转染外源HCAP1基因对Raji细胞化疗敏感性的作用

 目的　探讨外源HCAP1基因产物对B淋巴瘤 /白血病细胞系Raji细胞化疗敏感性的作用。 方法　用脂质体介导法 ,把HCAP1基因转染Raji细胞 ,经G4 18筛选后 ,分别与化疗药物DNR(daunoru bicin ,柔红霉素 )、VP16 (etoposide ,足叶乙甙 )和VCR(vincristine,长春新碱 )联合培养 2 4小时 ,用苔盼兰拒染试验计数活细胞。结果　转染HCAP1的Raji细胞 ,在不同浓度的DNR(0 .0 1～ 10 .0 μg/ml)和VP16 (5～ 80 μg/ml)作用下 ,与转染空载体和未转染对照细胞比较 ,细胞活力的抑制作用明显增强 (P <0 .0 5 )、IC50 (半数抑制浓度 )值明显降低 ;但与不同浓度的VCR(12 .5～ 10 0 μg/ml)作用 ,细胞活力的抑制和IC50 值与对照细胞相似。结论　HCAP1过表达可明显增加Raji细胞对DNR、VP16作用的敏感性 ,但不能显著增加对VCR作用的敏感性     

人恶性淋巴瘤细胞Raji长春新碱耐药株Raji/VCR的建立及其生物学特性

目的：建立人恶性淋巴瘤细胞Raji长春新碱（VCR）耐药株Raji/VCR并初步研究其生物学特性。方法：采用大剂量VCR间歇诱导法建立耐药株Raji/VCR。MTT法测定其对VCR、足叶乙甙(VP-16）和阿霉素（ADM）的药物敏感度,Real-time RT-PCR法测定细胞DMR1mRNA水平,流式细胞仪检测P-gp表达和细胞内柔红霉素（DNR）浓度。结果：历时近8月建成人恶性淋巴瘤多药耐药株Raji/VCR,其对VCR、ADM、VP-16的耐药倍数分别为8、5和3。Raji/VCR的DMR1mRNA及P-gp表达明显高于亲本细胞,而细胞内DNR浓度明显下降。结论：耐药株Raji/VCR具有多药耐药细胞的基本生物学特性,可用于肿瘤多药耐药的相关研究。     

转ARL-1基因HepG2细胞耐药相关基因的筛选

背景与目的:醛糖还原酶相似基因1(aldose-reductaselikegene-1,ARL-1)在原发性肝癌中高表达,与肝癌细胞对化疗药物耐药有关。本研究拟建立转染ARL-1的人肝癌细胞株,观察转染ARL-1的HepG2细胞对含醛基抗肿瘤药物耐药性的改变,利用基因表达谱芯片筛选HepG2细胞转染ARL-1后差异表达耐药相关基因。方法:采用脂质体转染PBK/ARL-1质粒到HepG2细胞,获得高表达ARL-1的单克隆细胞株;RT-PCR、流式免疫荧光和免疫组化鉴定高表达ARL-1的HepG2细胞;应用MTT法和细胞凋亡分析研究HepG2细胞和转染ARL-1的HepG2细胞对含醛基抗肿瘤药物阿霉素(ADM)和丝裂霉素(MMC)的耐药性,以5-氟尿嘧啶(5-FU)(不含醛基)为对照;将Cy3和Cy5两种荧光染料分别标记两种细胞的cDNA探针,与人肝癌基因表达谱芯片进行杂交与扫描,观察转染ARL-1基因HepG2与对照组HepG2细胞在基因表达谱方面的差异,筛选耐药相关基因,并运用RT-PCR和Westernblot对部分差异表达相关基因进行初步证实。结果:与对照组HepG2细胞相比,转染ARL-1基因HepG2细胞高表达ARL-1蛋白,明显增强对含醛基的抗肿瘤药物如ADM、MMC的耐药性,分别提高2.6倍和3.47倍,用5-FU处理两组细胞,则未发现有明显的耐药差异(ADM组t=6.39,P<0.05;MMC组t=30.06,P<0.01;5-FU组t=0.684,P>0.05);芯片扫描结     

