肝硬化肝癌立体定向照射后细胞因子表达的实验研究

目的应用兔肝硬化肝癌模型观察肝病状态下肝癌照射后放射性肝损伤的细胞因子变化。方法肝硬化肝癌兔16只(实验组1),随机分为两组,每组8只,分别给予单次剂量20,30Gy的立体定向照射;8只单纯接种肝癌兔(实验组2),随机分为两组,每组4只,按上述方法分别给予相同照射。照射后3周全部处死,应用EV二步法分别观察照射后实验组1与实验组2兔肝组织GST-π的变化。结果①给予20Gy照射,实验组1GST-π在癌周组织的表达比实验组2GST-π的表达高,两组间差异有显著性(P=0.010);②给予30Gy照射,实验组1GST-π在癌周组织的表达与实验组2GST-π的表达相似,两组间差异无显著性(P=1.000);③实验组1不同剂量照射后,高剂量组(30Gy)GST-π在癌周组织和肝癌组织的表达比低剂量组(20Gy)的表达低,两组间差异有显著性(P=0.010)。结论①实验性肝硬化肝癌的照射效果单次剂量30Gy优于20Gy;②GST-π可作为评价肝硬化肝癌照射效果的参考指标。     

兔肝硬化肝癌立体定向照射后PCNA、GST-π表达及其意义

目的 应用已制备的兔肝硬化肝癌模型观察肝病状态下肝癌照射后放射性肝损伤的细胞因子的变化.方法 肝硬化肝癌兔16只(实验组),随机分为两组,每组8只,分别给予单次剂量20、30 Gy的立体定向照射;8只单纯接种肝癌兔(对照组),随机分为两组,每组4只,按上述方法分别给予立体定向照射,单次剂量20、30 Gy.照射后3周分别处死实验组与对照组,应用EV二步法分别观察照射后实验组与对照组肝脏增殖细胞核抗原(PCNA)、谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π)的变化.结果 照射后PCNA、GST-π在癌周组织的表达:照射20Gy实验组比对照组的癌周组织表达高,两组间有显著性差异(P=0.010);照射30Gy实验组与对照组的癌周组织表达相似,两组间无统计学差异(P=1.000);实验组不同剂量照射后,高剂量组(30 Gy)PCNA、GST-π的表达比低剂量组(20 Gy)的表达低,两组间有显著性差异(P=0.010).照射后PCNA、GST-π在肝癌组织的表达;实验组不同剂量照射,高剂量组(30 Gy)的表达比低剂量组(20 Gy)的表达低,两组间有显著性差异(P=0.010).结论 实验性肝硬化肝癌的照射效果单次剂量30 Gy优于20 Gy;PCNA、GST-π可作为评价肝硬化肝癌照射效果的参考指标.     

急性放射性分泌性中耳炎新西兰兔模型的建立及研究

【目的】 建立急性放射性分泌性中耳炎的新西兰兔动物模型,并观察不同辐射剂量?方式对中耳的影响。 【方法】 72只健康的新西兰兔随机分成4组(每组18只),包括对照组(A组)和3个实验组B、C、D。 B组施加辐射剂量为30 Gy/次 × 1次,C组为10 Gy/次 × 3次,D组为10 Gy/次 × 6次。在照射前及照射后第1天,第1?2?4?8?12周分别行耳内镜、中耳CT、声阻抗检查,并在放疗后的每个观察时间点处死各个组的3只兔子,取其鼻咽黏膜,听泡行组织学检查。【结果】 初步建立了急性放射性分泌性中耳炎的新西兰兔动物模型。【结论】 利用新西兰兔建立放射性分泌性中耳炎的动物模型是可行的,但单次大剂量的电离辐射是成功建模的关键。     

胎盘型谷胱甘肽S-转移酶在人肝癌及癌旁组织的表达

①目的探讨胎盘型谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴπ）在肝癌及癌旁组织的表达及意义。②方法应用抗人ＧＳＴπ多克隆抗体，以ＬＳＡＢ免疫组织化学方法检测７７例肝细胞癌及癌旁组织中ＧＳＴπ的表达。③结果７７例肝细胞癌中，ＧＳＴπ阳性表达率为８９．６％；癌旁组织中，增生结节ＧＳＴπ阳性表达率为７１．１％（２７／３８），肝硬化组织为２２．９％（８／３５）；肝癌及增生结节中ＧＳＴπ阳性表达率显著高于肝硬化组织（χ２＝４４．９，１６．９；Ｐ＜０．００１）；且肝癌与增生结节两组间ＧＳＴπ阳性表达率亦有显著性差异（χ２＝６．３５，Ｐ＜０．０２）。ＧＳＴπ表达与Ｅｄｍｏｎｄｓｏｎ组织分级无关（χ２＝１．９６，Ｐ＞０．２５）。④结论ＧＳＴπ可作为肝细胞癌及癌前病变的标志酶，对肝癌有辅助诊断价值     

