大黄素抑制人口腔鳞癌细胞Tca8113增殖及细胞周期进程的实验研究

目的探讨大黄素对人口腔鳞癌细胞体外生长增殖及细胞周期改变的影响。方法采用2.5、5.0、10、20、40、60和80 μmol/L
大黄素分别干预体外培养的口腔鳞癌细胞Tca8113,作用24、48和72 h后,并设含0.1%二甲基亚砜的培养液作为对照组,通过
MTT检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞Tca8113的增殖作用;以FCM检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞周
期的影响;结合Western blotting 方法分析大黄素干预后对口腔鳞癌细胞周期相关蛋白CDK2、Cyclin E和P21 表达水平的变
化。结果大黄素能够在72 h内明显抑制Tca8113细胞生长以及增殖行为。MTT结果显示,随作用时间从24、48到72 h,大黄素
对于Tca8113细胞的抑制效应呈明显的时间—浓度依赖关系;由细胞周期检测结果显示,大黄素作用使口腔鳞癌Tca8113细胞
周期表现为G0~G1期细胞时相阻滞;蛋白免疫印迹则表明经大黄素干预口腔鳞癌Tca8113 细胞的细胞周期相关蛋白CDK2、
Cyclin E和P21表达水平明显降低,与空白对照组相比较,具有显著的统计学差异（P<0.05）。结论大黄素能够明确抑制人口腔鳞
癌细胞Tca8113的生长增殖以及影响其细胞分裂周期,这可能与抑制细胞周期调控信号通路中分子的活化与转导有关。
     

姜黄素对人口腔鳞癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨姜黄素对人口腔鳞癌细胞Tca8113及Tb增殖的抑制及诱导凋亡作用。方法分别应用6．25、12．50、25．00、50．00μmol／L的姜黄素作用Tca8113及Tb细胞24h,采用MTT法检测姜黄素对口腔鳞癌细胞Tca8113及Tb增殖的抑制作用,形态学观察及流式细胞仪测定细胞凋亡。结果6．25～50．00μmol／L姜黄素能显著抑制口腔鳞癌细胞Tca8113和Tb细胞的增殖（F＝793．94、391．08,q＝6．00～62．68,P〈0．05）。流式细胞仪检测显示口腔鳞癌细胞凋亡率随姜黄素浓度升高而增加。倒置显微镜下可观察到部分凋亡细胞出现染色质凝集、核固缩、核碎裂等形态学改变。结论姜黄素对人口腔鳞癌细胞Tca8113及Tb的增殖具有显著的抑制作用,并可诱导细胞凋亡。     

Cyclin D1-siRNA促进口腔鳞癌Tca8113细胞凋亡

目的:研究细胞周期蛋白D1(cyclin D1)siRNA对口腔鳞癌细胞Tca8113凋亡的作用。方法:采用cyclin D1-siRNA慢病毒感染Tca8113,qPCR检测cyclin D1表达,MTT检测细胞活性,Annexin-V单染检测细胞凋亡。结果:Cyclin D1-siRNA慢病毒成功抑制Tca8113中cyclin D1mRNA表达。Cyclin D1干扰组细胞活性显著低于阴性病毒组(P<0.01),且细胞凋亡率高于阴性对照组(P<0.01)。结论:Cyclin D1干扰能促进Tca8113凋亡,起到抗肿瘤效应。     

转人B7-H3基因鳞癌细胞株的建立及其检测

目的探讨转入B7-H3基因鳞癌细胞株的建立及其检测。方法采用脂质体介导法将已建好的真核表达质粒pEGFP-C1-B7-H3导入人鳞癌细胞Tca8113中(Tca8113/B7-H3),RT-PCR检测B7-H3在该细胞中的表达,Western blot检测其蛋白的表达。经G418筛选后,用有限稀释法建立稳定高表达的带有B7-H3基因的Tca8113鳞癌细胞株。结果RT-PCR方法检测到目的基因B7-H3的一个215bp大小的cDNA扩增产物;DAB显色,裂解的Tca8113/B7-H3基因转染细胞膜蛋白中相对分子质量约65～86ku大小的特异性条带。转染B7-H3的Tca8113细胞,经过细胞传代培养后仍然能够检测到高表达的B7-H3基因,经过有限稀释法建立了Tca8113/B7-H3细胞株。结论成功建立了Tca8113/B7-H3细胞株,为以后的体内外试验提供了很好的平台,为近一步研究其抗肿瘤作用奠定了基础。     