siRNA逆转白血病K562/ADM细胞对抗癌药物耐受性的研究

目的:研究小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)对多药耐药细胞K562/ADM耐药性的逆转效应.方法:以K562/ADM细胞为靶细胞,针对mdrl基因mRNA不同靶点设计合成4对siRNA分子,脂质体介导转染K562/ADM细胞,RT-PCR和实时荧光定量PCR检测mdrl基因mRNA的表达水平,流式细胞术(FCM)测定P-糖蛋白(P-gp)表达;MTT比色法检测K562/ADM细胞对多柔比星(ADM)、柔红霉素(DNR)和依托泊苷(Vp-16)的敏感性.结果:选择mdrl mRNA的4个靶点设计合成的siRNA中,针对333靶点的siRNA(si-mdrl/333)对mdrl基因的表达具有较好的沉默效果,RT-PCR和实时定量PCR检测,mdrl mRNA表达分别降低69%和63%;FCM检测P-gp的表达强度(MFI)降低约50%.si-mdrl/333可提高K562/ADM细胞对ADM、DNR和Vp-16的敏感性,耐药逆转倍数分别为3.45、1.70和2.91倍.结论:siRNA能特异性地阻抑白血病多药耐药细胞K562/ADM细胞mdrl基因的表达,逆转其对抗癌药物的耐受性.     

MDR1基因下调逆转人白血病阿霉素耐药细胞株K562/ADM的耐药性

目的：探讨RNA干扰（RNAi）人MDR1基因对人白血病阿霉素耐药细胞株K562/ADM耐药性的影响。方法：应用针对人MDR1基因的RNAi质粒pENTRTM/U6-MDR1转染人白血病阿霉素耐药细胞株K562/ADM和亲本细胞株K562,48 h后实时荧光定量PCR检测MDR1 mRNA表达,流式细胞术检测P-gp蛋白表达和P-gp功能,MTT法检测细胞对ADM的耐药性。结果：与未转染细胞相比,K562/ADM耐药细胞pENTRTM/U6-MDR1组的MDR1 mRNA和P-gp蛋白表达和功能均显著下降（ P <0.05）,对阿霉素的耐药性显著降低（ P <0.05）。结论：MDR1基因下调可逆转人白血病阿霉素耐药细胞株对阿霉素的耐药性。     

沉默CtBP1基因逆转人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)的多药耐药性

目的:探讨短发夹式RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰羧基末端结合蛋白1(C-terminal-binding proteins 1,CtBP1)基因表达是否可以逆转多药耐药基因1(multidrug resistant gene 1,MDR1)介导的人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)的多药耐药性.方法:采用脂质体转染法将特异性的shRNA1和shRNA2及非特异性的shRNAHK质粒转染入人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)中,RT-PCR法检测各组细胞MDR1基因表达水平,Western印迹法检测各组细胞P糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)的表达,MTT法测定各组细胞对多柔比星的敏感性变化.结果:RT-PCR结果显示,shRNA1组和shRNA2组细胞中MDR1基因被抑制,基因表达抑制率约50%;Western印迹结果显示,shRNA1组和shRNA2组细胞P-gp蛋白的表达水平显著降低;MTT检测发现,shRNA转染48和72 h时shRNA1组和shRNA2组细胞对多柔比星的敏感性增加(P<0.01).结论:沉默CtBP1基因可抑制人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)中MDR1基因和P-gp蛋白的表达,降低细胞的耐药性.     

