眼镜蛇毒细胞毒素CTX-d诱导NB4细胞凋亡及其机制研究

目的探讨眼镜蛇毒细胞毒素CTX-d诱导NB细胞凋亡的机制。方法MTT法测定CTX-d体外细胞毒作用,电镜、流式细胞仪观察CTX-d对NB4细胞的诱导凋亡作用,流式细胞仪检测NB4细胞线粒体膜电位的变化,Western-blotting测定胞浆细胞色素C及caspase-9、caspase-3的变化。结果CTX-d作用NB4细胞6、12h的IC50分别为1.8、1.35μg/mL;CTX-d引起NB4细胞线粒体肿胀、核固缩等形态学改变;诱导NB4细胞出现亚G1期的凋亡峰,且有时效及量效关系;CTX-d(1.0μg/mL)作用0.5h,NB4细胞线粒体膜电位已开始下降,同时在胞浆中检测到细胞色素C,显示细胞色素C已由线粒体释放入胞浆;caspase-9酶原的量在CTX-d(1.0μg/mL)作用1h时开始下降,而活化的caspase-3片断在0.5h即检测到,表明除了通过caspase-9,CTX-d还可能通过其他途径激活caspase-3。结论CTX-d可通过降低线粒体膜电位、细胞色素C释放,激活caspase-9和caspase-3,从而诱导NB4细胞凋亡,还可能通过其他途径激活caspase-3,参与凋亡作用。     

眼镜蛇毒细胞毒素在体外对人癌细胞的毒性作用（MTT法）

测定眼镜蛇毒细胞毒素对人癌细胞株的细胞抑制作用，以期能简便准确地反映其抗癌活性。应用溴化二苯四偶氮盐法测定在ＣＶ－ＣＴＸ作用下体外培养的人胃癌细胞株和人肝癌细胞株的存活情况和其量效关系。结果（１）ＳＭＣ，ＳＧＣ－７９－１的活细胞数与其分解ＭＴＴ的量成正线性关系。（２）ＣＶ－ＣＴＸ对ＳＭＣ，ＳＧＣ－７９０１癌细胞株的细胞抑制作用呈良好的量效关系，ＩＣ５０分别为２．４５Ｔ １．２４ｇ／ｍｌ。结论（１）     

中华眼镜蛇毒膜毒素对荷瘤小鼠S180细胞增殖和Bcl-2表达的影响

目的探讨蛇毒膜毒素(CTX)对移植性肿瘤的抑制及其对肿瘤细胞Bcl-2表达的影响.方法选取ICR小鼠48只,随机分为四组,在各组小鼠右腋皮下接种S180肉瘤细胞,3 d后各实验组小鼠分别腋下注射CTX0.8 mg/kg、0.4 mg/kg、0.2 mg/kg各0.1 mL,连续10 d.分析统计荷瘤小鼠的体重变化和肿瘤抑制率,并通过核仁组织区银染技术(AgNOR)和bcl-2蛋白的免疫组化实验,探讨CTX对体内肿瘤细胞生长和增殖的影响.结果CTX各剂量组荷瘤小鼠的平均瘤重和瘤/体比值与对照组相比显著地减少(P＜0.01),并有明显的剂量反应关系;CTX对体内S180肿瘤细胞的核仁形成区有明显的抑制效应,底、中、高剂量组的AgNOR数(3.693、2.578、1.042)均比对照组(x=3.858)明显减少,且随着CTX处理的浓度越大,AgNOR的数目也越少(P＜0.05,P＜0.001);对照组肿瘤细胞的bcl-2蛋白表达强烈,经CTX处理后,bcl-2蛋白表达减弱或被完全抑制.结论CTX对荷瘤小鼠体内肿瘤细胞生长的抑制作用,可能是通过抑制rDNA基因的活性和干扰bcl-2蛋白的表达,从而干扰和阻断肿瘤细胞的增殖.     

