组蛋白与基因调控研究进展

组蛋白是染色体的结构蛋白,它与DNA组成的核小体是染色体的基本结构单元。组蛋白能保护DNA免被核酸酶消化。除此之外组蛋白还有多种功能,它在基因调控、肿瘤细胞增殖、调亡、DNA修复以及衰老中发挥重要作用,它同时还是先天免疫的有效分子。本综述重点讨论了组蛋白的结构以及它们在基因调控中所发挥的调节作用。     

α晶体蛋白对视网膜神经节细胞作用的初步研究

目的 探讨α晶体蛋白对体外培养视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的作用.方法 原代培养RGCs,Thy1.1免疫荧光法鉴定RGCs并进行纯度检测,10-7、10-6、10-5、10-4 g/L α晶体蛋白加入后于1、3、12 h、1、2 d和3 d在相差倒置显微镜下观察RGCs形态学变化;计数突起数目和轴突长度;应用免疫荧光及激光共聚焦扫描技术观察实验组α晶体蛋白在体外培养RGCs上的定位并进行荧光强度半定量分析.结果 Thy1.1鉴定RGCs纯度为90%～95%,RGCs 10-4、10-5 g/L组突起数目及轴突长度显著大于对照组,以10-4 g/L组变化最显著.免疫荧光结果显示10-4 g/Lα晶体蛋白组RGCs与α晶体蛋白抗体呈阳性结合,并呈先升高后降低趋势.结论 α晶体蛋白能够促进RGCs生长,最佳浓度为10-4 g/L,细胞膜上抗体结合阳性,表明α晶体蛋白可与RGCs膜结合,这在α晶体蛋白促进RGCs存活和轴突再生的反应中可能起重要作用.     

中国人群中肾上腺素α2A受体基因SNP的分布及其对基因表达的影响

目的：在中国人群肾上腺素α2A受体(α2A-AR)基因中搜寻单核苷酸多态性(SNP)并研究其对基因表达的影响。方法：对α2A-AR基因进行序列分析，搜寻SNP。从全血中提取基因组DNA，扩增包含G／C多态性位点的239bpDNA片段。利用PCR-RFLP方法对中国北方人群α2A-AR基因-1296bp位点SNP进行基因分型。利用凝胶阻滞方法研究含G／C的390bp DNA片段与细胞核提取物的结合。结果：在中国北方人群α2A-AR基因中共发现2处SNP。-1296位SNP等位基因G、C频率分别为0．61和0．39，基因型GC,，C,C，CC频率分别为0．34，0．54，0．13。EMSA结果表明，细胞核提取物与-1296bp为C的DNA片段可特异性结合。结论：中国北方人群啦α2A-AR基因中存在2处SNP，调控区(-1296位)SNP等位基因为C的DNA片段可与特异性蛋白质结合，可能通过这一机制影响基因表达。     

STAT1对hsp90α基因表达的负调控作用

目的探讨转录因子STAT1对hsp90α基因表达的调控作用.方法将STAT1表达质粒转染Jurkat细胞,利用竞争性RT-PCR定量检测其内源性hsp90α基因mRNA水平.共转染STAT1表达质粒和hsp90α基因上游调控区不同长度的片段驱动的氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因质粒,利用定量RT-PCR检测CAT报告基因转录水平.用Western印迹分析方法检测42℃1h热激前后Jurkat细胞中STAT1酪氨酸磷酸化状态,用电泳迁移率变更分析(EMSA)检测STAT1与hsp90α5′基因上游调控区中含有STAT1特异结合元件的双链寡核苷酸片段特异性结合程度.结果STAT1既可抑制Jurkat细胞hsp90α基因的表达,又能抑制hsp90α基因5′上游调控区驱动的CAT报告基因活性.热激以前Jurkat细胞中的STAT1701位酪氨酸已有一定程度的磷酸化,热激以后其磷酸化程度明显升高,而且STAT1与hsp90α基因5′上游调控区中的STAT1结合元件呈特异性结合.结论STAT1对hsp90α基因的表达具有负调控作用.     

