三氧化二砷诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及对OPN表达的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）治疗肝癌的可行性及机制。方法将一定浓度梯度的As2O3与人肝癌细胞株SMMC-7721孵育后,采用MTT法、荧光显微镜及流式细胞仪检测细胞增殖与凋亡变化,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测肝癌细胞株中骨桥蛋白基因（OPN mRNA）表达水平。结果As2O3作用后SMMC-7721细胞生长明显受抑,且呈时间-浓度依赖性;荧光显微镜下细胞呈典型的凋亡形态学改变;在流式细胞仪上可见“凋亡峰”,细胞周期阻滞于G2／M期;细胞OPN mRNA表达阳性,OPN mRNA表达水平明显下调。结论As2O3体外能有效抑制肝癌细胞株生长;其机制可能为诱导细胞凋亡、下调OPN mRNA表达。     

苦参碱对白血病HL-60细胞增殖、凋亡及其Bcl-2mRNA、Survivin mRNA表达的影响

目的观察苦参碱在体外对急性早幼粒白血病HL-60细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养HL-60细胞至对数生长期,分别以苦参碱（苦参碱组）、顺铂（顺铂组）和药物溶媒（对照组）处理,MTI＇法检测细胞生长抑制率、流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化,RT．PCR法检测Bcl-2mRNA、SurvivinmRNA表达。结果与对照组比较,苦参碱组细胞生长抑制率、凋亡率及G,期细胞比例增高,Bcl．2mR—NA、SurvivinmRNA表达均下调,且呈明显的浓度依赖性（P〈0．05或0．01）。结论苦参碱体外可抑制急性早幼粒白血病HL-60细胞增殖、诱导细胞凋亡,其作用机制可能与下调凋亡基因Bcl一2、Survivin表达有关。     

苦参碱诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其对Bax表达的影响

目的 探讨苦参碱在体外诱导乳腺癌MCF-7细胞的凋亡作用及其机制.方法 用MTT方法检测乳腺癌MCF-7细胞生长抑制率,用流式细胞仪(FCM)分别检测MCF-7细胞凋亡情况,MCF-7细胞线粒体跨膜电位及MCF-7细胞Bax蛋白表达情况.结果 苦参碱对乳腺癌MCF-7细胞生长抑制率测定结果显示,不同浓度的苦参碱对MCF-7细胞生长抑制率与对照组相比存在明显差异(P＜0.05),呈剂量-效应正相关及时间-效应正相关,流式细胞仪检测MCF-7细胞凋亡,与对照组相比均有显著差异(P＜0.05),随着苦参碱浓度的增高,凋亡的发生率也相应提高,呈正相关.线粒体跨膜电位检测,苦参碱处理组MCF-7细胞罗丹明染色阳性数明显低于对照组,存在显著差异(P＜0.05),并随苦参碱浓度的增高而减少,呈负相关.流式细胞仪检测Bax蛋白表达显示,Bax蛋白表达上调,与对照组相比,存在显著差异(P＜0.05),且随作用浓度增高表达增强,呈正相关.结论 中药苦参碱在体外能抑制乳腺癌MCF-7细胞之生长抑制,并能诱导该细胞凋亡.     

Embelin通过PI3K/Akt信号途径抑制甲状腺癌细胞增殖

目的探讨Embelin对甲状腺癌细胞增殖的影响并探讨相关机制。方法体外培养甲状腺癌细胞,经Embelin处理后,RT-PCR和Western印迹检测XIAP m RNA和蛋白的表达水平;MTT法测定细胞生长抑制率;流式细胞仪测定细胞凋亡率和细胞周期;免疫印迹检测PI3K、Akt蛋白表达水平。结果 Embelin处理甲状腺癌细胞48 h后,XIAP m RNA和蛋白表达水平明显降低。在高剂量组中,MTT法检测其细胞生长抑制率为42.78%±4.29%,明显高于对照组(t=20.14,P0.01);流式细胞仪检测高剂量组细胞凋亡率为37.94%±2.29%,明显高于对照组(t=42.09,P0.01);流式细胞仪检测高剂量组细胞周期,发现其处于G1期细胞的百分比为68.23%±2.13%,明显高于对照组(t高剂量组=5.70,P0.01);检测PI3K、Akt蛋白在高剂量组中的表达水平,发现p Akt蛋白表达水平明显低于对照组(t高剂量组=6.47,P0.05)。结论 Embelin下调XIAP表达可抑制甲状腺癌细胞增殖,其作用机制可能与PI3K/Akt信号途径相关。     

