基质转换与肝纤维化

各种病因的肝脏损伤可引发肝脏的基质降解和基质转换,从而激活肝脏星状细胞,启动肝纤维化过程。纤维化时 Ｔ Ｉ Ｍ Ｐ１ 的合成增加 Ｍ Ｍ Ｐ１ 的合成减少, Ｍ Ｍ Ｐ１ 活性受抑制导致肝纤维化进一步发展。     

细胞外基质代谢与肾小球病变研究进展

细胞外基质（ECM）的代谢紊乱及异常沉积是影响肾小球病变发生发展的重要环节．各种肾小球病变中的ECM合成与分泌均有增加,但在不同病理发展阶段及组织学类型中其成分和分布并不一致,不同结构的Ⅳ型胶原纤维α链分布与各类肾炎肾小球病理改变密切相关。此外,在肾病变中ECM代谢受基质金属蛋白酶及其组织抑制因子等各种因素的调节。     

TGF-β对细胞外基质降解酶及其抑制因子的调节

TGF-β是多功能细胞因子,在创伤愈合及组织修复中起关键作用.它可促进细胞外基质的合成,减少细胞外基质的降解,过表达能导致器官的纤维化.基质金属蛋白酶(MMPs)和金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)在器官纤维化、自身免疫性疾病及肿瘤侵袭中的作用日益受到重视.MMPs/TIMPs受多种细胞因子尤其是转化生长因子-β的调节.     

贮脂细胞凋亡与肝纤维化逆转

贮脂细胞经过激活、刺激性增殖、表型转换后分泌大量的细胞外基质和基质金属硫蛋白酶抑制剂 (TIMPs)而在肝纤维化中发挥了关键作用。但随着贮脂细胞的激活 ,其凋亡敏感性发生改变 ,通过Fas依赖途径发生凋亡 ,其数量明显减少 ,细胞外基质合成和TIMPs的表达快速下降 ,而使肝纤维化发生逆转。这一过程涉及贮脂细胞中凋亡和抑凋亡基因的表达变化。提示通过诱导激活的贮脂细胞凋亡 ,可能为肝纤维化的逆转治疗提供一新的乐观手段。     

CCl4肝纤维化过程中肝组织金属硫蛋白与肝星状细胞MMP-2表达及活性之间相关性研究

目的：研究金属硫蛋白（MT）在体内及体外与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达、活性之间的相关性。方法:昆明种雄性成年小鼠50只,其中实验鼠40只,对照鼠10只,用CCl4诱导小鼠肝纤维化模型。向肝星状细胞（HSCs）条件培养基（含有MMP-2）中加不同浓度MT,使之与MMP-2酶学共浴,检测MMP-2活性。制作小鼠肝组织芯片,天狼猩红染色判断肝纤维化程度。免疫组化法测肝组织MMP-2、MT蛋白表达,酶图法测鼠肝组织匀浆和培养基中MMP-2活性。结果:①模型组小鼠肝组织MMP-2和MT蛋白表达水平均随纤维化进展而呈波浪式交替升高,但二者时相变化相反。②模型组小鼠肝组织MMP-2活性随实验时间的增加而逐渐升高,亦有波动。除个别时点外,酶活性与MT表达呈负相关。③肝星状细胞条件培养基与不同浓度的MT直接作用后,MMP-2活性随MT浓度增加活性逐渐降低(P＜0.01)。结论:在小鼠肝纤维化发生发展过程中,肝组织MT蛋白和MMP-2蛋白表达均有上升趋势,二者间可能存在相互作用;MT蛋白和MMP-2活性呈负相关,前者对后者可能起抑制作用。     

