华山参通过TGF-β1/Smad3通路对体外纤维化的调节作用

[目的] 研究华山参对重组小鼠转化生长因子 β1 以及香烟提取物（CSE）对小鼠胚胎成纤维细胞（NIH-3T3）和人源支气管上皮细胞（BEAS-2B）的影响及相关机制。[方法] 噻唑蓝（MTT）法筛选华山参生物碱、非生物碱、总提取物对 NIH-3T3 细胞的安全浓度;重组小鼠转化生长因子 β1 诱导 NIH-3T3 细胞 24 h,进行天狼猩红染色,并计算相对胶原沉积率;MTT 法分别筛选 7 种华山参生物碱单体对 BEAS-2B 细胞的安全浓度;CSE 处理 BEAS-2B细胞 24 h 后,进行 β-半乳糖苷酶（β-Gal）染色;蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测 TGF-β1、Smad3、NLRP3 蛋白的表达水平。[结果] 华山参生物碱、非生物碱、总提取物均能抑制重组小鼠转化生长因子 β1 诱导的 NIH-3T3 细胞发生胶原沉积（P 均<0.05）;东莨菪碱和去水阿托品可以显著抑制 CSE 诱导的 BEAS-2B 细胞发生衰老（P 均<0.05）,并且能够显著抑制 TGF-β1、Smad3、NLRP3 蛋白的表达（P 均<0.05）。[结论] 华山参可能通过抑制 TGF-β1/Smad3 通路来调节体外肺纤维化的进程。     

芩丹胶囊对血管外膜成纤维细胞的作用机制

目的  探讨芩丹胶囊（QC）含药血清对动脉血管外膜成纤维细胞（AF）的作用机制。方法  采用组织贴块法体外原代培养大鼠胸主动脉成纤维细胞,MTT法观察大［750mg/（kg·d）］、小［150mg/（kg·d）］剂量的QC含药血清对转化生长因子β1 (TGF-β1)诱导的大鼠胸主动脉成纤维细胞的增殖的影响;实时定量PCR及western blot分别检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SM actin）和Smad3的基因及蛋白表达情况。结果  大、小剂量QC含药血清呈剂量依赖性抑制TGF-β1诱导的AF的增殖（P＜0.05）,且用药组α-SM actin和Smad3基因及蛋白的表达较单纯刺激组显著降低（P＜0.05）。结论  QC含药血清通过干扰TGF-β1/Smad信号转导通路抑制AF增殖和分化,从而改善和逆转动脉血管外膜重构。     

血管生成素抑制TGF-β1诱导的Smad2的活化

目的从Smad信号通路途径探讨血管生成素(angiogenin,Ang)对HeLa细胞的促增殖作用机制。方法用不同浓度的重组人Ang刺激HeLa细胞,用蛋白质印迹实验(Western blotting)检测p-Smad2、Smad2的表达情况以及检测TGF-β1刺激的状态下,过表达或低表达Ang Smad通路的变化。MTT法检测TGF-β1对HeLa细胞增殖的作用,mRNA及蛋白水平检测TGF-β1对Ang表达的影响。结果 Ang能够抑制Smad2的磷酸化。过表达Ang时TGF-β1促进的Smad2的磷酸化也受到抑制,而敲低Ang的表达后促进了TGF-β1诱导的Smad2的磷酸化。TGF-β1能够抑制HeLa细胞增殖,但不影响Ang的表达。结论Ang与TGF-β1对HeLa细胞增殖的作用可能与Smad信号通路相关,并且Ang能够抑制TGF-β1诱导的Smad2的活化。     

