增殖细胞核抗原基因反义RNA表达质粒的构建及对人胃癌细胞的抑瘤效应

目的观察增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）基因反义ＲＮＡ表达质粒对人胃癌细胞生长特性的影响，探讨其抗肿瘤作用。方法用ＤＮＡ重组方法将人ＰＣＮＡ基因反向克隆到真核表达质粒ｐＤＯＲｎｅｏ中，构建成人ＰＣＮＡ基因真核表达质粒ｐＤＲＰＣＮＡ，用脂质体介导转染人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１。结果经Ｇ４１８筛选获得转染细胞ＳＧＣ／ＰＣＮＡ，与亲本细胞相比，其生长速度减慢，ＲＮＡ、蛋白质的生物合成受到抑制，Ｓ期、Ｇ２／Ｍ期ＤＮＡ含量降低。结论ＰＣＮＡ基因反义ＲＮＡ对胃癌细胞的生长具有明显的抑制作用。     

表皮生长因子受体反义RNA抑制胶质瘤细胞生长增殖的体外试验

目的：研究表皮生长因子受体基因对于胶质瘤发生发展的作用，探索以ＥＧＦＲ反义ＲＮＡ进行反义基因治疗胶质瘤的可行性。方法：将含ＥＧＦＲ反义ＲＮＡ的质粒通过脂质体介导转入Ｃ６恶性胶质瘤细胞，通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交鉴定外源基因整合情况，ＭＴＴ法测定细胞存活率，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交、细胞原位ｍＲＮＡ杂交及ＥＧＦＲ免疫组化染色检测ＥＧＦＲｍＲＮＡ及蛋白表达，核仁组成区相关嗜银蛋白染色（ＡｇＮＯＲ计数）检测细胞增殖活性。结果：Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交表明外源性反义ＥＧＦＲ基因（互补于ＥＧＦＲ基因全长及３端部分序列）分别在Ｃ６细胞中整合（分别命名为Ｃ－ｐＲ１和Ｃ－ｐＲ３），通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交、原位杂交及细胞免疫组织化学检测均显示转染ＥＧＦＲ反义ＲＮＡ的Ｃ６细胞比转染前ＥＧＦＲｍＲＮＡ水平及ＥＧＦＲ蛋白水平有不同程度的降低。表达高水平反义ＲＮＡ的克隆在培养状态下细胞增殖活性较对照组有明显下降。结论：ＥＧＦＲ在恶性胶质瘤细胞的发生发展过程中起十分关键的作用，ＥＧＦＲ有可能成为基因治疗恶性胶质瘤的优选靶的之一。     

反义硫代寡核苷酸对人脑胶质瘤细胞系转化生长因子α基因表达及生长抑制作用的研究

目的研究转化生长因子α（ＴＧＦα）反义寡核苷酸对人脑胶质瘤细胞系中该ＴＧＦα基因表达的作用。方法采用人工合成反义、正义及随机三组硫代脱氧寡核苷酸（ＳＯＮ）经阳性脂质体包裹后转染人脑胶质瘤ＴＪ９０５细胞系。用细胞计数检测转染后瘤细胞的生长抑制率，用细胞原位ＲＮＡ杂交与免疫组化方法检测ＴＧＦαｍＲＮＡ及蛋白的表达水平。结果ＴＧＦα反义ＳＯＮ可抑制ＴＪ９０５细胞系的生长和ＴＧＦαｍＲＮＡ及其蛋白的表达。结论ＴＧＦα反义ＳＯＮ能够抑制人脑胶质瘤ＴＪ９０５细胞系ＴＧＦαｍＲＮＡ及其蛋白的表达，同时细胞的生长受到明显抑制。     

bcl-2反义基因调控对人宫颈癌裸鼠移植瘤体内治疗的探讨

ｂｃｌ－２基因与宫颈癌关系密切，本研究采用回体转移法（Ｅｘ ｖｉｖｏ）和活体直接转移法（Ｉｎ ｖｉｖｏ）观察反义ＯＤＮ及反义ＲＮＡ作用于移植瘤的治疗效果。１材料与方法１．１一般资料 硫代磷酸修饰ｂｃｌ－２脱氧寡核苷酸（上海生工生物工程有限公司），反义链（ＡＯＤＮ）５＇－ＣＡＧＣＧＴＧＣＧＣＣＡＴＣＣＴＴＣＣＣ—３＇；无义链（ＮＯＤＮ）５＇－ＴＣＧＣＣＡＣＴＣＧＡＴＣＣＴＧＣＣＣＧ—３＇。含反义 ｂｃｌ－２ ｃＤＮＡ部分序列（６２２ｂｐ）的质粒ｐＤＯＲ－ＡＢ（７．１２ｋｂ）由第四军医大学王成济教授惠赠…     