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子降解途径的初步研究

目的:观察蛋白酶体抑制剂MG-132对细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,CD147)表达的影响,探讨CD147的降解途径。方法:在SY5Y细胞中分别加入0,1,2.5和5μmol/L不同浓度剂量的蛋白酶体抑制剂MG-132作用24 h后,通过Western Blot和In-cell Western的方法检测CD147的相对含量;免疫荧光双标检测SY5Y细胞中CD147与泛素(ubiquitin)的表达及共定位情况。结果:在一定时间内,随着MG-132浓度的增大,CD147的含量相对增多;与0μmol/L组比较,5μmol/L组的CD147含量在两种实验方法中分别增加了约151.81%±36.26%(P0.05)和76.43%±18.02%(P0.05);CD147与泛素在细胞胞体中存在共定位的特征。结论:蛋白酶体抑制剂MG-132可增加CD147的含量;CD147可被泛素化。提示CD147可能通过泛素-蛋白酶体途径进行降解。     

成纤维细胞与结肠癌细胞相互作用促进细胞外基质金属蛋白酶诱导因子的表达

目的研究成纤维细胞与结肠癌细胞相互作用对二者表达细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）的影响,初步探讨肿瘤-基质相互作用在结肠癌侵袭转移中的作用。方法结肠癌SW480细胞与HELF成纤维细胞以RPMI1640培养液分别共培养0、12、24、48h,通过RT-PCR和免疫细胞化学方法检测SW480和HELF细胞中EMMPRIN的表达。结果共培养组SW480细胞EMMPRINmRNA和蛋白的表达均明显升高,HELF细胞本来不表达EMMPRIN,与SW480细胞共培养12、24、48h后检测到EMMPRIN表达,且随时间延长而表达增加。结论成纤维细胞与结肠癌细胞相互作用上调SW480细胞EMMPRIN的表达,并诱导HELF细胞表达EMMPRIN,有可能在结肠癌侵袭转移中发挥重要作用。     

胸腺上皮肿瘤组织中基质金属蛋白酶-2活性与Ⅰ型膜型基质金属蛋白酶 mRNA表达的相关性

目的探讨胸腺瘤和胸腺癌中基质金属蛋白酶（MMP）-2、Ⅰ型膜型（MT1）-MMP、金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）-2mRNA的表达和MMP-2蛋白活性的关系。方法分别用real-time逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR,Taqman法）、明胶酶谱法和Filmin situ gelatin-Zymography（FIZ）对正常的胸腺组织（2例）、胸腺瘤（12例）和胸腺癌（2例）患者的新鲜肿瘤组织中MMP-2、MT1-MMP、TIMP-2mRNA的表达,pro-MMP-2的活性率及活性蛋白的定位进行测定。结果MMP-2、MT1-MMP及TIMP-2mRNA在Ⅰ期与Ⅱ期和Ⅲ期与Ⅳ期中的表达差异均无统计学意义（P〉0．05）,在Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期和胸腺癌3组中差异均有统计学意义（P〈0．01）。在AB、B1型（混合型和淋巴细胞为主型）与B2、B3型（皮质型和多角细胞为主型）以及胸腺癌3组中差异均有统计学意义（P〈0．05）。MMP-2的蛋白活性率（MMP-2／pro—MMP-2＋MMP-2）在Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期和胸腺癌各组中差异有统计学意义（P〈0．05）,在AB、B1型与B2、B3型以及胸腺癌各组中的差异均具有统计学意义（P〈0．05）。胸腺瘤各期及各型中MT1-MMP、TIMP-2mRNA与MMP-2蛋白活性表达均呈正相关,且相关程度相似（r=0．7235、r=0．7647、P〈0．005）。MMP-9的蛋白表达在各组间差异均无统计学意义。结论MMP-2、MT1-MMP及TIMP-2的mRNA表达与胸腺瘤临床分期、病理分型相关,MMP-2的活性与MT1-MMP和TIMP-2的表达升高正相关。推测MT1-MMP通过TIMP-2对MMP-2的激活起促进作用。     

