钙黏蛋白12在结肠癌细胞株与结肠直肠癌组织中的表达及其影响

目的：研究钙黏蛋白12（cadherin-12,CDH-12）在结肠癌细胞株与结肠直肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞株增殖、侵袭、迁移的影响。方法：应用实时PCR和Western印迹法在7株结肠癌细胞株中筛选CDH-12高表达细胞株;shRNA瞬转干扰高表达细胞株SW1116,Western印迹法验证干扰效果;CCK-8检测癌细胞增殖活性变化;transwell实验验证癌细胞迁移、侵袭能力的变化;组织芯片免疫组织化学技术检测CDH-12在结肠直肠癌组织中的表达。结果：实时PCR和Western印迹结果显示CDH-12在细胞株中表达,SW1116和LoVo两个细胞株高表达CDH-12,在成功下调SW1116细胞中CDH-12表达之后,SW1116结肠癌细胞株的增殖、迁移、侵袭能力较对照组明显下降;免疫组化染色结果显示,CDH-12在结肠直肠癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织中的表达。结论：CDH-12在结肠直肠癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织,证实了CDH-12为癌基因的可能性;下调CDH-12在结肠癌细胞株SW1116的表达可明显抑制细胞的增殖、迁移、侵袭能力,显示其在肿瘤细胞生长和转移中的重要作用。     

TXNDC9在结肠直肠癌组织中的表达及其影响

目的:探讨TXNDC9基因在结肠直肠癌组织和细胞中的表达,以及沉默TXNDC9高表达后对细胞株SW1116增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法:分别应用免疫组织化学技术、免疫印迹法观察TXNDC9在结肠直肠癌组织和细胞中的表达水平:应用小干扰RNA瞬时转染TXNDC9高表达的结肠癌细胞株SW1116,用实时PCR筛选最高效率的干扰片段,并用Western印迹法检测基因沉默效果:最后研究瞬时转染后SW1116细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化。结果:结肠直肠癌组织中TXNDC9的表达明显高于对照的癌旁正常组织(P<0.01),细胞迁移和侵袭能力亦有明显下降(P<0.01)。结论:TXNDC9在结肠直肠癌组织中的表达显著高于癌旁正常黏膜上皮,并与肿瘤的大小和浸润深度相关,SW1116是TXNDC9基因高表达的细胞株之一,下调TXNDC9表达能显著抑制该细胞的增殖能力、细胞迁移和侵袭能力。TXNDC9基因对维持肿瘤细胞的增殖和运动能力有重要作用,并可能成为抑制肿瘤生长和转移的有效途径。     

伴侣素CCT6A在结肠直肠癌中的表达及其意义

目的：研究真核生物胞质伴侣素6A（chaperonin containing TCP1 complex,CCT6A）在结肠直肠癌中的表达及临床意义。方法：58例已明确诊断的结肠直肠癌病人入选,分别用Western印迹法和免疫组化方法检测结肠直肠癌细胞系和结肠直肠癌标本中CCT6A的表达,并分析此表达与病人临床病理间的关系。结果：结肠直肠癌组织中CCT6A的表达明显高于结肠直肠的正常组织,具有显著性差异（P〈0．01）。CCT6A的表达与结肠直肠癌浸润深度（P〈0．01）和肿瘤大小（P〈0．05）相关。结论：CCT6A在结肠直肠癌组织中高表达,并与肿瘤浸润深度和肿瘤大小有关,提示CCT6A可作为诊断结肠直肠癌的潜在标记物。     