芩丹胶囊对自发性高血压大鼠血管重构以及骨桥蛋白基因表达的影响

目的观察芩丹胶囊（QC）对自发性高血压大鼠（SHR）的降压作用及对血管重构的影响并探讨其可能的机制。方法SHRs随机分为模型组和QC组,WKY大鼠作为正常对照组。QC组给予芩丹胶囊灌胃治疗,模型组和正常对照组给予等量生理盐水。观测各组大鼠收缩压、主动脉中膜厚度（MT）、腔内径（LD）、MT／LD、中膜胶原含量以及中膜血管平滑肌细胞（VSMC）超微结构变化,实时定量PCR检测管壁骨桥蛋白（OPN）mRNA的表达。结果与模型组相比,QC组收缩压明显下降;主动脉MT、MT／LD以及中膜胶原含量均显著下降;主动脉壁VSMCs表型变化不明显;动脉壁OPNmRNA表达显著降低。结论QC不仅能够有效地降低SHRs血压,而且能够对动脉血管重构具有明显地逆转作用,其机制可能与下调血管OPNmRNA表达,进而抑制VSMCs表型的变化以及抑制血管壁胶原网络重构有关。      

TGF-β_1/Smad信号转导通路对肾间质纤维化的影响

肾间质纤维化是各种慢性肾脏疾病进展为终末期肾衰竭的共同通路,以肾间质中细胞及胶原成分集聚增多、伴有肾小管萎缩或扩张、变形及肾小管和间质毛细血管的丧失为特征[1]。近年的研究发现,TGF-β1/Smad信号转导通路在肾纤维化的发生、发     

芩丹胶囊对高血压大鼠血管壁Ⅰ型胶原蛋白与mRNA表达的影响

目的    观察芩丹胶囊对老年自发性高血压（SHR）大鼠血管壁Ⅰ型胶原蛋白和基因表达的影响,并进一步探讨其对血管重构的作用机制。方法    32只40周龄老年自发性高血压大鼠模型随机分为模型组(SHR组)、芩丹胶囊大剂量组(SHR+QDH组)、芩丹胶囊小剂量组(SHR+QDL组)、氯沙坦组(SHR+Los组),另设老年Wistar-Kyoto(WKY)大鼠为空白对照组(WKY空白组)及正常药物对照组(WKY+QD组), SHR+QDH组、SHR+QDL组和SHR+Los组分别经灌胃给予芩丹胶囊及氯沙坦, SHR组和WKY空白组给予等量生理盐水, WKY+QD组给予等量芩丹胶囊灌胃。最后用免疫印迹法和实时定量PCR法检测Ⅰ型胶原的表达水平。结果    WKY空白组、WKY+QD组、SHR+Los组、SHR+QDH组、SHR+QDL组、SHR组Ⅰ型胶原蛋白表达依次增强, SHR+QDH组、SHR+QDL组、SHR+Los组与SHR组比较Ⅰ型胶原蛋白和mRNA表达均显著降低(P＜0.05), SHR+QDH组与SHR+Los组比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。结论    芩丹胶囊能有效地降低自发性高血压大鼠血管壁Ⅰ型胶原蛋白与mRNA的表达,改善血管胶原重塑,进而抑制并逆转动脉血管重构。     

芪苈强心胶囊改善心肌纤维化及对TGF-β1/Smad3信号转导通路的影响

目的探讨芪苈强心胶囊对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌纤维化(MF)的作用及其可能机制。方法2012年4—10月于重庆医科大学附属第一医院动物实验中心进行实验。取SD大鼠68只随机分为假手术组8只,余60只建立大鼠CHF模型,8周后随机分为模型组、依那普利组和芪苈强心胶囊高、中、低剂量组。给药4周后检测血浆脑钠肽(BNP)的含量,计算左室质量指数(LVMI),天狼猩红染色(PSR)观察左室心肌胶原形态,测量胶原容积分数(CVF),免疫组化法检测心室中转化生长因子β1(TGF-β1)和Smad3蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠BNP、LVMI、Ⅰ/ⅢCVF、TGF-β1和Smad3蛋白表达均明显增加(t=9.75、2.04、9.59、8.57、9.23,P<0.05或P<0.01);与模型组比较,依那普利组、芪苈强心胶囊各剂量组BNP、LVMI、Ⅰ型CVF、Ⅲ型CVF、TGF-β1和Smad3蛋白表达均明显降低(芪苈强心胶囊低、中剂量组BNP除外,芪苈强心胶囊低剂量组Ⅲ型CVF和Ⅰ/ⅢCVF除外),差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与依那普利组比较,芪苈强心胶囊中、高剂量组各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论芪苈强心胶囊能减轻CHF大鼠的心室肥厚,抑制MF和改善心功能,这种作用可能与抑制TGF-β1/Smad3信号转导有关。     