反义转染细胞HL^R60—9的c—myc基因表达及其生物大分子的…

作者构建了体外能双向转录ｃ－ｍｙｃ基因的重组质粒ＰＧＣ，以制备ＲＮＡ探针用于检测ｃ－ｍｙｃ反义ＲＮＡ转染细胞ＨＬ＾Ｒ６０－９的ｃ－ｍｙｃ及反义ＲＮＡ表达，结果显示，Ｃｄ＾２＋诱导的ＨＬ＾Ｒ６０－９细胞的ｃ－ｍｙｃ反义ＲＮＡ表达随Ｃｄ＾２＋浓度及作用时间的增加而增强，但ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达在诱导过程中逐渐减少，两者变化呈镜相关系。免疫组化法未能检出ｃ－ｍｙｃＰ６２蛋白的表达，＾３Ｈ－ＴｄＲ，＾３Ｈ     

反义转染细胞HL_（60）~R－9的c-myc基因表达及其生物大分子的生物合成

作者构建了体外能双向转录ｃ－ｍｙｃ基因的重组质粒ＰＧＣ，以制备ＲＮＡ探针用于检测ｃ－ｍｙｃ反义ＲＮＡ转染细胞ＨＬＲ６０－９的ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ及反义ＲＮＡ表达。结果显示，Ｃｄ２＋诱导的ＨＬＲ６０－９细胞的ｃ－ｍｙｃ反义ＲＮＡ表达随Ｃｄ２＋浓度及作用时间的增加而增强，但ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达在诱导过程中逐渐减少，两者变化呈镜相关系。免疫组化法未能检出ｃ－ｍｙｃＰ６２蛋白的表达。３Ｈ－ＴｄＲ、３Ｈ－ＵＲ及３Ｈ－Ｌｅｕ掺入试验表明其ＤＮＡ、ＲＮＡ及蛋白质生物合成明显抑制。以上结果表明，ＨＬＲ６０－９细胞的恶性表型逆转及现所示的大分子生物合成抑制，与ｃ－ｍｙｃ反义ＲＮＡ阻断了ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达有关。     

c－ets－2、c－myc、N－ras三个癌基因联合反义RNA对肝癌细胞恶性表型的逆转

作者构建了一个能表达ｃ－ｅｔｓ－２、ｃ－ｍｙｃ及Ｎ－ｒａｓ三个癌基因联合反义ＲＮＡ的重组逆转录病毒载体，经病毒包装细胞ＰＡ３１７包装成假型逆转录病毒，利用此病毒成功地感染了人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１，经Ｇ４１８筛选得到Ｇ４１８抗性细胞，基因组ＤＮＡ杂交结果表明重组病毒稳定地整合入７７２１细胞基因组中。ＲＮＡ杂交结果表明转化细胞中有较高水平的联合反义ＲＮＡ表达。初步结果表明，反义ＲＮＡ使７７２１细胞生长速率下降约７０％，软琼脂集落形成能力及裸鼠致瘤能力显著下降。这一结果表明，针对多个癌基因的联合反义ＲＮＡ可能给肿瘤基因治疗提供新的途径，有进一步探索的价值。     

p53反义RNA对肠癌细胞恶性表型的抑制作用

研究ｐ５３反义ＲＮＡ对大肠癌细胞中突变型ｐ５３致癌性的抑制效应,为肿瘤基因治疗提供新思路。方法２．１ｋｂ的人ｐ５３全长ｃＤＮＡ反向插入哺乳动物表达载体ｐＲＥＰ９,得到ｐ５３反义ＲＮＡ表达载体ｐＲＥＰ９－ｐ５３（ＡＳ）,并将其导入人肠癌细胞株ＳＷ１１１６（内源性突变型ｐ５３）,采用ＭＴＴ和ＦＣＭ方法测定ｐＲＥＰ９－ｐ５３（ＡＳ）表达的ｐ５３反义ＲＮＡ对ＳＷ１１１６细胞生长的影响。结果带有ｐＲＥＰ９－ｐ５３（ＡＳ）的ＳＷ１１１６细胞,与对照组ＳＷ１１１６细胞和带ｐＲＥＰ９空载体的ＳＷ１１１６细胞相比,由于ｐ５３反义ＲＮＡ的表达,其增殖速度显著下降,ＦＣＭ的结果也证明带ｐＲＥＰ９－ｐ５３（ＡＳ）的细胞部分受阻于Ｇ０／１期,而带ｐＲＥＰ９空载体的细胞则无明显变化。结论ｐ５３反义ＲＮＡ可以有效地抑制大肠癌细胞中突变型ｐ５３的致癌性,可用于实验性肿瘤基因治疗研究     

