NF-κB在脑损伤后脑损害和脑保护中的双重作用

核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)在炎性及免疫反应中起着重要的作用,创伤性脑损伤后NF-κ表达已在实验动物及临床观察中得到肯定,但对伤后NF-κB的作用仍存在不同的争议.NF-κB活化的机制目前仍不十分清楚.笔者就近年来创伤性脑损伤后NF-κB的研究进行如下综述,着重阐明脑损伤后NF-κB活化的变化机制及其双重作用性.     

补骨脂素加长波紫外线光化学疗法诱导NB4细胞凋亡及对NF-κB/I-κB蛋白的影响

目的探讨补骨脂素(PSO)加长波紫外线(UVA)光化学疗法(PUVA)诱导人白血病NB4细胞凋亡及对NF-κB、I-κB蛋白的影响。方法以NB4细胞为研究对象,以电镜下细胞超微结构改变、细胞凋亡率以及NF-κB、I-κB蛋白的表达为检测指标,观察不同浓度PSO和(或)不同照射时间波长为360 nm的UVA对NB4细胞的作用。结果 PUVA处理后的NB4细胞超微结构出现明显的凋亡形态学改变;PSO、UVA及PUVA均可使细胞凋亡率增加,PUVA的作用显著强于前两者;凋亡率增加的同时上调了NF-κB、I-κB蛋白的表达。结论 PUVA可诱导NB4细胞凋亡,过程中上调了NF-κB、I-κB蛋白的表达。     

Bortezomib对非小细胞肺癌细胞系增殖、细胞周期及核转录因子活性的影响

目的探讨Bortezomib对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞周期、增殖、凋亡及核转录因子(NF-κB)的影响。方法采用MTT法检测Bortezomib对细胞生长的抑制作用,流式细胞仪分析Bortezomib对细胞周期及凋亡的影响,Western blotting检测Borte-zomib对NF-κB、IκB和Bcl-2表达的影响。结果随着作用时间和药物浓度的增加,Bortezomib对NSCLC细胞的生长抑制作用越明显。25nmol/L的Bortezomib作用48h可以使细胞周期阻滞在G2/M期。6种NSCLC细胞中均有NF-κB的基础性表达,且胞核中NF-κB的表达水平与胞质IκB的表达水平呈反比。Bortezomib对细胞中NF-κB的基础表达水平没有影响,但能明显抑制TNF-α诱导的NF-κB的核转位,并下调抗凋亡蛋白Bcl-2的水平,且这种抑制作用呈时间和剂量依赖趋势。结论Bortezomib能够抑制NSCLC细胞增殖,并诱导凋亡发生,可能是通过NF-κB通路发挥作用。     

PTEN对脂多糖攻击RAW264.7细胞核因子-κB转录活性的影响及其意义

目的探讨PTEN（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten）全县对脂多糖（LPS）攻击RAW264．7细胞核因子-κB转录活性的影响。方法NF-κB-LUC质粒与PTEN质粒或其突变质粒分别共转染RAW264．7细胞,通过检测NF-κB反应性荧光素酶报告基因表达,观察PTEN在LPS攻击巨噬细胞时对NF-κB转录激活的影响。结果野生型PTEN过表达可促进LPS诱导的NF-κB活性增强,而突变型PTEN则没有明显作用。结论PTEN可正性调控LPS诱导的NF-κB转录因子的激活,从而有可能在内毒素所诱导的炎症反应中发挥重要的调控作用。     

电离辐射对肠上皮细胞NF-κB p65和Akt表达的影响

目的 观察电离辐射对肠上皮细胞PI3K/Akt通路和NF-κB通路的激活模式。方法 将对数生长期的IEC-6细胞用无血清培养基培养24h后进行60Co γ射线12Gy照射,检测IEC-6细胞辐照前后不同时间Akt磷酸化水平和胞浆、胞核NF-κB P65蛋白水平变化。结果 辐射可使肠上皮细胞受照20 min后迅速诱导p65的核转位,但检测不到明显的Akt磷酸化;肠上皮细胞Akt磷酸化的高峰于受照后1 h才出现。结论 电离辐射诱导的NF-κB p65快速核转位早于辐射诱导Akt的磷酸化。     

