芩丹胶囊对血管外膜成纤维细胞的作用机制

目的  探讨芩丹胶囊（QC）含药血清对动脉血管外膜成纤维细胞（AF）的作用机制。方法  采用组织贴块法体外原代培养大鼠胸主动脉成纤维细胞,MTT法观察大［750mg/（kg·d）］、小［150mg/（kg·d）］剂量的QC含药血清对转化生长因子β1 (TGF-β1)诱导的大鼠胸主动脉成纤维细胞的增殖的影响;实时定量PCR及western blot分别检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SM actin）和Smad3的基因及蛋白表达情况。结果  大、小剂量QC含药血清呈剂量依赖性抑制TGF-β1诱导的AF的增殖（P＜0.05）,且用药组α-SM actin和Smad3基因及蛋白的表达较单纯刺激组显著降低（P＜0.05）。结论  QC含药血清通过干扰TGF-β1/Smad信号转导通路抑制AF增殖和分化,从而改善和逆转动脉血管外膜重构。     

行瘀清热胶囊对大鼠前列腺成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的观察行瘀清热胶囊对大鼠前列腺成纤维细胞增殖及凋亡的影响。方法取健康SD大鼠前列腺组织进行成纤维细胞的原代培养并传代增殖,选用第3～6代细胞,制备行瘀清热胶囊含药血清,于酶标仪490 nm波长处测定吸光度（A）值,计算药物对成纤维细胞的相对抑制率,并以流式细胞仪分析行瘀清热胶囊对前列腺成纤维细胞的凋亡率的影响。结果行瘀清热胶囊能抑制前列腺成纤维细胞增殖;流式细胞仪分析显示行瘀清热胶囊含药血清使成纤维细胞凋亡率增高较为明显。结论行瘀清热法防治慢性前列腺炎的机制与抑制前列腺组织成纤维细胞增殖、促进成纤维细胞的凋亡有关。     

不同浓度腐胺对人皮肤成纤维细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的探讨不同浓度腐胺对人皮肤成纤维细胞（human skin fibroblasts,HSF）增殖、迁移、凋亡的影响。方法将体外HSF
分为腐胺组和对照组,以含腐胺浓度分别为0.5、1、5、10、50、100、500、1000 μg/ml完全培养基培养细胞设为腐胺组,不添加腐胺
设为对照组。经对照组及不同浓度腐胺组处理的HSF培养24 h后,再以四唑化合物电子耦联显色法（MTS法）测定细胞增殖能
力（用吸光度值表示）,Transwell迁移实验测定细胞的迁移能力,流式细胞技术（Flow Cytometry, FCM）Annexin V/PI标记法测
定细胞凋亡率。结果（1）细胞增殖能力（MTS）测定结果显示,0.5、1、5、10 μg/ml 腐胺组HSF的吸光度值较对照组升高（P<
0.01）,并且1 μg/ml时达峰值（0.754±0.024）;500、1000 μg/ml腐胺组HSF吸光度值较对照组降低（P<0.01）;50、100 μg/ml腐胺
组HSF的吸光度值与对照组无明显差异（P>0.05）;（2）Transwell迁移实验结果显示,1 μg/ml腐胺组穿过微孔膜的细胞数目较对
照组显著增加（P<0.01）,且达到峰值309±21;50 μg/ml及以上浓度腐胺组HSF穿过微孔膜的数目较对照组减少（P<0.05）;0.5、
5、10 μg/ml腐胺组HSF穿过微孔膜的细胞数目与对照组比较无明显差异（P>0.05）;（3）流式细胞凋亡结果显示,0.5、1、5、10 μg/ml
腐胺组HSF凋亡率较对照组显著降低（P<0.05）,而且在1 μg/ml时细胞凋亡率达最低值（11.10±0.79）%;100 μg/ml及以上浓度
腐胺组细胞凋亡率较对照组显著升高（P<0.01）,而且随着浓度增加凋亡率逐渐升高;50 μg/ml腐胺组与对照组比较细胞凋亡率
无明显差异（P>0.05）。结论微量腐胺可维持细胞正常的迁移能力,显著提高HSF的细胞增殖能力,而较高浓度的腐胺能显著
抑制HSF迁移与增殖,并诱导细胞发生凋亡,提示不同浓度的腐胺会对创面愈合起到完全不同的作用。
     