人肝癌中p57kip2 mRNA及其蛋白表达研究

【目的】研究p57kip2基因在人体肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)不同阶段的mRNA和蛋白表达情况,以探讨HCC发生的分子生物学机制。【方法】运用原位分子杂交和免疫组化技术分别检测30例正常肝组织、30例癌周肝硬化和30例肝癌组织中p57kip2mRNA及P57kip2蛋白的表达情况。【结果】p57kip2mRNA表达:正常肝组织组未见表达,癌周肝硬化组与肝癌组阳性表达率分别为33.33%和16.67%。肝癌组分化好和分化差阳性表达率之间差异有统计学意义,相关分析呈正相关。P57kip2蛋白表达:正常肝组织组未见表达;癌周肝硬化组与肝癌组阳性表达率分别为56.67%和63.33%。肝癌组分化好者与分化差者阳性表达率之间差异有统计学意义,相关分析呈正相关。【结论】p57kip2基因mRNA和蛋白表达缺失或下降与HCC分化程度低呈正相关,提示p57kip2基因的失活可能是进展期HCC的晚期分子事件,并可能是一个新的预后指标。     

高压氧对荷H22肝癌小鼠放疗增敏情况的研究

目的探讨高压氧（HBO）对荷H22肝癌小鼠在放疗中的增敏情况。方法将25只荷瘤小鼠均分为5组，每组5只：（1）对照组；（2）单纯照射组，只接受单次15Gy的60^Co放射治疗；（3）15min组，高压氧后15min进行照射治疗；（4）30min组，高压氧后30min进行照射治疗；（5）60min组，高压氧后60min进行照射治疗。各组均观察小鼠生长情况，测定肿瘤体积，记录肿瘤照射后生长时间及小鼠平均存活时间。结果各实验组分别与对照组比较，实验组肿瘤生长延缓及小鼠生长天数可见延长，有显著性差异（P〈0．05）；各组与单纯照射组比较，15min组、30min组可见显著性差异（P〈0．05），60min组无显著性差异（P〉0．05）。结论高压氧对荷H22肝癌小鼠有放疗增敏作用，且在30min内效果明显。     

肝细胞癌超氧化物歧化酶铜伴侣蛋白表达水平与肝癌恶性生物学指标的相关性

【目的】探讨肝细胞癌（HCC）超氧化物歧化酶铜伴侣蛋白（CCS）表达水平与肿瘤恶性生物学指标之间的相关性。【方法】收集2018年1月至2018年12月在中山大学附属第一医院行外科切除的10例肝细胞癌肿瘤标本以及患者的临床及病理资料，采用蛋白免疫印迹法（WB）检测肝癌及相应癌旁组织CCS表达水平，采用免疫组化（IHC）染色法检测Ki67，CD34，vimentin及glypican-3（GPC3）表达情况。用Wilcoxon秩和检验法分析CCS表达水平与各肝细胞癌恶性相关生物学指标Ki67，CD34，vimentin及GPC3表达水平之间的关系；采用Fisher精确概率法分析CCS表达水平与肝细胞癌患者临床及病理特征之间的关系。【结果】10例肝癌患者的肝癌组织标本中，7例CCS表达水平较癌旁组织低（7/10），3例CCS表达水平较癌旁组织高（3/10）。肝细胞癌CCS低表达组的Ki67，vimentin及GPC3表达水平高于CCS高表达组（Z=-2.400，P=0.016；Z=-2.423，P=0.015；Z=-2.400，P=0.016）；肝细胞癌CCS低表达组CD34表达水平低于CCS低表达组（Z=-2.423，P=0.015）；CCS高表达组与低表达组之间在年龄、性别、乙肝病史、肝硬化、术前AFP水平、肿瘤大小、ES分级、微血管侵犯各临床及病理特征方面均未呈现显著统计学差异。【结论】本研究显示多数肝细胞癌的CCS表达水平低于相应癌旁组织，且与CCS高表达的肝细胞癌相比，CCS低表达的肝细胞癌Ki67，vimentin及GPC3表达水平较高，提示CCS表达降低与肝细胞癌增殖、侵袭、转移等恶性生物学行为相关。CCS低表达组CD34表达水平低于CCS高表达组，但其相关机制有待于进一步探究。本研究结果显示，与正常肝脏组织相比，CCS在肝癌中的表达多呈下降趋势，其表达水平可能成为肝细胞癌治疗预后的预测指标。     

