KAI1基因对肝癌细胞侵袭、转移的影响及其分子机制

目的研究肿瘤转移抑制基因KAI1对肝癌细胞侵袭、转移的影响及其分子机制,为肝癌的基因治疗提供理论和实验依据.方法用亚克隆技术构建KAI1基因正、反义真核表达质粒,DOTAP脂质体法将其分别转入高转移潜能的人MHCC97-H肝癌细胞,以限制性酶切、PCR、Western blot及免疫组化鉴定基因重组及转染是否成功.电镜观察细胞超微形态变化,流式细胞仪检测细胞周期分布,细胞生长曲线和平板法集落形成试验观察细胞生长和集落形成能力,Boyden Chamber试验观察细胞侵袭能力,微管吸吮技术测定细胞的粘弹性和粘附力.BALB/CA 4～6周龄雄性裸鼠80只,随机分正义组、反义组、亲本细胞组及空载体组进行皮下(n=40)和原位肝(n=40)种植试验,观察体内的成瘤性、侵袭性及远处转移能力,免疫组化研究癌转移灶AFP和肿瘤组织细胞外基质(ECM)及粘附分子的表达状况.结果(1)成功构建了KAI1正、反义基因真核表达质粒,并将其分别转入MHCC97-H人肝癌细胞;(2)发现转入KAI1基因后可导致肝癌MHCC97-H细胞的一些细胞器数量和形态的变化;(3)KAI1基因对肝癌MHCC97-H细胞的体内外生长、细胞周期及体内成瘤性无明显影响;(4)反义KAI1基因可使MHCC97-H细胞的克隆形成能力增强、对体内外肝癌细胞的侵袭和转移有促进作用;(5)KAI1基因表达上调能使MHCC97-H细胞的体内外侵袭能力降低;(6)KAI1基因抑制肝癌侵袭和转移的机制可能与细胞粘弹性增加、ECM表达上调、粘附分子表达下调及粘附力下降等变化有关.结论KAI1基因在肝癌的侵袭转移过程中发挥着重要作用,上调KAI1基因表达能明显降低肝癌细胞的侵袭和转移能力.     

索拉非尼对MHCC97-H 肝癌细胞增殖、 侵袭以及PRL-3 蛋白表达的影响研究

目的 探讨索拉非尼对体外培养MHCC97-H 肝癌细胞中肝再生磷酸酶3（PRL-3）表达水 平的影响,以及对肝癌细胞侵袭力的作用。方法 在24、48 及72 h 测定经不同浓度梯度索拉非尼处理 MHCC97-H 肝癌细胞增殖抑制率以筛选合适的干预浓度和时间。采用MHCC97-H 肝癌细胞培养传代, 用索拉非尼干预处理,瑞氏吉姆萨法染色观察形态学变化,MTT 法检测其增殖抑制率,Western blot 法检测 PRL-3 蛋白表达水平,Transwell 实验检测癌细胞侵袭力。结果 该实验索拉非尼体外最佳干预实验浓度和时 间分别为16 μmol/L 和48 h ;索拉非尼能诱导肝癌细胞株MHCC97-H 的凋亡,肝癌细胞增殖抑制率与时间 和剂量呈正相关。经索拉非尼作用后PRL-3 蛋白也出现不同程度下降,肝癌细胞侵袭能力明显下降。结论 索拉非尼能降低MHCC97-H 肝癌细胞株中PRL-3 蛋白表达水平,降低肿瘤细胞侵袭力,从而诱导肝癌细胞 凋亡;索拉非尼降低癌细胞的侵袭可能是通过下调PRL-3 蛋白进行。     

JWA抑制人肝癌细胞的黏附和迁移侵袭潜能

探讨JWA蛋白在人肝癌细胞黏附和迁移侵袭过程中的作用?方法:应用小干扰RNA下调低转移潜能人肝癌细胞株MHCC97L中JWA蛋白表达水平,MTT法检测MHCC97L增殖;应用细胞小室检测MHCC97L在JWA不同蛋白水平时的迁移及侵袭潜能变化;黏附试验检测MHCC97L细胞黏附能力变化?结果:研究发现人肝癌细胞株MHCC97L中的JWA表达水平下降后,肝癌细胞迁移及侵袭能力明显增强,细胞对细胞外基质纤维连接蛋白的黏附力增加?结论:RNA干扰JWA引起肝癌细胞的JWA蛋白表达水平下降,导致肝癌细胞的黏附?迁移及侵袭能力增强,结果提示JWA可能抑制人肝癌细胞侵袭和转移?     

