p27kiplcDNA对胃癌细胞端粒酶活性及细胞周期的影响

目的 观察p27基因表达对胃癌SGC7901细胞端粒酶活性及细胞周期的影响。方法 采用腺病毒介导的方法将p27kiplcDNA导人胃癌SOC7901细胞中，应用TRAP-ELISA法检测细胞端粒酶活性的变化，流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果 转染了p27kiplcNA的细胞端粒酶活性显著下降，G1期细胞比率显著增高，细胞增殖指数显著降低。结论 外源性p27基因的表达可使SGC7901细胞生长停滞于G1期，端粒酶活性下降，Ad-p27kipl对治疗胃癌有潜在意义。     

腺病毒介导的p27kip1cDNA对胃癌细胞增殖的影响

目的　研究 p2 7基因对人胃癌细胞SGC 790 1的抗增殖作用。方法　构建重组体腺病毒Ad p2 7kip1并转染SGC 790 1细胞 ,绘制细胞生长曲线 ,克隆形成实验 ,免疫组化检测PCNA的表达情况。 结果　成功构建Ad p2 7kip1 ,病毒滴度为 1 .2 4× 1 0 12 pfu/ml,在MOI≥ 5 0时 ,即可达到 1 0 0 %的转导效率。在SGC 790 1细胞中表达 ,能抑制其生长和集落形成 ,Ad p2 7kip1和对照组PCNA标记指数分别为 3 5 .2 %及78.6% (P <0 .0 1 )。结论　p2 7可有效抑制胃癌细胞的增殖活性 ,这为采用 p2 7kip1cDNA基因治疗胃癌奠定了基础。     

奥曲肽抑制胃癌细胞系SGC-7901生长的实验研究

目的　研究奥曲肽对胃癌细胞系SGC -790 1生长的抑制作用。方法　将奥曲肽注入胃癌细胞 ,采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT )法测定细胞生长抑制效应 ,将3 H -胸腺嘧啶核苷 (3 H -TdR )掺入试验测定奥曲肽对胃癌细胞DNA合成的影响 ,显微镜下观察胃癌细胞形态变化 ,应用流式细胞仪 (FCM )检测细胞周期 ,并采用TRAPPCR -ELISA法对胃癌细胞端粒酶活性进行检测。结果　奥曲肽对胃癌细胞系SGC -790 1的生长及DNA合成均有抑制作用 ,显微镜下可见细胞变圆、变小、脱落 ,FCM检测结果显示奥曲肽作用后 ,G0 /G1期细胞比例增高 ,S期、G2 /M期细胞比例下降 ,端粒酶活性显著受抑制。结论　奥曲肽能明显抑制胃癌细胞系SGC -790 1的生长 ,形成G0 /G1期阻滞 ,并抑制端粒酶活性     

腺病毒介导的p27kip1cDNA对胃癌细胞增殖的影响

 目的　研究 p2 7基因对人胃癌细胞SGC 790 1的抗增殖作用。方法　构建重组体腺病毒Ad p2 7kip1并转染SGC 790 1细胞 ,绘制细胞生长曲线 ,克隆形成实验 ,免疫组化检测PCNA的表达情况。 结果　成功构建Ad p2 7kip1 ,病毒滴度为 1 .2 4× 1 0 12 pfu/ml,在MOI≥ 5 0时 ,即可达到 1 0 0 %的转导效率。在SGC 790 1细胞中表达 ,能抑制其生长和集落形成 ,Ad p2 7kip1和对照组PCNA标记指数分别为 3 5 .2 %及78.6% (P <0 .0 1 )。结论　p2 7可有效抑制胃癌细胞的增殖活性 ,这为采用 p2 7kip1cDNA基因治疗胃癌奠定了基础。     