碘化钾对人体皮肤成纤维细胞增殖活性的影响

目的探讨不同浓度的碘化钾（KI）对人体皮肤成纤维细胞(HSF)增殖活性的影响。方法将体外培养的ＨＳＦ分成7组含不同浓度的KI（0、1?000、3?000、5?000、7?000、9?000、11?000?μg/L）,每组含8个平行样本。完全培养基分别培养24?h后,观察HSF形态变化,用流式细胞术和酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测HSF增殖活性。结果KI的浓度在1?000、3?000、5?000?μg/L时成纤维的增殖活性随着碘浓度的增加而升高（P＜0.05）;5?000、7?000?μg/L组细胞增殖活性最高,两组间增殖活性差异无统计学意义（P＞0.05）;7?000、9?000、11?000?μg/L?时HSF增殖活性随着KI浓度的增加而降低（P＜0.05）。结论KI浓度在5?000?μg/L以下会促进HSF增殖活性,高于7?000?μg/L时反而会抑制HSF增殖活性。     

EGF对大鼠真皮成纤维细胞增殖的影响

目的观察EGF对大鼠真皮成纤维细胞增殖活性的影响.方法将传代培养的第3代大鼠真皮成纤维细胞(FB)以含有新生牛血清的DMEM培养基进行培养,当细胞培养至对数生长期时,分别改用添加有不同浓度EGF的培养液继续培养,以MTT法测定细胞增殖活性.结果在培养液中添加不同浓度的EGF,FB的增殖活性均有不同程度的增加.结论EGF对体外培养大鼠真皮成纤维细胞的增殖具有促进作用.     

EGF对大鼠真皮成纤维细胞增殖的影响

目的观察EGF对大鼠真皮成纤维细胞增殖活性的影响。方法将传代培养的第3代大鼠真皮成纤维细胞(FB)以含有新生牛血清的DMEM培养基进行培养,当细胞培养至对数生长期时,分别改用添加有不同浓度EGF的培养液继续培养,以MTT法测定细胞增殖活性。结果在培养液中添加不同浓度的EGF,FB的增殖活性均有不同程度的增加。结论EGF对体外培养大鼠真皮成纤维细胞的增殖具有促进作用。     

牛磺酸对成纤维细胞增殖及功能的影响

目的观察牛磺酸对３Ｔ３细胞的增殖及产生胶原和透明质酸的影响。方法；采用「＾３Ｈ」－胸腺嘧啶（「＾３Ｈ」－ＴｄＲ）、「＾３Ｈ」－脯氨酸（「＾３Ｈ」－Ｐｒｏ）掺入和放射名单分析法分析别测定细胞增殖、胶原和透明质酸合成。结果；牛磺酸能显著抑３Ｔ３细胞的「＾３Ｈ」－ＴｄＲ和「＾３Ｈ」Ｐｒｏ掺入，并呈时间、剂量依赖关系；对透明质酸的合成亦具有剂量依赖的抑制作用。此外，牛磺酸还明显提高细胞内ｃＡＭＰ水平。结论     

天麻钩藤饮和血府逐瘀汤与温胆汤含药血清对SHR心肌成纤维细胞增殖的影响

目的 以自发性高血压大鼠(SHR)为实验对象,以ACEI类药物卡托普利作对照,对比观察天麻钩藤饮、温胆汤、血府逐瘀汤的药物血清对体外心肌成纤维细胞增殖的作用.方法 按照各药方药物血清的不同浓度分组同步细胞后,运用CCK-8法检测各种药物血清对CFb增殖的影响,并根据酶标仪上所测OD值分析不同药物不同浓度含药血清之间的差异程度.结果 (1)完全空白对照组、20%空白兔血清组、10%空白兔血清组、5%空白兔血清组之间比较差异均无显著性(P>0.05);(2)5%天麻钩藤饮、卡托普利含药血清与同浓度的空白兔血清相比差异有显著性(P<0.01);5%温胆汤、血府逐瘀汤含药血清与空白兔血清相比无显著性差异(P>0.05);(3)10%及20%天麻钩藤饮、温胆汤、血府逐瘀汤、卡托普利含药血清与空白兔血清组比较差异均有显著性,10%含药血清之间比较:天麻钩藤饮、温胆汤、血府逐瘀汤对CFb增殖的抑制作用不及卡托普利,20%天麻钩藤饮、温胆汤、血府逐瘀汤含药血清组与卡托普利组比较差异无显著性(P>0.05).结论 天麻钩藤饮、温胆汤、血府逐瘀汤均有抑制CFb增殖的作用,并呈浓度效应关系.     