转录因子NF-κB在肝纤维化中的作用

核因子-κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)是近年来研究极为广泛的转录调控因子,作为一种转录刺激因子,最初是在1986年由Sen和Baltimore首先报道的.NF-κB可因一些细胞因子、氧化剂、蛋白激酶、脂多糖等的刺激而激活,而活化的NF-κB又可诱导细胞因子、趋化因子、免疫因子受体和转录因子等多种物质的表达,在炎症反应、肿瘤及血液性疾病的病理生理过程中发挥重要作用[1].目前对NF-κB在肝纤维化中的作用报道较少,为此,笔者就转录因子NF-κB在肝纤维化形成过程中的相关作用作一综述.     

核因子-κB/p65 siRNA对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖、细胞周期及迁移能力的影响

目的 研究下调核因子-κB(NF-κB)/p65的表达对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞的增殖、周期及迁移能力的影响,并探讨其相关的分子机制.方法 应用脂质体2000将NF-κB/p65 siRNA转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,用Real-time PCR和Western blotting技术分别检测p65 mRNA及其蛋白的表达,采用CCK-8试剂盒和流式细胞术分别检测NF-κB/p65 siRNA对Tca8113细胞增殖和细胞周期的影响,Boyden小室法分析其对Tca8113细胞迁移能力的影响.进一步用Real-time PCR和Western blotting技术检测细胞周期相关基因cyclin E和cdk2以及浸润转移相关因子MMP-9 mRNA和蛋白表达的变化.结果 NF-κB/p65 siRNA能有效下调舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中NF-κB/p65 mRNA和蛋白的表达(P<0.05),明显抑制Tca8113的细胞增殖(P<0.05),诱导细胞静止在G0/G1期,并降低Tca8113细胞的迁移能力.NF-κB/p65转染Tca8113后的48h,cyclin E、cdk2及MMP-9的表达均显著降低(P<0.05).结论 NF-κB/p65在舌鳞状细胞癌细胞周期及浸润转移中起重要作用,这可能与相关基因表达的改变有关.     

核因子κB降低小鼠胚胎成纤维细胞中Lmp2基因转录

目的 研究在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中,核因子κB(NF-κB)对Lmp2基因转录的影响.方法 利用NF-κB荧光素酶报告基因检测MEF和c-abl/arg缺失株(DKO)中内源性NF-κB活性;构建包含Lmp2启动子序列和NF-κB结合序列突变体的荧光素酶报告基因,通过双荧光素酶报告系统,研究NF-κB对Lmp2启动子转录活性的调控,并应用定量PCR、Western印迹比较Lmp2基因在MEF和DKO细胞中表达水平.结果 DKO细胞中内源性NF-κB活性上调;DKO细胞中Lmp2基因启动子的转录活性发生下调,并且NF-κB结合序列突变后,其转录活性升高;定量PCR和Western印迹结果表明,DKO细胞中Lmp2基因mRNA和蛋白表达水平比较MEF细胞均发生下调.结论 MEF中内源性NF-κB可负调控Lmp2基因转录,并降低其蛋白表达水平.     

N-乙酰半胱氨酸对大鼠颅脑损伤后ICAM-1和NF-κB表达的影响

目的 观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)对大鼠颅脑损伤后细胞问黏附因子-1(ICAM-1)和核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响,探讨其脑保护机制.方法 90只Wistar大鼠随机分为假手术组(n=6)、颅脑创伤组(n=42)及颅脑创伤NAC干预组(n=42).采用自由落体法建立大鼠颅脑创伤模型,应用免疫组织化学法检测NF-κB和ICAM-1表达的变化.结果 与假手术组相比,脑损伤组NF-κB和ICAM-1表达水平明显升高,NAC可降低NF-κB和ICAM-1表达,减轻炎症反应.结论 NAC可能通过抑制NF-κB和ICAM-1的表达,减轻炎症反应,发挥脑保护作用.     