miR-301a在结肠直肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞侵袭、迁移能力的影响

目的:分析结肠直肠癌组织miR-301a的表达及其与结肠直肠癌病人临床病理特征的关系。探讨下调miR-301a表达对结肠癌细胞增殖、侵袭、迁移能力以及PTEN蛋白表达的影响。方法:应用实时定量PCR方法检测48对结肠直肠癌组织和癌旁组织以及5种结肠癌细胞株中miR-301a的表达。应用瞬时转染方法将miR-301a抑制剂转入结肠癌细胞株HCT116后,用细胞增殖实验(CCK-8法)、transwell侵袭实验检测细胞的增殖和侵袭力;采用transwell迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力;并用Western印迹技术检测下调miR-301a后其靶蛋白PTEN表达的变化。结果:PCR结果显示,miR-301a在有淋巴结转移的结肠直肠癌组织中表达较其对应的癌旁组织和无淋巴结转移的癌组织为高(P<0.05);5种结肠癌细胞中均有不同程度表达;transwell侵袭、迁移实验显示,miR-301a抑制剂转染后HCT116细胞侵袭、迁移能力明显降低(P<0.05);增殖实验显示,下调miR-301a对结肠癌细胞抑制作用明显(P<0.05)。划痕实验表明,miR-301a抑制剂转染组细胞迁移能力明显受到抑制。Western印迹法显示,miR-301a抑制剂转染组细胞PTEN蛋白表达增加。结论:miR-301a在有淋巴结转移的结肠直肠癌组织中表达较高;下调miR-301a的表达抑制HCT116细胞的增殖、侵袭和迁移能力,且PTEN蛋白表达增加。miR-301a对结肠癌细胞生物学功能的影响可能是通过PTEN信号通路实现的。     

趋化因子受体CXCR7在结肠直肠癌中的表达及意义

目的：探讨趋化因子受体CXCR7在结肠直肠癌中的表达及其临床意义。方法：收集48例结肠直肠癌病人的癌组织和癌旁组织,采用实时定量PCR和免疫组化方法,分别检测CXCR7在mRNA及蛋白水平的表达。结果：CXCR7 mRNA表达在结肠直肠癌和相对应癌旁组织中的差异无统计学意义（P〉0.05）,与临床病理特征无明显相关;但结肠直肠癌中CXCR7蛋白的表达高于癌旁组织（P〈0.001）,且其表达与淋巴结转移、AJCC分期及肿瘤部位均有相关性（P值分别为0.024、0.024、0.010）。结论：CXCR7在结肠直肠癌中mRNA和蛋白水平上的表达有差异;CXCR7蛋白的表达与结肠直肠癌的进展及转移有关。     

C/EBPα在结肠直肠癌的表达及对癌细胞的作用

目的:检测C/EBPα在结肠直肠癌中的表达情况,探讨下调C/EBPα表达对结肠癌细胞增殖、凋亡以及细胞周期的影响。方法:利用RT-PCR和免疫组织化学技术检测C/EBPα在结肠直肠癌组织及相邻正常组织中的表达,分析C/EBPα表达与临床病理特征的关系。用Western印迹法筛选C/EBPα,发现SW620为高表达C/EBPα肠癌细胞株。通过RNA干扰技术下调结肠癌细胞株SW620中C/EBPα表达后,利用CCK8和流式分析技术检测SW620细胞增殖、凋亡和细胞周期的变化。结果:C/EBPα在结肠直肠癌组织中高表达,且与肿瘤浸润深度有关(P<0.05),促进SW620细胞凋亡(P     

ECT2基因在结肠直肠癌组织中的表达及意义

目的:检测结肠直肠癌组织及相应癌旁组织中上皮细胞转化序列2癌基因(epithelial cell transforming sequence 2 oncogene,ECT2)的m RNA表达以及蛋白质表达,并探讨其与结肠直肠癌临床病理因素的相关性及临床意义。方法:采用实时定量聚合酶链反应法检测结肠直肠癌病人的癌组织和相应癌旁组织ECT2 m RNA的表达;免疫组织化学法检测150例癌组织ECT2蛋白表达。结果:结肠直肠癌组织ECT2 m RNA表达水平明显升高(P     

趋化因子受体CXCR4在结肠直肠癌中的表达及意义

目的：研究趋化因子受体CXCR4在结肠直肠癌中的表达及其临床意义。方法：采用RT-PCR法检测8种结肠直肠癌细胞株中CXCR4mRNA表达,应用蛋白印迹法检测细胞株中CXCR4蛋白表达。应用免疫组化染色法、结合组织芯片检测正常结肠直肠黏膜组织54例、结肠直肠癌组织49例中之CXCR4蛋白表达情况,并探讨其与结肠直肠癌临床病理特征的关系。结果：在8种结肠直肠癌细胞株中,CXCR4基因在HT29中表达水平最高。COL0205及SW480次之,HCTll6最低。CXCR4蛋白在结肠直肠癌组织中的表达高于结肠直肠正常黏膜组织,差异具有统计学意义（P=0．000）;在伴发转移的结肠直肠癌组织中,其表达比未发生转移者增强,差异具有统计学意义（P=0．024）。结论：CXCR4表达与结肠直肠癌转移存在密切关系,可能成为结肠直肠癌转移潜在治疗靶点。     