HSP90β蛋白低调肿瘤细胞系的建立 *

目的：通过转染ＨＳＰ９０β反义核酸重组子ｐｃＤＮＡ－ＨＳＰ９０于４株人消化系肿瘤细胞系,以建立ＨＳＰ９０β蛋白低调肿瘤细胞系,并研究ＨＳＰ９０β蛋白低调后细胞的生长情况。方法：用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ介导将ｐｅＤＮＡ－ＨＳＰ９０转染人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１、人胃癌多药耐药细胞系ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ、人肝癌细胞系ＨＣＣ７４０２及人食道癌细胞系Ｅｃ１０９,用Ｇ４１８进行筛选,用ＲＮＡ酶保护分析法鉴定ＨＳＰ９０β反义核酸的表达,用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法检测ＨＳＰ９０β蛋白的表达。用细胞生长曲线研究基因转染细胞的生长情况。结果：ｐｃＤＮＡ－ＨＳＰ９０转染细胞ＡＨ－ＳＧＣ７９０１,ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ,ＡＨ－ＨＣＣ７４０２及ＡＨ－Ｅｃ１０９有ＨＳＰ９０β反义ＲＮＡ表达,这些细胞ＨＳＰ９０β蛋白表达低调。研究还发现这些细胞的生长受到不同程度的抑制,其中ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ及ＡＨ－Ｅｃ１０９细胞受抑程度更明显。结论：ｐｃＤＮＡ－ＨＳＰ９０转染细胞ＡＨ－ＳＧＣ７９０１,ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ,ＡＨ－ＨＣＣ７４０２及ＡＨ－Ｅｃ１０９　ＨＳＰ９０β蛋白表达降低,细胞的生长受到不同程度的抑制。     

REVERSION OF MALIGNANT PHENOTYPES OF HUMAN LUNG SQUAMOUS CARCINOMA CELLS BY ORNITHINE DECARBOXYLASE ANTISENSE RNA

ＲＥＶＥＲＳＩＯＮＯＦＭＡＬＩＧＮＡＮＴＰＨＥＮＯＴＹＰＥＳＯＦＨＵＭＡＮＬＵＮＧＳＱＵＡＭＯＵＳＣＡＲＣＩＮＯＭＡＣＥＬＬＳＢＹＯＲＮＩＴＨＩＮＥＤＥＣＡＲＢＯＸＹＬＡＳＥＡＮＴＩＳＥＮＳＥＲＮＡＧｕａｎＪｕｎ关钧，ＦａｎＭｕｚｈｅｎ范慕贞，Ｃａｏ...     

A STUDY OF THE TNM STAGING SYSTEM FOR NASOPHARYNGEAL CARCINOMA (NPC)

ＡＳＴＵＤＹＯＦＴＨＥＴＮＭＳＴＡＧＩＮＧＳＹＳＴＥＭＦＯＲＮＡＳＯＰＨＡＲＹＮＧＥＡＬＣＡＲＣＩＮＯＭＡ（ＮＰＣ）ＬｉＣｈａｎｇｑｉｎｇ；李长青ＬｉａｏＬｉｎｇｘｉａ；廖玲霞（ＨｕｂｅｉＣａｎｃｅｒＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｗｕｈａｎ，４３００７０）Ａｂｓ...     