抑制NF-κB激活的策略

NF-κB是一个广泛存在于哺乳动物细胞中的转录因子。它可以参与机体的炎症反应、免疫反应、细胞分化与凋亡及其他应激反应。NF-κB启动基因的表达涉及到IKK的激活、IκB磷酸化和泛素化、IκB裂解、NF-κB向核内的迁移、NF-κB与DNA的结合等过程。NF-κB的过度激活会引起一系列的疾病，如哮喘、类风湿性关节炎、肠炎等，利用药物或通过转基因方法来抑制以NF-κB为核心的信号转导途径可能会成为防治某些疾病的途径。     

BMP-7对高糖诱导近端肾小管上皮细胞外基质及NF-κB表达的影响

目的探讨骨形态发生蛋白7（BMP-7）对高糖诱导近端肾小管上皮细胞（HKc）表达细胞外基质及核转录因子-κB（NF-κB）的干预作用。方法采用人近端肾小管HKc细胞株,将细胞分为正常对照组（NG,5．5mmol／L葡萄糖）、高糖组（HG,25mmol／L葡萄糖）、HG＋100ng／ml BMP-7组、NG＋100ng／ml BMP-7组、高渗组（HM,25mmol／L甘露醇）。应用免疫细胞化学和ELISA技术检测细胞Ⅳ型胶原（Col Ⅳ）、纤维连接蛋白（FN）表达,用凝胶电泳迁移率竞争试验（EMSA）检测NF-κB的表达。结果高糖作用下NF-κB活性和Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白表达显著增高,加入100ng／ml BMP-7后可显著抑制NF-κB活性及Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白的表达。结论BMP-7可能通过抑制NF-κB活性而从转录水平抑制高糖诱导的近端小管细胞细胞外基质的过度表达。     

NF-κB在肝细胞生长因子介导的肝脏干细胞增殖效应中的作用

目的 研究NF-κB途径在肝细胞生长因子(HGF)介导的肝脏WB F-344细胞增殖信号转导调控中的作用.方法 用不同浓度的HGF(0,20,40,80,100ng/ml)刺激、WB F-344细胞,24h后用3H-TdR掺人法检测细胞的增殖效应.采用脂质体转染方法用位点阴性的IκBa蛋白突变体质粒转染WB F-344细胞,阻断NF-κB活性.用HGF(40ng/ml)刺激0、15、30、60、120min后提取核蛋白,通过凝胶阻滞实验(EMSA)检测NF-κB的结合活性.采用脂质体转染法将NF-κB报告基因质粒BD Great EscA PeSEAPvector瞬时转染WB F-344细胞后用不同浓度的HGF(0、10、20、40ng/m1)刺激8h,通过BD Great EscA PeTM SEAP荧光检测系统检测NF-κB的转录活性.用NF-κB抑制剂如BAY-11-7082和ASA预处理WB F-344细胞,再用HGF(40ng/ml)刺激24h,通过3H掺入法检测细胞增殖效应.结果 HGF具有促进WB-F344细胞增殖的作用,且呈剂量效应正相关趋势.HGF能够明显提高NF-κB DNA的结合活性,NF-κB复合物在HGF作用15min后即出现,并在30～60min时达到高峰,以后逐渐减退.HGF能够显著促进NF-κB的转录活性,呈剂量效应相关趋势.用NF-κB抑制剂BAY-11-7082或ASA阻断NF-κB后,HGF诱导的WB F-344细胞增殖能够被明显抑制;在转染NF-κB抑制质粒的细胞,HGF介导的WBF-344细胞增殖效应被完全阻断.结论 HGF可促进WBF-344细胞增殖,且呈剂量效应正相关趋势.HGF介导的WB F-344细胞增殖效应依赖NF-κB的活化,NF-κB的激活对于HGF介导的WB F-344细胞增殖效应是必须的.     