眼镜蛇毒抗肿瘤作用的研究进展

近年来,人们对蛇毒成分的抗肿瘤作用进行了较多的研究,其中眼镜蛇毒的抑癌作用引起了很大的关注［１］．１眼镜蛇毒的抗肿瘤作用１．１体外实验体外实验分两个层次：一是直接使用粗毒,二是使用提纯的蛇毒成分。我国学者赵蓉等［２］应用９种蛇毒（眼睛王蛇、眼镜蛇、金环蛇、银环蛇、青环海蛇、蝮蛇、尖吻蛇、竹叶青及圆斑蝰）的粗毒对多种人类实体瘤细胞株,包括子宫颈癌细胞株（Ｈｅｌａ）、鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ）、肝癌细胞株（ＳＭＣ）、胃癌细胞株（ＭＧＣ８０－３）等进行了直接毒性作用实验,结果表明眼镜蛇毒对肿瘤细胞的杀伤作…     

中华眼镜蛇毒心脏毒素—13对猪离体冠脉的作用

探讨中华眼镜蛇毒中分离纯化获得的心脏毒素－１３对离体冠脉血管平滑肌的作用和机制。用离子交换和凝胶过滤法从中华眼镜蛇毒中分离纯化出心脏毒素。以不同浓度ＣＴＸ－１３分别作用于猪冠脉环，观察记录其所诱发的血管环收缩。普萘洛尔，哌唑嗪和尼群地平分别与冠脉环预作用５ｍｉｎ，再分别给予不同浓度的ＣＴＸ－３，观察记录其收缩强度的变化。     

当归提取物对S180荷瘤模型小鼠肉瘤的抑瘤作用的实验研究

目的:探讨当归醇粗提物的抗肿瘤作用与机制。方法:昆明种小鼠60只接种腹水瘤,建立S180荷瘤模型小鼠,当归醇粗提物100、200、400 mg/kg剂量灌胃给药2周,计算模型小鼠的抑瘤率,脾指数和胸腺指数;MTT法测定当归水提物对模型小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;ELISA法测定模型小鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)及白介素(IL-2)表达。结果:当归醇粗提物可显著抑制S180荷瘤模型小鼠实体瘤的生长(P<0.05),提高脾和胸腺指数(P>0.05),促进Con A诱导的脾淋巴细胞增长和血清中TNF-α及IL-2的表达。结论:当归醇粗提物对S180实体瘤模型小鼠有抑制肿瘤生长作用,其作用机制可能与其具有促进免疫功能有关。     

复方守宫散对S180荷瘤小鼠镇痛作用研究

目的:研究复方守宫散对S180荷瘤小鼠的镇痛作用。方法:采用小鼠热板法和扭体法致痛模型来评价复方守宫散的镇痛作用。结果:复方守宫散可以明显延长荷瘤小鼠舔后足的时间和显著减少扭体反应的次数。结论:复方守宫散具有明显的镇痛作用。     

中华眼镜蛇毒组分C抗白血病作用的实验研究

目的：研究眼镜蛇毒组分Ｃ对白血病细胞的直接作用及机制。方法：应用ＭＴＴ、ＤＮＡ电泳、流式细胞仪ＲＴ－ＰＣＲ等方法,观察眼镜蛇毒组分Ｃ对ＨＬ６０等９株白血病细胞系的毒性作用、量效关系及白血病细胞经过眼镜蛇毒组分Ｃ处理后的生物化学、Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ表达水平变化。结果：眼镜蛇毒组分对９株人白血病细胞系均有明显的抑制作用,ＩＣ５０为０．００４６～４．４０μｇ／ｍｌ,且呈较好的量效关系（ｒ为０．６６～０．     

广东产眼镜蛇毒及其组份C对小鼠的抑瘤作用研究

本文进行了体内和体外实验，体内实验通过腹腔注射及灌胃给药，发现广东产眼镜蛇毒及其组份C对小鼠实验性肝癌及S-180肉瘤均有明显抑瘤作用，但口服给药剂量须达到腹腔注射给药剂量的50倍，才能产生相似的药效;体外实验中原毒及其组份C的抑癌作用量效关系明显，剂量增大肿瘤生长缓慢甚至完全不生长;在一定剂量范围内，组份C的抑瘤作用较原毒强。结果表明，广东产眼镜蛇毒及其组份C有抗实验性肝癌及S-180的作用。     

眼镜蛇毒组份M对血液流变学的影响

静脉注射眼镜蛇毒M组份（0．07mg／kg和0．1mg／kg）可使家兔和狗的全血粘度和血浆粘度降低，对家兔红细胞压积和红细胞电泳时间无影响。M组份在体内外均能抑制ADP和花生四烯酸所诱导的血小板聚集。     