ＲｈｏＡ小干扰ＲＮＡ抑制乳腺癌细胞株ＭＣＦ-７及其裸鼠皮下移植瘤的实验研究

目的　观察ＲｈｏＡ小干扰ＲＮＡ（ｓｉＲｈｏＡ）对乳腺癌细胞株ＭＣＦ-７增殖、迁移、周期和凋亡的影响以及对裸鼠移植瘤生长的影响。方法　ｓｉＲｈｏＡＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００介导下转染乳腺癌细胞ＭＣＦ-７,转染４８ｈ后,采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ技术检测ＲｈｏＡ蛋白的表达,ＭＴＴ实验检测ｓｉＲｈｏＡ转染细胞的增殖变化,损伤刮擦实验检测ｓｉＲｈｏＡ转染细胞的迁移能力,流式细胞仪检测ｓｉＲｈｏＡ转染细胞的周期和凋亡,裸鼠移植瘤实验检测ｓｉＲｈｏＡ对肿瘤生长的影响。结果　成功转染ｓｉＲｈｏＡ的肿瘤细胞,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ显示ＲｈｏＡ蛋白表达在ＭＣＦ-７细胞中明显下降;ｓｉＲｈｏＡ对ＭＣＦ-７细胞的增殖、迁移均有显著的抑制作用并能促进肿瘤细胞凋亡及细胞周期中Ｓ期细胞减少,Ｇ１／Ｇ０期细胞增加;裸鼠移植瘤内重复注射ｓｉＲｈｏＡ后肿瘤生长明显减缓。结论　ｓｉＲｈｏＡ能够明显抑制ＲｈｏＡ基因在乳腺癌细胞ＭＣＦ-７中的表达,部分逆转ＭＣＦ-７的恶性生物学行为并抑制裸鼠移植瘤的生长。     

表皮生长因子受体反义cDNA对C6鼠脑胶质瘤体内治疗的研究

目的研究表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）反义ｃＤＮＡ对Ｃ６鼠脑胶质瘤的体内治疗效果。方法将野生型及已转染ＥＧＦＲ反义ｃＤＮＡ的Ｃ６鼠胶质瘤细胞接种于鼠脑右侧尾状核（对照组８只,转染组６只）,并对鼠脑内已形成的Ｃ６胶质瘤用脂质体包裹的ＥＧＦＲ反义ｃＤＮＡ瘤区原位注射（治疗组９只）。观察各组大鼠的一般情况、生存期、肿瘤病理学和磁共振成像（ＭＲＩ）动态改变,采用Ａｇ－ＮＯＲ计数、ＴＵＮＥＬ法检测肿瘤细胞增殖活性及凋亡。结果对照组８只大鼠平均生存期为１７．３天,转染组６只及治疗组６只大鼠生存期明显延长,除因病理检查人为处死外,无自然死亡,存活期超过２００天。ＭＲＩ检查对照组大鼠脑内有明显瘤灶,转染组大鼠未形成瘤灶,治疗组大鼠脑内瘤灶治疗后消失,均与病理学检查结果一致。而且治疗组大鼠Ｃ６细胞增殖活性降低,大量细胞凋亡,ＥＧＦＲ表达减少。结论ＥＧＦＲ可望成为基因治疗的优选靶基因     

RESEARCH ON SERUM LEVELS OF RETINOL，α－TOCOPHEROL β－CAROTENE，AND 12 ELEMENTS IN GASTRIC DYSPLASIA AND GASTRIC CANCER PATIENTS

ＲＥＳＥＡＲＣＨＯＮＳＥＲＵＭＬＥＶＥＬＳＯＦＲＥＴＩＮＯＬ，α－ＴＯＣＯＰＨＥＲＯＬβ－ＣＡＲＯＴＥＮＥ，ＡＮＤ１２ＥＬＥＭＥＮＴＳＩＮＧＡＳＴＲＩＣＤＹＳＰＬＡＳＩＡＡＮＤＧＡＳＴＲＩＣＣＡＮＣＥＲＰＡＴＩＥＮＴＳＣｈｅｎｇＷｕｆｅｎｇ；程五凤；...     

PREVENTIVE DETECTION OF FUNGI AND MYCOTOXINS IN CORN FROM HIGH RISKAREA OF ESOPHAGEAL CANCER IN CIXIAN COUNTY

ＰＲＥＶＥＮＴＩＶＥＤＥＴＥＣＴＩＯＮＯＦＦＵＮＧＩＡＮＤＭＹＣＯＴＯＸＩＮＳＩＮＣＯＲＮＦＲＯＭＨＩＧＨＲＩＳＫＡＲＥＡＯＦＥＳＯＰＨＡＧＥＡＬＣＡＮＣＥＲＩＮＣＩＸＩＡＮＣＯＵＮＴＹＺｈａｎｇＸｉａｎｇｈｏｎｇ；张祥宏；ＸｉｅＴｏｎｇｘｉｎ；谢同...     