人p27kip1重组腺病毒载体的构建及其介导的p27kip1表达

目的　研究外源性p2 7kip1基因对细胞周期及细胞增殖的影响。方法　构建CMV启动子转录调控的含人p2 7kip1cDNA的E1区替代的腺病毒载体pAxlcw .CIhp2 7kip1,与经EcoT2 2 1酶切的Ad5腺病毒DNA -末端肽复合物共转染 2 93细胞 ,制备p2 7kip1重组腺病毒 ,在体外转染HeLa细胞 ,Westernblot、FACS及MTT检测分析外源性p2 7kip1蛋白在细胞内的表达 ,以及对细胞周期及细胞增殖的影响。结果　获得含人p2 7kip1cDNA的重组腺病毒 ,滴度为 1.7× 10 9pfu/ml。体外转染HeLa细胞2 4h后 ,p2 7kip1蛋白在p2 7kip1转染后的HeLa细胞中高表达 ;FACS检测表明 ,p2 7kip1和LacZ重组腺病毒转染后的HeLa细胞 ,经 10 %血清刺激后处于G1期的细胞分别为 89.93%和 5 9.84% ;MTT法检测表明 ,人p2 7kip1重组腺病毒转染后的HeLa细胞经 2 0 %血清刺激后 ,48及 72h的A值均低于LacZ重组腺病毒转染后的HeLa细胞 (P <0 .0 1)。结论　本研究中所制备的p2 7kip1重组腺病毒能有效介导外源性p2 7kip1基因在体外转染HeLa细胞并高表达p2 7kip1,抑制细胞由G1期向S期过渡 ,从而抑制细胞增殖 ,为进一步研究p2 7kip1基因治疗奠定了基础。     

p27kip1的过表达对肾癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究外源性 p27kip1 基因对肾癌细胞周期、细胞凋亡及增殖的影响。方法:将含p27cDNA的质粒在脂质体介导下在体外转染肾癌GRC 1细胞,Western Blot、FCM及MTT检测分析外源性 p27kip1 蛋白在细胞内的表达,观察其对细胞周期、凋亡及细胞增殖的影响。结果:体外转染 GRC 1 细胞 48 h 后, p27 蛋白在p27kip1转染后的 GRC 1 细胞中高表达。FCM检测表明,细胞停滞于 G1 期,实验组 G1 期细胞占66 9%,并出现亚G1 凋亡峰;而空白对照组和转染空载体组 G1 期细胞分别为 32 2% 和33 8%。MTT 法检测表明,转染 p27cDNA 后,实验组细胞增殖明显受抑。结论: p27kip1 基因在体外转染GRC 1细胞并过表达p27kip1蛋白,抑制细胞由G1 期向 S期过渡,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

p27kip1的过表达对肾癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究外源性p27kip1基因对肾癌细胞周期、细胞凋亡及增殖的影响。方法：将含p27cDNA的质粒在脂质体介导下在体外转染肾癌GRC-1细胞．Western Blot、FCM及MTT检测分析外源性p27kip1蛋白在细胞内的表达．观察其对细胞周期、凋亡及细胞增殖的影响结果：体外转染GRC-1细胞48h后．p27蛋白在p27kip1转染后的GRC-1细胞中高表达。FCM检测表明．细胞停滞于G1期，实验组G1期细胞占66．9%．并出现亚G1凋亡峰：而空白对照组和转染空载体组G1期细胞分别为32.2%和33.8%。MTT法检测表明．转染p27cDNA后，实验组细胞增殖明显受抑。结论：p27kip1基因在体外转染GRC-1细胞并过表达p27kip1蛋白，抑制细胞由G1期向S期过渡．从而抑制细胞增殖．诱导细胞凋亡。     

p27kip1高表达乳腺癌细胞株MCF-7基因表达谱的差异分析

目的:利用基因芯片技术筛选p27kip1转染乳腺癌MCF-7细胞的差异表达基因,探讨p27kip1调控肿瘤细胞增殖和细胞周期的分子机制。方法:将含p27cDNA的质粒在脂质体介导下体外转染乳腺癌MCF-7细胞,利用Affy-metrix公司的人类基因组基因芯片U133A分别检测表达p27kip1蛋白和空载体的乳腺癌细胞株的基因表达谱,用生物信息学软件进行比较分析,对差异表达基因进行功能分类。结果:在含22277个基因cDNA的芯片上差异表达的基因有1379条,其中表达谱发生明显变化(2倍以上)的基因173条,占总检测基因的0·78%。157条基因表达明显上升(SLR>1),占总检测基因的0·705%;16条基因表达明显下降(SLR<-1),占总检测基因的0·072%。基因表达差异主要集中在物质代谢、细胞增殖、细胞周期调控、细胞分化与凋亡、免疫反应、信号传导、蛋白转运、调节转录等方面。结论:多基因共同参与了p27kip1抑制肿瘤细胞过度增殖以及促进细胞凋亡的作用。对于p27kip1相关基因群的研究有助于认识p27kip1蛋白在细胞周期调控乃至整个细胞癌变过程中作用的分子机制。     

p27KIP1基因过表达诱导人胃癌细胞的凋亡

目的:研究p27KIP1基因对胃癌细胞凋亡的潜在调节作用。方法:采用脂质体转染法将p27KIP1全长cDNA转入胃癌细胞系SGC7901中,通过免疫印迹及RNA斑点杂交检测p27KIP1基因在蛋白质和mRNA水平的表达;通过DNA电泳、TUNEL染色、流式细胞仪及透射电镜等方法,观察目的基因对细胞凋亡的影响。结果:转染p27KIP1的SGC7901细胞在mRNA和蛋白质水平均有高水平p27KIP1的表达。诱导p27KIP1表达后,SGC7901细胞出现凋亡细胞所拥有典型的梯状DNA和超微结构改变,其凋亡指数也显著增加(P<0.01),并且p27KIP1的过表达使G1期前出现一个亚二倍体的凋亡峰,占14.68%。结论:p27KIP1基因能够诱导胃癌SGC7901细胞的凋亡。     

