Hepatocyte Growth Factor Improves the Therapeutic Efficacy of Human Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells via RAD51

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人骨髓间充质干细胞经肝细胞生长因子基因修饰后的促进鸡胚血管新生

本研究目的是评价人骨髓间充质干细胞（human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMMSC）经肝细胞生长因子基因（hepatocyte growth factor,HGF）修饰后的促血管新生效应,并初步分析其机理。利用重组腺病毒HGF转染hBMMSC,将细胞接种于鸡胚绒毛膜尿囊膜,与α-MEM、同代hBMMSC及bFGF比较,3天后计算其血管数量。用RT—PCR检测hBMMSC表达bFGF、VEGF、血管生成素-1和血管生成素-2的水平。结果表明：4个组中hBMMSC／HGF促血管生成能力最强,hBMMSC和bFGF组相近,α-MEM组最低。RT—PCR检测显示,hBMMSC和hBMMSC／HGF均表达多种促血管生成相关细胞因子,而HGF转染后表达水平升高。结论：经HGF基因修饰的hBMMSC具有较强的促血管新生的功能,本研究为缺血性疾病的治疗提供了有益的信息。     

腺病毒载体介导肝细胞生长因子基因对血管内皮细胞的作用

目的：研究腺病毒载体介导肝细胞生长因子（HGF）基因感染血管内皮细胞后在正常供氧、缺氧及缺氧后复氧的情况下细胞的凋亡情况。方法：将分离、培养的内皮细胞分为3组，分别给予M199（对照组）、HGF（HGF组）和HGF基因腺病毒载体（Ad-HGF组），分别在正常供氧、缺氧及缺氧后复氧3种情况下观察细胞的凋亡情况。结果：Ad-HGF组及HGF组细胞凋亡数均低于对照组（P〈0．01），Ad-HGF组与HGF组细胞凋亡数差异无显著性意义。结论：腺病毒载体介导HGF基因感染内皮细胞后能在缺氧情况下有效地阻止细胞凋亡。     

肝细胞生长因子基因治疗减轻胆管结扎肝纤维化的实验研究

目的:验证肝细胞生长因子(HGF)基因治疗在胆管结扎肝纤维化中的保护作用。方法:用雄性CD-1小鼠,随机分为3组。正常对照组仅解剖肝门分离胆总管,不作胆管结扎;胆管结扎的2组,分别给予HGF质粒(pCMV-HGF,1μg/g)和空质粒(pcDNA3),每2周1次。3个月后将小鼠处死,评价肝纤维化程度。结果:肝细胞生长因子基因治疗能显著减少胆管周围胶原的沉积,表现在:肝胶原染色(Masson-Trichrome染色)减少;胆管周围Ⅰ型和Ⅲ型胶原的免疫荧光染色减少。和空质粒组相比,HGF治疗组肝组织羟脯氨酸的含量显著降低(两组分别为0.48±0.04μg/mgvs1.37±0.06μg/mg,P<0.05);肝纤维母细胞的激活减少——表现为肝组织中α-SMA的表达减少(两组分别为0.32±0.05vs.0.84±0.14,P<0.05);TGF-β1的表达减少(两组分别为0.69±0.11vs.1.31±0.23,P(0.01)。结论:在胆管结扎肝纤维化中,肝细胞生长因子基因治疗能减轻肝纤维化的程度,肝细胞生长因子可用于肝纤维化的治疗。     

肝细胞生长因子对人胃癌细胞株AGS增殖的促进作用

目的:肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)是一种多肽生长因子,具有促进细胞增殖、诱导细胞迁移和形态改变的作用。本研究探讨HGF对人胃癌细胞株AGS增殖的影响。方法:体外培养人胃癌细胞株AGS,应用浓度为25、50、75、100 ng/mL的HGF分别处理AGS细胞24 h、48 h、72 h,采用CCK-8法检测AGS细胞的增殖情况。结果:CCK-8法检测结果显示,不同浓度的HGF对AGS细胞均有促增殖作用,随着HGF浓度的增加或作用时间的延长,细胞增殖活力呈上升趋势,在72 h最为明显,呈时间、浓度依赖关系(t为3.89、5.28、9.73、11.00,P0.01)。结论:HGF能显著促进人胃癌细胞株AGS的增殖。     

