外周血单个核细胞感染乙型肝炎病毒在母婴垂直传播中的作用

目的：探讨HBsAg、HBeAg阳性孕妇外周血单个核细胞(PBMC)内乙型肝炎病毒(HBV)DNA感染状况及其在宫内母婴垂直传播中的作用。方法：对HBsAg／HBeAg双阳性共67对孕妇及其新生儿静脉血分离和提纯PBMC后，经抽提、纯化后的DNA进入PCR扩增反应，引物为HBVC区基因序列。结果：67名HBsAg及HBeAg双阳性的孕妇中有35例(52．2％)PBMC中HBV DNA阳性，25例孕妇在血清及PBMC中均发现HBV DNA。67名新生儿有22例感染HBV DNA，感染率32．8％，其中血清HBV DNA阳性者10例，PBMC HBV DNA阳性者19例，二者均阳性者7例。结论：母亲PBMC内HBV DNA阳性可能导致新生儿PBMC中HBV DNA阳性，PBMC内的HBV DNA可能是HBV母婴垂直传播的一条重要途径，同时，HBsAg及HBeAg阳性母亲若血清HBV DNA为阳性就极大增加了其新生儿感染HBV的危险性。     

HBeAg阴性慢性肝病患者血清中和外周血单个核细胞内HBV DNA的检测

目的探讨HBeAg阴性慢性肝病患者血清中和外周血单个核细胞(PBMC)内HBV DNA的感染情况及其临床意义。方法采用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测52例HBeAg阴性慢性乙型肝炎(CHB)和46例HBeAg阴性乙型肝炎肝硬化(CIH)患者血清中和PBMC内HBV DNA的含量。结果患者血清中和PBMC内HBV DNA的总阳性率分别为64.29%(63/98)和77.55%(76/98),2组比较,差异有显著性(χ2=7.56,P<0.01),检测结果一致的患者占83.67%(82/98),不一致的患者占16.33%(16/98),两者差异有相关性(χ2=40.45,P<0.01);CHB组血清中HBV DNA含量对数值明显高于CIH组(t=2.16,P<0.05),而在PBMC内2组差异无显著性(t=0.91,P>0.05);血清中2组患者HBV DNA的阳性率差异无显著性(χ2=0.44,P>0.05),PBMC内CIH组HBV DNA的阳性率明显高于CHB组(χ2=4.41,P<0.05);PBMC内HBV DNA阳性而血清中HBV DNA阴性的患者CIH组28.26%(13/46),明显高于CHB组1.92%(1/52),差异有显著性(χ2=8.64,P<0.01)。结论HBV感染PBMC在HBeAg阴性慢性肝病慢性化进程中起一定作用,PBMC内HBV DNA的检测是对血清中HBV DNA检测的重要补充。     

慢性HBV感染儿童血清和外周血单个核细胞中HBV DNA的流行病学意义

采用生物素标记HBV DNA探针检测256例慢性HBV感染儿童血清HBV DNA,其中39例尚检测了外周血单核细胞(PBMC)中的HBV DNA,以了解其带病毒状况。结果表明:慢性HBV感染儿童多具传播危险性(67.9％,88.8％),即使血清感染性标志已阴性,仍有部分儿童血清或PBMC中HBV DNA阳性(9.4％)。因此对慢性HBV感染儿童应注意隔离,以防HBV传播。     

外周血单个核细胞内乙型肝炎病毒DNA评估拉米夫定治疗慢性乙型肝炎预后的研究

目的探讨拉米夫定治疗慢性乙型肝炎结束时,外周血单个核细胞(PBMC)中HBV DNA检测对持续性应答的预测作用。方法对100例慢性乙型肝炎患者进行拉米夫定治疗96周,选择完全应答的80例病人,检测PBMC中HBV DNA,并对患者进行长期的血清HBV DNA监测。结果治疗结束时,有68例患者的PBMC HBV DNA为阳性,12例为阴性。在PBMC中HBV DNA阳性患者,停止治疗的6个月内所有患者的HBV DNA复发。而PBMC HBV DNA阴性者,随访至停药1年,12例中仅2例HBV DNA阳转,其余10例,随访至3.5年,血清中HBV DNA仍阴性。结论拉米夫定治疗结束时PBCMC中HBV DNA检测能预测慢性乙型肝炎的治疗效果。     