氧化苦参碱调控CDK4/cyclinD1通路诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的细胞周期调控机制

目的 研究氧化苦参碱对前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响及CDK4/cyclinD1通路调控方面的作用,探讨其对前列腺癌可能产生的作用机制。方法 噻唑蓝(MTT)法观察前列腺癌PC-3细胞增殖情况;荧光染色观察前列腺癌PC-3细胞核形态改变情况;流式细胞仪观察前列腺癌PC-3细胞凋亡率与细胞周期情况;实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)观察细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK4)、细胞周期蛋白(cyclin)D1基因表达情况;Western印迹观察CDK4、cyclinD1表达情况。结果 与对照组相比,8μmol/L氧化苦参碱组作用72 h前列腺癌PC-3细胞的增殖活力最弱。荧光染色发现,氧化苦参碱使前列腺癌PC-3细胞核形态改变,且细胞核皱缩程度随氧化苦参碱浓度增加而加深。与对照组相比,氧化苦参碱组前列腺癌PC-3细胞的凋亡率显著上升且随浓度增加而显著上升(P<0.05);与对照组相比,2、4、8μmol/L氧化苦参碱组G1期比例明显增加,S期、G2的比例显著降低(P<0.05)。PCR法发现,与对照组相比,氧化苦参碱组CDK4和cyclinD1 mRNA的...     

曲古抑菌素A抑制乳腺癌细胞MCF-7生长增殖及促进凋亡的机制

目的 探讨曲古抑菌素A(TSA)对乳腺癌细胞系MCF-7细胞生长增殖、凋亡及p21、p53表达的影响.方法 分别以不同浓度的TSA处理MCF-7细胞,采用MTT比色法测定细胞增殖活性;用流式细胞仪检测细胞凋亡率;用RT-PCR方法检测细胞p21、p53mRNA的表达水平;用Western印迹法检测MCF-7细胞的p21、p53蛋白表达.结果 TSA作用后,各组细胞均出现显著的生长抑制作用,存活率明显降低,并呈剂量依赖性.流式细胞仪分析,在100 ～ 400 nmol/L范围内凋亡率随TSA浓度的升高而升高(P＜0.01).经不同浓度TSA处理的细胞p21mRNA和蛋白表达水平明显上调(P＜0.01);、而p53mRNA和蛋白表达水平则没有明显变化.结论 TSA显著抑制MCF-7细胞生长,促进凋亡可能与TSA维持p53的稳定表达,从而促进其下游因子p21的表达有关.     

靶向Pokemon基因shRNA重组质粒的构建及其对HepG2细胞生长的影响

目的:观察携带shRNA的重组质粒对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响,并初步探讨其分子机制.方法:设计3对针对Pokcmon基因不同位点的shRNA片段的真核表达载体,脂质体介导转染肝癌细胞株HepG2细胞.RT-PCR及Western blot检测转染前后Pokemon mRNA及蛋白质的 表达,MTT和流式细胞仪分析转染后细胞增殖及凋亡的变化,RT-PCR检测其可能的下游因子β-catenin及H-ras的表达.结果:成功构建含shRNA片段的重组质粒,依次命名为pshRNA1、2、3.转染HepG2细胞后,Pokemon基因的mRNA及蛋白质表达水平明显下调,以pshRNA2最强,抑制率分别为75.2%(RNA水平)和72.6l%(蛋白质水平).MTT显示pshRNA2可明显抑制细胞增殖;流式细胞仪测定转染后细胞凋亡增加;RT-PCR显示下游因子H-ras的表达明显降低(P＜0.05),而β-catenin的表达没有变化(P＞0.05).结论:采用RNAi技术可以特异性阻断Pokemon 基因的表达;Pokemon基因有促进肝癌细胞株增殖及抑制其凋亡的作用,该效应可能与下调其下游因子H-ras的表达有关.     

