA含量均无影响。结论;被动吸烟可减轻6－OHDA对黑质DNA能神经元的损伤。     

The effects of rehabilitative training on the behaviors of Parkinson's disease mouse and underlying mechanism

ABSTRACT Objective: To examine the effects of rehabilitative training on mice behavior improvement in a 1-Methyl-4-Phenyl-1,2,3,6-Tetrahydropyridine (MPTP) mice model of Parkinson's disease (PD). Methods: MPTP mice model of Parkinson disease was generated. The rehabilitative training included daily running wheel and balance walking; the control group was allowed for free activity. The behaviors of the two groups were investigated at 1 week, 2 weeks, and 4 weeks and the content of dopamine (DA) in striatum of different groups of mice was measured with high-performance liquid chromatography (HPLC). Results: The results showed that as compared to the control group, the score of climbing pole, traction, swimming tests, and dopamine content was improved in the rehabilitative training group. Conclusion: This suggested that rehabilitative training could improve the locomotor ability and dopamine content in PD mouse model.     

神经节苷脂对帕金森病鼠旋转行为、纹状体多巴胺浓度及黑质病理的影响

目的观察神经节苷脂对帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）鼠模型的旋转行为、纹状体多巴胺浓度及黑质病理的影响。方法将６－羟基多巴胺用立体定向法注入大鼠一侧中脑被盖腹侧区制作ＰＤ大鼠模型，并于同侧侧脑室注射混合型神经节苷脂（ａｍｉｘｅｄｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，ＧＭ），观察ＧＭ对由阿朴吗啡所诱发的旋转行为、受损侧纹状体多巴胺浓度及黑质病理的影响。结果ＧＭ能减轻ＰＤ大鼠模型的旋转行为、使受损侧纹状体多巴胺浓度下降和黑质神经细胞减少。结论ＧＭ可减轻６－羟基多巴胺对黑质多巴胺能神经元的损伤。     

重复经颅磁刺激治疗MPTP帕金森病模型小鼠的疗效观察

目的观察重复经颅磁刺激对MPTP帕金森病模型小鼠的治疗效果。方法于雄性C57BL/6J小鼠皮下注射MPTP制备帕金森病动物模型,24 h后进行重复经颅磁刺激(刺激频率1.00 Hz、刺激强度1.00 T、刺激时间25 s/次,共刺激5个序列,1次/d)。Rotarod实验评价小鼠身体协调能力和连续运动能力,免疫组织化学染色观察重复经颅磁刺激前后黑质区酪氨酸羟化酶阳性神经元数目和纹状体区酪氨酸羟化酶阳性神经纤维变化,高效液相色谱-电化学法检测重复经颅磁刺激对帕金森病小鼠纹状体多巴胺表达水平的影响。结果重复经颅磁刺激组小鼠停留于旋转杆上的圈数(85.89±3.74)、黑质区酪氨酸羟化酶阳性神经元数目(36.67±3.82)和纹状体多巴胺表达水平(258.70±1.06)均高于单纯帕金森病模型组(59.71±8.33,31.67±3.35,152.35±1.64;均P=0.000)。结论重复经颅磁刺激可改善帕金森病小鼠运动协调能力,保护受损黑质区酪氨酸羟化酶阳性神经元及纹状体区酪氨酸羟化酶阳性神经纤维,提高纹状体多巴胺及其代谢产物水平。     

Increased brain-derived neurotrophic factor-containing axons in the basal ganglia of patients with multiple system atrophy.

Brain-derived neurotrophic factor (BDNF) has a neurotrophic effect not only on mesencephalic dopaminergic neurons, but also on striatal neurons. To investigate whether the abnormal expression of BDNF occurs in the basal ganglia of patients with Parkinson disease (PD) and multiple system atrophy (MSA), we compared the BDNF levels in the striatum and globus pallidus of patients with PD or MSA to controls using immunohistochemistry. Furthermore, to quantitatively evaluate the immunohistochemical changes in the striatum, image analysis of the putamen was performed. BDNF-positive nerve fiber bundles and fine granular structures were scattered throughout the striatum and globus pallidus of all samples. Most of these granular structures were observed in glial fibrillary acidic protein-positive astrocytes. In addition, BDNF-positive neurites were abundant in the striatum of all MSA patients, and numerous BDNF-positive varicose fibers were found in the globus pallidus of some MSA cases with particularly severe striatal involvement. These observations suggest that the upregulated expression of BDNF may occur as a protective mechanism in the striatum of MSA patients, and that severe striatal degeneration may cause the aberrant accumulation of BDNF in the striatal projection areas of the globus pallidus of MSA patients.     