转人B7-H3基因鳞癌细胞株的建立及其检测

目的探讨转入B7-H3基因鳞癌细胞株的建立及其检测。方法采用脂质体介导法将已建好的真核表达质粒pEGFP-C1-B7-H3导入人鳞癌细胞Tca8113中（Tca8113/B7-H3）,RT-PCR检测B7-H3在该细胞中的表达,Western blot检测其蛋白的表达。经G418筛选后,用有限稀释法建立稳定高表达的带有B7-H3基因的Tca8113鳞癌细胞株。结果RT-PCR方法检测到目的基因B7-H3的一个215bp大小的cDNA扩增产物;DAB显色,裂解的Tca8113/B7-H3基因转染细胞膜蛋白中相对分子质量约65～86ku大小的特异性条带。转染B7-H3的Tca8113细胞,经过细胞传代培养后仍然能够检测到高表达的B7-H3基因,经过有限稀释法建立了Tca8113/B7-H3细胞株。结论成功建立了Tca8113/B7-H3细胞株,为以后的体内外试验提供了很好的平台,为近一步研究其抗肿瘤作用奠定了基础。     

诱导型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在舌癌细胞株中的表达

 【目的】探讨诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和血管内皮生长因子（VEGF）在舌鳞癌细胞株Tca8113中的表达,为进一步研究iNOS和VEGF在舌鳞癌肿瘤血管生成中的作用提供实验基础。【方法】采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法和SP免疫组化方法,对舌鳞癌细胞株Tca8113中iNOS和VEGF mRNA和蛋白表达情况进行检测。【结果】RT-PCR检测到舌鳞癌Tca8113细胞株中iNOS／VEGF mRNA条带明显,SP免疫组化检测到iNOS／VEGF蛋白在舌癌细胞胞浆中呈强阳性表达。【结论】iNOS／VEGF mRNA和蛋白在舌鳞癌Tca8113细胞株中呈高水平表达。     

JSH-23对人舌鳞癌细胞Tca8113增殖和凋亡的影响

目的 探讨JSH-23阻断NF-κB信号通路后人舌鳞癌细胞Tca8113增殖和凋亡的情况及NF-κB信号通路相关凋亡抑制基因Bcl-2的表达变化,进而为临床舌鳞癌的干预和治疗寻找新的药物提供实验依据.方法 采用体外培养人舌癌Tca8113细胞的方法,经不同浓度JSH-23作用不同时间后,用MTT法、RT-PCR及Western blot等方法检测JSH-23对Tca8113细胞增殖、凋亡的影响.采用SPSS13.0统计软件对数据进行方差分析及t检验.结果 Tca8113细胞经JSH-23作用后,增殖受到明显抑制,20 μmol/L JSH-23作用48 h时,抑制作用最为显著,细胞生长抑制率达到60.45％.同时,Bcl-2凋亡抑制基因表达减少,与对照组相比,JSH-23作用48 h后,Bcl-2表达显著减少47.85％,差异有统计学意义（P＜0.05）;Bcl-2蛋白含量也明显减少,作用48 h后,Bcl-2蛋白表达相对光密度值分别下降50.93％ （P ＜0.01）.结论 JSH-23作为NF-κB信号通路抑制剂,可以明显抑制人舌鳞癌细胞的增殖,同时显著下调Bcl-2基因及蛋白的表达.     

异土木香内酯对人舌鳞癌Tca8113细胞的增殖、迁移和侵袭的影响

目的 研究异土木香内酯对舌鳞癌细胞Tca8113的增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 用CCK-8法检测异土木香内酯作用于舌鳞癌Tca8113细胞的半数抑制浓度(IC50),EDU实验方法检测异土木香内酯抑制Tca8113细胞增值能力.检测土木香内酯对Tca8113细胞凋亡影响实验.Western Blot检测异土木香内酯对Tca8113细胞凋亡蛋白表达的影响.结果 实验结果表明,异土木香内酯作用于舌鳞癌Tca8113细胞的半数抑制浓度(IC50)为20μM,20μM异土木香内酯可以抑制舌鳞癌Tca8113细胞活性(P<0.01),细胞增值能力(P<0.01);进一步结果表明,异土木香内酯还可以抑制对Tca8113 P迁移,同时降低Tca8113细胞侵袭能力(P<0.01);促进Tca8113细胞凋亡的影响(P<0.01).Western Blot实验结果表明,异土木香内酯可以下调舌癌Tca8113细胞的Bcl-2蛋白,上调caspase3蛋白的表达.结论 实验结果表明异土木香内酯对舌癌Tca8113细胞有抑制作用.     