芪苈强心胶囊对心肌梗死大鼠心肌纤维化及TGF-β1／Smad3信号通路的影响

目的探讨芪苈强心胶囊对心肌梗死后大鼠心肌纤维化的影响及其作用机制。方法 SD雄性大鼠结扎冠脉左前降支,建立急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction,AMI)模型,4周后根据心脏超声结果随机分为模型组和芪苈强心组,另设假手术组,分别给予1 g/(kg·d)芪苈强心及等体积蒸馏水灌胃。4周后超声心动图检测大鼠心脏功能,取梗死周围心肌组织采用HE及Masson染色观察心肌病理形态改变,免疫组织化学方法检测心肌α-SMA表达,Western blotting方法检测心肌α-SMA、胶原Ⅰ(collagenⅠ)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)及p-Smad3蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组左心室短轴缩短分数(FS)和射血分数(EF)明显降低(P0.05),左心室收缩末期内径(LVIDs)和收缩末期容量(ESV)显著升高(P0.05),心肌纤维化明显(P0.05),α-SMA、collagenⅠ、TGF-β_1和p-Smad3等表达增加(P0.05)。与模型组比较,芪苈强心组EF和FS明显升高(P0.05),LVIDs和ESV明显降低(P0.05),心肌纤维化程度减轻(P0.05),α-SMA、collagenⅠ、TGF-β_1和p-Smad3等表达明显降低(P0.05)。结论芪苈强心胶囊能够降低心肌梗死大鼠心肌纤维化程度,改善心脏功能,其作用机制可能与调控TGF-β_1/Smad3信号通路相关蛋白有关。     

肾康丸对糖尿病肾病大鼠肾脏TGF-β1/Smad 7通路的影响

目的探讨肾康丸对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏TGF-β1/Smad 7信号通路的影响。方法用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射法诱导建立大鼠糖尿病(DM)模型,模型成功后随机分为3组:模型对照组、开搏通组、肾康丸组,另设正常对照组。治疗8周后,取大鼠肾脏,采用免疫组化法观察各组大鼠肾脏组织纤连蛋白(FN)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和Smad 7蛋白表达的情况。结果8周后,DN模型组大鼠与正常大鼠比较,肾脏组织中FN和TGF-β1蛋白表达明显增加,Smad 7蛋白表达明显减少。肾康丸和开搏通都可以减少FN和TGF-β1蛋白的表达,增加Smad 7蛋白的表达。结论肾康丸可以抑制DN大鼠肾脏中TGF-β1/Smad信号传导通路的激活,减少ECM的沉积,从而延缓DN进程。     

调控TGF-β1/Smad4通路对宫颈癌 SiHa细胞自噬基因p62的影响

目的 探究调控TGF-β1/Smad4通路对宫颈癌SiHa细胞自噬基因p62的影响。方法 对数生长期的宫颈癌SiHa细胞加入不同浓度的TGF-β1和SIS3干预24h后收取细胞,分别检测在mRNA及蛋白水平上自噬基因p62表达量的变化。结果 TGF-β1作用SiHa细胞24h后,随着浓度升高, p62 mRNA及蛋白的表达量逐渐降低(P<0.05)。SIS3作用SiHa细胞24h后,随着浓度升高,p62 mRNA及蛋白的表达量逐渐增高(P<0.05)。结论 外源性的TGF-β1/Smad4通路激活剂TGF-β1可使宫颈癌SiHa细胞自噬蛋白p62 mRNA及蛋白的表达量降低,诱导宫颈癌SiHa细胞发生自噬;外源性的TGF-β1 /Smad4通路抑制剂SIS3可使宫颈癌SiHa细胞自噬蛋白p62 mRNA及蛋白的表达量升高,抑制宫颈癌SiHa细胞发生自噬;且随TGF-β1和SIS3浓度的增加,p62表达量出现变化,具有一定的浓度依赖性。     