Dopamine regulates brain-derived neurotrophic factor (BDNF) expression in cultured embryonic mouse striatal cells

The differentiation of striatal GABAergic neurons coincides with the perinatal establishment of nigrostriatal dopaminergic synaptic connections. We have shown previously that dopamine stimulates the maturation of striatal GABAergic neurons. Since BDNF also regulates the development of GABAergic cells, we hypothesized that dopamine might affect striatal BDNF expression. The influence of dopamine on BDNF protein/mRNA and trkB mRNA levels was studied in neuronal and astroglia cultures of the mouse striatum. Stimulation with dopamine and a dopamine D1 receptor agonist increased BDNF mRNA and protein but not trkB mRNA in neuronal cultures. Our data indicate a potential role for dopamine in the developmental regulation of striatal BDNF expression and suggest that dopamine effects on GABAergic cells may be intertwined with BDNF action.     

重复经颅磁刺激治疗MPTP帕金森病模型小鼠的疗效观察

目的观察重复经颅磁刺激对MPTP帕金森病模型小鼠的治疗效果。方法于雄性C57BL／6J小鼠皮下注射MPTP制备帕金森病动物模型,24h后进行重复经颅磁刺激（刺激频率1．00Hz、刺激强度1．00T、刺激时间25s／次,共刺激5个序列,1次,d）。Rotarod实验评价小鼠身体协调能力和连续运动能力,免疫组织化学染色观察重复经颅磁刺激前后黑质区酪氨酸羟化酶阳性神经元数目和纹状体区酪氨酸羟化酶阳性神经纤维变化,高效液相色谱．电化学法检测重复经颅磁刺激对帕金森病小鼠纹状体多巴胺表达水平的影响。结果重复经颅磁刺激组小鼠停留于旋转杆上的圈数（85．89±3．74）、黑质区酪氨酸羟化酶阳性神经元数目（36．67±3．82）和纹状体多巴胺表达水平（258．70±1．06）均高于单纯帕金森病模型组（59．71±8．33,31．67±3．35,152．35±1．64;均P：0．000）。结论重复经颅磁刺激可改善帕金森病小鼠运动协调能力,保护受损黑质区酪氨酸羟化酶阳性神经元及纹状体区酪氨酸羟化酶阳性神经纤维,提高纹状体多巴胺及其代谢产物水平。     

NMDA受体和GABA受体拮抗剂对小鼠脑内多巴胺的影响

目的 观察兴奋性氨基酸受体拮抗剂和GABA受体拮抗剂对帕金森病（PD）模型动物全脑多巴胺（DA）含量的影响，为PD发病机制研究提供理论依据。方法 采用MPTP腹腔注射建立C57 BL小鼠PD模型，同时分别腹腔注射兴奋性氨基酸NMDA受体拮抗剂ketamine和GABA受体拮抗剂bicucullin．采用荧光分光光度计法测定各组小鼠全脑DA的含量。结果 ketamine＋MPTP组、bicucullin＋MPTP组与MPTP组及NS组比较，DA含量差异有统计学意义。结论 NMDA受体拮抗剂可抑制由MPTP引起的DA神经递质减少，GABA受体拮抗剂可增强MPTP引起的DA神经递质减少。     

Lesion-induced increase of BDNF is greater in the striatum of young versus old rat brain

Young (4-5 month old) and old (32-34 month old) Brown Norway/F344 hybrid rats were given unilateral 6-OHDA lesions of the nigrostriatal pathway. Four weeks later tissue from the lesioned or intact striatum or ventral midbrain was dissected and analyzed for brain-derived neurotrophic factor (BDNF) protein levels using an enzyme-linked immunosorbent assay. BDNF protein content was greater in the lesioned striatum than in the intact striatum for all young rats, and the increased BDNF content in the lesioned striatum of young rats was directly correlated with severity of lesion as determined by rotational scores. BDNF content in the lesioned striatum increased in less than half of the old rats and was not significantly different than BDNF content in the intact striatum. BDNF content in the lesioned substantia nigra/ventral tegmental area (SN/VTA) was greater than BDNF content in the intact SN/VTA for both young and old rats. These data suggest that an age-related difference in activity of at least one neurotrophic factor, BDNF, occur within the denervated striatum following a neurotoxic lesion of the nigrostriatal pathway.