HE切片褪色后行EBER原位杂交检测方法的探讨

目的探讨将HE切片褪色后行EB病毒编码的小RNA(EBER)原位杂交检测的方法。方法收集40例EBER原位杂交检测阳性病例的HE切片作为实验组,相同蜡块的连续切片作为对照组,分别进行EBER原位杂交检测。结果实验组中,38张切片的组织结构全部完整,2张骨髓穿刺切片中的骨小梁脱片,但剩余组织组织结构保持完整。所有40张切片均杂交阳性,阳性信号位于细胞核,呈棕黄色,定位准确、清晰可读,杂交背景干净。阳性细胞数目及强度与对照组无差别。结论将HE切片褪色后行EBER原位杂交检测,方法简单、可靠,在病理诊断中有一定的应用价值。     

组织芯片制作技术

组织芯片 (tissuechip)又称组织微阵列 (tissuemicroarray,TMA) ,是将数十至上千个小组织整齐地排放在一张载玻片上而制成的组织切片。 1998年 ,Kononen等〔1〕首先制作了乳腺癌的组织微阵列 ,并应用荧光原位杂交、免疫组织化学和mRNA原位杂交技术研究了 6种基因及其表达产物的     

原位杂交与免疫组化双染法在淋巴瘤诊断中的应用

目的在淋巴瘤病例中建立EB病毒编码小RNA(EBER)原位杂交与免疫组化双重染色法。方法使用双染试剂盒在石蜡切片上先做原位杂交再做免疫组化。结果双染成功后细胞和组织结构完整。原位杂交阳性细胞的胞核呈蓝黑色,免疫组化阳性细胞的胞膜呈红色,双阳性细胞的核与膜蓝红对比鲜明,背景清晰。结论此方法可直观地判断感染EB病毒的细胞属于B细胞还是T细胞,有助于淋巴瘤的诊断。     

组织芯片技术在免疫组化及原位杂交阳性对照中的应用

组织芯片亦称组织微阵列(tissue microaryyay,TMA)是将数十个、数百个组织标本整齐地排列在同一张载玻片上的微缩组织切片。组织芯片具有高通量、节约组织原材料和检测试剂、实验条件一致性及实验结果可比性好、实验误差小等优点，在病理学研究中有广阔的应用前景…。我们利用组织芯片技术制作免疫组化及原位杂交的阳性对照组织芯片，将阳性对照的组织芯片与待检测的组织裱在同一张玻璃切片上，进行免疫组化及原位杂交染色，取得了比较理想的结果，现介绍如下。     

应用免疫组化、原位杂交及间接原位PCR诊断弓形虫淋巴结炎

目的 研究弓形虫淋巴结炎的病理诊断.方法 应用免疫组化、原位杂交及间接原位PCR技术,检测71例病理诊断为慢性非特异性淋巴结炎(淋巴结反应性增生)组织切片中的弓形虫.结果 在71例中应用免疫组化、原位杂交及间接原位PCR技术检测,弓形虫阳性病例分别为17例(23.94%)、35例(49.30%)、41例(57.75%),经统计学处理有显著差异(P＜0.005).结论 病理诊断为慢性非特异性淋巴结炎(淋巴结反应性增生)病例中,部份为漏诊的弓形虫淋巴结炎病例.免疫组化、原位杂交及间接原位PCR均能显示淋巴结组织切片中的弓形虫,但弓形虫检测结果阳性率依次为间接原位PCR、原位杂交及免疫组化.     

种子冰冻切片技术探讨

<正>冰冻切片是一种在较低温条件下使组织快速冷冻到一定的硬度,然后进行切片的一种方法。且不经过脱水和透明、浸蜡等一系列繁琐前期实验步骤,组织形态不会收缩;具有简便、快速、易操作、环境污染小(无须用二甲苯有毒试剂处理)等特点~([1])。常用于组织化学、免疫定位及原位杂交等研究。在动物和人     

骨髓活检在EBER原位杂交检测中消化时间的优化

目的优化骨髓活检样本在EB病毒编码的小RNA(EBER)原位杂交检测中的消化时间。方法对20例EB病毒相关疾病的骨髓活检样本,连续切片3张,分为3组,使用同一浓度的蛋白酶K,对3组切片进行间隔5 min的梯度时间消化,然后继续进行EBER原位杂交的其它检测步骤,并对结果进行判读。结果消化时间为10 min组的切片,杂交效果最好,组织结构完整,阳性细胞着色深,定位准确,背景干净,结果清晰易辨。结论骨髓活检样本与其他活检组织相比,在EBER原位杂交检测中的消化时间要适当延长,以10 min最佳。     