小柴胡汤通过TGF-β1/Smad通路改善大鼠肝纤维化

目的研究小柴胡汤通过转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad通路改善大鼠肝纤维化的作用及机制。方法雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、中药+SRI组,采用四氯化碳皮下注射的方式建立大鼠肝纤维化模型,给与小柴胡汤灌胃及Smad2/3激活剂SRI-011381腹腔注射干预。比较各组大鼠肝脏病理改变、血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白蛋白(ALB)、透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)含量,以及肝脏中TGF-β1、Smad2、Smad3表达的差异。结果与对照组比较,模型组大鼠出现了典型的肝纤维化病理改变,血清中ALB的含量降低,血清中ALT、AST、HA、LN、PCⅢ的含量及肝脏中TGF-β1、Smad2、Smad3的表达水平增加;与模型组比较,中药组大鼠肝纤维化的病理改变减轻,血清中ALB的含量增加,血清中ALT、AST、HA、LN、PCⅢ的含量及肝脏中TGF-β1、Smad2、Smad3的表达水平降低;与中药组比较,中药+SRI组大鼠肝纤维化的病理改变加重,血清中ALB的含量降低,血清中ALT、AST、HA、LN、PCⅢ的含量及肝脏中TGF-β1、Smad2、Smad3的表达水平增加。结论小柴胡汤能够改善大鼠的肝纤维化,抑制TGF-β1/Smad通路是介导这一改善作用可能的分子机制。     

小柴胡汤通过TGF-β1/Smad通路改善大鼠肝纤维化

目的 研究小柴胡汤通过转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad通路改善大鼠肝纤维化的作用及机制.方法 雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、中药+SRI组,采用四氯化碳皮下注射的方式建立大鼠肝纤维化模型,给与小柴胡汤灌胃及Smad2/3激活剂SRI-011381腹腔注射干预.比较各组大鼠肝脏病理改变、血清天门...     

益气化瘀法干预TGF-β/ALK1/Smad1/5通路对糖尿病大鼠肉芽增生期创面血管生成的影响

目的:观察益气化瘀中药对糖尿病大鼠肉芽增生期创面转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)/激活素受体样激酶(actilin receptor-like kinase 1,ALK1)/Smad1/5通路及血管新生的影响。方法:将50只大鼠随机分为益气化瘀组、益气组、化瘀组、模型组、正常对照组。通过腹腔注射链脲佐菌素和外科方法建立糖尿病大鼠全层皮肤缺损模型,运用Westernblot技术手段检测各组肉芽增生期创面成纤维细胞ALK1/Smad1/5的表达水平及微血管计数。结果:糖尿病模型组微血管计数为(35.38±11.45),明显低于正常组(69.13±28.45)(P0.05);ALK1(3 635.86±2 135.83)/Smad1(2 729.92±1 757.01)/Smad 5(2 570.81±1 188.04)均明显低于正常组(P0.01)。益气化瘀组及其拆方组能不同程度的上调ALK1/Smad1/5通路,促进血管新生,且益气化瘀组更优于其拆方组。结论:糖尿病创面难以愈合的机制可能与ALK1/Smad1/5通路有关,益气化瘀中药可能通过干预ALK1/Smad1/5通路,促进血管新生,从而加速创面愈合。     

阿利吉仑对大鼠肾纤维化TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨阿利吉仑对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的作用及机制。方法 24只雌性SD大鼠随机分为3组,Sham组、UUO组及aliskiren组,除Sham组外,UUO组及aliskiren组均行左侧输尿管结扎术。aliskiren组术前1 d开始灌胃给药,阿利吉伦50 mg/(kg·d),每日1次,连续2周。术后第14天处死大鼠,留取梗阻侧肾组织行HE染色和Masson染色,光镜下观察各组大鼠肾组织病理变化,免疫组化和Western印迹检测肾组织TGF-β1、Smad2和Smad7蛋白表达水平。结果阿利吉仑可明显减轻大鼠肾间质炎性细胞浸润、纤维组织增生及肾小管扩张和萎缩。免疫组化和Western印迹结果均显示:与Sham组相比,UUO组TGF-β1、Smad2表达明显上升,而Smad7表达明显下降(均P<0.05);与UUO组相比,aliskiren组TGF-β1、Smad2表达明显下降,Smad7表达明显上升(均P<0.05)。结论 TGF-β1/Smad信号通路与肾间质纤维化有关,阿利吉仑可抑制肾间质纤维化,其机制可能与下调TGF-β1、Smad2的表达和上调Smad7的表达有关。     