大剂量分次照射致兔放射性心脏损伤中检测miRNA-21表达的意义

  目的   建立良好、可靠、稳定的放射性心脏损伤（radiation-induced heart disease，RIHD）模型，初步确定miRNA-21在血浆中表达趋势。   方法   成年雄性健康新西兰兔27只，随机分为对照组3只和照射组24只，采用3%戊巴比妥钠（用量为0.8～1.0 ml/kg）耳缘静脉麻醉，通过CT定位扫描勾画左心室前壁作为照射靶区。采用直线加速器（Elekta precise），6 MV高能X线，5 Gy/F、2 F/W的照射方式，每隔3 d照射直到照射总剂量为30 Gy。对照组兔麻醉后给予佯装照射。于照射后第6、24、72 h及第1、2、4、8、24周，通过耳缘静脉采集血浆通过RT-PCR检测miRNA-21表达，取心脏组织通过HE染色检测心脏损伤情况。   结果   照射后心肌纤维之间炎性细胞浸润，以单核细胞为主，心肌细胞水肿明显、排列紊乱，心肌细胞核轻度固缩、染色加深，出现少量异型细胞核，符合心脏损伤模型病变。RT-PCR检测miR-21在各个时间点和Control组比较均有升高，差异有统计学意义（P < 0.05）；6 h、24 h、72 h、1周、2周、4周时间点随着照射时间的延长，miR-21表达不断递增，在4周达到最高表达；8周、24周时间点显示随着照射时间的延长，miR-21表达下降（ P < 0.05）。   结论   多次分剂量、大分割照射可以构建良好、可靠、稳定的RIHD阶梯模型，可以较好地模拟RIHD的发生、发展的演变过程。血浆中miR-21表达检测可以初步预测RIHD纤维化进展。      

益气活血中药对放射损伤大鼠肺组织转化生长因子和胶原纤维的影响

目的观察小剂量重复照射下不同时相大鼠肺组织转化生长因子β1（transforming growth factor beta1,TGF-β1）的表达和Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的动态变化,以及益气活血中药干预的影响,探讨益气活血中药防治放射性肺损伤的作用及机理。方法 96只Wistar雌性大鼠随机分为照射加中药组（A组）30只、照射加氨溴索组（B组）30只、单纯照射组（C组）30只、正常对照组（D组）6只。用直线加速器对前三组大鼠右肺进行分次照射（5Gy/次,1次/周,累积剂量为30Gy）,于照射开始后第4、6、8、12、26周5个时间点分别处死三组大鼠各6只,取肺组织切片行TGF-β1和Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维免疫组化检测,对照观察各组大鼠肺组织不同时相TGF-β1的表达和胶原纤维含量的病理改变。结果单纯照射组大鼠肺组织TGF-β1于照射第4周增高,第12周达到表达高峰;胶原纤维合成在第4周开始,第12周明显增快,至26周达到高峰。中药干预组各时相大鼠肺组织TGF-β1表达及Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维增生程度均明显低于单纯照射组（P〈0.05）;各时相值与照射加氨溴索组近似,相比无统计学差异（P〉0.05）。结论在小剂量重复照射过程中,组织TGF-β1表达与组织胶原纤维合成有明显的同步性,而早期应用益气活血中药可抑制TGF-β1的表达,并减轻早期放射性肺炎的炎症反应和后期放射性肺纤维化的程度,因而对放射性肺损伤具有防治作用。     

急性白血病病人GST-π、MRP1表达及其相关性的临床研究

目的：检测急性白血病（acute leukemia，AL）病人谷胱甘肽硫转移酶-π（glutathione—S—transferltse-π，GST-π）、多药耐药相关蛋白1（multi—drug resistance relevant protein 1，MRP1）的表达，探讨二者与AL多药耐药（multi—drug resistance，MDR）的关系及临床意义，明确二者在AL中的表达有无相关性以及两者表达与AL病人临床特征的关系。方法：采用免疫组织化学S—P法检测80例AL病人及30例正常人外周血单个核细胞GST-π、MPP1表达。运用SPSS10．0统计软件，采用X^2检验、四格表精确概率法、t检验、直线相关分析方法统计结果。结果：GST-π、MRP1在难治组的阳性率均高于初治组和完全缓解组；在初治组的阳性率均高于对照组。GST-π、MRP1在AL难治组中的表达具有高度相关性。GST-π、MRP1表达阳性组完全缓解率低于阴性组。GST-π、MRP1的表达与AL难治组病人年龄、性别、骨髓幼稚细胞比例及外周血白细胞计数无关。且两者在急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）组、急性非淋巴细胞白血病（acute nonlymphoblastic leukemia，ANLL）组表达无差别。结论：GST-π和MRP1的高表达与AL临床耐药有关；GST-π和MRP1在难治组中的表达密切相关；GST-π和MRP1表达阳性的AL病人的完全缓解率明显降低，两者可能是影响AL疗效的重要指标；GST-π和MRP1在难治组表达阳性率与年龄、性别、外周血白细胞计数、骨髓幼稚细胞比例可能无关，且在ALL组与ANLL组中差别无统计学意义。