奥曲肽对胃癌细胞株SGC7901细胞生长抑制作用及其机制的探讨

 目的　研究生长抑素类似物奥曲肽对胃癌细胞株SGC790 1细胞的增殖、蛋白激酶B及端粒酶活性的影响。方法　应用奥曲肽作用于胃癌细胞株SGC790 1细胞不同时间后 ,检测其对体外培养胃癌细胞的抑制率 ,胃癌细胞蛋白激酶B(Akt/PKB)及端粒酶的活性。结果　奥曲肽对胃癌细胞增殖有明显抑制作用 ,呈剂量依赖性。同时能显著抑制胃癌细胞Akt/PKB的活性和端粒酶的活性 (12 ,2 4 ,4 8h均P <0 .0 1)。结论　生长抑素对胃癌细胞株SGC790 1细胞增殖有抑制作用 ,其机制与抑制Akt/PKB及端粒酶活性有关。     

肝素对胃癌细胞端粒酶活性及生长的影响

目的:研究肝素对胃癌细胞生长及端粒酶活性的影响。方法:用不同浓度的肝素作用于胃癌SGC7901细胞,倒置相差显微镜进行细胞计数,绘制生长曲线,TRAPELISA法测定细胞端粒酶活性。结果:肝素浓度为10mg/mL时细胞端粒酶活性明显受抑制,P<005;各浓度肝素下胃癌细胞的生长速度减慢,以中等剂量(10mg/mL)时明显,但均无细胞死亡。结论:肝素对胃癌细胞的端粒酶活性有抑制作用,对肿瘤细胞自身的增殖有一定抑制作用,但肝素不引起细胞死亡。     

顺铂等化疗药物对胃癌细胞端粒酶活性的影响

目的：探讨端粒酶作为化疗敏感性指标的可行性。方法：选择IC50剂量的顺铂，丝裂霉素C，阿霉素及5－氟脲嘧啶和甲酰四氢叶酸处理胃癌细胞，采用半定量TRAP－银染法检测药物处理前后胃癌细胞端粒酶活性。并应用流式细胞学检测细胞周期和细胞凋亡率。结果：顺铂，丝裂霉素C和阿霉素在诱导两细胞凋亡的同时，下调端粒酶活性，且其抑制作用呈时间依赖关系；5－氟脲嘧啶和甲酰四氢叶酸对胃癌细胞端粒酶活性无明显抑制作用，结论：化疗前后细胞端粒酶活性的变化，可作为化疗敏感性指标。     

沉默Chk1基因对姜黄素诱导胃癌细胞SGC7901凋亡敏感度的影响

目的探讨siRNA沉默Chk1基因表达对姜黄素诱导胃癌细胞SGC7901凋亡和细胞周期的影响,评价其作为姜黄素治疗胃癌增敏靶点的有效性。方法采用RNAi技术在胃癌细胞SG-7901中将Chk1基因沉默,采用Western blot检测转染前后Chk1蛋白表达的变化,采用流式细胞术检测Chk1基因沉默对姜黄素诱导胃癌细胞凋亡及细胞周期变化的影响。结果转染Chk1 siRNA后,胃癌细胞SGC7901中Chk1蛋白表达受抑制,明显低于对照组(P＜0.05)。FCM检测结果显示,si-Chk1组较空白对照组G₂/M期百分比有所降低(P＜0.05),si-Chk1+Curcumin组G₂/M期比例明显低于Empty vector+Curcumin组(P＜0.05)。siRNA沉默Chk1基因使姜黄素诱导的细胞凋亡率由(14.7±1.1)%上升到(28.9±1.8)%。结论siRNA沉默Chk1基因可明显消除G₂/M期阻滞,并显著增强姜黄素诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡的敏感度,提示Chk1可作为姜黄素治疗胃癌的有效增敏靶点。     