靶向HOXA9基因RNAi慢病毒载体增加人急性单核细胞白血病U937细胞的药物敏感性

目的:探讨慢病毒载体介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默同源盒A9(homeobox A9,HOXA9)基因对人急性单核细胞白血病U937细胞药物敏感性的影响。方法:应用蛋白质印迹法从4条针对HOXA9基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体中筛选出1条敲减效率最高的包装成慢病毒HOXA9/GV118RNAi-LV#2。实验分成未感染对照组(control,CON)、阴性对照组(negative control,NC)及敲减组(knock down,KD)。HOXA9/GV118RNAi-LV#2感染U937细胞后,应用实时荧光定量PCR法检测HOXA9 mRNA的沉默效率,蛋白质印迹法检测HOXA9蛋白的表达,MTT法和FCM检测病毒感染前后U937细胞对长春新碱(vincristine,VCR)和柔红霉素(daunorubicin,DNR)的敏感性及细胞凋亡率变化,RT-PCR法检测DNR作用后各组细胞中MDR-1mRNA的表达。结果:KD组细胞中HOXA9mRNA的沉默效率在55%以上,HOXA9蛋白的表达量明显减少。VCR及DNR作用KD组细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值明显降低(P<0.01),药物敏感性明显增强;VCR和DNR作用后,KD组细胞的凋亡率明显增加(P<0.01);DNR作用后,KD组U937细胞中MDR-1mRNA的表达水平明显下调(P<0.01)。结论:靶向HOXA9基因的RNAi慢病毒可稳定沉默HOXA9基因的表达,在一定程度上提高U937细胞对化疗药物的敏感性。     

基因RNA干扰载体的构建及其对乳腺癌细胞耐药性的影响

目的:构建针对CIAPIN1基因的慢病毒siRNA表达载体并稳定转染人乳腺癌多柔比星耐药细胞MCF-7/ADM,观察该基因对乳腺癌细胞耐药性的影响。方法:设计合成针对CIAPIN1的siRNA重组质粒表达载体,并筛选出最有效的干扰序列,使用病毒包装系统进行慢病毒颗粒的包装和生产,获取ADM-CIAPIN1 RNAi稳定表达细胞株;MTT法检测CIAPIN1基因干扰前后细胞对于不同化疗药物IC50值的变化。结果:测序验证针对CIAPIN1的siRNA重组质粒构建成功,并筛选CIAP-IN1-siRNA1为最佳干扰序列;以慢病毒为载体将干扰表达质粒稳定转染入乳腺癌细胞MCF-7/ADM后,抑制CIAPIN1表达水平超过88%。RNA干扰后紫杉醇、多柔比星及吉西他滨3种抗肿瘤药物对于MCF-7/ADM细胞的IC50值均显著下降[(7.12±0.31)、(11.21±1.79)、(49.72±4.52)vs(1.13±0.06)、(4.51±0.20)、(18.30±1.27)μg/ml,P<0.01],说明该细胞的耐药性明显减弱。结论:针对CIAPIN1基因的慢病毒siRNA表达载体可以有效抑制MCF-7/ADM细胞中该基因的表达,CIAPIN1基因表达下调可使乳腺癌细胞的多药耐药性发生逆转。     

靶向抑制Slug基因表达对BxPC-3细胞凋亡和对5-FU化疗敏感性影响的实验研究

目的:探讨siRNA干扰Slug基因表达对BxPC-3细胞增殖、凋亡和对5-FU化疗敏感性的影响.方法:用脂质体转染法将表达siRNA-Slug的真核表达载体pGenesil-1-Slug-siRNA(pSlug-siRNA)和空载体pGenesil-1-Neg-siRNA(pNeg-siRNA)导入胰腺癌BxPC-3细胞,G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆.将转染栽体的BxPC-3阳性克隆细胞和未转染载体的BxPC-3细胞分别暴露于系列浓度(0.01～100 μmol/L)的5-FU 72 h.RT-PCR和蛋白质印迹法检测不同组细胞经5-FU作用72 h后的Slug表达;MTT法测定各组细胞生存率并计算IC50,Hoechst33258和PI双染色和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞的凋亡.结果:实验组细胞内Slug基因被有效沉默;BxPC-3、BxPC-3/pSlug-siRNA知BxPC-3/pNeg-siRNA细胞的5-FU IC50分别为(11.0±2.1)、(1.5±0.4)和(9.7±1.3)μmol/L(P<0.05).BxPC-3/pSlug-siRNA细胞对5-FU作用的敏感性增加了7.33倍.5-FU以剂量依赖方式诱导BxPC-3细胞凋亡,但对BxPC-3/pSlug-siRNA细胞所诱导的凋亡比BxPC-3和BxPC-3/pNeg-siRNA更明显.结论:靶向抑制Slug基因表达促进胰腺癌BxPC-3细胞凋亡,并增强BxPC-3对5-FU的化疗敏感性.     