腺病毒载体介导肝细胞生长因子基因对血管平滑肌细胞的作用

目的：研究腺病毒载体介导肝细胞生长因子（HGF）基因感染血管平滑肌细胞后在缺氧和正常供氧时的细胞凋亡和迁移情况。方法：以肝细胞中抽提的总RNA为模板，反转录cDNA，采用逆转录-聚合酶链反应技术（RT-PCR）获得HGF基因，并引入酶切位点，转染大肠杆菌，筛选阳性菌落，经酶切及测序，转染腺病毒，经三轮扩增，制备高效表达HGF基因腺病毒载体（Ad-HGF），再感染人血管平滑肌细胞（VSMC）为观察组（Ad-HGF组）；未感染为阴性对照组（DMEM组）；以含人工合成HGF为阳性对照组（HGF组），分别在正常供氧和缺氧情况下观察细胞的凋亡和迁移情况。结果：与DMEM组及HGF组比较，Ad-HGF组在缺氧和正常供氧时VSMC的迁移率及凋亡细胞数差异均无显著性意义。结论：HGF基因感染VSMC后，在缺氧情况下并不促进VSMC的迁移。亦不抑制其凋亡。     

早期干预促进大鼠神经生长因子表达与脑功能的关系

目的　研究早期干预对宫内缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)大鼠脑内神经生长因子 (NGF)表达及脑功能状态的影响。方法　制备宫内 HIBD大鼠模型 33只 ,随机选择 18只通过早期触摸和丰富环境刺激进行早期干预 ,其余为非干预组 ,同时设正常对照组 18只。干预 2 8d后 ,进行感觉运动功能 (行走试验 )测试 ,并采用 EL ISA法检测各组大鼠海马与额皮质区 NGF的含量。结果　 HIBD非干预组大鼠感觉运动功能 (10 .47± 3.46 ) s较正常对照组 (8.17± 2 .48) s减退(P<0 .0 5 ) ,HIBD干预组的感觉运动功能 (8.11± 2 .89) s好于 HIBD非干预组 (P<0 .0 5 ) ,与正常对照组无显著性差异(P>0 .0 5 ) ;HIBD干预组大鼠海马与额皮质区 NGF含量 (2 0 5 2 .0 3± 133.2 5 ;1481.0 9± 80 .95 ) pg/ g高于非干预组(1919.5 5± 137.5 1;1370 .89± 12 8.86 ) pg/ g(P<0 .0 5 ) ,略低于正常对照组海马区 NGF(2 174.18± 172 .14) pg/ g(P<0 .0 5 ) ;而与正常额皮质区 NGF (15 19.90± 83.2 8) pg/ g无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ,而且大鼠行走试验结果与其海马、额皮质 NGF的含量成正相关 (r海 =0 .32 3,r皮 =0 .317,P<0 .0 5 )。结论　早期干预可促进缺氧缺血脑损伤大鼠脑内神经生长因子表达与脑功能恢复。     

超声辐照微泡介导肝细胞生长因子基因逆转大鼠肝纤维化

目的 探讨超声辐照载肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)基因的超声微泡造影剂逆转大鼠肝纤维化的可行性. 方法 将成模后的40只Wistar大鼠随机分为5组,即(1)超声+载基因超声微泡造影剂组(HGF+ US/MB),(2)超声+单纯质粒组(HGF+ US),(3)质粒+超声微泡造影剂组(HGF+MB),(4)单纯质粒组(HGF),(5)单纯模型组(MA).经股静脉注入超声微泡造影剂,同时超声基因转染治疗仪辐照肝区,辐照条件为300 kHz,2 W/cm2,辐照10 s,间隔10 s,共20 min.于超声辐照后14 d行磁共振弥散加权成像(diffusion weighted imaging,DWI)检查;然后处死各组大鼠,取肝组织HE染色,观察肝纤维化恢复情况;Western Blot检测HGF蛋白在大鼠肝脏中的表达. 结果 HGF+ US/MB组的表观弥散系数(apparent diffusion coefficient,ADC)值明显高于其他各组;相反地,指数表观弥散系数(exponential apparent diffusion coefficient,EADC)低于其他各组;病理组织片可见HGF+ US/MB组汇管区纤维结缔组织增生,但肝小叶结构完整,其余各组纤维组织增生程度强于HGF+US/MB组.同时,HGF+US/MB组的HGF蛋白的表达均高于其他各组(P＜0.05). 结论 超声靶向破坏微泡能够介导HGF基因在肝组织内高效表达,并产生抗纤维化效应,为肝纤维化的基因治疗提供一种新的基因转移途径.     