KAI1基因对MHCC97-H肝癌细胞粘附力的影响

目的探讨KAI1基因对MHCC97-H肝癌细胞粘附力的影响,从而推测KAI1基因影响MHCC97-H肝癌细胞侵袭转移的机制.方法采用微管吸吮技术研究我们前已转染人类KAI1全长正、反义结构基因的人肝癌MHCC97-H细胞粘附力.结果在纤维连接蛋白(fibronectin,FN)裱衬表面,利用微管吸吮系统测得的各组肝癌细胞的粘附力分别为MHCC97-H-S组(678.4±101.8),MHCC97-H-AS组(1 083.6±113.8),MHCC97-H-pCI组(853.0±105.4)及MHCC97-H亲本细胞组(834.6±130.5)(单位为10-10N,细胞数为25).与MHCC97-H亲本细胞组比较,MHCC97-H-S组细胞对FN的粘附力显著下降(P＜0.01),MHCC97-H-AS组细胞对FN的粘附力显著增加(P＜0.01),而MHCC97-H-pCI组细胞对FN的粘附力无明显变化(P＞0.05).结论KAI1基因可能降低肝癌细胞对细胞外基质FN的粘附力,从而抑制转移的初始步骤,进而抑制MHCC97-H肝癌细胞的侵袭和转移.     

生长抑素类似物对人肝癌细胞株MHCC97-H的影响

目的:探讨生长抑素类似物奥曲肽对人高转移潜能肝癌细胞株MHCC97-H的影响及可能机制.方法:MHCC97-H肿瘤组织种植于裸鼠肝脏建立肝癌动物模型27只,随机分为3组:阴性对照组和小、大剂量干预组,同等条件下饲养35d,记录动物模型生存期,死亡时质量;观察肝脏,肺脏病理改变;免疫组化方法检测肝脏肿瘤组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达变化.结果:奥曲肽干预组动物模型较阴性对照组动物模型死亡时平均体重增加,肝癌转移率下降(P＜0.05);干预组间对比未见统计学差异(P＞0.05);免疫组化显示干预组肝脏肿瘤细胞MMP-2表达较阴性对照组下调(P＜0.05);干预组组间比较未见统计学差异(P＞0.05).结论:奥曲肽可改善荷MHCC97-H细胞裸鼠肝癌模型生存质量,抑制MHCC97-H细胞肺转移,下调肿瘤组织MMP-2的表达是奥曲肽抑制MHCC97-H细胞侵袭转移的可能机制之一.     

Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1促进肝癌细胞的转移

目的:探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)在肝癌中的表达及在肝癌侵袭中的作用?方法:荧光定量PCR(real-time PCR)检测肝癌及癌旁组织中ROCK1的mRNA表达水平,同时检测肝癌细胞系及正常人肝细胞中ROCK1mRNA表达水平,免疫组织化学染色(IHC)法检测肝癌及癌旁组织中ROCK1蛋白的表达量,并通过在肝癌细胞株中过表达及干扰ROCK1分析ROCK1蛋白对肝癌细胞转移的作用?结果:60对样本中有42对ROCK1的mRNA表达水平在肝癌组织中高于癌旁组织,免疫组织化学染色提示肝癌组织中ROCK1蛋白表达量高于癌旁组织?在体外肝癌细胞的功能实验中,过表达ROCK1能促进HepG2细胞的侵袭和转移,而干扰ROCK1的表达能减少SMMC-7721细胞的侵袭和转移?结论:ROCK1在肝癌组织中高表达,过表达ROCK1能促进肿瘤的侵袭及转移,ROCK1可能成为临床治疗中抑制肿瘤侵袭和转移的靶点?     