EZH2基因在人卵巢癌顺铂耐药株中的表达及其对细胞耐药性的影响

目的:检测果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2, EZH2)基因在人卵巢癌顺铂(cisplatin, DDP)耐药细胞株A2780/DDP及其亲本细胞株A2780中的表达差异,探讨以EZH2基因为靶向的RNA干扰能否有效逆转A2780/DDP细胞对DDP的耐药性.方法:采用实时荧光定量PCR(real-time fluorogenic quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western印迹法检测EZH2 mRNA和蛋白在A2780/DDP及A2780细胞中的表达差异.人工构建4个靶向沉默EZH2基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)质粒表达载体,脂质体法瞬时转染至A2780/DDP细胞,RFQ-PCR检测EZH2基因的沉默水平并挑选沉默效果最佳的质粒载体,G418加压筛选得到转染稳定的细胞株.RFQ-PCR和Western印迹法检测稳定转染后A2780/DDP细胞中EZH2基因的表达,MTT法检测转染细胞对DDP的耐药性.结果:A2780/DDP细胞中EZH2 mRNA和蛋白的表达量分别是A2780细胞表达量的(3.50±1.06)和(2.10±0.29)倍,差异有统计学意义(P<0.01).稳定转染EZH2 shRNA后的A2780/DDP细胞,EZH2的mRNA及蛋白水平的表达量分别下降(83.66±5.65)%和(77.57±3.90)%(P<0.001),其对DDP的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值下降(61.33±11.40)%,差异有统计学意义(P<0.05). 结论:EZH2基因在A2780/DDP细胞中的表达明显升高,沉默EZH2基因能有效逆转A2780/DDP细胞对DDP的耐药性.     

Possibility of predicting the results of the surgical treatment of cancer of the thoracic portion of the esophagus

Within a 18-year period in the clinic 273 patients were subjected to radical surgery for cancer of the thoracic esophagus. 206 patients were discharged from the clinic. The survival rate for 5 years and longer was noted in 58 patients. The data and results of the treatment depending on a sum of clinical signs were treated mathematically. It is noted that the patients' survival is influenced by such factors as sex, the stage of the disease, the morphological structure of tumor, the character of course, tumor size and spread, the type of surgical intervention. An advanced course, changes in blood presence of metastases do not seem to be the reason for cancellation of the operation.     

Cardiac tolerance of the combination paclitaxel-anthracyclines in the context of the management of cancer of the breast

Within the past decades there has been major interest in associating the paclitaxel into the management of breast cancer patients with a strong improvement of clinical results. Moreover, doxorubicin is historically one of the major chemotherapeutic agents in breast cancer treatment. So, investigations of the combination of the paclitaxel with doxorubicin have logically taken place in the strategy of breast cancer management. Also, this association became a standard of care neoadjuvantly in locally advanced breast cancer. The aim of this review of literature consists to make a special focus on cardiac toxicity occurring after doxorubicin and paclitaxel association and to give adequate directions for the next future in this promising combination.     

Improvement of the efficiency of the treatment of gastric cancer by the standardization of the treatment plan

Standardized treatment plan for gastric cancer was established in our department by which surgeons and nurses understood the treatment schedules of each gastric cancer patient as the common knowledge, and the cooperation of surgeons and nurses could be improved. Furthermore, the modality decreased the length of hospital stay from 35 +/- 15 days to 24 +/- 8 days, which indicated that the number of patients per one bed for one year increased from 10 to 15, and the efficiency of the treatment of gastric cancer patients 50% by our system.