肝细胞癌肿瘤抑制基因p53过度表达及点突变的研究

应用一种敏感的ＡＲＦ免疫组经和ＰＣＲ、银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法检测了本地区３８例肝细胞癌组织中肿瘤抑制基因ｐ５３的过度表达及点突变，结果发现１６例有ｐ５３蛋白过度表达（４１．２％），７例有ｐ５３基因２４９位密码子点突变，２例２４９位密码子外第７外显子点突变。９例ｐ５３基因有突变的肝癌中８例ｐ５３蛋白阳性，两者符合率为８８．９％，ｐ５３基因蛋白过度表达和点突点与ＨＣＣ分化和转移有关。本组ＨＣＣ ｐ５     

银染PCR－SSCP法检测人纤维源性肿瘤p53基因点突变

应用银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法检测８７例良恶性人纤维源性肿瘤ｐ５３基因５～８号外显子点突变。结果显示：人纤维源性肿瘤ｐ５３基因总的点突变率为２１．８％，其中５、６、７、８号外显子所占百分率分别为７．７％、３８．５％、２６．９％和２６．９％。随着肿瘤恶性程度的增加，ｐ５３基因点突变增加。ｐ５３基因点突变与肿瘤的分化程度及转移有密切关系，ｐ５３基因点突变的检测有可能成为判断纤维源性肿瘤恶性程度，转移潜能及预后的一项指标。我们的结果还显示银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法是检测基因突变的有效、快速、简便的方法。     

银染PCR—SSCP法检测人纤维源性肿瘤p53基因点突变

应用银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法检测８７例良恶性人纤维源性肿瘤ｐ５３基因５￣８号外显子点突变。结果显示：人纤维源性肿瘤ｐ５３基因总的点突变率为２１．８％，其中５、６、７、８号外显子所占百分率分别为７．７％、３８．５％、２６．９％和２６．９％。随着肿瘤恶性程度的增加，ｐ５３基因点突变增加，ｐ５３基因点突变与肿瘤的分化程度及转移有密切关系，ｐ５３基因点突的检测有可能成为判断纤维源性肿瘤恶性程度，转移潜能及预     

p53基因突变及染色体倍性与大肠癌转移之间关系初探

目的研究大肠癌转移与ｐ５３基因突变及染色体倍性之间的关系。方法采用特异合成引物对ｐ５３基因的有关外显子进行ＰＣＲ扩增，结合单链构象多态性（ＳＳＣＰ）和银染技术，检测１５例大肠癌手术标本ｐ５３基因的突变；使用流式细胞仪（ＦＡＣＳ）分析其染色体的倍性。结果８例有转移灶大肠癌病人中７例表现有ｐ５３基因的突变，而７例未转移大肠癌病人只显示３例有ｐ５３基因的突变。异倍体的９例病人中７例有ｐ５３基因突变，二倍体的６例病人中有３例有ｐ５３基因突变。结论大肠癌转移与ｐ５３基因突变细胞染色体异倍性三者相互存在着密切联系     

P~(53)基因突变及P~(53)突变蛋白在卵巢上皮肿瘤中表达检测方法的探讨

采用改进的ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术和ＳＰ免疫组化技术检测３６例卵巢上皮癌，１２例卵巢上皮交界瘤和１５例良性卵巢上皮肿瘤的Ｐ５３基因的突变和突变蛋白的表达。结果卵巢上皮癌Ｐ５３基因突变率为３０．６％，突变蛋白表达为５８．４％。Ｐ５３基因突变主要发生在外显子５～８上，以第７外显子突变率最高。交界性肿瘤个别出现Ｐ５３基因突变和突变蛋白表达，而在良性肿瘤无一例出现。提示Ｐ５３基因突变是卵巢癌形成过程中的晚期事件。Ｐ５３基因突变可作为肿瘤标记物判定卵巢癌的预后。ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ非同位素基因突变技术克服了常规ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测方法的缺陷，可提高准确性。     