白藜芦醇诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡的作用机制

目的 探讨白藜芦醇对人卵巢癌SKOV3细胞的诱导凋亡作用,并探讨该凋亡的发生机制.方法 对人卵巢癌SKOV3细胞采用不同浓度的白藜芦醇（400、200、100、50、25 μmol/L）处理24、48、72 h后,采用MTT法检测细胞存活率,透射电镜观察细胞形态变化,流式细胞仪分析细胞周期的改变,RT-PCR法、Western blot法检测细胞mRNA、蛋白表达.结果 白藜芦醇对人卵巢癌SKOV3细胞抑制作用明显,并且呈时间和浓度依赖性关系（P＜0.05或＜0.01）;白藜芦醇作用后SKOV3细胞出现典型的凋亡超微结构改变;SKOV3细胞凋亡并阻滞于S期;细胞中Bcl-2 mRNA、蛋白表达下调,Bax mRNA、蛋白表达上调.结论 白藜芦醇能有效地抑制SKOV3细胞生长,其机制可能与抑制抗凋亡因子Bcl-2的表达、增强凋亡促进因子Bax的表达有关.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对常氧及低氧状态下胰腺癌细胞的作用

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对在常氧及低氧诱导下人胰腺癌细胞株BxPC-3的增殖、凋亡的影响及其相关基因的表达。方法:采用氯化钴(CoCl2)建立低氧模型,在常氧及低氧状态下,研究不同浓度EGCG对人胰腺癌细胞株BxPC-3的作用。采用四唑氮蓝(MTT)还原法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)和血管内皮生长因子A(VEGF-A)mRNA水平的表达变化;蛋白质印迹法(Western-blot)检测MMP-2和VEGF-A蛋白水平的表达变化。结果:低浓度的EGCG短时间内对BxPC-3细胞的生长无显著抑制作用,但随着作用时间的延长和剂量的增加,EGCG显示了细胞生长抑制作用;流式细胞仪结果显示EGCG可诱导胰腺癌细胞凋亡,低氧状态下其抑制作用低于常氧状态。EGCG可显著抑制MMP-2和VEGF-A蛋白的表达,下调MMP-2和VEGF-A mRNA的表达。结论:EGCG无论在常氧或低氧环境下均可以显著抑制胰腺癌BxPC-3细胞的生长,促进其凋亡,低氧状态下其抑制作用低于常氧状态下,提示在临床上胰腺癌化学治疗效果差可能与其肿瘤内低氧状态有关。其可能相关机制与下调VEGF、MMP-2表达水平有关。     

EGCG对结肠癌HT-29细胞生长的影响及机制

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人结肠癌细胞株HT-29生长的影响及可能作用机制.方法 采用不同浓度的EGCG处理HT-29细胞,四唑盐比色试验(MTT)法观察处理后细胞的生长情况;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况;Western Blot洁检测表皮生长因子受体(EGFR)、细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化水平的表达.结果 EGCG处理后HT-29细胞生长明显抑制,呈现时间、剂量依赖性;HT-29细胞凋亡率升高;EGFR和ERK的磷酸化水平表达下调.结论 EGCG可明显抑制结肠癌HT-29细胞的生长;其可能机制为下调EGFR和ERK的磷酸化水平,从而干预EGFR-ERK信号转导通路.     