HBV母婴传播致新生儿免疫失败的原因和机制

目的:了解新生儿HBV免疫失败与宫内HBV感染,外周血单个核细胞(PBMC)中HBV DNA及其与白细胞介素2(IL-2)的相互关系,探讨HBV母婴传播致新生儿免疫失败的原因和内在机制.方法:52例HbsAg阳性无症状携带孕妇及其新生儿作为实验组,8例HBV M阴性孕妇及其新生儿作为正常对照组.用巢式联合酶链反应(Nested-PCR)技术检测新生儿血清和PBMC中HBV DNA,固相放射免疫法检测血清乙型肝炎病毒抗原抗体(HBV M),采用体外细胞培养和双抗体夹心酶联合免疫法检测PBMC在植物素(PHA)和HBsAg刺激下,培养上清液中IL-2的含量.结果:HBsAg阳性母亲新生儿,PBMC中HBV DNA阳性者免疫接种失败率明显高于PBMC中HBV DNA阴性者,有显著差异性(P＜0.01).PHA或HBsAg刺激下,HBsAg阳性孕妇分娩的新生儿中,PBMC中HBV DNA阳性者PBMC培养上清液中IL-2含量明显低于PBMC中HBV DNA阴性者和正常对照组新生儿,差异均有显著性(P＜0.01).而后两者比较,差异无显著性(P＞0.05).PHA或HBsAg刺激下,免疫接种失败新生儿PBMC培养上清液中IL-2含量明显低于免疫接种成功新生儿和正常对照组新生儿,差异均有显著性(P＜0.01).而后两者比较,差异无显著性(P＞0.05).结论:宫内感染HBV并侵犯PBMC,是新生儿免疫接种失败的重要原因;HBV侵犯PBMC可使其IL-2分泌能力下降,可能是导致新生儿免疫接种失败的机制之一.     

太原市HBsAg阳性孕妇新生儿HBV感染状况的研究

目的 了解目前太原市HBsAg阳性孕妇新生儿HBV感染状况。方法 ELISA法检测新生儿外周血HBsAg；巢式聚合酶链反应(nPCR)检测新生儿外周血HBV DNA；选择性聚合酶链反应(sPCR)检测外周血单个核细胞(PBMC)HBV DNA，其中任一项阳性即判为发生新生儿HBV宫内感染。结果 151例HBsAg阳性孕妇所生新生儿，ELISA法检测5例HBsAg阳性，nPCR检测29例HBV DNA阳性，sPCR检测36例PBMC HBV DNA阳性，新生儿任一项阳性者57例，合计宫内感染率37．75％(57／151)。结论 检测PBMC内HBV DNA是对外周血HBV DNA的一个重要补充，太原市HBsAg阳性孕妇新生儿HBV宫内感染率37．75％，与国内外同类研究结果相比，处于低水平。     

Relationship between Maternal PBMC HBV cccDNA and HBV Serological Markers and its Effect on HBV Intrauterine Transmission