CXCR4在不同转移潜能肝癌细胞中的表达及意义

  目的研究趋化因子受体CXCR4在高、低转移潜能肝癌细胞中的表达,并探讨其在肝癌细胞增殖和侵袭转移过程中的作用。方法 利用3B肝癌细胞株对人工基底膜穿透能力的差异获得不同转移潜能肝癌细胞亚系,并通过transwell小室侵袭实验比较两细胞亚系的侵袭能力从而对其进行验证, 应用RT-PCR和Western Blot检测CXCR4在两细胞亚系中的表达。CCK8法检测两细胞亚系生长曲线和倍增时间,流式细胞仪检测两细胞亚系细胞周期和凋亡率。结果成功筛选出高、低转移潜能肝癌细胞亚系,并通过transwell小室侵袭实验证实高转移潜能肝癌细胞的侵袭能力高于低转移潜能肝癌细胞;RT-PCR和Western Blot均显示高转移潜能肝癌细胞在基因水平和蛋白水平的CXCR4表达均显著高于低转移潜能肝癌细胞;且两细胞亚系体外生长速度、倍增时间、细胞周期和凋亡率均具有明显差异。结论上述结果表明CXCR4在肝癌进展中发挥了重要的作用,可能为未来肝癌的诊疗提供理论依据。     

AEG-1对裸鼠肝癌模型中肝癌细胞生长及肺转移的影响

摘要:目的 研究过表达和沉默 AEG-1基因对肝癌细胞生长的影响,以及 AEG-1基因在调节肝癌细胞定向肺转移 中的作用。方法 分别以携带过表达 AEG-1序列及对照基因序列的慢病毒(lentivirus)转染 SMMC-7721肝癌细胞株 (SMMC-7721-AEG-1-L;SMMC-7721-control-L);以携带shRNAAEG-1及对照shRNA 质粒(plasmid)转染SMMC-7721 细胞株(SMMC-7721-shAEG-1-P;SMMC-7721-control-P);使用实时定量 PCR 和 Westenblot检测 AEG-1的表达;随后 使用荧光素酶基因慢病毒包装颗粒转染上述4种稳定转染细胞株。使用上述细胞株分别建立3种裸鼠肝癌模型:皮下 移植瘤模型,原位移植瘤模型和血行播散模型;每种细胞株每一模型5只 Balb-c裸鼠,共60只。建立皮下移植瘤模型, 观测肿瘤的生长情况并绘制肝细胞肿瘤生长曲线;建立肝癌原位移植瘤和血行播散模型,采用生物发光活体成像技术及 组织病理学方法监测造模成功率及肿瘤在肝内、肝外转移情况。结果 通过肝癌皮下移植瘤模型可观察到 AEG-1过表 达组肿瘤体积显著高于对照组,且裸鼠肝脏组织出现弥漫性侵袭转移灶;在肝癌原位移植瘤和血行播散模型中可观察到 AEG-1过表达/沉默可以导致肝癌细胞肝内转移、肺转移率和转移灶数量显著增高/降低。结论 过表达 AEG-1基因可 促进肝癌细胞生长以及定向肺转移,沉默 AEG-1基因抑制肝癌细胞生长及定向肺转移。     

miR-30c减轻肝细胞肝癌的侵袭与转移

目的:观察miR-30c/snail在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达并探讨其在肝癌侵袭中的作用?方法:定量PCR检测肝癌及肝癌细胞系中miR-30c/snail的mRNA表达水平,通过免疫组织化学和Western blot分别检测肝癌及肝癌细胞系中snail的蛋白表达水平,并在肝癌细胞株中转染miR-30c模拟物或抑制物,分析其对肝癌细胞侵袭的作用?结果:与无脉管转移组相比,miR-30c在有脉管转移组的HCC组织中表达明显下调,同时在高转移肝癌细胞株MHCC-97H中也有相似的结果?转染miR-30c模拟物可减少snail的表达,并减少MHCC-97H细胞的侵袭性,然而,转染miR-30c抑制剂则增加snail的蛋白水平,增加HepG2细胞的侵袭力?结论:上调miR-30c的表达通过直接抑制snail,可减弱HCC的侵袭性?一种新的针对miR-30c的治疗策略可能有利于伴侵袭转移的HCC患者?     

三羟基异黄酮对肝癌细胞侵袭转移能力的影响

目的探讨三羟基异黄酮（Genistein）对肝癌细胞侵袭转移能力的影响及其机制.方法以人高转移肝细胞癌细胞系HCCLM3为研究对象,用细胞基质粘附实验检测Genistein对肝癌细胞基质粘附能力的影响,Transwell小室侵袭运动实验检测Genistein对肝癌细胞侵袭、运动能力的影响.免疫细胞化学法检测肝癌细胞MMP-2蛋白表达.结果 Genistein能抑制肝癌细胞对FN和Marigel胶的粘附;Genistein能抑制肝癌细胞在Transwell小室中的侵袭运动;Genistein处理组肝癌细胞MMP-2蛋白表达较对照组降低.结论 Genistein能抑制肝癌细胞的侵袭转移,其机制之一可能在于Genistein能抑制肝癌细胞MMP-2蛋白表达.     