Hepatocyte Growth Factor and Clinical Diabetes in Postmenopausal Women

OBJECTIVE

To investigate the association between circulating levels of hepatocyte growth factor (HGF), a mesenchymal-derived pleiotrophic factor that is elevated in obesity, and the prevalence of type 2 diabetes.

RESEARCH DESIGN AND METHODS

A cross-sectional analysis among 892 postmenopausal women within the Women''s Health Initiative Observational Study (WHI-OS).

RESULTS

HGF levels positively correlated with BMI and homeostasis model assessment for insulin resistance. In the multivariable analysis comparing the highest tertile with the lowest tertile of HGF, the odds ratio for prevalent diabetes was 2.47 (95% CI [1.12–5.47], P for trend = 0.014) after accounting for age, race, BMI, and other risk factors for diabetes.

CONCLUSIONS

HGF levels are associated with the presence of type 2 diabetes in postmenopausal women. Future studies should consider the prospective evaluation of the association of HGF with the development of type 2 diabetes.Hepatocyte growth factor (HGF) is a mesenchymal-derived pleiotropic factor that regulates growth, motility, and morphogenesis of various cells (1). HGF is highly expressed in white adipose tissue (2,3), and it stimulates glucose uptake in cultured adipocytes (4). In humans, circulating HGF positively correlates with insulin and glucose (5) and is reported to be elevated in obesity (6), metabolic syndrome (5), hypertension (7), and coronary heart disease (8). Although HGF levels are observed to be elevated in these diabetes-associated conditions, the specific HGF-diabetes association has not yet been investigated. Hence, we conducted a study to examine the cross-sectional relationship between HGF and diabetes in a representative sample of postmenopausal women (n = 892) within the Women''s Health Initiative Observational Study (WHI-OS).     

逆转录病毒介导转导的人粒-巨噬系集落刺激因子基因在哺乳动物细胞中的表达(英文)

利用多聚酶链反应(PCR)方法,从活化的人外周血单个核细胞中克隆了人粒-巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)的cDNA。DNA序列测定证实此片段为完整的GM-CSF cDNA。应用DNA重组技术,将此cDNA重组于逆转录病毒载体pDORneo上,以Lipofectin介导转染病毒包装细胞PA317,用NIH3T3细胞测定病毒滴度。选取高滴度病毒上清感染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,经G418筛选获抗性克隆,PCR方法鉴定重组载体整合于CHO细胞的基因组DNA中。用CFU-GM集落形成实验检测GM-CSF活性,证实转染后的CHO细胞有GM-CSF的稳定、高效表达。     

肝细胞生长因子在心血管疾病诊断及治疗中的应用

肝细胞生长因子是一个多效的间充质因子，可以调节细胞的生长、运动和形态，具有促进血管生成，保护血管内皮、心肌细胞和抑制细胞凋亡及氧化应激等多重作用。本文就其与各种心血管疾病之间的关系做一综述。     

Urocortin 2 Gene Transfer Improves Heart Function in Aged Mice

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肝细胞生长因子对心肌细胞肥大的影响

目的 探讨肝细胞生长因子（HGF）在培养新生大鼠心肌细胞肥大中的作用。方法 原代心肌细胞中进行，分对照组和不同浓度HGF组（1ng／mL、10ng／mL、100ng／mL），采用放射性同位素3H-leu掺入法检测培养心肌细胞蛋白质合成速率。应用荧光定量PCR方法检测HGF对培养心肌细胞肥大相关基因ANF、B-MHC表达的影响。结果 HGF（1ng／mL、10ng／mL、100ng／mL）作用心肌细胞24h后可明显增加心肌细胞3H—leu的掺入量，分别增高2．15、4．66、2．51倍，与对照组比较有显著性差异（P〈0．01，0．01，0．01）；并可诱导心肌细胞ANF和B-MHC表达增加，ANFmRNA表达增加平均为（2．63±0．04，4．32±0．08，3．91±0．05），分别增高1．61、3．32、2．91倍，与对照组（1±0．00）比较有显著性差异（P〈0．01，0．01，0．01）；B-MHCmRNA表达增加平均为（2．14±0．03，2．81±0．07，2．42±0．06），分别增高1．10、1．82、1．41倍，与对照组比较有显著性差异（P〈0．01，0．01，0．01）；上述结果表明1ng／mL已经起作用，10ng／mL作用最强，100ng／mLHGF有所下降。结论 肝细胞生长因子可促进心肌细胞蛋白质合成速率和心肌细胞ANF、B-MHC表达增加，它可直接促进心肌细胞的肥大。     