顺铂等化疗药物对胃癌细胞株端粒酶活性的调节作用

目的：研究常用化疗药物对SGC－7901人胃癌细胞株端粒酶活性的调节作用,探讨端料酶作为化疗敏感性指标的可行性。方法：选择顺铂、丝裂霉素C、阿霉素及5－氟尿嘧啶和甲酰四氢叶酸处理胃癌细胞,采用半定量TRAP－银染法检测药物处理前后的端粒酶活性,流式细胞学检测细胞周期和细胞凋亡。结果：顺铂、丝裂霉素C和阿霉素在诱导SGC－7901细胞凋亡的同时,下调端粒酶活性,且抑制作用呈时间依赖关系,5－氟尿嘧啶和甲酰四氢叶酸对端粒酶活性无明显抑制作用。结论：观测细胞株端粒酶的活性变化可作为化疗药物敏感性的指标,可合理选择新的化疗药物。     

Tanshinone IIA Reverses the Malignant Phenotype of SGC7901 Gastric Cancer Cells

Backgrounds: Tanshinone IIA (TIIA), a phenanthrenequinone derivative extracted from Salvia miltiorrhizaBUNGE, has been reported to be a natural anti-cancer agent in a variety of tumor cells. However, the effect ofTIIA on gastric cancer cells remains unknown. In the present study, we investigated the influence of TIIA on themalignant phenotype of SGC7901 gastric cancer cells. Methods: Cells cultured in vitro were treated with TIIA (0,1, 5, 10 μg/ml) and after incubation for different periods, cell proliferation was measured by MTT method andcell apoptosis and cell cycling were assessed by flow cytometry (FCM). The sensitivity of SGC7901 gastric cancercells to anticancer chemotherapy was investigated with the MTT method, while cell migration and invasion wereexamined by wound-healing and transwell assays, respectively. Results: TIIA (1, 5, 10 μg/ml) exerted powerfulinhibitory effects on cell proliferation (P < 0.05, and P < 0.01), and this effect was time- and dose-dependent.FCM results showed that TIIA induced apoptosis of SGC7901 cells, reduced the number of cells in S phase andincreased those in G0/G1 phase. TIIA also significantly increased the sensitivity of SGC7901 gastric cancer cellsto ADR and Fu. Moreover, wound-healing and transwell assays showed that TIIA markedly decreased migratoryand invasive abilities of SGC7901 cells. Conclusions: TIIA can reverse the malignant phenotype of SGC7901gastric cancer cells, indicating that it may be a promising therapeutic agent.     

舒林酸对胃癌细胞株SGC7901细胞周期调控及凋亡的影响

目的观察舒林酸影响胃癌细胞株SGC7901细胞周期分布,诱导细胞凋亡,探讨其作用机制方法采用MTT比色法观察舒林酸对胃癌SGC7901细胞增殖的影响,采用流式细胞仪检测舒林酸对细胞周期分布的影响,同时结合透射电子显微镜观察舒林酸诱导SGC901细胞凋亡的作用;免疫细胞化学方法观察舒林酸对胃癌细胞周期调控蛋白cyvclinE及P21WAF/CIPI的影响结果舒林酸可抑制胃癌SGC7901细胞的增殖,改变细胞周期分布,使G-0/G1期细胞比例增高,S期比例降低,并对SGC7901细胞有促凋亡作用.上述作用具有剂量和时间依赖性(P＜0.05).舒林酸还可上调P21WAF/CIPI蛋白表达.下调cyolinE蛋白表达.结论舒林酸可改变细胞周期分布,影响细胞周期调控蛋白表达,并可诱导SGC7901细胞凋亡,从而抑制细胞增殖.     

人参皂苷CK对胃癌细胞株SGC-7901及其内源性VEGF的影响

目的 研究人参皂苷CK对胃癌SGC-7901细胞增殖、细胞周期的影响及其对内源性分泌的血管内皮细胞生长因子(VEGF)的作用。方法 以50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625μg/ml的人参皂苷CK作用于胃癌细胞株SGC-7901,通过MTT法检测人参皂苷CK对细胞的抑制作用;采用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;ELISA定量检测细胞培养液中内源性VEGF的含量变化。结果 MTT法显示人参皂苷CK对胃癌细胞株SGC-7901有抑制作用,并且呈浓度、时间依赖关系;SGC 7901细胞经人参皂苷作用后出现明显凋亡峰,且细胞周期被阻滞在G0/G1期;人参皂苷CK处理组VEGF含量低于对照组(P<0.05),高浓度组低于低浓度组(P<0.05),且随着作用时间延长,VEGF含量降低。结论 人参皂苷CK可通过诱导凋亡抑制胃癌细胞株SGC-7901生长,并可抑制SGC 7901细胞内源性分泌VEGF,人参皂苷CK可能成为一种潜在的抗胃癌药物。