血小板衍生生长因子-BB激活Rac1对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖与迁移的影响

目的 探讨Rac1活化在血小板衍生生长因子(PDGF-BB)刺激引起的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖与迁移中的作用.方法 贴块法分离培养主动脉平滑肌细胞,CCK8法和Transwell小室检测Rac1抑制剂NSC23766和Rac1siRNA对PDGF-BB诱导的平滑肌细胞增殖和迁移的影响.GST-pulldown法和免疫印迹(Western印迹)检测PDGF-BB对Rac1活性和pi-JNK表达的时间特性以及NSC23766和Rac1 siRNA对Rac1活性和pi-JNK表达的影响.结果 PDGF-BB(50 μg/L)显著促进了大鼠主动脉平滑肌细胞的增殖和迁移.在给予不同浓度NSC23766( 25、50、100 μg/L)以及Rac1 siRNA( 50 nmol/L)后,其增殖和迁移显著受到了抑制.PDGF-BB刺激后Rac1活性和pi-JNK逐渐升高,并分别在5 min和15 min达到最高峰后下降.给予NSC23766和Rac1 siRNA处理后Rac1活性(5 min)和pi-JNK( 15 min)表达均明显受到了抑制.结论 Rac1活性影响JNK磷酸化并在调节PDGF-BB诱导的主动脉平滑肌细胞增殖与迁移中起着重要的作用.     

Effect of Calmodulin and Voltage-dependent Ca~(2+) Channel on the Proliferation of Heptoma Cells Induced by Epidermal Growth Factor

Epidermal growth factor(EGF) has been impli-cated as a hepatotrophic factor during liver regenera-tion.EGF plays a role in the proliferation of hep-atoma cells.In general,EGF induces tumor cells di-vision and proliferation through a series of signaltransduction by binding with EGF receptor(EGFR)and activate its thyrosine protein kinase and therebyinducing phosphoration of itself and its protein sub-strate[1] .This postreceptorsingnal transduction isas-sociated with phosphoylinositolpathw…     

GSTθ高表达对肝癌7721细胞的生长及侵袭性的影响

目的探讨增加GSTθ表达水平对人类肝癌7721细胞生长及侵袭能力的影响。方法通过脂质体Lipo-fectAMINE将pcDNA3-GSTθ真核质粒载体转染获得高GSTθ表达水平的7721稳定转染细胞;采用RT-PCR检测GSTθmRNA的表达水平;采用细胞记数法测定细胞的生长;采用Boyden小室方法观察细胞侵袭能力的改变。结果 GSTθ高水平表达对7721细胞的生长无明显影响,但使7721细胞的侵袭能力下降。结论本实验证实了在7721细胞中,GSTθ高水平表达可以降低细胞的侵袭能力。     

干扰SIRT7抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力

目的：研究干扰SIRT7对甲状腺癌细胞BCPAP的体外增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法：通过慢病毒构建干扰SIRT7的甲状腺癌BCPAP的稳定株,并在mRNA和蛋白水平验证干扰效果,然后通过CCK-8、细胞划痕、细胞迁移和细胞侵袭实验来研究SIRT7对甲状腺癌细胞BCPAP体外增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果：成功构建干扰SIRT7的甲状腺癌细胞BCPAP的稳定株;干扰SIRT7之后,甲状腺癌细胞BCPAP的体外增殖活力显著降低,划痕愈合能力、细胞迁移和侵袭能力也明显减弱,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：SIRT7可能在甲状腺癌中扮演了癌基因的角色,并且SIRT7可能是甲状腺癌一个潜在的治疗靶点。     

CHFR基因在人肝癌HepG2细胞中的表达与作用

目的:研究CHFR基因在人肝癌细胞株HepG2中的表达,以及CHFR基因甲基化对HepG2细胞生长与集落形成的影响。方法:采用去甲基化剂5-氮-2-脱氧胞苷处理人肝癌细胞株HepG2,半定量RT-PCR检测CHFR在HepG2细胞中的表达变化,CCK法和平板集落形成试验分析HepG2细胞生长增殖情况的改变。结果:CHFR在HepG2细胞中表达缺失;经Aza去甲基化处理后,CHFR在HepG2细胞中逐渐恢复表达,肿瘤细胞抑制率和集落形成抑制率都逐渐增高,均存在剂量-反应关系;且CHFR表达水平与HepG2细胞抑制率、集落形成抑制率均呈正相关。结论:CHFR对于肝癌细胞的生长增殖能力发挥负向调控作用。     