横纹肌肉瘤P53,MDM2基因及p53,p21,p185蛋白表达检测比较

目的：探讨ｐ５３、ｐ２１、ｐ１８５蛋白表达及ｐ５３、ＭＤＭ２基因与横纹肌肉瘤（ＲＭＳ）分化和预后的关系，并对几种检测方法进行了比较。方法：应用免疫组化方法检测ＲＭＳｐ５３、ｐ２１、ｐ１８５蛋白表达，银染ＰＣＲＳＳＣＰ检测ＲＭＳｐ５３的突变，原位杂交检测ＲＭＳｐ５３和ＭＤＭ２基因。结果：ｐ５３、ｐ２１、ｐ１８５蛋白在ＲＭＳ的阳性率分别为６７２％（４１／６１）、６８（３４／５０）、６０％（３０／５０）；检测３０例ＲＭＳ，ｐ５３基因７例发生点突变原位杂交检测ＲＭＳ的ｐ５３、ＭＤＭ２基因突变的检出率分别为６６７％和７７４％；上述结果均与年龄、性别、肿瘤组织类型无关，而与肿瘤分化转移和预后有关。结论：ｐ５３、ｐ２１、ＭＤＭ２蛋白表达及癌基因检测均有助于判断肿瘤恶性程度和肿瘤预后，上述３种方法比较，免疫组化与原位杂交检测的阳性结果基本相符，提示免疫组化方法同样能反映肿瘤恶性程度和预后，是一种简便可行的检测方法。     

胆管癌p53基因突变和蛋白表达的研究

目的了解胆管癌ｐ５３基因突变和蛋白表达的变化。方法应用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术检测胆管癌中ｐ５３基因突变，并用亲和素－生物素－过氧化物酶复合物（ＡＢＣ）免疫组织化学染色方法检测胆管癌ｐ５３蛋白的表达。结果１１例胆管癌中，３例胆管癌样品ＰＣＲ－ＳＳＣＰ单链电泳带迁移异常，依据ＤＮＡ单链构象与分子电泳迁移的关系，胆管癌ｐ５３基因５～８外显子的突变率为２７％；６例有ｐ５３蛋白异常表达，阳性率为５５％。结论导致ｐ５３蛋白异常表达的ｐ５３基因突变是胆管癌的一种分子结构改变，可能在胆管癌的发生和发展中起着一定的作用。     

胃癌P53基因突变和蛋白表达的研究

为了解中国人胃癌Ｐ５３基因突变情况，应用银染聚合酶链反应－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术对Ｐ５３基因第５、６、７、８外显子进行检测。对来自癌组织ＤＮＡ和癌旁正常组织ＤＮＡ的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ电泳带迁移作对比分析，发现３７例胃癌中，１１例胃癌样品电泳带迁移异常，依据ＤＮＡ单链构象与分子电泳迁移的关系，研究结果表明：胃癌Ｐ５３基因５－８外显子的突变率为３０％。微波处理ＡＢＣ法检测突变型Ｐ５３蛋白表     

卵巢恶性肿瘤p53基因表达产物及检测p53第七外显子突变的初步分析研究

为探讨ｐ５３基因突变表达产物与卵巢恶性肿瘤临床生物学行为以及ｐ５３第七外显子突变情况之间的关系。采用聚合酶链反应单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）对５０例卵巢恶性肿瘤中的２３例病人新鲜组织标本进行ｐ５３基因突变蛋白表达检测。结果显示：卵巢恶性肿瘤免疫组化ｐ５３阳性表达率２４％。２３例新鲜组织标本中４例ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测第七外显子异常。提示ｐ５３阳性表达可能与遗传因素有关（Ｐ＝０．０３８）；卵巢恶性肿瘤第七外显子突变可出现ｐ５３蛋白高表达；第七外显子突变可出现于不同临床分期及组织分型     

卵巢恶性肿瘤p53基因表达产物及检测p53第七外显子突变的初步 …

为探讨ｐ５３基因突变表达产物与卵巢恶性肿瘤临床生物学行为以及ｐ５３第七外显子突变情况之间的关系，采用聚合酶链反应单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）对５０例卵巢恶性肿瘤中的２３例病人新鲜组织标本进行了ｐ５３基因突变蛋白表达检测，结果显示：卵巢恶性肿瘤免疫组化ｐ５３阳性表达率２４％，２３例新鲜组织标本中４例ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测第七外显子异常。提示ｐ５３阳性表达可能与遗传因素有关（Ｐ＝０．０３８），     

肝细胞癌p53基因突变初步研究

本文应用快速银染多了矣酶链反应单链构像多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法检测了３０例肝细胞癌（ＨＣＣ）组织中ｐ５３基因变异情况。结果１３例癌组织中有异常电带，其中２闰于第５外显子，各有３例位于第６和第７外显子，位于第８显子有５例，ｐ５３基因变异的病例乙型肝炎表面抗原均阳性，实验结果表明：本技术能有效检测出基因突变；肝细胞癌中ｐ53基因突变率较高且有多个位点；肝细胞癌ｐ５３基因突变可能与乙型肝炎病毒感染有关     