Objective To investigate the relationship between maternal peripheral blood mononuclear cells (PBMC) hepatitis B virus(HBV) covalenty closed circular deoxyribonucleic acid(cccDNA) and other HBV serological markers and its effects on HBV intrauterine transmission. Methods We enrolled 290 newborns and their hepatitis B surface antigen(HBsAg) positive mothers. HBV cccDNA in PBMC and HBV DNA in serum were detected by a real‐time PCR‐TaqM an probe while HBV serological markers were detected with an electrochemiluminescence immunoassay. Results There was a positive correlation between the levels of PBMC HBV cccD NA and serum HBV DNA and HBeA g(r = 0.436 and 0.403, P 0.001). The detection rate of pattern A [‘HBsA g(+), HBeA g(+), and anti‐HBc(+)'] was significantly higher in the PBMC HBV cccD NA positive group than in the control group(χ2 = 48.48, P 0.001). There was a significant association between HBV intrauterine transmission and PBMC HBV cccD NA(χ2 = 9.28, P = 0.002). In the presence of serum HBV DNA, HBeA g, and PBMC HBV cccD NA, the risk of HBV intrauterine transmission was three times higher(OR = 3.69, 95% CI: 1.30‐10.42) than that observed in their absence. The risk of HBV intrauterine transmission was the greatest(OR = 5.89, 95% CI: 2.35‐14.72) when both PBMC HBV cccD NA and pattern A were present. A Bayesian network model showed that maternal PBMC HBV cccD NA was directly related to HBV intrauterine transmission. Conclusion PBMC HBV cccDNA may be a direct risk factor for HBV intrauterine transmission. Our study suggests that serological markers could be combined with PBMC‐related markers in prenatal testing.     

外周血单个核细胞中乙型肝炎病毒感染与细胞表面HLA-Ⅰ类抗原表达的关系探讨

乙型肝炎病毒(HBV)属嗜肝DNA病毒,主要侵犯肝脏,但目前在肝外组织和细胞中也发现HBV的存在,特别在外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell ,PBMC)中阳性率更高.PBMC为免疫活性细胞群体,HBV感染PBMC对机体免疫功能的影响尚未阐明.我们就PBMC中HBV感染与其表面HLA-I类抗原表达的关系进行了研究,探讨PBMC中HBV感染在乙型肝炎慢性化及向肝癌恶性转化中的作用.     

乙肝病毒时外周血单个核细胞中的存在状态及其意义

<正>乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)是嗜肝DNA病毒,HBV在基因组由部分呈双链环状结构的DNA分子构成,约含3200个核苷酸。HBV存在广泛的异嗜性,目前在许多肝外组织及细胞中也已检测出HBV存在的证据。自Lie-Injo首次从HBsAg阳性的肝癌患者外周血单个核细胞(Peripheral blood meononuclear cells,PBMC)中检测出HBV DNA以来,近几年已在PBMC内检出多种形式的HBV DNA及其抗原成     

慢性乙肝患者Th1/Th2应答与乙肝病毒感染单个核细胞的关系

目的探讨乙肝病毒侵犯淋巴细胞对慢性乙肝患者免疫功能状态的影响.方法采用双抗体夹心法检测慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液中细胞因子的水平, PCR方法扩增乙肝病毒DNA片段.血清中HBV DNA检测采用斑点杂交法.结果与正常对照组比较,慢性乙型肝炎患者的IFN-γ水平降低,但无显著差异性;而IL-4水平明显增高(F=17.4,P<0.01).血清中HBV DNA 水平与PBMC培养上清液中的IFN-γ水平呈负相关(rs= 0.53, P<0.01).62.9%(35/56)的慢性乙肝患者外周血PBMC中检出HBV DNA,HBV DNA 阳性组和阴性组的IFN-γ水平具有显著差异(F=15.2,P<0.01).结论 (1)慢性乙肝患者的外周血以Th2类细胞因子占优势.(2)乙肝病毒侵犯淋巴细胞可能影响其免疫功能的发挥.     