基质金属蛋白酶及其抑制剂在器官纤维化中的研究进展

器官纤维化共同的基本特征是ECM过度沉积和组织结构改建 ,而病变组织内ECM降解减少是导致其过度沉积的主要原因之一。正常或异常的ECM代谢基于基质降解限速酶MMPs及其抑制剂TIMPs的平衡或失衡 ,MMPs/TIMPs受多种细胞因子和转录因子的调节 ,对肺、肝、肾等器官纤维化的发生、发展及其临床监测与治疗具有重要意义。     

七项肝纤维化血清标志物的诊断意义

目的检测肝病患者血清基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PⅢP)、Ⅳ型胶原(CⅣ)和层粘连蛋白(LN)含量,评价其对肝纤维化的诊断价值。方法酶标法检测血清MMP-1、TIMP-1、TGF-β1含量。放射免疫法检测血清HA、PⅢP、CⅣ、LN含量。结果肝病患者血清TGF-β1、HA、PⅢP、CⅣ、LN水平与健康对照组比较均有升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。慢性肝病患者血清TIMP-1水平明显高于健康对照组(P<0.01),而肝病患者血清MMP-1水平与健康对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论慢性肝病患者存在MMP-1和TIMP-1的严重失衡,是慢性肝病患者肝脏细胞外基质沉积的重要原因。血清TIMP-1、TGF-β1、HA、PⅢP、CⅣ和LN对肝纤维化具有较好的临床诊断价值,而MMP-1的临床诊断价值欠佳。     

七项肝纤维化血清标志物的诊断意义

目的 检测肝病患者血清基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)、转化生长因子B1(TGF-β1)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PⅢP)、Ⅳ型胶原(CⅣ)和层粘连蛋白(LN)含量,评价其对肝纤维化的诊断价值.方法 酶标法检测血清MMP-1、TIMP-1、TGF-β1含量.放射免疫法检测血清HA、PⅢP、CⅣ、LN含量.结果 肝病患者血清TGF-β1、HA、PⅢP、CⅣ、LN水平与健康对照组比较均有升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).慢性肝病患者血清TIMP-1水平明显高于健康对照组(P＜0.01),而肝病患者血清MMP-1水平与健康对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 慢性肝病患者存在MMP-1和TIMP-1的严重失衡,是慢性肝病患者肝脏细胞外基质沉积的重要原因.血清TIMP-1、TGF-β1、HA、PⅢP、CⅣ和LN对肝纤维化具有较好的临床诊断价值,而MMP-1的临床诊断价值欠佳.     

细胞外基质因子在兔软骨细胞损伤模型中的表达变化

目的:研究细胞外基质因子在兔关节软骨细胞损伤后不同时间点的表达变化水平。方法:通过机械划伤制备关节软骨细胞损伤模型,观察软骨细胞在划伤后的形态变化。采用实时荧光定量PCR检测软骨细胞在划伤前与划伤后1、3、5 d和7 d共5个时间点的基质金属蛋白酶13(MMP13)及基质金属蛋白酶抑制物1(TIMP1)、透明质酸和Ⅱ型胶原(ColⅡ)基因mRNA表达水平。结果:成功建立了兔关节软骨细胞损伤模型。与划伤前相比,MMP13基因水平在细胞损伤第1天表达明显下降,随后出现升高趋势,第5天达到最高后逐渐下降。TIMP1基因表达量损伤后先上升至第1天然后下降,在第3天降至最低,随后呈现升高趋势。透明质酸和Col-Ⅱ基因水平第1天表达明显降低,随后呈上升趋势,透明质酸mRNA表达量至第5天达到最高,然后逐渐下降。结论:MMP13、TIMP1、透明质酸和Col-Ⅱ基因在细胞损伤后的表达规律相异,为软骨细胞外基质因子表达与软骨细胞之间关系提供实验依据。     