壮骨止痛胶囊含药血清对大鼠成骨样细胞增殖分化影响的实验研究

[目的]观察壮骨止痛胶囊含药血清对成骨细胞增殖、分化的影响,为明确壮骨止痛胶囊防治骨质疏松症的作用机制提供实验依据。[方法]取2代培养的大鼠成骨细胞,在壮骨止痛胶囊含药血清为40%的浓度中培养。观察细胞的生长及钙结节的形成,碱性磷酸酶(ALP)测定成骨细胞增殖和分化,噻唑蓝(MTT)法测成骨细胞生长曲线。[结果]成骨细胞在6d可铺满瓶壁,30d可形成钙结节,壮骨止痛胶囊含药血清可促进成骨细胞的增殖、ALP的分泌。[结论]壮骨止痛胶囊含药血清可促进大鼠成骨细胞的增殖、分化。壮骨止痛胶囊含药血清可能通过直接促进成骨细胞增殖、分化,从而防治骨质疏松症。     

芦丁对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨芦丁对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖作用.方法 应用瘢痕疙瘩组织诱导成纤维细胞;芦丁分为0、50、100、200、300μmol/L等5个浓度梯度, 通过CCK-8及Ed U实验观察芦丁对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响, 通过Western blot检测芦丁对TGF-β/Smad信号通路的影响.结果 当浓度低于300μmol/L时, 芦丁对瘢痕疙瘩组织来源成纤维细胞增殖产生明显抑制作用 (P<0.01) , 并且呈剂量依赖性;Ed U实验结果显示, 瘢痕疙瘩组织来源成纤维细胞DNA合成受到芦丁的抑制作用;50、100、200μmol/L条件下, 芦丁可以明显地抑制瘢痕疙瘩组织来源成纤维细胞TGF-β1及Smad2的表达.结论 芦丁通过调控TGF-β/Smad信号通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖.     

Sonic hedgehog促进血管外膜成纤维细胞表型转化并发生增殖迁移

目的 研究sonic hedgehog(shh)在血管外膜成纤维细胞增殖、迁移、表型转化中的作用.方法 体外培养血管外膜成纤维细胞,免疫荧光、激光共聚焦显微成像、免疫印迹以及实时定量聚合酶链式反应检测蛋白和基因表达,Ki67、细胞生长曲线评价细胞增殖情况,划痕实验观察细胞迁移情况,α-肌动蛋白评价细胞表型转化情况.结果 shh在体外培养的血管外膜成纤维细胞中有表达,加入外源性的shh后(3.5μg/ml),Ki67~+的成纤维细胞增多,划痕区域的细胞覆盖率增大、成纤维细胞内出现α-肌动蛋白的表达;加入cyclopamine(40μmol/L)抑制内源性的shh信号通路后,Ki67~+的成纤维细胞减少,划痕区域的细胞覆盖率减小.结论 shh能够促进成纤维细胞增殖、迁移、向肌成纤维细胞转化.     

罗格列酮及环格列酮对血管紧张素Ⅱ体外诱导大鼠主动脉外膜成纤维细胞增殖的抑制作用

目的：探讨过氧化物酶体增殖物激活型受体（PPAR）γ激动剂罗格列酮、环格列酮对大鼠主动脉外膜成纤维细胞（AF）增殖的影响,并比较电流排除（ECE）、四甲基偶氮唑盐（MTT）2种方法检测增殖的差异。方法：采用组织贴块法原代培养AF并传代。取第5代纯化细胞血清饥饿24h,然后用不同浓度（0、1、5、10、50μmol/L）的罗格列酮、环格列酮加或不加血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激24h,用ECE、MTT2种方法检测细胞增殖活力。结果：与未加AngⅡ组比较,加AngⅡ组的细胞活力升高（P〈0.05）,10、50μmol/L罗格列酮、环格列酮能够抑制AF增殖（P〈0.05）,5、10、50μmol/L罗格列酮、环格列酮能够抑制AngⅡ诱导的AF增殖（P〈0.05）。ECE与MTT结果相关性好（r=0.667,P〈0.001）。结论：罗格列酮、环格列酮能够抑制AngⅡ诱导的AF增殖,ECE法可准确检测细胞增殖。     