人食管癌EC9706细胞中Gadd45α基因的表达

Gadd45α基因位于人类1号染色体短臂上,其mRNA全长1355 bp.研究[1-4]发现,Gadd45α在细胞周期调控、细胞凋亡、DNA损伤修复以及维持基因组稳定性中起重要作用,与许多肿瘤(如肝癌、胰腺癌、乳癌、非小细胞肺癌等)的发生发展关系密切.作者采用实时定量PCR技术检测人食管癌EC9706细胞培养不同时间Gadd45α基因的相对表达量,观察EC9706细胞Gadd45α基因表达的稳定性,为食管癌的基因研究提供一定的参考.     

α-crystallin与多种细胞作用的免疫荧光观察

目的 在α-crystallin(α晶体蛋白)对RGCs保护性作用研究并进行定位研究的基础上,对α-crystallin与其他细胞之间的作用相比较,以期揭示α-crystallin与RGCs作用的本质.方法 原代培养大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)、大鼠巨噬细胞、大鼠心肌细胞以及传代培养的ECV细胞株、293细胞细胞株、猪视网膜色素上皮细胞(RPE).应用免疫荧光结合激光共聚焦技术观察α-crystallin与多种细胞的作用.结果 免疫荧光结合激光共聚焦发现α晶体蛋白在3种细胞中有阳性免疫沉积物出现在细胞膜上,其对照组阴性;3种细胞见实验组和对照组均有阳性免疫沉积物出现在细胞浆、细胞核中.结论 α晶体蛋白不是特异性与RGCs发生作用,它是广泛存在的生物学效应物质.α晶体蛋白具有sHSP的抗应激损伤特性,对于不表达内源性α晶体蛋白的同时又是抗损伤能力较弱的RGCs,可通过增加外源性α晶体蛋白达到有效保护RGCs的目的 .     

c-myc基因mRNA核酶真核表达载体的构建和鉴定

0　引言　冠状动脉腔内球囊成形术 (PTCA)被公认为是治疗冠心病最有效的非手术方法 ,然而 PTCA术后 6 mo球囊扩张动脉段再狭窄的发生率达 30 %以上 ,其中血管平滑肌细胞的增殖、向内膜下迁移是再狭窄的主要病理改变之一 [1 ] .研究表明 ,c- myc基因属于速发 -早期基因 ,编码产物为核内DNA结合蛋白 ,在核内的信息传递过程中起重要作用 ,可促进与细胞增殖有关的基因开放 ,产生细胞增殖效应 ,是血管平滑肌细胞增殖、迁移的触发和调控因素 ,在再狭窄的发生过程中起重要作用 [2 ,3] .我们在计算机辅助下设计了特异性切割c- myc基因 m RNA的…     

遗传性白内障与晶体蛋白基因

先天性白内障严重影响着视觉的发育。白内障的产生是大量基因通过不同机制相互作用导致突变的最终结果,大多数遗传性白内障与晶体蛋白基因的突变有关,这些晶体蛋白基因对维持晶状体的透明性和稳定性起着至关重要的作用。现对与遗传性白内障相关的晶体蛋白基因定位、晶体蛋白的组成与结构、翻译后修饰和突变蛋白的功能进行综述。     

转录因子AP-2在肿瘤发生中的双向调节作用

激活蛋白-2是一类具有细胞特异性结合DNA的转录因子家族,能特异性调控靶基因的表达,迄今已发现α、β、γ、δ、ε五个亚型,在调节细胞增殖、分化和凋亡以及哺乳动物的胚胎发育中起到重要作用.近年来,其在肿瘤发生发展中的作用也日益受到关注.众多研究表明,激活蛋白-2的调节效应可能为双向,即抑癌或促癌,与组织特异性、时间先后以及各亚型之间差异性等相关.文中着重综述了AP-2在肿瘤发生中作用的最新进展以及临床应用前景.     