槲皮素脂质体对糖尿病肾病氧化应激和TGF-β1/Smad7通路的影响

目的 观察槲皮素脂质体(LQ)对糖尿病肾病氧化应激和转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad7通路的影响.方法 高糖高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备大鼠2型糖尿病肾病模型,随机分为糖尿病模型组(DM组)、槲皮素脂质体组(LQ组)和厄贝沙坦组(IRB组),另设正常组.8周后生化法测定各组大鼠血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,免疫组化检测大鼠肾脏TGF-β1和Smad7蛋白的表达,RT-PCR法检测大鼠肾皮质TGF-β1和Smad7 mRNA的表达情况.结果 与正常组比较,DM组大鼠血清中HDL、SOD、GSH-Px活性水平显著下降,TC、TG、LDL、MDA含量明显升高,肾组织TGF-β1蛋白及TGF-β1 mRNA表达均显著增高,Smad7蛋白及Smad7 mRNA表达减少.与DM组比较,LQ组和IRB组HDL、SOD、GSH-Px活性水平升高,TC、TG、LDL、MDA含量降低,肾组织TGF-β1蛋白及TGF-β1 mRNA减少,Smad7蛋白及Smad7 mRNA表达增加.结论 LQ通过减轻体内氧化应激反应,干预TGF-β1和Smad7通路从而对糖尿病肾病起保护作用.     

TGF-β/Smad信号通路与慢性移植性肾病的研究进展

慢性移植性肾病是导致肾移植失败的主要原因,其发病机制目前尚不清楚。TGF-β/Smad信号通路在慢性移植性肾病的形成和发展中发挥了重要作用,而Smad通路仍是目前所公认的介导TGF-β胞内反应的主要通路。本文将Smads在慢性移植性肾病中TGF-β/Smads信号转导通路的作用研究进展予以综述,旨在为开辟防治慢性移植性肾病的新途径提供理论和实验依据。     

基于TGF-β1/Smad通路研究牛膝多糖对慢阻肺模型大鼠的作用机制

目的:基于TGF-β1/Smad通路研究牛膝多糖对慢阻肺模型大鼠的作用机制.方法:60只大鼠,随机选10只为对照组,其余大鼠采用向气管内滴注脂多糖加香烟熏的方法复制大鼠慢阻肺模型,将模型成功的大鼠随机分为模型组、地塞米松组(0.5 mg·kg-)及牛膝多糖低、中、高剂量组(2g·kg-1、4 g·kg-1、8 g·kg...     

反义Smad3转染阻断TGF-β_1信号转导对球囊损伤后大鼠血管内膜增生的影响

目的通过建立大鼠颈动脉球囊损伤模型并体内转染反义Smad3腺病毒载体,研究阻断TGF-β1/Smad3信号途径对损伤后大鼠颈动脉内膜增生的影响。方法 90只SD大鼠随机分为单纯损伤组（单纯球囊损伤大鼠颈动脉内膜）、干预组（损伤后局部保留灌注反义Smad3腺病毒液）、空白对照组（损伤后局部灌注空载腺病毒液）;另取6只同周龄大鼠作为正常对照组（不进行任何处理）。各组分别在损伤后第1天、3天、1周、2周、1月、3月时处死大鼠并取材。ELISA法检测单纯损伤组和正常对照组不同时间点血清中TGF-β1的质量浓度;Real-timePCR和HE染色法分别检测三个损伤组在不同时间点Smad3mRNA表达和血管壁内膜、中膜厚度。结果单纯损伤组各时间点TGF-β1的质量浓度较正常对照组显著升高（P〈0.05）。干预组第1天、3天、1周、2周、1月时的Smad3mRNA表达和第1天、2周、3月时的内膜/中膜比值均较单纯损伤组明显下降（P〈0.05）;单纯损伤组与空白对照组各指标比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论体内转染反义Smad3可以阻断TGF-β1/Smad3信号转导,从而抑制内膜增生。