诱导型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在舌癌细胞株中的表达

【目的】探讨诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和血管内皮生长因子（VEGF）在舌鳞癌细胞株Tca8113中的表达,为进一步研究iNOS和VEGF在舌鳞癌肿瘤血管生成中的作用提供实验基础。【方法】采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法和SP免疫组化方法,对舌鳞癌细胞株Tca8113中iNOS和VEGF mRNA和蛋白表达情况进行检测。【结果】RT-PCR检测到舌鳞癌Tca8113细胞株中iNOS／VEGF mRNA条带明显,SP免疫组化检测到iNOS／VEGF蛋白在舌癌细胞胞浆中呈强阳性表达。【结论】iNOS／VEGF mRNA和蛋白在舌鳞癌Tca8113细胞株中呈高水平表达。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂与顺铂联用激活线粒体信号通路诱导口腔鳞癌细胞的凋亡

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACIs)与顺铂联合应用对口腔鳞癌细胞的凋亡诱导作用及相关分子机制。方法 (1)采用MTS法首先检测不同浓度的SAHA(suberoylanilide hydroxamic acid)和顺铂单独作用于口腔鳞癌细胞后,对其生长增生的影响,获得口腔鳞癌细胞对两种药物单独使用的剂量反应。(2)结合前面所得结果,采用流式细胞术及TUNEL分别检测低剂量SAHA(2μmol/L)及顺铂(4μg/ml)单独和联合用药后,对口腔鳞癌细胞的凋亡诱导情况。(3)采用western blotting的方法观察单独及联合用药情况下Tca8113及κB两株口腔鳞癌细胞线粒体和胞质内细胞色素C(cyto-chrome C)的表达变化。结果随单独用药剂量的增加,两株口腔鳞癌细胞都对SAHA及顺铂呈现出较好的敏感性。低剂量SA-HA用药组Tca8113及κB的凋亡率分别为0.9%和3.9%,低剂量顺铂组Tca8113及κB的凋亡率分别为17.4%和12.6%,而在联合用药组凋亡率可以达到34.6%和40.4%;较低剂量SAHA及顺铂的单独用药组,联合用药组TUNEL染色阳性的细胞明显增多,差异具有显著统计学意义(P<0.05)。联合应用低剂量的SAHA及顺铂,可以诱导cytochrome C从线粒体中释放到胞质。结论与单独使用两种药物相比较,低剂量的SAHA与顺铂的联合用药方式能诱导口腔鳞癌细胞通过线粒体相关通路发生凋亡。     

内毒素血症幼年大鼠小肠Bcl-2、Bax mRNA的变化

目的：通过内毒素血症幼年大鼠小肠Bcl-2度BaxmRNA表达的变化。探讨小儿胃肠功能障碍的机制。方法：腹腔注射内毒素制备18d龄大鼠内毒素血症模型，注射同等量生理盐水为对照组。分别取全部回肠。半定量RT-PCR法检测Bcl-2、BaxmRNA的表达。结果：正常对照和内毒素组小肠各时间点的Bcl-2 mRNA均为阴性表达，正常对照BaxmRNA表达较弱。内毒素组小肠各时间点的BaxmRNA表达均明显增强（P〈0．01）。死亡组与24h之内其他各组的表达无显著差异，比72h亚组表达明显增高（P〈0．05）。内毒素组Bax与Bcl-2mRNA表达的比值明显高于对照组。结论：内毒素通过调节基因Bcl-2、BaxmRNA表达的变化促进幼年大鼠小肠细胞凋亡可能为严重感染时胃肠功能障碍机制之一。     

抑郁对心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响

目的:探讨抑郁对心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3的影响。方法:大鼠随机分为四组,各组8只,A组为假手术组,B组为抑郁大鼠假手术组,C组为心肌梗死组,D组为抑郁大鼠心肌梗死组。用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应方法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的基因表达。结果:各组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达的差异有统计学意义(P<0.01),C、D组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达均高于A组和B组,差异有统计学意义(P<0.01),D组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bax、Caspase-3 mRNA表达高于C组,而心肌细胞Bcl-2蛋白及mRNA表达低于C组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抑郁可以加重心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡,其机制可能与上调促凋亡基因Bax及Caspase3表达、下调抗凋亡基因Bcl-2的表达有关。     