洛铂与放疗联合治疗对SGC-7901胃癌细胞凋亡的影响

目的观察洛铂与放疗联合治疗对SGC-7901胃癌细胞凋亡的影响。方法实验分为正常对照组、单纯化疗组、单纯放疗组、放疗化疗联合组。倒置显微镜观察细胞生长状态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR方法检测p53 mRNA表达。结果倒置显微镜观察,正常对照组的细胞呈多角形,细胞大小均匀。加入洛铂与照射后,细胞生长相对减慢,细胞体积变小,出现明显的细胞生长抑制。流式细胞仪检测细胞凋亡率,单纯化疗组与单纯放疗组的细胞凋亡率均高于正常对照组(P<0.01),联合组细胞凋亡率明显高于单纯化疗与单纯放疗组,差异有统计学意义(P<0.01)。联合组p53 mRNA表达明显高于正常对照组(P<0.01),联合组p53 mRNA表达均高于单纯化疗组与单纯放疗组(P<0.05)。结论化疗与放疗联合应用增加胃癌细胞的凋亡率。     

相关基因在苦参碱诱导人肺腺癌细胞凋亡中的表达

目的 探讨苦参碱对肺腺癌细胞凋亡和Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法 肺腺癌A549细胞进行传代培养后,分别加入30、60、120、240 mg/L的苦参碱,MTT法检测其对A549细胞生长的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 不同浓度的苦参碱对肺腺癌细胞生长均有抑制作用,抑制率与浓度呈正相关.苦参碱可诱导A549细胞凋亡,与作用时间呈正相关.苦参碱能显著降低Bcl-2蛋白表达(P＜0.01),而显著升高Bax蛋白表达水平.结论 Bcl-2基因表达降低、Bax基因表达增高可能在苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡中起重要作用.     

蟾毒灵介导JNK信号通路诱导人胰腺癌细胞的凋亡

目的:研究蟾毒灵诱导人胰腺癌细胞凋亡以及凋亡相关基因表达的JNK信号转导通路,揭示其抗胰腺癌的部分机制.方法:MTT法观察蟾毒灵对人胰腺癌BxPC-3细胞的生长抑制作用;0.16、0.32、0.64mg/L蟾毒灵分别作用人胰腺癌BxPC-3细胞48h后,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测细胞周期和细胞凋亡;Western印迹法检测蟾毒灵作用BxPC-3细胞后SAPK/JNK信号通路的激活情况,荧光定量PCR检测Survivin基因mRNA的表达水平;并比较阻断JNK信号通路后丹参酮ⅡA对胰腺癌细胞凋亡Survivin基因mRNA的表达.结果:MTT法测得蟾毒灵对人胰腺癌BxPC-3细胞具有显著的抑制作用,其作用效果与剂量和作用时间成正相关;0.16、0.32、0.64mg/L浓度蟾毒灵作用人胰腺癌细胞后的细胞凋亡率分别为19.36%±0.39%、40.69%±0.44%、59.63%±1.14%,与对照组2.24%±0.37%比较均有显著性差异(P<0.01);蟾毒灵作用人胰腺癌细胞1h后JNK信号通路被激活,2h达峰值;阻断JNK信号通路后,凋亡率明显降低(P<0.01);0.32mg/L蟾毒灵作用人胰腺癌细胞48h后Survivin mRNA的表达明显下降;阻断JNK信号通路后,蟾毒灵作用人胰腺癌细胞的Survivin mRNA的表达明显上升.结论:蟾毒灵通过JNK信号转导通路下调人胰腺癌BxPC-3细胞Survivin mRNA的表达,可能是其诱导胰腺癌细胞凋亡的机制.     