原发性肝细胞癌组织中乙肝病毒整合与p53基因突变关系研究

应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交方法检测１５例原发性肝细胞癌及癌旁组织乙肝病毒（ＨＢＶ）存在状态，采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（Ｐｏｌｙ－ｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ－ｓｉｎｇｌｅｓｔｒａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）银染技术研究其ｐ５３基因突变。结果癌组织中１３例（８６．７％）有ＨＢＶＤＮＡ整合，同时３例伴游离ＨＢＶＤＮＡ；癌旁４例（２６．７％）有ＨＢＶＤＮＡ整合，而游离的ＨＢＶＤＮＡ却有６例。癌组织中ｐ５３基因变异８例（５３．３％），１例位于第５外显子，各有２例位于第６、第７外显子，３例位于第８外显子，癌旁组织未见ｐ５３基因异常，ｐ５３基因异常的癌组织中均有ＨＢＶＤＮＡ整合。研究结果表明，ＨＢＶＤＮＡ整合与ｐ５３基因突变密切相关，ＨＢＶＤＮＡ可能通过整合基因组后导致抑癌基因突变失去抑癌作用而引发肝癌。     

人乳头瘤病毒感染和p53基因突变与宫颈癌的关系

目的：探讨人乳头瘤病毒１６ 和１８ 型及抑癌基因ｐ５３ 突变对宫颈的致癌作用以及 Ｈ Ｐ Ｖ 感染与ｐ５３ 基因突变的相关性。方法：采用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） 技术和限制性酶切片段多态性分析（ Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ） 技术对３４ 例原发性宫颈癌组织及３０ 例正常宫颈组织 Ｈ Ｐ Ｖ１６ ,１８ 型 Ｄ Ｎ Ａ 及抑癌基因ｐ５３ 的突变进行了检测。结果： Ｈ Ｐ Ｖ１６ ,１８ Ｄ Ｎ Ａ 在宫颈癌的总阳性率为６４７ ％ （２２／３４） ,正常宫颈组织只有６７ ％ 阳性,８例宫颈癌组织出现ｐ５３ 基因第６ 外显子突变,其中２ 例为 Ｈ Ｐ Ｖ１６ Ｄ Ｎ Ａ 阳性、１ 例 Ｈ Ｐ Ｖ１８ Ｄ Ｎ Ａ 阳性。结论：宫颈癌的发病与 Ｈ Ｐ Ｖ 感染及ｐ５３ 基因突变有关,宫颈癌组织中ｐ５３ 基因突变与 Ｈ Ｐ Ｖ 感染无关。     

鼻咽癌中p53基因突变的研究

目的：探讨鼻咽癌中ｐ５３基因突变情况。方法：用非同位素不对称ＰＣＲ－单链构象多态性技术（ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ），分析了鼻咽癌活检组织、细胞株和裸鼠移植瘤中ｐ５３基因第５、６、７和８外显子（ｅｘｏｎ）的基因突变，并对其中ｅｘｏｎ８突变的ＳＵＮＥ－１和ＳＵＮＴ－１进行ＤＮＡ测序。结果：在２０例鼻咽癌活检组织中没有发现突变；但在鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１、ＣＮＥ２、ＳＵＮＥ－１和瘤株ＳＵＮＴ－１中存在第８外显子突变，而ＨＫ１为第５外显子突变。ＤＮＡ测序发现ＳＵＮＥ－１和ＳＵＮＴ－１的突变点在ｅｘｏｎ８的密码子（ｃｏｄｏｎ）２８０上，由ＡＧＡ（精氨酸）→ＡＣＡ（苏氨酸）。结论：ｐ５３基因突变热点的ｅｘｏｎ５、６、７和８可能在鼻咽癌变过程中没有重要意义，而在裸鼠移植瘤和细胞株建立过程中起重要作用。ＥＢＶ由于和鼻咽癌的关系密切，在鼻咽癌中可能存在ＥＢＶ编码蛋白与ｐ５３结合或蛋白表达被ＥＢＶ抑制等其他途径使ｐ５３失活。     