Corilagin对小鼠小胶质细胞株照射后炎性反应因子表达的抑制作用

目的 研究抗炎药物Corilagin抑制放射引起小胶质细胞(BV-2)炎性反应的作用及其防护的分子机制。方法 细胞抑制实验(MTT)检测Corilagin对BV-2细胞的抑制率;Corilagin预处理小胶质细胞,12 h后,以0和32 Gy 2个放射剂量照射BV-2细胞,Real-time PCR检测小胶质细胞照射后不同时间点炎性反应因子IL-1β、TNF-α表达水平;硝酸还原酶法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的含量;Western blot检测各组细胞核转录因子NF-κB p65蛋白表达;激光共聚焦显微镜观察各组细胞标志物Iba-1的表达、NF-κB p65核转位及Nemo的表达。结果 1～10 μg/ml浓度范围内Corilagin对BV-2细胞增殖几乎无影响;照射后小胶质细胞表面标志物Iba-1表达明显,提示小胶质细胞激活,且炎性反应因子NO、TNF-α、IL-1β表达上调,而Corilagin(5μg/ml)可以显著抑制上述炎性反应因子的表达(t_IL-1β=6.341, t_TNF-α=3.411, t_NO=3.134, P <0.05);Corilagin可抑制NF-κB活化蛋白Nemo,并显著抑制NF-κB p65的转位。结论 Corilagin可能通过NF-κB信号转导途径抑制照射后小胶质细胞的活化,从而下调炎性反应因子表达,保护神经元。     

NF-κB在TNF-α和血管紧张素Ⅱ致内皮细胞凋亡中的作用

目的:了解NF-κB在TNF-α和血管紧张素Ⅱ导致内皮细胞凋亡中的作用。方法:用浓度为10 ng/ml TNF-α和浓度为1μmol/L血管紧张素Ⅱ分别干预内皮细胞,TUNEL法检测细胞的凋亡情况、EMSA检测NF-κB的活性和Western-blot检测IκBα的表达;用浓度检测细胞的凋亡、NF-κB的活性和IκB的表达。结果:TNF-α和血管紧张素Ⅱ显著引起了细胞的凋亡、IκBα蛋白的裂解和NF-κB的激活,用PDTC预处理后,在NF-κB活性减弱的同时抑制了细胞的凋亡。结论:在内皮细胞中,TNF-α和血管紧张素Ⅱ通过裂解胞浆内的IκBα蛋白进而激活NF-κB引起的细胞凋亡。     

创伤性脑损伤后脑组织核因子-κB和基质金属蛋白酶-9的表达

目的 研究创伤性脑损伤（TBI）后损伤区脑组织核因子κB（NF-κB）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达,探讨其在继发性脑损害中的作用机制。方法 采用自由落体撞击法造成大鼠右侧顶叶脑挫裂伤,Wistar大鼠随机分为对照组、伤后3、12、24、72小时和7天组。采用EMSA测定NF-κB的活性,免疫组化测定MMP-9的表达。结果 TBI后NF-κB的活性和MMP-9的表达逐渐增强,至伤后72小时达高峰,伤后7大仍保持任较高水平。NF-κB和MMP-9任表达时相和强度上呈正相关关系。MMP-9表达阳性细胞包括血管内皮细胞、神经胶质细胞和少数神经元细胞及侵入的中性粒细胞。结论 TBI可引起损伤区脑组织NF-κB活性和MMP-9的表达明显增强,可能在脑组织的继发性损害中起重要作用。     

血管生成素通过ERK信号通路促进HeLa细胞的增殖

目的通过细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)通路及NF-кB信号途径探讨血管生成素(angiogenin,Ang)对HeLa细胞的促增殖及抗凋亡作用机制。方法用不同浓度的重组人Ang刺激HeLa细胞,MTT法分析Ang对HeLa细胞的促增殖作用,蛋白质印迹实验检测ERK信号通路相关分子的表达情况。U0126抑制ERK信号通路,检测Ang诱导的ERK1/2的磷酸化及c-myc的表达情况,同时检测Ang对细胞增殖的影响。敲低Ang的表达,检测细胞的凋亡情况。双荧光素酶报告基因检测Ang对NF-κB报告基因的激活。蛋白水平检测Ang刺激的HeLa细胞后,NF-κB通路相关分子的表达。结果 Ang能促进HeLa细胞增殖,ERK1/2的磷酸化水平及c-myc的表达随重组人Ang浓度的升高而增加。U0126能抑制Ang诱导的ERK1/2的磷酸化、c-myc的上调及细胞的增殖。Ang的低表达促进HeLa细胞的凋亡,但不影响NF-κB报告基因的激活及NF-κB通路上相关分子的表达。结论 Ang能够促进HeLa细胞增殖,并通过活化ERK通路促进细胞的增殖,但其抑凋亡作用与NF-κB通路无关。     