大鼠液压脑损伤后bax/bcl-xL 的表达在mRNA和蛋白质水平的相关性

目的：探讨脑创伤后bax/bcl-xL在mRNA和蛋白水平的变化规律及其与神经细胞凋亡发生、发展的关系。方法：在液压脑损伤模型中,应用逆转录聚合酶链反应、免疫组化分别检测大鼠脑创伤后不同时程bax和bcl-xL表达;采用凋亡原位末端标记、电镜超微结构、DNA凝胶电泳观察脑创伤后细胞凋亡的形态和生化特征。结果：伤后6 h,bcl-xL mRNA表达下调［伤侧半球为对侧的(67.42±7.5 4)%］,bcl-xL蛋白水平下降［伤侧为对侧的(85.85±5.72)%］。伤后3 d,bcl-xL mRNA和 bcl-xL蛋白表达分别为对侧的(39.97±3.61)%和(57.50±6.21)%;bax mRNA和bax蛋白分别为对侧半球的(203.95±17.53)%和(189.02±7.23)%。伤后bax/bcl-xL比率升高比细胞凋亡提前出现,早期由于bcl-xL的表达下降,后期主要是由于bax的升高所致。结论：细胞凋亡及其调节基因的表达间具有一致性;脑创伤对bax和 bcl-xL 的调节发生在转录水平以前的某一环节。bax/bcl-xL平衡体系的维持或紊乱影响脑创伤后神经细胞生存或死亡。     

bcl-2和bax在三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡过程中的变化

目的:探讨bcl-2和bax在三氧化二砷(arsenic trioxide,As₂O₃)诱导HL-60细胞凋亡过程中的变化。方法:7.5μmol/L的As₂O₃作用HL-60细胞12、24 h,RT-PCR和Western-blot分别检测bcl-2和bax基因mRNA表达及相应的蛋白表达变化。结果:7.5μmol/L的As₂O₃作用HL-60细胞12、24 h后,bcl-2 mRNA相对表达分别为(65.02±4.69)%、(40.70±3.94)%,baxmRNA相对表达分别为(46.71±4.26)%、(95.65±5.57)%,Western-blot检测bcl-2蛋白相对表达分别为(56.34±6.45)%、(42.01±3.01)%,bax蛋白质表达分别是(50.65±4.50)%、(66.78±5.05)%,对照组与实验组差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:As₂O₃诱导HL-60细胞凋亡过程中,下调bcl-2 mRNA和蛋白质表达,同时上调bax mRNA和蛋白质表达,可能是As₂O₃诱导细胞凋亡信号传导通路之一。     

凋亡相关基因bcl-2基因族在乳腺癌中的预后作用

探讨癌基因ｂｃｌ－２及其基因族成员ｂａｘ、ｂｃｌｘ的表达水平与乳腺癌生物学行为的关系及对乳腺癌预后的意义。方法运用免疫组化方法对９１例乳腺癌石蜡组织切片ｂｃｌ－２、ｂａｘ蛋白表达水平进行检测,运用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法检测１６例新鲜乳腺癌组织标本ｂｃｌｘｌｍＲＮＡ表达水平。结果９１例乳腺癌病例中,ｂｃｌ２阳性率６５．９％（６０／９１）,ｂａｘ阳性率６４．８％（５９／９１）。ｂｃｌ２、ｂａｘ蛋白表达水平与凋亡指数（ＡＩ）、病理组织学分级、腋淋巴结转移情况、术后局部复发与转移相关,ｂｃｌ２表达与雌激素受体（ＥＲ）水平正相关。ＡＩ与ｂｃｌ２、ｂａｘ蛋白表达水平相关。对影响乳腺癌术后无病生存率的单因素分析结果显示,ｂｃｌ２、ｂａｘ蛋白表达水平具有预后作用;Ｃｏｘ’ｓ模型多因素分析结果,ｂｃｌ２蛋白表达水平是独立的预后指标。１６例乳腺癌新鲜标本中,５０％（８／１６）ｂｃｌｘｌｍＲＮＡ高表达,其表达水平与ｂｃｌ２蛋白表达、腋淋巴结转移相关。结论凋亡相关基因ｂｃｌ２、ｂａｘ、ｂｃｌｘｌ表达失调可导致乳腺癌细胞凋亡调控的紊乱,使腋淋巴结转移程度增加,ｂｃｌ２蛋白表达水平在乳腺癌中有独立的预后价值     