HBV M和HBV DNA的关系探讨

目的:研究乙肝病毒血清学标志物(HBV M)与乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)之间的关系。方法:对497例患者同时检测HBV M和HBV DNA,HBV M检测用ELISA法,HBV DAN检测用PCR法。结果:HBV M的检测结果分为6组,每组HBV M组合都有一定的HBV DNA检出率。结论:说明HBV M只能作为乙肝病毒有无感染的一般性检测,而HBV DNA能检出复制病毒,但难以表达非复制状态的感染,所以两者关系值得进一步探讨。     

应用聚合酶链反应检测乙肝患者肾组织中的HBV DNA

应用套式聚合酶链反应(PCR)技术对11例乙肝患者石蜡包埋的肾、肝组织中的HBV DNA进行了检测,并与其免疫组化及原位杂交结果作了比较。二组引物检测的结果表明:肾组织中HBV DNA的检出率为8/11(72.7％),8例中包括膜性肾炎和膜增生性肾炎各1例,均不存在有HBV的复制;在肝组织中均有HBV感染,其中5例有HBV复制。HBV可以感染肾组织但并不在肾组织中复制这一结果支持乙肝患者肾脏出现的病理改变是由于沉积于肾小球内的免疫复合物介导损伤的结果。     

白细胞内HBV DNA的研究

本研究对155例慢性 HBV 感染者和250例一般人群,用分子杂交技术和特异性细胞免疫方法测定血清和白细胞内 HBV DNA 及特异性细胞免疫反应。结果显示:血清 HBV DNA 阳性39%,白细胞内 HBV DNA 阳性36%,特异性细胞免疫反应34%;血清 HBV DNA 存在与否与特异性细胞免疫反应无明显关系,而白细胞内 HBV DNA 阳性者细胞免疫反应多为阴性;在80例血清 HBV 标志物全阴性正常人的白细胞内发现3例 HBV DNA 阳性,提示,HBV 有一种单独存在于白细胞内新的感染形式。因此,白细胞可能是乙型肝炎病毒的重要潜存场所,血清 HBV 标志物全阴性者不能排除 HBV的感染。     

斑点杂交试验直接检测血清HBV DNA的临床意义

本文应用斑点杂交试验直接检测101例乙肝病毒(HBV)无症状携带者、慢活肝及肝硬化患者血清HBV DNA,阳性率分别为58.3％(21/36)、36.9％(17/46)、10.5％(2/21),三组间有显著差异(P<0.01)。并与血清免疫标志进行比较,在HBeAg阳性时,HBV DNA检出率分别为95.2％(20/21)、70.8％(17/24)、25.0％(1/4),三组间有显著差异(P<0.05)。HBsAg、抗-HBc及抗-HBe与血清HBV DNA并非一致。结果表明,HBV无症状携带者比慢活肝及肝硬化具有更高的传染性,是极重要的传染源。     

对直接酶标HBV DNA探针检测乙肝患者血清中HBV DNA方法的改进

本文对Ｒｅｎｚ等＾〔１〕直接酶标ＨＢＶ ＤＮＡ探针检测乙肝患者血清ＨＢＶ ＤＮＡ法进行了改进，用其直接酶标ＨＢＶ ＤＮＡ 制备探针的方法，杂交后用增强化学发光检测系统取代直接酶标ＤＮＡ探针检测法中的酶催化底物显色法〔２〕。结果显示，改进后的方法在保持了特异性的同时，大大地提高了直接酶标ＨＢＶ ＤＮＡ探针检测法的敏感性，使这种方法成为可替代同位素探针测定血清中ＨＢＶＤＮＡ的一种新的快速简便的检测方法     

乙型肝炎病毒DNA定量的临床研究

目的：探讨乙型肝炎病毒DNA定量及肝炎临床的转归及血清标志物的关系。方法：自96例乙型肝炎患者血清提取HBV DNA，经PCR扩增后，通过ELISA法进行HBV DNA定量。结果：96例乙肝患者HBV DNA定性与HBV DNA定量的符合率为95．2％；20例急性肝炎在抗病毒治疗后HBV DNA水平迅速降低；比较HBV DNA水平，重度肝炎＞慢性中度肝炎＞慢性轻度肝炎＞急性肝炎，大三阳组高于小三阳组。结论：HBV DNA定量对于了解乙型肝炎的转归、疗效评价及预后判断具有重要的应用价值。     