PAK5在肿瘤组织中的研究进展

PAK5为PAKs (p21活化的激酶)家族中新近发现的成员,PAKs在细胞骨架重组、细胞增殖、细胞侵袭转移、基因转录及细胞凋亡等一系列的细胞功能中发挥着重要的调控作用.PAKs是一类高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,通过与Rac和Cdc42结合而激活发挥作用.PAKs作为小G蛋白Rho家族的下游靶蛋白,可被生长因子及其他胞外信号活化.近来研究表明,PAK5在神经源性肿瘤、胃肠癌、骨肉瘤及卵巢上皮癌等过表达.本文就PAK5的结构、表达部位和功能及影响肿瘤细胞增殖、侵袭、转移和凋亡,影响肿瘤耐药的作用等方面综述.     

肝癌细胞中XAGE-1b的表达和意义

目的研究XAGE-1b在肝癌细胞中的表达情况,探讨其对肝癌细胞的生物行为影响。方法运用实时荧光定量PCR方法检测38例肝癌病理组织以及42例癌旁组织的XAGE-1b的基因表达水平。结果 XAGE-1b在肝癌组织中表达值为(9.139±0.768),在癌旁组织中表达值为(2.078±0.646),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 XAGE-1b在肝癌发生、发展过程中可能起重要作用,有望成为反映肝癌肿瘤恶性程度及预后判断的标记物,并成为分子靶向药物治疗的靶点。     

番荔枝内酯单体Desacetyluvaricin对肝癌细胞株生长和凋亡的影响

 [目的]探讨Desacetyluvaricin在体外对肝癌HpG2.2.15细胞株生长和凋亡的作用及机制。[方法]处于生长期的人肝癌HepG2.2.15细胞分为3组：对照组,Desacetyluvaricin组和顺铂组。用MTT法检测各组肿瘤细胞增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞周期、细胞调亡以及凋亡基因Fas的表达情况,比较Desacetyluvaricin与顺铂的疗效。[结果]Desacetyluvaricin对肝癌细胞增殖的抑制率高达62.2%。Desacetyluvaricin抑制肝癌细胞增殖的机制可能为阻滞肝癌HepG2.2.15细胞从G1期进入S期,从而抑制了肿瘤细胞的增殖,同时通过促进Fas表达,诱导HepG2.2.15细胞凋亡。其诱导Fas表达的效果还优于顺铂。[结论]Desacetyluvaricin可能通过延缓细胞G1期及诱导细胞凋亡等机制,对肝癌细胞的增殖有一定的抑制作用。     

SOD模拟化合物对人离体肝癌细胞内源SOD活力的影响

目的研究SOD模拟化合物(models ofsuperoxide dismutase,MSOD)对人肝癌细胞增殖的影响、细胞内外环境SOD活力和蛋白含量变化.方法采用离体培养的人肝癌细胞SSMC-7721细胞株,加入SOD模拟化合物.结果模拟化合物[Mn(EDTB)(AC)(AC)]具有SOD酶的活性,并能通过SSMC-7721肝癌细胞膜进入细胞内,使细胞内SOD的活力上升,抑制肝癌细胞的增殖.结论 MSOD可以改变肿瘤细胞内的氧化还原水平,此研究将对抗癌药物的研究具有重要意义.     

siRNA-FAM92A1-289对HeLa细胞增殖的影响

目的:研究RNA干扰(RNAi)沉默基因FAM92A1-289对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法:化学合成法合成小干扰RNA(siRNA),阳离子脂质体转染FAM92A1-289 HeLa细胞;实时定量RT-PCR检测其mRNA表达,MTT法和流式细胞仪检测转染后HeLa细胞增殖、细胞周期和凋亡变化。结果:转染合成FAM92A1-289 siRNA后,HeLa细胞中FAM92A1-289 mRNA表达下降(P<0.01),细胞增殖均明显增强(P<0.01);细胞周期分布改变,S期细胞明显增多,而G2/M期细胞减少,凋亡率无变化。结论:FAM92A1-289基因调节细胞增殖活动。