组蛋白去乙酰化酶3及P21蛋白在结肠直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的：观察组蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）及P21蛋白在结肠直肠癌组织中的表达及其临床意义;探讨二者间的关系,以及HDAC3与结肠直肠癌临床分期间的关系。方法：以Western印迹法检测30例结肠直肠癌组织及正常黏膜中HDAC3及P21蛋白的表达差异,并分析其与病人临床病理特征间的关系。结果：30例结肠直肠癌组织中HDAC3及P21蛋门的表达与正常黏膜比较有统计学差异（P〈0．001）：HDAC3及P21的表达与结肠直肠癌的病理分期无关系。结论：HDAC3在结肠直肠癌组织中的表达显著升高,而P21蛋白则明显降低。HDAC3可能通过抑制P21蛋白的表达而引起结肠直肠黏膜的异常增生;二者存结肠直肠癌的发生过程中起较重要的作用。     

DEPDC1基因在胰腺癌的表达及其siRNA对胰腺癌细胞的影响

目的:探讨DEPDC1基因在人胰腺癌细胞株、胰腺癌组织和癌旁组织的表达;应用RNA干扰技术靶向沉默胰腺癌细胞株PANC-1中DEPDC1基因,研究其对细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法:应用半定量RT-PCR方法检测4个胰腺癌细胞株、4例胰腺癌组织和癌旁组织DEPDC1基因的表达;靶向DEPDC1的siRNA载体转染胰腺癌细胞株PANC-1,采用实时定量PCR和Western印迹法检测基因沉默前、后DEPDC1基因及蛋白表达变化,CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖、周期及凋亡的变化。结果:胰腺癌细胞株和胰腺癌组织中DEPDC1基因呈高表达,癌旁组织呈低表达甚至不表达;转染siRNA的PANC-1细胞与对照组比较,DEPDC1基因及其蛋白表达下调,细胞增殖被显著抑制(P<0.05),细胞凋亡率显著增高(P<0.01或P     

结肠癌肝转移细胞增殖能力减弱

目的 通过阶梯转移法在裸鼠中筛选出人结肠癌肝转移细胞,然后对结肠癌肝转移细胞的生长增殖能力进行鉴定.方法 通过SW1116细胞株裸鼠皮下连续5次传代后取皮下种植瘤裸鼠结肠原位种植,分别取肝脏转移灶和皮下5代细胞进行原代培养,获得大肠癌肝转移细胞和皮下5代的原代细胞,分别命名为结直肠癌肝转移细胞1代(CHM-1)和皮下第5代(P5),通过CCK-8测生长曲线、流式检测细胞周期以及细胞周期相关的蛋白的免疫细胞化学来对SW1116、CHM-1和P5增殖能力进行检测.结果 细胞增殖实验显示CHM-1生长速度明显慢于SW1116和P5细胞(P＜0.05);流式细胞周期分析中CHM-1细胞G41期(68.390±2.865)%比例高于SW1116(50.440±1.472)%和P5(53.930±2.651)%(P＜0.05),G2期CHM-19(13.530±4.411)%比例要低于SW1116(32.030±5.645)%和P5(29.720±3.559)%(P＜0.05),S期3种细胞差异无统计学意义(18.250±6.901)%、(19.050±4.162)%、(18.930±0.169)%(P＞0.05);免疫细胞化学分析发现细胞周期蛋白Cyclin DI在CHM-1(23.7±4.7)%中的表达比SW1116(30.2±5.1)%和P5(32.1±4.2)%减少(P＜0.05).结论 发现侵袭能力和生长增殖能力具有反向关联,即结肠癌肝转移细胞具有更强的侵袭能力,但生长增殖速度比其他细胞更慢.