眼镜蛇毒M组份对血小板聚集功能的研究

本文用眼镜蛇毒提取的 M 组份,对58例健康人的血小板聚集功能进行研究,发现其能抑制血小板对 ADP 的诱聚,初步认为其作用与其所含之纤溶酶与磷脂酶 A_2有关。     

眼镜蛇毒M组份对实验性血栓形成的影响

眼镜蛇毒M组份对家兔实验性血栓形成有剂量(或浓度)依赖性的抑制作用,静脉注射0.05～0.2mg/kg使家兔颈动——静脉旁路血栓湿重减轻,维持时间在1小时以上,静脉注射0.3mg/kg时,抑制率为59.19％,M组份亦可使Chandler管中血栓湿重、干重减轻。     

Therapeutic Potential of Naja Naja Atra Venom in A Rat Model of Diabetic Nephropathy

ObjectiveTo study the protective effects of naja naja atra venom (NNAV) in a rat model of diabetic nephropathy (DN).MethodsThe rat diabetes model was induced by intraperitoneal injection of streptozotocin (STZ). Thirty-two model rats were randomly divided into one DN group (n=8) and three treatment groups (n=8 each) that received NNAV at doses of 30, 90, or 270 μg/(kg·day) via oral gavage, another eight rats as normal controls. After 12 weeks, all rats were sacrificed and the changes in serum and urine biological index levels were determined by colorimetric assay. Microalbumin (mALB), N-acetyl-β- glucosaminidase (NAG) and cystatin C (CysC) concentrations were measured by ELISA. Renal tissues were sliced for pathological and immunohistochemical observations.ResultsComparied with the DN group, serum glucose was decreased by 31.04%, total cholesterol 21.96%, triglyceride 23.78%, serum creatinine 19.83%, blood urea nitrogen 31.28%, urinary protein excretion 45.42%, mALB 10.42%, NAG 20.65%, CysC 19.57%, whereas albumin increased by 5.55%, high-density lipoprotein-cholesterol 59.09%, creatinine clearance 19.05% in the treatment group by NNAV administration at dose of 90 μg/(kg·day). NNAV also reduced the levels of malondialdehyde in serum (22.56%) and kidney tissue (9.79%), and increased superoxide dismutase concentration in serum (15%) and decreased it in renal tissue (8.85%). In addition, under light microscopy kidney structure was improved and glomerular hypertrophy decreased by 8.29%. As shown by immunohistochemistry, NNAV inhibited transforming growth factor-β1 by 6.70% and nuclear actor-κB by 5.15%.ConclusionNNAV improves biological indexes in DN, and it may exert renoprotective effects in rats with STZ-induced diabetes.     

舟山眼镜蛇毒细胞毒素-F的体内抗肿瘤作用

目的　观察舟山眼镜蛇毒细胞毒素 - F(CTX- F)对小鼠肉瘤 180 (S180 )、宫颈癌 U14、艾氏腹水癌(EAC)和 P388白血病的体内抗肿瘤活性。　方法　 CTX- F不同剂量腹腔注射 (ip)对 EAC和 P388白血病荷瘤小鼠存活时间、生命延长率的影响 ;CTX- F不同剂量静脉注射对 U 14和 S180荷瘤小鼠瘤块重量的影响 ,并计算抑瘤率。　结果　 CTX- F 0 .6和 0 .8m g/ kg实验第 1、3和 5天给药 (ip) ,使艾氏腹水癌荷瘤小鼠存活时间由 10 .0± 2 .0d分别提高到 2 2 .2± 6 .3和 31.3± 9.2 d,生命延长率分别为 12 5 .5 %和 2 13.2 % ;P388小鼠存活时间从 10 .8± 1.9d分别延长到 15 .9± 1.9和 17.6± 2 .3d,生命延长率分别为 4 7.0 3%和 6 3.2 4 %。CTX- F 0 .8和 1.0 m g/ kg静脉注射 ,连续给药 7d,对宫颈癌 U 14抑瘤率分别为 2 6 .6 4 %和 38.87% ;对肉瘤 S180的抑瘤率分别为 31.8%和39.7%。　结论　舟山眼镜蛇毒 CXT- F对小鼠移植性肿瘤荷瘤小鼠具有实验性治疗作用     