PPARs配体对巨噬细胞、泡沫细胞细胞外基质金属蛋白酶诱导因子表达的影响

目的：观察PPARα、γ配体对巨噬细胞、泡沫细胞细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)表达的影响。方法：体外诱导THP-1单核细胞转化为巨噬细胞、泡沫细胞,分别加入PPARα配体氯贝特（clofibrate）、PPARγ配体吡格列酮(pioglitazone)共同培养,应用Real-timeRT-PCR和Westernblotting测定巨噬细胞、泡沫细胞中EMMPRIN基因和蛋白表达,ELISA测定细胞培养上清液MMP-9浓度,Zymgraphy法测定MMP-9活性。结果：氯贝特和吡格列酮均能显著抑制巨噬细胞和泡沫细胞EMMPRIN的表达,此抑制作用与PPARα、γ配体抑制MMP-9分泌及活性的趋势一致。结论：PPARα、γ配体均可抑制巨噬细胞、泡沫细胞EMMPRIN的表达,下调EMMPRIN可能是PPARs配体抑制粥样斑块局部MMPs产生的机制之一。     

基质金属蛋白酶-9与炎症反应研究进展

MMP - 9 is one of the family of matrix metalloproteinases, which degrades extracellular matrix. MMP- 9 is induced by many inflammatory factors, including IL - 1β, IL - 8 and TNF - α. Mean-while, MMP - 9 potentiates inflammatory factors by aminoterminal processing. The signal transduction by which inflammatory factors induce MMP - 9 is also an important part in recent research. This review will give a sunmamy in all these fields.     

组织蛋白酶与细胞外基质重塑

细胞外基质重塑是多种疾病的病理学基础,与之相关的细胞外蛋白酶中,组织蛋白酶起非常重要的作用,本文就组织蛋白酶在细胞外基质重塑相关疾病中的作用以及调节等作一综述。     

基质金属蛋白酶及其抑制剂对肝纤维化的影响

肝纤维化(liver fibrosis)是各种病因(病毒性、酒精性、化学性等)引起的细胞外基质(extracelluIar matrix,ECM)合成超过降解,而导致的细胞外基质在肝脏过度沉积的一类疾病,肝纤维化继续发展可以导致肝硬化而严重威胁人类健康.     

氯喹对体外活化肝星状细胞自噬与胶原代谢的影响

目的:研究不同浓度的自噬抑制剂氯喹(CQ)对活化的大鼠肝星状细胞系HSC-T6中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响及可能机制。方法:应用转化生长因子β1(TGF-β1)活化HSC-T6细胞,给予CQ干预24 h。实验分组为:control组、TGF-β1组、TGF-β1+CQ(15μmol/L)组、TGF-β1+CQ(30μmol/L)组和TGF-β1+CQ(60μmol/L)组。采用Western blot技术检测微管相关蛋白轻链3(LC3)比值LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、自噬靶蛋白P62、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶13(MMP-13)、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)和TIMP-2的表达情况;免疫细胞化学检测Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达;RT-q PCR检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、MMP-13、TIMP-1和TIMP-2mRNA的表达变化。结果:CQ干预后LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显升高且呈剂量依赖性;P62蛋白表达TGF-β1+CQ组均显著高于TGF-β1组(P0.01)。TGF-β1组的Ⅰ、Ⅲ型胶原表达量较control组显著增加,TGF-β1+CQ组较TGF-β1组也有明显增加。α-SMA的表达在TGF-β1组和TGF-β1+CQ组均显著高于control组(P0.05),而TGF-β1组和TGF-β1+CQ各组之间无显著差异。MMP-13表达在TGF-β1+CQ组较TGF-β1组显著下降(P0.05);TIMP-1和TIMP-2在TGF-β1+CQ组较TGF-β1组显著升高(P0.05),且呈剂量依赖性。结论:自噬抑制剂CQ能显著增加HSC-T6细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达并呈剂量依赖性,这可能与其上调TIMP-1及TIMP-2的表达并抑制MMP-13表达有关。     