Abstract：

Objective To study the proliferation ability of liver metastatic colorectal cancer cells by establishing stepwise metastatic colorectal carcinoma cell model via in vivo selection.Methods SW1116 cells were transplanted into the subcutis of nude mice and serially passaged for 5 times,and then the subcutaneous tumor was implanted into the cecal wall of new nude mice.The liver metastatic lesions and the subcutaneous carcinoma cells of the fifth generation were picked for primary culture.Two cell lines named CHM-1 and P5 were obtained.Proliferation levels were analyzed by testing of cell growth curve,cell cycle analyses by flow cytometry and Cyclin D1 analysis by immunocytochemistry.Results CHM-1 grew much slower than P5 and SW 1116 although there was no difference between P5 and SW 1116 in cell proliferation assay ( P＜0.05 ).Cell cycle analysis revealed that the percentage of cells in G0/G1 phase was higher (P＜0.05) in CHM-1 (68.390 ±2.865)% than in SW1116 (50.440 ± 1.472)% and P5 (53.930 ± 2.651)%,but that in G2/M phase was lower ( P＜0.05 ) in CHM-1 ( 13.530 ± 4.411 )% than in SW1116 (32.030 ±5.645)% and P5 (29.720 ±3.559)% rough there was no difference in S phase ( 18.250 ± 6.901 )%,( 19.050 ± 4.162 )%,( 18.930 ± 0.169 )% ( P ＞ 0.05 ).The expression of cell cycle proteins Cyclin D1 was decreased ( P＜0.05 ) in CHM-1 ( 23.7 ± 4.7 )% as compared with thoseinP5(32.1±4.2)% and SW1116 (30.2 ±5.1)%.Conclusion In the same cell line,there was a reverse relationship between the ability of invasion and proliferation.     

沉默Polo样激酶1基因的表达对结直肠癌细胞迁移和侵袭的影响

目的 研究PLK1在结直肠癌细胞迁移和侵袭过程中的作用.方法 常规培养9株结直肠癌细胞,采用PCR和Western-blot法筛选PLK1高表达细胞株.设计3种RNA干扰片段,转染高表达PLK1的结直肠癌细胞株,利用实时定量PCR和western-blot法验证并干扰效果.选择高干扰效果的干扰片段,通过Transwe1l实验来评估转染后结直肠癌细胞迁移和侵袭能力的变化.结果 SW1116细胞中PLK1 mRNA及蛋白都呈现高表达 3种干扰片段转染SW1116细胞后,PLK1表达量均有不同程度下降,以片段1干扰效果最为明显.在迁移实验中,PLK1干扰组穿膜细胞数为（44±14）个,低于阴性对照组[（242±40）个]和空白对照组[（240±38）个] 在侵袭实验中,PLK1干扰组穿膜细胞数为（62±3）个,低于阴性对照组[（207±12）个]和空白对照组[（211±15）个] 上述差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 干扰PLK1能显著抑制肿瘤细胞的迁移、侵袭能力,提示PLK1可能在结直肠癌浸润和转移中具有一定作用.     

RNA干扰畸胎瘤源性生长因子基因对食管鳞癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨RNA干扰畸胎瘤源性生长因子（PCDGF）基因对食管鳞癌细胞Eca-109的影响.方法 脂质体介导PCDGF-shRNA的表达载体转染Eca-109细胞,应用RT-PCR、Westernblot检测转染后细胞PCDGF mRNA及蛋白的表达情况,分别采用Counting Kit-8（CCK-8）试剂盒和Boyden小室法检测转染后Eca-109细胞的增殖能力和侵袭能力.结果 转染组PCDGF mRNA和蛋白表达水平均较其他组下调.转染24、48和72 h转染组细胞增殖均受到抑制,抑制率分别为20.4％、21.1％和20.9％,其细胞增殖活性较未转染组、阴性质粒组和脂质体组均明显降低（均 P＜0.05）.未转染组、阴性质粒组、脂质体组和转染组的细胞迁移数分别为118.8±12.0、100.8±9.0、114.3±4.7和 53.5±16.3,转染组与其余3组比较,差异均有统计学意义（P=0.001,P=0.002,P=0.002）.结论 RNA干扰PCDGF基因可抑制食管鳞癌细胞的体外增殖及侵袭能力,PCDGF基因可能成为基因治疗的新靶点.     