眼镜蛇毒对大鼠丘脑腹内侧核c-jun表达的影响

目的:探讨眼镜蛇毒对大鼠丘脑腹内侧核(VM)c-jun表达的影响。方法:将18只SD大鼠随机分为正常对照组、生理盐水组、眼镜蛇毒组,每组6只。采用免疫组织化学方法观察VM的c-jun表达。结果:与正常对照组和生理盐水组相比,眼镜蛇毒组大鼠VM的c-jun表达增加(P<0.01)。结论:眼镜蛇毒对大鼠VM的c-jun表达有上调作用。     

中华眼镜蛇毒F组分对血小板活化时α颗粒膜蛋白的影响

目的：观察中华眼镜蛇毒F组分对血小板α－颗粒膜蛋白表达的影响，确定F组分是否具有抑制血小板活化的功能。方法：实验分成对照组，凝血酶组和各给药组（凝血酶＋F组分），应用酶免疫吸附法（ELISA）测定健康成年人血浆中的α－闰膜蛋白（GMP－140）含量的变化。结果：凝血酶能引起血浆中的GMP－140含量明显升高，中华眼镜蛇毒F组为100、30μg/ml明显降低凝血酶引起的血浆GMP－140含量升高，并呈现一定程度的剂量依赖关系，两组比较P＜0．05），结论：中华眼镜蛇毒F组分能够抑制激动剂引起的血小板活化。     

中华眼镜蛇毒纤溶组份的纤溶活性及其机制研究

目的：研究中华眼镜蛇（NajaNajaatra）蛇毒中单一纤溶活性组份对人纤维蛋白和纤维蛋白原的降解作用及其机制。方法：使用剩余可凝纤维蛋白原测定法和酶联纤维蛋白原溶解试验研究该纤溶活性组份对人纤维蛋白原的降解作用；使用纤维蛋白平板法和酶联纤维蛋白溶解试验研究它对人纤维蛋白的降解作用；对它的纤溶机制研究使用的是纤维蛋白溶解酶原激活物活性测定法。结果：该活性组分对人纤维蛋白和纤维蛋白原有直接的降解作用。其活性大约是粗毒的10倍。该活性组份仅降解纤维蛋白原的Aa链，对它的印链和了链没有作用。该组分对人纤维蛋白溶解酶原没有激活作用。结论：从中华眼镜蛇毒中提取的单一纤溶活性组分是一种新的能够直接降解人纤维蛋白和纤维蛋白原的酶类。     

鳖甲多糖抗肿瘤免疫调节作用及其机理的研究

[目的]探讨鳖甲多糖对S180荷瘤小鼠抗肿瘤免疫调节作用及其机理。[方法]制备S180荷瘤小鼠动物模型,随机分为荷瘤对照组(Ⅰ)、鳖甲多糖低剂量组(Ⅱ)、中剂量组(Ⅲ)和高剂量组(Ⅳ);通过测定荷瘤小鼠的瘤重、抑瘤率及瘤体比观察鳖甲多糖对肿瘤生长的影响;通过检测半数溶血值(HC50)、T淋巴细胞转化功能、脾细胞的增殖分化、NK细胞的活性以及腹腔巨噬细胞的吞噬功能,研究鳖甲多糖对荷瘤小鼠体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫功能的影响。[结果]鳖甲多糖能明显减小S180荷瘤小鼠的瘤重和瘤体比(P<0.05),能明显抑制肿瘤的生长(P<0.05),(Ⅱ)、(Ⅲ)、(Ⅳ)组的平均抑瘤率分别为30%、37%、45%;鳖甲多糖能明显改善S180荷瘤小鼠半数溶血值(P<0.05);鳖甲多糖能明显提高荷瘤小鼠T淋巴细胞的转化功能、脾细胞的转化功能和NK细胞的活性(P<0.05);鳖甲多糖能明显增强S180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能(P<0.05)。[结论]鳖甲多糖能明显抑制S180荷瘤小鼠肿瘤的生长,其机理可能是通过增强荷瘤小鼠的特异性免疫功能和非特异性免疫功能。     

雷公藤对荷S180小鼠的抑瘤作用的实验研究

目的探讨中药雷公藤治疗实验性肉瘤的疗效。方法建立荷S180小鼠模型,观察经雷公藤治疗对其肿瘤生长的影响。结果雷公藤能显著抑制肿瘤的生长,其抑瘤率达45．89％。结论雷公藤有明显的抗肿瘤作用。