大肠癌的p53基因点突变

作者以改良的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ的ＰＣＲ直接测序方法，分析了２２例大肠癌原发灶和１例转移淋巴结组织中ｐ５３基因第七外显子的基因结构变化。发现２７％（６／２２）大肠癌原发灶和检测的１例转移淋巴结中存在ｐ５３基因第七外显子点突变，突变位点分别为２４５、２５１、２５９和２６０密码子。５０％点突变是２４５密码子中碱基Ｇ∶Ｃ向Ａ∶Ｔ转换，其它突变形式是碱基插入和碱基缺失。本研究ｐ５３点突变阳性标本均为结肠癌，其中低分化腺癌突变率高于高、中分化腺癌（Ｐ＝０．０１７８），ＤｕｋｅｓＣ１期突变率高于ＤｕｋｅｓＡ２、Ｂ期（Ｐ＝０．０３６１）。此结果提示，临床检测大肠癌原发灶和转移淋巴结中是否存在ｐ５３基因第七外显子突变，可有助于识别高度恶性的大肠癌和判断大肠癌病员的预后。     

非小细胞肺癌中p53基因突变的初步研究

为了解非小细胞肺癌中ｐ５３基因突变的情况，应用改良聚合酶链反应－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术检测１７例非小细胞肺癌中ｐ５３基因第５～８外显子的突变情况，有８例存在ｐ５３基因突变，突变率为４７．００％（８／１７），其中鳞癌为５５．５６％（５／９），腺癌为３７．５０％（３／８）。本研究结果表明：非小细胞肺癌中ｐ５３基因突变较为常见；改良后的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术对非小细胞肺癌的基因诊断具有潜在性应用价值     

乳腺癌p53基因突变规律及其预后意义

目的 探讨ｐ５３基因突变在乳腺癌发生发展中的演变规律及其与预后的关系。方法 应用ＰＣＲ－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析方法检测５５例原发性乳腺癌患者ｐ５３基因５～８外显子的突变情况。结果 ｐ５３基因突变发生的频率为３６．４％（２０／５５）,Ｉ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期乳腺癌中ｐ５３基因突变阳性率分别为４７．２％（１７／３６）和１５．８％（３／１９）,而且突变多发生在５～６外显子。突变阳性患者其无病生     

p53基因突变与EB病毒相关性鼻咽部T细胞淋巴瘤

目的：了解Ｐ５３基因突变与埃伯斯坦－巴尔病毒相关性鼻咽部Ｔ细胞淋巴瘤的关系。方法;应用免疫组织化学方法,原位杂交（ＩＳＨ）,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ对２６例确诊为鼻咽部Ｔ细胞淋巴瘤的病例进行Ｐ５３蛋白及基因的检测。结果：ＥＢＶ编码的小ＲＮＡ探讨（ＥＢＥＲ）１７／２６例阳性;Ｐ５３蛋白１３／２６例阳性;对其中１２例进行Ｐ５３外显子５,７,８的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测,发现Ｐ５３突变７／１２例阳性,ＥＢＶ阳性组５     

肺癌组织抑癌基因P53异常分析

Ｐ５３基因５－８外显子ＰＣＲ产物的ＤＮＡ序列分析及石蜡包埋组织Ｐ５３鼠抗人单克隆抗体（Ｄｏ－１）免疫组化分析发现：５７例原发性肺癌中３７例有Ｐ５３蛋白积累。ＤＮＡ／ＰＣＲ产物直接测序发现：９／１２例小细胞肺癌（ＳＣＬＣ），８／１５非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）Ｐ５３基因突变，错义突变为１２／１７，Ｇ→Ｔ突变为６／１７。免疫组化发现：１１／１９例ＳＣＬＣ，１９／３７例ＮＳＣＬＣ Ｐ５３蛋白染色阳性。４／     

肺癌组织中p53,K—ras,p53,p16基因的改变

目的 探讨ｐ５３、Ｋ－ｒａｓ、ｐ１５、ｐ１６基因在肺癌组织中改变情况及多基因联合检测在肺癌诊断中的价值。方法 对５９例肺癌组织和１４例肺部良性组织,应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－银染法检测ｐ５３基因第５～８外显子突变情况;应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法对Ｋ－ｒａｓ基因突变进行检测;并应用ＰＣＲ法检测ｐ１５、ｐ１６基因纯合缺失情况。结果肺癌组织中ｐ５３、ｐ１５、ｐ１６基因改变频率分别为３７．３％、１１．９％、２３．