黄体酮对鼠脑外伤后脑组织炎性信号因子表达的干预作用

目的 观察黄体酮对脑外伤后脑组织内炎症反应信号转导因子核因子-κB(NF-κB)、炎症细胞因子如肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)水平的影响,探讨其对创伤性脑外伤(TBI)继发性脑损伤的保护作用及可能的作用机制.方法 采用Freeney法造成大鼠脑挫裂伤模型,在伤后1、3、5、7天不同时相点用ELISA法、免疫组化法分别检测4组大鼠脑组织中NF-κB、TNF-α、IL-1β水平的变化.结果 伤后注射黄体酮治疗组脑组织NF-κB、TNF-α、IL-1β 3种炎性因子水平均比脑创伤组低(P＜0.05).结论 注射黄体酮能降低脑外伤后炎性信号因子表达,减轻脑外伤后脑组织的炎症反应,对脑组织起一定的保护作用.     

髓样分化蛋白-2在内毒素激活内皮细胞核因子-kB中的作用

目的 探讨髓样分化蛋白-2(myeloid differentiation protein-2，MD-2)在内毒素(LPS)对内皮细胞核因子-κB(NF-κB)激活中的作用。方法 以ECV304细胞为模型，逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测内皮细胞MD-2mRNA的表达；转染MD-2功能突变体，观察MD-2在内毒素对内皮细胞NF-κB激活和内皮细胞分泌IL-8中的作用。结果 内皮细胞有MD-2mRNA的表达，转染MD-2的突变体能明显抑制内毒素对内皮细胞NF-κB的激活和内皮细胞IL-8的分泌。结论 MD-2在内毒素对内皮细胞NF-κB激活中发挥着不可缺少的作用，且在内毒素对内皮细胞激活／损伤效应中占有重要的地位。     

α-硫辛酸对高糖诱导的系膜细胞核因子-κB活性的抑制作用

目的探讨α-硫辛酸对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及核因子-κB(NF-κB)活性的影响。方法在体外条件下采用正常糖(NG)、高糖(HG)及HG 不同浓度α-硫辛酸处理大鼠系膜细胞;噻唑蓝法(MTT)测定系膜细胞增殖;采用凝胶电泳迁移率改变法检测NF-κB的活性。结果50~300μmol/L的α-硫辛酸可抑制系膜细胞增殖。HG刺激系膜细胞1h可引起NF-κB活性增强2·2倍(P<0·01),高糖诱导的NF-κB的活化可被α-硫辛酸(200μmol/L)所抑制(0·6±0·3vs2·2±0·2,P<0·01)。结论一定浓度的α-硫辛酸可抑制高糖诱导的系膜细胞增殖,并可降低NF-κB的DNA结合活性。     

CPNE5对NF-κB转录调控活性的影响

目的:研究CPNE5对TNF-α诱导的NF-κB转录激活活性的影响,并探讨其作用机制.方法:用10 ng/mlTNF-α处理转染了pcDNA3.1或pcDNA3.1-CPNE5的HEK293细胞,用双荧光素酶报告基因实验检测不同转染组NF-κB的转录激活活性;Western印迹和细胞免疫荧光技术检测CPNE5表达上调对NF-κB入核的影响;凝胶阻滞实验研究CPNE5表达上调对NF-κB DNA结合能力的影响.结果:CPNE5可以显著抑制TNF-α对NF-κB的转录激活活性(P<0.0001);CPNE5不影响TNF-α诱导的NF-κB(P65)入核;CPEN5过表达降低了TNF-α诱导的NF-κB与DNA结合的能力.结论:CPNE5通过抑制NF-κB的DNA结合活性抑制TNF-α诱导的NF-κB转录激活活性.