白细胞介素2受体α基因表达中两组近端启动子活性的研究

淋巴细胞表面的高亲和力白细胞介素2受体(IL-2R)由α、β和γ三个亚基组成.其中α亚基只在激活淋巴细胞上表达,并且只能与IL-2特异性结合.因此,IL-2Rα基因的活化过程参与决定淋巴细胞增殖和免疫应答强度的调控.IL-2Rα基因至少存在两组近端启动子,即分别位于-58(5')及+1(3')转录起始位点及其各自上游30 bp附近的两个TATA盒.为探讨它们在PHA激活前后的淋巴细胞中IL-2Rα基因表达中的作用,应用PCR及分子重组技术构建了两组分别受IL-2Rα基因片段驱动的荧光素酶(Luciferase,Luc)报告基因质粒:     

人GDNF基因的克隆

目的：克隆可表达人胶质细胞源性神经营养因子的基因。方法：从脑胶质细胞瘤患者术后的脑瘤组织中提取总ＲＮＡ，以ＲＴＰＣＲ方法扩增出了一段约５５８ｂｐ的ｃＤＮＡ片段，将这一片段克隆于ｐＵＣ１８载体中，进行全序列分析。结果：证实该研究所克隆的ｃＤＮＡ是编码正确的人ＧＤＮＦ基因。与发表于ＧｅｎｅＢａｎｋ上的序列相比，发现该研究克隆的基因有一段７８ｂｐ的核苷酸序列缺失，但不影响密码子的阅读框。结论：克隆到了编码正确的人ＧＤＮＦ的ｃＤＮＡ全序列，对帕金森病基因治疗的基础研究及临床应用具有重要意义。     

Rb基因对人视网膜母细胞瘤株SO-Rb50的影响

目的：探讨视网膜母细胞瘤（Rb）的发生与Rb基因（Rb1）缺失、失活等异常的关系。方法：用逆转录病毒载体pDOR与全长4．7kb野生型Rb1cDNA构建逆转录病毒表达载体pDOR－Rb1+。用脂质体介导法将pDOR－Rb1+转入CRIP包装细胞系。结果：实验产生了0．5X105Cfu具有一次感染能力的重组逆转病毒。利用该病毒感染SO-Rb50，经G418筛选，获得了抗G418细胞群体。运用PCR及Southern杂交技术对转染细胞进行检测，结果表明该抗G418细胞中有完整的外源Rb1存在。Northern杂交发现其Rb1mRNA表达水平有所提高。对细胞群体生长速率、软琼脂集落形成能力的测定表明，外源Rb1的表达使SO-Rb50在软琼脂中集落形成能力降低，而群体生长速率无明显影响。结论：外源Rb1对SO-Rb50恶性表型有一定影响。     

143名藏族中学生ABO血系基因频率的检测与分析

ABO 血系检测已在输血、妊娠免疫血液病、组织器官移植、疾病相关性、人类学、法医学中广泛应用。不文对郑州市第四中学藏族143名学生 ABO 血系进行检测与分析:A 型频率为18.18,B 型频率为43.36,AB 型频率为6.29,O 型频率为32.17;I~A基因频率为0.1310,I~B 基因频率为0.3018,基因频率为0.5672.     

Alport综合征的家系调查及研究

目的：调查Alport综合征一家系的遗传方式及临床特点。方法：对该家系(45人)进行家系调查、体格检查、实验室检查、病理检查及超微结构检查。结果：该家系中2位先证者各项检查均符合Alport综合征的诊断标准。该家系发病率为33.3％，为性连锁显性遗传(XD)，其蛋白尿、血尿发生率分别为28．9％和57．9％，眼病、神经性耳聋发生率分别为52．6％和15.8％。结论：XD-Alport综合征的血尿和眼病发生率较高，可仅有血尿而无蛋白尿，临床上应特别注意。     