Inhibitory Effect of Curcumin on Proliferation of Human Pterygium Fibroblasts

In order to investigate the effect of curcumin on proliferation and apoptosis of human pterygium fibroblasts (HPF) in culture and search for a new method to prevent the recurrence after pterygium surgery, HPF was incubated with 0-160 μmol/L curcumin for 24-96 h. The MTT method was used to assay the biologic activities of curcumin at different time points and different doses. The expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in each group was detected by immunohistochemistry. The cell cycle distribution was detected by flow cytometry (FCM). Admini- stration of 20-80 μmol/L curcumin for 24-72 h could significantly inhibit HPF proliferation in a dose- and time-dependent manner (P<0.05). After treatment with curcumin at different concentrations of 20, 40, 80 and 160 μmol/L for 24 h, FCM revealed there was a significant sub-G1 peak at each concentration. The number of HPF in G0/G1 phase was increased, while in S phase, it was decreased (P<0.05). At the concentration of 20-80 μmol/L, curcumin, in a dose-dependent manner (P<0.05), could inhibit the expression of PCNA in HPF. It was suggesterd that curcumin could significantly in- hibit the proliferation of HPF, make HPF arrest in G0/G1 phase and induce the apoptosis of HPF in a dose- and time-dependent manner.     

芩丹胶囊降压作用及其机制的实验研究

目的：观察芩丹胶囊对自发性高血压大鼠（spontaneous hypertensive rat,SHR）的降压作用和对血浆内皮素（ET）、降钙素基因相关肽（CGRP）、血浆和血管组织中血管紧张素II（Ang II）含量的影响,并探讨可能的降压机制。方法：将40只SHR均分为5组：芩丹胶囊大剂量组、小剂量组、牛黄降压胶囊组、卡托普利组和模型组,8只Wistar Kyoto（WKY）大鼠作为正常对照组,分别给予相应药物;给药12周后观测各组大鼠血压、血浆ET、CGRP及血浆和肠系膜动脉组织中Ang II的含量。结果：芩丹胶囊大剂量组血压较模型组血压明显降低（P＜0.01）,与牛黄降压胶囊组和卡托普利组相比差异无统计学意义（P均＞0.05）;与模型组相比,芩丹胶囊大剂量能够降低SHR血浆ET含量,升高CGRP含量（P均＜0.05）,且效果优于牛黄降压胶囊和卡托普利;对血浆Ang II含量无影响（P＞0.05）,且能够降低肠系膜血管组织中Ang II含量（P＜0.05）。结论：芩丹胶囊对SHR具有良好的降压作用,其机制可能与对血浆中血管活性肽和局部肾素-血管紧张素系统（RAS）的调节有关。     

芍药苷对增殖性瘢痕成纤维细胞增殖抑制作用及机制研究

目的探索芍药苷对增殖性瘢痕(HS)成纤维细胞增殖抑制作用及机制研究。方法 0(对照组),200,400,800μmol/L的芍药苷作用HS成纤维细胞24、48、72 h后,MTT法检测细胞活力,Hoechst染色法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞Ⅰ型胶原(COLⅠ)和Ⅲ型胶原(COLⅢ)含量,Western blot检测转化生长因子-β(TGF-β)/Smad信号通路相关蛋白及基质金属蛋白酶1(MMP1)、MMP13表达。结果 200,400,800μmol/L芍药苷能显著降低HS成纤维细胞活力(P0.01),使细胞核发白,皱染,使细胞周期阻滞在G1期(P0.01),能显著降低细胞中COLⅠ、COLⅢ含量(P0.01),下调MMP1、MMP13、TGF-β1、pSmad2及p-Smad3表达(P0.01)。结论芍药苷能明显抑制HS成纤维细胞增殖及胶原合成,可能是通过抑制TGF-β1/Smad信号通路实现的。     

LncRNA SIL对肺泡上皮细胞增殖和迁移的抑制作用研究

目的 研究lncRNA SIL与肺纤维化过程中肺泡上皮细胞的增殖和迁移之间的关系.方法 利用RNA fish研究在转化生长因子(TGF-β1)诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转化的过程中lncRNA SIL的表达变化,构建lncRNA SIL真核表达载体,转染A549细胞后,通过RT-PCR、MTT、Western blot...     