SerpinE2在细胞外基质代谢中作用的研究进展

正丝氨酸蛋白酶抑制剂E2(serpin peptidase inhibitor clade E member 2,Serpin E2),又称蛋白酶连结蛋白-1(protease nexin-1,PN-1),最初被鉴定为神经胶质源性连接蛋白~([1])。Serpin E2是丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族的一员,可以抑制凝血酶、尿激酶、纤溶酶和胰蛋白酶等蛋白酶活性。Serpin E2由人染色体2q99~q35上的SERPINE2基因编码~([2]),是一类可以分泌到细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的蛋白     

RGDS四肽促进大鼠肝星状细胞胶原降解机制的研究

目的：观察精-甘-天冬-丝氨酸（RGDS）四肽对纤维连接蛋白（FN）刺激的大鼠肝星状细胞（HSC）基质金属蛋白酶-13（MMP-13）及其组织抑制因子（TIMP-1）表达的影响。方法：应用体外细胞培养技术，用RT-PCR检测HSC MMP-13mRNA水平；原位杂交和Western blot技术分别检测上述细胞TIMP-1 mRNA和蛋白水平。结果：RGDS四肽干预2h组MMP-13 mRNA的表达强度明显上调，同时TIMP-1 mRNA表达受抑制；RGDS四肽干预24h组TIMP-1蛋白表达受抑制。结论：RGDS四肽诱导HSC MMP-13表达，抑制其TIMP-1表达是其抗肝纤维化的作用机制之一。     

腱止点过度使用性损伤形成过程中细胞外基质的调节机制

文题释义：腱止点：指肌腱附着于骨的附丽部位,又称骨腱结合部。 过度使用性损伤：用次最大负荷反复刺激骨骼肌肉系统,且休息时间不足以使骨骼肌肉系统的结构产生适应,则会发生过度使用性损伤。 背景：过度使用性腱病多发,但目前还没有理想的治疗手段,这是由于腱病的发生机制尚不清楚。 目的：拟通过髌骨髌腱结合部过度使用性损伤模型,探讨负荷积累过程中,影响胶原合成的酶对胶原Ⅰ、胶原Ⅲ代谢的影响。 方法：32只雌性成年新西兰大白兔随机分为跳跃组(n=16)和对照组(n=16)。跳跃组分别进行2,4,6,8周跳跃训练、150次/d,5 d/周,建立兔髌骨髌腱结合部过度使用性损伤模型;对照组为空白对照。2组兔分别在跳跃组训练2,4,6,8周的最后一次训练结束后24 h,进行双侧髌骨髌腱复合体取样。通过免疫组织化学测定基质金属蛋白酶1、组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP1)、胶原Ⅰ、Ⅲ的时序性变化。实验方案经北京体育大学动物实验伦理委员会批准(批准号BSU2015022)。 结果与结论：①基质金属蛋白酶1的活性在训练前6周均显著低于对照组,TIMP1的活性在训练4-8周均显著高于对照组,TIMP1/MMP1在4-8周的训练中均显著高于对照组;②训练的前6周胶原Ⅰ的表达均显著高于对照组;训练8周后胶原Ⅲ的表达显著低于对照组;③结果说明,髌骨髌腱结合部在跳跃负荷积累过程中主要通过增加胶原Ⅰ的表达应对负荷刺激。在负荷积累前2周主要通过抑制基质金属蛋白酶1的活性,增加胶原Ⅰ的表达;负荷积累4-6周主要通过上调TIMP1的活性,抑制基质金属蛋白酶1的活性,增加胶原Ⅰ的表达;负荷积累8周后,TIMP1促进胶原合成的作用不足以拮抗基质金属蛋白酶1降解胶原Ⅰ、Ⅲ的作用,胶原Ⅰ的表达从训练6周后的峰值水平下降到对照组水平,胶原Ⅲ降到低于对照组水平。 ORCID: 0000-0001-6541-558X(陈晓蓝) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程