胎儿细胞及游离DNA穿越胎盘的实验研究

目的 从胎盘组织中寻找胎儿细胞及其游离DNA穿越胎盘屏障的实验室证据,为利用孕妇外周血进行无创性产前基因诊断提供实验依据。方法 分娩胎盘组织22份(男婴的12份,女婴的10份),切片,平行分为2组。一组HE染色,光镜观察绒毛中胎儿细胞的分布;另一组用Dig-碱性磷酸酶标记男性性别特异性标记物SRY(sex determining region)基因扩增片断制成探针,通过原位杂交鉴定胎盘绒毛内特别是绒毛间隙是否存在相应的游离DNA。阳性对照由男性外周血有核细胞涂片经原位杂交提供。结果 HE染色光镜观察,22例胎盘组织切片可见胎儿细胞有穿越绒毛毛细血管内皮和滋养层基膜的现象;胎盘组织原位杂交结果显示：分娩男婴的12份胎盘切片的绒毛毛细血管腔内、绒毛滋养层基膜边缘、以及绒毛间隙,可见阳性信号;分娩女婴的10份胎盘切片均无阳性信号出现;阳性对照涂片杂交后可见清晰阳性信号。结论 胎盘组织切片HE染色、镜检观察胎儿细胞分布,结合原位杂交技术鉴定绒毛内、绒毛问隙游离核酸的性质,可以初步反映胎儿微量遗传物质穿越胎盘进入母亲血液循环的过程。     

胎儿细胞及游离DNA穿越胎盘的实验研究

目的 从胎盘组织中寻找胎儿细胞和遗传物质穿越屏障的实验室证据．为利用孕妇外周血进行无创性产前基因诊断提供买验依据。方法 分娩胎盘组织22份(男婴的12份，女婴的10份)，切片，平行分为两组。一组HE染色，光镜观察绒毛中胎儿细胞的分布；另一组用Dig碱性磷酸酶标记SRY区域(sex determining region)基因扩增片断制成探针，通过原位杂交鉴定胎盘绒毛内，特别是绒毛间隙游离核酸的性质；阳性对照由男性外周血有核细胞涂片经原位杂交提供。结果 HE染色光镜观察：22例胎盘组织切片可见胎儿细胞有穿越绒毛毛细血管内皮和滋养层基膜的现象；胎盘组织原位杂交结果显示：分娩男婴的12份胎盘切片的绒毛毛细血管腔内、绒毛滋养层基膜边缘以及绒毛间隙．可见阳性信号；分娩女婴的10份胎盘切片均无阳性信号出现；阳性对照涂片杂交后可见清晰阳性信号。结论 胎盘组织切片HE染色、镜检观察胎儿细胞分布，结合原位杂交技术鉴定绒毛内、绒毛间隙游离核酸的性质，可以初步反映胎儿微量遗传物质穿越胎盘进入母亲血液循环的过程。     

淋巴结转移性鼻咽癌针吸检查中细胞块样本的应用

目的探讨细针吸取(FNA)涂片联合细胞块(CB)切片、免疫组化标记(IHC)和EBER原位杂交在淋巴结转移性鼻咽癌中的应用。方法采用友谊式细针穿刺器和21G注射针对31例鼻咽癌头颈部淋巴结转移病灶获取样本制片,观察其细胞形态学及CB组织形态学特征、IHC和EBER原位杂交表达。比较分析单纯细胞涂片、细胞涂片联合CB切片、细胞涂片联合CB切片及IHC和EBER原位杂交3种不同方式对鼻咽癌头颈部淋巴结转移病灶的诊断准确率。结果 1所有病例的细胞涂片及CB切片均显示为非角化性癌的形态学特征。2CB切片IHC和EBER原位杂交显示:肿瘤细胞CK5/6、p63、Ki-67及EBER均为(+);LCA和CK7均呈(-)。33种不同方式对鼻咽癌头颈部淋巴结转移病灶的诊断准确率比较显示:单纯细胞涂片诊断的敏感度(90.3%,28/31)及确诊率(74.2%,23/31)最低;细胞涂片联合CB切片诊断的敏感度(93.5%,29/31)及确诊率(77.4%,24/31)居中;细胞涂片联合CB切片及IHC和EBER原位杂交诊断的敏感度(96.8%,30/31)及确诊率(96.8%,30/31)最高。结论FNA细胞涂片联合CB切片、IHC及EBER原位杂交的方式,对头颈部淋巴结转移性鼻咽癌的早期诊断、寻找原发灶、治疗以及预后判断具有重要意义。