结缔组织生长因子在肝纤维化发生中的作用机制初探

目的:观察结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在人及大鼠纤维化肝组织中的表达,探讨CTGF及其介导的生物学信号在肝纤维化发生中的作用机制。方法:雄性SD大鼠32只,皮下注射CCl_4制备大鼠肝纤维化模型,分别于注射后1、4、8用处理动物并收集肝组织标本;44例人肝组织(12例正常肝组织、32例慢性病毒性肝炎和肝硬化组织)来自外科手术切除的诊断明确的病理存档标本。采用免疫组化方法对检测肝组织中CTGF的表达及分布。结果:免疫组化显示．CTGF主要表达于大鼠肝星状细胞(HSC)及肝细胞胞质中。CCl_4注射诱导后,大鼠肝组织中CTGF的表达较正常对照明显增强(P＜0．01或P＜0．05),且CCl_4注射1、4、8周组肝组织中CTGF的表达强度呈明显递增的趋势(P＜0．01或P＜0．05)。在人肝纤维化组织中,CTGF亦主要表达于HSC胞质及部分肝细胞胞质中,CTGF表达水平显著高于人正常肝组织(P＜0．01)。结论:CTGF作为一种促纤维化因子,其过表达主要促进HSC的增殖活化,促进细胞外基质的形成,从而参与肝纤维化的发生、发展。     

肝细胞生长因子在胎儿生长受限孕妇胎盘组织的表达及其意义

目的：探讨肝细胞生长因子（HGF）在胎儿生长受限孕妇胎盘组织中的表达及其对胎盘滋养细胞凋亡的影响。方法：选取胎儿生长受限（FGR）孕妇42例及正常晚孕孕妇（对照组）38例,采用逆转录聚合酶联反应、免疫印迹的方法,检测胎盘组织中HGF和Fas基因mRNA及蛋白表达水平。结果：胎盘组织HGFmRNA和蛋白的表达水平,FGR组明显低于对照组（P〈0.05）;FasmRNA和蛋白在胎盘组织中的表达水平,FGR组明显高于对照组（P〈0.05）。胎盘HGF的表达与Fas的表达呈负相关。结论：胎盘组织HGF低表达和F as高表达可能是FGR胎盘滋养细胞凋亡的一个重要影响因素。     

Ultrasound Irradiation Combined with Hepatocyte Growth Factor Accelerate the Hepatic Differentiation of Human Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells

This study investigated the impact of ultrasound (US) irradiation on the hepatic differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells (hBMSCs) induced by hepatocyte growth factor (HGF) and the possible mechanisms. We treated hBMSCs, using HGF with and without US irradiation. Cell viability and stem cell surface markers were analyzed. Hepatocyte-like cell markers and functional markers including α-fetoprotein (αFP/AFP), cytokeratin 18 (CK18), albumin (ALB) and glycogen content were analyzed at the time point of day 1, 3 and 5 after treatment. The involvement of Wnt/β-catenin signaling pathway was evaluated as well. The results showed that the US treatment at 1.0 W/cm² or 1.5 W/cm² for 30?s or 60?s conditions yielded favorable cell viability and engendered stem cell differentiation. At day 5, the expressions of AFP, CK18, ALB and the glycogen content were significantly elevated in the US-treated group at both messenger ribonucleic acid and protein levels (all p?<0.05), in comparison with HGF and control groups. Among all the US treated groups, the expression levels of specific hepatic markers in the (1.5 W/cm² for 60?s) group were the highest. Furthermore, Wnt1, β-Catenin, c-Myc and Cyclin D1 were significantly increased after US irradiation (all p?<0.05), and the enhancements of c-Myc and Cyclin D1 could be obviously impaired by the inhibitor ICG-001 (p?<0.05, p?<0.05), in accordance with decreased ALB and CK18 expression and glycogen content (all p?<0.05). In conclusion, US irradiation was able to promote the hBMSCs' differentiation mediated by HGF in vitro safely, easily and controllably. The activation of Wnt/β-catenin signaling pathway was involved in this process. US irradiation could serve as a potentially beneficial tool for the research and application of stem cell differentiation.