乙肝病毒血清标志物与DNA定量联合检测的临床应用价值

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）两对半抗原抗体系统、前S1蛋白（Pre-S1）和HBV脱氧核糖核酸（HBV-DNA）之间的关系及临床意义。方法用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清标志物,用荧光定量PCR检测HBV-DNA。结果A组（HBsAg^＋HBeAg^＋抗HBc^＋）HBV-DNA、Pre-S1阳性率为98.63%、86.30%;B组（HBsAg^＋抗HBe＋抗HBc^＋）HBV-DNA、Pre-S1阳性率为48.37%、22.22%;C组（其它模式）HBV-DNA、Pre-S1阳性率为4.96%、0.83%。HBV-DNA定量结果A组显著高于B、C两组（P〈0.01）;B组显著高于C组（P〈0.05）。结论正确合理地分析HBV血清学指标出现的类型,与HBV-DNA的联合动态检测有助于临床诊断、疗效观察及预后判断。     

HBV宫内感染的危险因素及与HBV DNA的关系

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）宫内感染的危险因素及HBV DNA含量对HBV宫内感染的影响。方法 分别用酶联免疫吸附法及荧光定量PCR法检测230例HBsAg阳性孕妇及其新生儿外周血HBV血清标志物和HBV DNA含量,发生宫内感染的为病例组,余为对照组,运用非条件Logistic回归模型对宫内感染的危险因素进行分析。结果 （1）230例HBsAg阳性孕妇分娩的新生儿中,有22例发生宫内感染。其中HBsAg阳性7例,HBV DNA阳性18例,HBsAg和HBV DNA均阳性的3例,总的HBV宫内感染率为9．6％（22／230）。（2）非条件Logistic多元回归分析表明,仅HBV DNA浓度分级有统计学意义,OR为1．57（1．12．2．21）。（3）230例HBsAg阳性孕妇中HBV DNA阳性者119例,发生宫内感染18例,感染率为15．1％（18／119）,并且当孕妇血清HBV DNA浓度≥10^7copies／ml时,HBV宫内感染率显著增加,（χ^2=-7．92,P〈0．05）。结论 孕妇血清HBV DNA浓度分级是HBV宫内感染的危险因素,并且当HBV DNA浓度≥10^7copies／ml时,其宫内感染率显著增加。     

肾炎肾组织中HBV DNA的检测及其存在意义

应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分子杂交和免疫组化技术，检测１８例肾穿刺组织中ＨＢＶ ＤＮＡ和ＨＢＶ相关抗原的阳性情况。结果表明１５全ＢＶ ＤＮＡ阳性，其中８例成人和４例儿童为整合型，另３例儿童为游离型，有１３例ＨＢＶ抗原阳性。除肾小球外，肾小管亦表达ＨＢＶ抗原，提示ＨＢＶ ＤＮＡ在存在状态在成人主要为整合型，在儿童有整合型和游离型。     

电泳印迹和分子杂交技术在肝内HBV DNA研究中的应用

应用DNA电泳转移、生物素探针Southern杂交及不同探针重复杂交等3项新技术研究肝炎肝癌的肝内HBV DNA分子状态。经过方法学比较以电泳印迹取代毛细渗吸法对65例肝炎肝癌病人的101份肝内组织DNA进行尼龙膜快速转移和HBV DNA杂交,结果检出HBV DNA分子状态里整合型15份、游离型31份、整合型合并游离型30份。其中12例乙型肝炎标本为经生物素探针杂交检测,结果全部检出游离型HBV DNA。还有3例乙型肝炎标本和2例其它肝炎标本为经重复杂交检测,即先用~(32)P探针杂交继去探针再用生物素探针杂交,结果乙型肝炎标本两次杂交HBV DNA都阳性,其它肝炎标本两次均阴性。阳性者表现为3.2kb和2.3kb电泳位置呈现杂交带,代表HBV之松弛环状和超螺旋状结构。由于两种探针各含不同序列,故结果可对待检基因进行初步序列分析。本实验表明,上述3项技术对临床医学研究有广泛的应用价值。