γ-synuclein基因真核表达载体的构建及其对结肠癌细胞SW1116体外侵袭转移潜能的影响

目的构建针对γ-synuclein基因的真核表达载体并观察其对结肠癌细胞sw1116体外侵袭及与人脐静脉内皮细胞（HUVEC）黏附能力的影响。方法从结肠癌细胞系HT29提取总RNA,经RT．PCR获得γ-synucleincDNA全长片段,经过酶切连接等反应定向克隆至真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1上,以脂质体转染的方法将重组质粒转染至结肠癌细胞系SW1116,经G418筛选出稳定转染的细胞株。采用Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力。将细胞接种于铺有HUVEC的96孔板中,酶标仪读取荧光强度来表示黏附细胞的相对数。结果成功构建pEGFP-γ-synuclein真核表达载体,经过筛选后可在SW1116细胞中稳定表达,且能在体外翻译出GFP-γ-synuclein融合蛋白质。转染γ-synuclein后,穿过Matrigel胶及Transwell小室膜的细胞数明显增加（198．4±20．7比98．8±13．2,P〈0．05）,与HUVEC黏附的细胞数（荧光强度）亦显著增加（3．08±0．36比1．22±0．21,P〈0．05）。结论γ-synuclein可显著增强结肠癌细胞SW1116体外侵袭转移潜能。     

体内连续筛选法建立人结肠癌肝转移阶梯细胞模型

目的：通过在裸鼠体内进行SW1116结肠癌细胞株原位种植肝转移连续筛选,建立人结肠癌肝转移阶梯细胞模型系统,为研究结肠癌转移的分子机制提供实验模型。方法：将SW1116细胞株在裸鼠皮下连续5次传代后,取皮下种植瘤在裸鼠结肠进行原位种植,继而取肝脏转移灶进行下一代裸鼠结肠原位种植,经3次结肠原位种植肝转移筛选,建立大肠癌肝转移阶梯细胞模型。用免疫组化法验证种植瘤及转移灶的组织来源,并行同期体内外侵袭实验,检测经体内连续筛选出的癌细胞侵袭转移能力变化。结果：经5代皮下连续传代及3代结肠至肝的体内转移筛选,成功建立了第三代结肠癌肝转移筛选细胞系（CRCLM3）。裸鼠种植瘤及转移灶均表达人癌胚抗原,而同期体内外侵袭试验结果显示,经体内筛选得到的结肠癌细胞株转移能力逐渐加强。结论：经体内连续肝转移筛选所建立的结肠癌细胞系侵袭转移能力增强,而CRCLM3细胞系是研究结肠癌肝转移机制的理想细胞模型。     

MUC1联合MUC2在结直肠腺瘤及结直肠癌中联合表达与临床病理的相关性研究

目的探讨黏蛋白MUC1、MUC2在结直肠腺瘤及结直肠癌中联合表达与临床病理参数间相关性。方法应用免疫组织化学方法检测MUC1、MUC2在20例结直肠腺瘤和60例结直肠癌中的表达。结果 1MUC1、MUC2在20例结直肠腺瘤及60例结直肠癌中,阳性表达率分别为10%、46.7%(P=0.013);100%、58.3%(P=0.000)。2MUC1黏蛋白在结直肠癌中的表达与肿瘤的分化程度呈负相关(P=0.006),在低分化结直肠癌中表达强,并与浸润深度(P=0.004)、淋巴结转移(P=0.01)、Dukes分期(P=0.033)呈正相关,与预后呈负相关。3MUC2的表达与分化程度无关(P=0.143),而与浸润深度(P=0.016)、淋巴结转移(P=0.002)、Dukes分期(P=0.005)呈负相关,与生存期呈正相关。4MUC1、MUC2联合检测表明:MUC1与MUC2呈负相关,MUC2+MUC1-预后最好、MUC1+MUC2-预后最差。结论 MUC1的上调表达或MUC2的下调表达可能参与了结直肠癌的发生、发展、浸润及转移,对临床上判断预后具有较大意义。     

MicroRNA-145靶向沉默PLK1基因对肾小管上皮细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨microRNA-145(miR-145)靶向沉默PLK1基因对肾小管上皮细胞增殖、凋亡的影响及相关机制.方法 采用lipofectamine 2000试剂将miR-145转染肾小管上皮细胞,按不同转染结果分为对照组、阴性对照组及miR-145转染组,采用RT-PCR法检测肾小管上皮细胞中miR-145水平,...