槐耳颗粒抑制肺腺癌细胞增殖和迁移的机制研究

目的:研究槐耳颗粒对肺腺癌细胞系A549和H1299增殖和迁移的作用及机制。方法:通过MTT和细胞划痕实验探究不同浓度槐耳对A549、H1299细胞生长和迁移的抑制作用,并计算抑制率;运用流式细胞术检测细胞凋亡状态;运用Western blot检测不同浓度槐耳对两种细胞系中EMT相关蛋白表达水平的影响。结果:MTT表明随着槐耳浓度升高,A549和H1299的增殖抑制率均上升(P<0.05);流式细胞术结果显示槐耳能诱导两种细胞发生凋亡;细胞划痕实验结果表明,肿瘤细胞的迁移随槐耳浓度的升高而抑制(P<0.05);Western blot表明,上皮细胞标记蛋白E-cadherin表达增高,间充质细胞标记蛋白N-cadherin、Vimentin及Snail表达减少。结论:槐耳能有效抑制肺癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,并通过Snail通路抑制EMT的发生,从而阻碍肿瘤细胞的迁移。     

RhoA对AngⅡ诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响

目的 构建dominant negative N19RhoA重组腺病毒并感染血管外膜成纤维细胞(AF),观察RhoA对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的AF增殖的影响.方法 运用pAdEasy-1腺病毒载体系统,细菌同源重组法构建含目的基因N19RhoA的腺病毒重组质粒pAd-CMV-N19RhoA-eGFP,并感染体外培养的大鼠AF,然后用1×10-7 mol/L的AngⅡ处理24 h.Rho pull-down分析法测定RhoA活性;BrdU ELISA法检测AF的增殖情况.以同时构建的pAd-CMV-eGFP作为对照.结果 1×10-7 mol/L AngⅡ处理感染pAd-CMV-N19RhoA-eGFP的AF 30 min后,其GTP-RhoA的表达明显升高,提示AngⅡ可激活RhoA信号分子;感染pAd-CMV-N19RhoA-eGFP的AF,AngⅡ诱导的BrdU掺入明显受到抑制.结论 RhoA信号分子对AngⅡ诱导的AF增殖具有调节作用.     

红景天总黄酮对大鼠心肌成纤维细胞增殖的抑制作用

目的:研究红景天总黄酮对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(CFB)增殖的抑制作用,探讨红景天总黄酮改善心肌纤维化的作用机制。方法:采用TGF-β1(5 μg·L^-1)诱导大鼠CFB增殖,构建心肌纤维化细胞模型。将正常培养的大鼠CFB分为对照组、模型组和25、50及100 mg·L^-1红景天总黄酮组。给药48 h后,MTT法检测细胞活力,ELISA法检测细胞培养上清液中Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(Col Ⅲ)的水平,检测上清液中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性以及丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的水平。结果:MTT法检测,与对照组比较,模型组细胞活力明显升高(P<0.01);与模型组,红景天总黄酮各剂量组细胞活力均明显下降(P<0.05)。T-SOD和MDA检测,与对照组比较,模型组细胞T-SOD活性下降(P<0.05),MDA水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,50和100 mg·L^-1组细胞T-SOD活性明显升高(P<0.01),25和50 mg·L^-1红景天总黄酮组MDA水平明显下降(P<0.05)。GSH-Px和GSH检测,与对照组比较,模型组细胞GSH-Px活性及GSH水平均明显降低(P<0.01);与模型组比较,红景天总黄酮各剂量组细胞GSH-Px活性和GSH水平均升高(P<0.05)。ColⅠ和Col Ⅲ水平测定,模型组ColⅠ和Col Ⅲ水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,红景天总黄酮各剂量组细胞2种蛋白水平均明显下降(P<0.05)。结论:红景天总黄酮可以抑制大鼠CFB的增殖,并可能经抗氧化应激途径改善心肌纤维化。