关于鼻咽癌TNM临床分期的修改建议

关于鼻咽癌ＴＮＭ临床分期的修改建议胡心传ＰＲＯＰＯＳＡＬＯＮＭＯＤＩＦＩＥＤＴＮＭＳＴＡＧＩＮＧＳＹＳＴＥＭＦＯＲＮＡＳＯＰＨＡＲＹＮＧＥＡＬＣＡＲＣＩＯＮＭＡ（ＮＰＣ）￥ＨｕＸｉｎ－ｃｈｕａｎ（ＨｕｂｅｉＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＣａｎｃｅｒＨｏｓｐｉｔ...     

反义c—myc寡核苷酸抑制人肝癌细胞SMMC—7721生长

用逆转录病毒载体将反义ｃ ｍｙｃ质粒通过ＰＡ317包装后转染人肝癌细胞 ,能够抑制人肝癌细胞的生长[1 ] ,本研究采用反义ｃ ｍｙｃ核酸技术初步观察了反义ｃ ｍｙｃ寡核苷酸(ＯＤＮ)对人肝癌细胞ＳＭＭＣ 772 1生长的抑制作用。材料和方法一　寡核苷酸的合成及修饰　正义、错配及反义ｃ ｍｙｃＯＤＮ(均为 15 ｍｅｒ)的合成和硫代磷酸化修饰均由上海生物工程公司完成。二　人肝癌细胞ＳＭＭＣ 772 1培养和基因转染　人肝癌细胞ＳＭＭＣ 772 1在 37℃、5 %ＣＯ2 条件下 ,用 10 %胎牛血清(ＦＢＳ) 16 40液进行培养。选取对数生长期ＳＭＭＣ …     

mrp反义RNA逆转胃癌细胞系SGC7901对VCR的耐受性

目的：探讨以多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）作为靶分子进行胃癌多药耐药基因治疗的可行性。方法：采用已构建成功的ｍｒｐ反义ＲＮＡ真核载体ｐｃＤＮＡ－Ａｍｒｐ转染胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１,用Ｇ４１８抗性筛选出稳定细胞克隆,命名为Ｍ－ＳＧＣ７９０１;用＾３２Ｐ标记的寡核苷酸探针打点杂交检测Ｍ－ＳＧＣ７９０１细胞中ｍｒｐ ｍＲＮＡ表达的变化;从细胞生长曲线中,观察Ｍ－ＳＧＣ７９０１细胞生长速度的变化;经０．００     

GST-π EXPRESSION IN TRANSFORMED CELLS BY TRANSFECTING OF DNA ISOLATED FROM HUMAN FETAL LUNG TISSUES TREATED WITH CARCINOGENS

ＧＳＴπＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＩＮＴＲＡＮＳＦＯＲＭＥＤＣＥＬＬＳＢＹＴＲＡＮＳＦＥＣＴＩＮＧＯＦＤＮＡＩＳＯＬＡＴＥＤＦＲＯＭＨＵＭＡＮＦＥＴＡＬＬＵＮＧＴＩＳＳＵＥＳＴＲＥＡＴＥＤＷＩＴＨＣＡＲＣＩＮＯＧＥＮＳＹａｏＤｅｎｇｇａｏ姚登高ＨｕＧｕ...     

人肿瘤裸鼠移植瘤株模型转移抑制基因nm23-H1mRNA的表达

目的ｎｍ２３基因与肿瘤移植瘤株转移的关系。方法应用地高辛标记的ｎｍ２３┐Ｈ１反义ｃＲＮＡ探针原位杂交方法对人克隆化肝癌，人骨肉瘤，肾癌三种不同肿瘤的裸鼠移植瘤株模型（Ｈ┐ＣＳ，Ｍ┐ＯＳ，Ｍ┐ＲＣＣ）中瘤内ｎｍ２３┐Ｈ１进行检测。结果ｎｍ２３Ｈ１ｍＲＮＡ在三模型中均有不同程度快的表达，其中有较强转移能力的Ｈ┐ＣＳ，和潜伏期短、侵袭生长速度快的Ｍ┐ＲＣＣ杂交信号５０％为弱阳性，而Ｍ┐ＯＳ仅有２５％为弱阳性。结论ｎｍ２３的弱阳性表达可能和Ｈ┐ＣＳ生长速度及转移倾向有一定联系。