左归降糖益肾方含药血浆对高糖培养小鼠足细胞凋亡的影响

目的：探讨在高糖作用下,体外培养的小鼠足细胞凋亡及bax、bcl-2表达水平的变化,及左归降糖益肾方含药血浆的调控作用。方法将体外培养的小鼠足细胞随机分为空白组(A组,25 mmoL/L葡萄糖,10%空白血浆)、高糖组(B组,200 mmoL/L 葡萄糖,10%空白血浆)、左归降糖益肾方含药血浆组（C 组,200 mmoL/L 葡萄糖,10%含药血浆）,4-苯基丁酸（4-PBA）含药血浆组（D组,200 mmoL/L葡萄糖,10%含药血浆）。采用间接免疫荧光细胞化学法检测足细胞凋亡情况;MTT自动比色法检测足细胞活力,蛋白质印迹法和逆转录-聚合酶链反应法分别检测bax及bcl-2蛋白或mRNA表达水平的变化。结果与A组相比,B组足细胞活力降低,bax及 bcl-2蛋白或mRNA的表达水平均升高（P＜0.01）;与B组相比,C组、D组足细胞活力升高,bax蛋白或mRNA的表达水平均降低（P＜0.05或P＜0.01）,bcl-2蛋白或mRNA的表达水平均升高（P＜0.01）;与C组比,D组足细胞活力升高（P＜0.05),但bax及bcl-2蛋白或mRNA的表达水平,差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 bax及bcl-2蛋白或mRNA表达水平的升高,是足细胞损伤的分子机制之一;左归降糖益肾方含药血浆可以通过影响bax及bcl-2蛋白或mRNA的表达水平,从而抑制足细胞凋亡。     

一氧化氮诱导肝癌细胞凋亡过程bcl-2和bax mRNA表达水平的变化

目的 探讨在一氧化氮(NO)诱导肝癌细胞凋亡过程bcl-2和bax mRNA表达水平的动态变化。方法 用NO供体硝普钠(SNP)诱导SMMC-7721和HepG2肝癌细胞株凋亡，RT-PCR的方法检测bcl-2、ba xmRNA表达水平，并采用凝胶分析系统进行半定量分析。结果 1．0mmol/L可降低SMMC-7721和HepG2细胞bcL2、bax mRNA的表达水平，提高bax/bc1-2 mRNA的比值并呈时间依赖性。HepG2细胞bcl-2和bax mRNA降低的幅度较SMMC-7721细胞小(P＜0．05)，开始变化的时间也较SMMC-7721细胞迟。结论 NO诱导肝癌细胞株的凋亡，可能与其bcl-2、bax mRNA表达水平变化导致bax/bc1-2 mRNA比值上升有关。     

丹酚酸B配伍丹皮酚对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型Bcl-2、Bax、caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨丹酚酸B配伍丹皮酚对过氧化氢（H2O2）诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型Bcl-2、Bax、caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响。方法采用H2O2造成人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型,利用SYBR GreenRT-PCR方法检测药物作用内皮细胞后凋亡相关基因Bcl-2、Bax、caspase-3 mRNA的表达变化,Western blot法检测内皮细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3的表达。结果丹酚酸B配伍丹皮酚能够使损伤内皮细胞中Bcl-2基因mRNA水平上升,而Bax、caspase-3基因的表达降低,与Western blot方法检测蛋白含量的结果较为一致,且数据比较差异有高度统计学意义（P〈0.01）。结论丹酚酸B配伍丹皮酚是通过调节Bcl-2、Bax基因及蛋白的表达,抑制下游分子caspase-3的活化而起到保护血管内皮细胞的作用。     

β-淀粉样肽（25-35）对PC12细胞bax和bcl-2基因表达的影响

目的：观察β-淀粉样肽25-35（β-amyloid peptide 25-35,Aβ25-35）诱导PC12细胞凋亡和对bax及bcl-2基因表达的影响。方法：采用MTT法检测PC12细胞的存活率;DNA电泳法观察细胞凋亡时特异性梯状条带;Hochest33258-PI荧光染色观察细胞核形态学改变;RT-PCR检测bax和bcl-2基因mRNA表达变化,Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达变化。结果：随着Aβ25-35浓度的增加,PC12细胞存活率逐渐降低;DNA电泳呈凋亡特异性梯状条带;荧光染色可见细胞核碎裂、核固缩等凋亡特征;bax mRNA及Bax蛋白表达增加,bcl-2 mRNA及Bcl-2蛋白表达降低。结论：在Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中,Bax和Bcl-2可能起重要作用。     

蜂胶黄酮对衰老小鼠胸腺bcl-2、bax基因mRNA表达的影响

目的：研究蜂胶黄酮对D-半乳糖致衰老小鼠胸腺bcl-2、bax基因mRNA表达的影响,探讨蜂胶黄酮的抗衰老机制。方法：用D-半乳糖建立衰老小鼠模型,以蜂胶黄酮治疗,RT-PCR法观察小鼠胸腺bcl-2、bax基因mRNA表达。结果：与正常对照组比较,模型组bcl-2基因表达降低,bax基因表达升高,差异有统计学意义（P〈0.01）;与模型组比较,治疗组bcl-2基因表达升高,bax基因表达降低,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：蜂胶黄酮能增加衰老小鼠bcl-2基因表达,降低bax基因表达,具有抗衰老作用。