降钙素基因工程研究

降钙素临床上被用于治疗老年骨质硫松等，本文成功地全合成了人的降钙素基因，基因全长１０９个碱基对，分四个片段，在５′端有一个ＥｃｏＲＩ位点和一个精氨酸密码，３′端有一个ＢａｍＨＩ位点，一个甘氨酸密码和一个终止密码．合成基因克隆到ｐＷＲ５９０并转化ＪＭ１０９．用ＤＮＡ分子杂交筛选到单克隆，并对合成基因进行序列分析．同时对克隆菌的发酵、表达和质粒稳定性进行研究，结果较好．     

慢性丙型肝炎患者HCV核心蛋白基因及其肽链的序列分析

为探讨丙型肝炎病毒感染在肝癌发生中的作用，从３５例ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性的非甲非乙型肝病患者血清中提取ＨＣＶ－ＲＮＡ，经随机引物逆转合成ｃＤＮＡ，在病毒的Ｃ基因区进行分型，再于病毒５‘－末端至Ｅ１区进行测序分析。     

肺肿瘤癌基因与抑癌基因表达的研究

目的探讨癌基因与抑癌基因的表达与肺癌发生、发展的关系。方法对61例肺肿瘤标本,用免疫组化方法同时检测癌基因Bcl-2、抑癌基因视网膜母细胞瘤(Rb)、p53、p16。结果Rb与p16表达、p53与Bcl-2表达呈负相关(P<0．05),Rb与p53表达、p16与Bcl-2表达呈正相关(P<0．05)。结论肺癌的发生与发展是癌基因激活、抑癌基因失活及细胞凋亡调控基因异常等多基因损害的积累过程和协同作用使各细胞增殖调控途径失控,最终导致肺癌发生并使肺癌发展。     

凋亡相关基因Bax,Bcl-2在大鼠急性胰腺炎中表达的研究

目的 :探讨凋亡调控基因Bax ,Bcl- 2在胰腺组织中的表达情况与急性胰腺炎严重程度的关系。方法 ;制作大鼠急性重型胰腺炎和急性轻型胰腺炎模型。制模后 3h取材 ,查血清胰淀粉酶及应免疫组化SABC法检测胰腺组织中基因Bax ,Bcl- 2蛋白表达。结果 :急性胰腺炎时 ,基因Bax蛋白表达在胰腺腺泡细胞胞浆 ,急性轻型胰腺炎组和急性重型胰腺炎组均明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,且急性轻型胰腺炎组高于急性重型胰腺炎组 (P <0 .0 5 ) ;Bcl- 2蛋白表达在胰腺导管细胞胞浆 ,对照组Bcl- 2蛋白表达弱 ,急性轻型胰腺炎组和急性重型胰腺炎组表达明显增强 ,急性重型胰腺炎组高于急性轻型胰腺炎组 ,统计学处理急性轻型胰腺炎组和急性重型胰腺炎组之间无显著性差异 ,但急性轻型胰腺炎组、急性重型胰腺炎组与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :Bax基因在大鼠的急性胰腺炎过程中可能参与诱导胰腺腺泡细胞凋亡 ,减轻胰腺炎症反应程度 ;而Bcl- 2基因可能参与防止导管细胞凋亡而促进其增生并且形成导管管状复合体     

人脑原发性肿瘤中c-fos基因的扩增、重排及过强表达

以c-fos基因为分子探针,对2例正常人脑和11例人脑原发性肿瘤DNA进行Southern吸印杂交分析,同时对上述部分样品的总RNA进行斑点杂交分析。结果表明:1例多形性胶质母细胞瘤发生c-fos基因的扩增和过强表达;1例室管膜瘤在发生c-fos基因扩增的同时,还发生c-fos基因的重排,提示c-fos基因在人脑原发性肿瘤的恶变过程中起着重要作用,其表达水平与肿瘤细胞的分化程度有着密切关系。     

两种载体表达人乳头瘤病毒6型L_1基因的比较

以表达融合蛋白的载体PUR288以及高效表达载体PBV221作载体,在大肠杆菌内成功地表达了我国克隆的HPV6BVL_I基因,并对表达蛋白进行免疫学鉴定,对两种载体的表达情况进行了讨论。