五味子乙素抗H2O2诱导PC12细胞凋亡的机制

目的 探讨五味子乙素(Sch B)抗H2O2诱导PC12细胞凋亡的影响及机制.方法 在H2O2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上,采用MTT比色法分析细胞存活率; Hochest33258荧光染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡情况;DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)水平;Real Time PCR和Western印迹检测p53基因mRNA和蛋白的表达.结果 不同剂量Sch B处理PC12细胞48 h后,可剂量依赖性对抗H2O2引起的细胞凋亡,提高细胞存活率,减轻H2O2导致的细胞核固缩、聚集和碎裂,降低细胞内ROS的含量,抑制p53基因mRNA和蛋白的表达.结论 Sch B可剂量依赖性对抗H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与其抗氧化、下调促凋亡基因p53的表达等有关.     

靶向瘦素基因的siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的 通过构建慢病毒介导的靶向瘦素基因的小干扰RNA(siRNA),探讨瘦素对A549细胞增殖和凋亡的影响.方法 建立siRNA-a组、siRNA-b组及其各自阴性对照组和空白对照组(A549)5组细胞,分别于荧光显微镜下观察细胞5d和11d的生长情况.噻唑蓝(MTT)比色法测定空白对照组、siRNA-a组及其阴性对照组细胞1～6 d的生长情况,绘制生长曲线,比较各组细胞增殖差异.流式细胞仪分析各组细胞凋亡率,观察瘦素的siRNA对A549细胞凋亡的影响.RT-PCR和Western bloting方法检测各组细胞瘦素mRNA和蛋白表达水平.结果 siRNA-a细胞镜下形态基本正常,5d后荧光效率仍较高,感染稳定,但生长较阴性对照组及空白对照组细胞缓慢.siRNA-b细胞感染48 h后,镜下见细胞肿胀、变形,空泡出现,5d后见多量细胞碎片,凋亡小体形成,呈现凋亡状态,11d后可见细胞碎片,已近完全凋亡.MTT实验siRNA-a组细胞从第3天起生长比其他各组均缓慢(P＜0.01).流式细胞仪检测细胞凋亡率结果:siRNA-a组、siRNA-b组细胞凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组.RT-PCR和Western bloting结果 显示干扰组细胞瘦素mRNA和蛋白表达水平较阴性对照组和空白对照组明显下调.结论 慢病毒介导的siRNA能下调肺腺癌A549细胞瘦素基因的表达,从而抑制A549细胞增殖,促进其凋亡.由此可见,瘦素的siRNA有望成为肺腺癌基因治疗的新手段.     

三氧化二砷对肝癌细胞表达PTTG1和VEGF的影响及其意义

目的 观察三氧化二砷(As2O3)对人肝癌细胞株BEL-7402和SMMC-7721的作用及其可能机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测As2O3对两种细胞的生长活性;用流式细胞仪测定经不同浓度As2O3溶液处理后的两种细胞的周期变化,并用Annexin V-FITC与PI双染法检测细胞凋亡;用实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测As2O3对两种细胞垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响;用蛋白免疫印迹法(western-blotting)检测As2O3对两种细胞PTTG1和VEGF蛋白表达的影响.结果 As2O3可显著抑制BEL-7402和SMMC-7721细胞的生长,并呈量效关系(r=0.973,P<0.01;r=0.985,P<0.01),半数抑制浓度(IC50)分别为4.38 μmol/L和5.16 μmol/L.BEL-7402和SMMC-7721经As2O3处理后均发生显著凋亡(P<0.01).As2O3能显著下调两种细胞PTTG1和VEGF mRNA及蛋白的表达(P<0.01),并使细胞周期阻滞在G2/M期.结论 As2O3可有效抑制人肝癌细胞的生长增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期及下调PTTG1和VEGF的表达有关.     

PTEN siRNA对多发性骨髓瘤细胞周期和侵袭力的影响及其分子机制

目的 探讨PTEN基因对RPMI8226细胞增殖、细胞周期和侵袭力的影响及其分子作用机制.方法 应用PTEN siRNA转染RPMI8226细胞,封闭内源性PTEN mRNA表达.MTT法检测细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡;Transwell小室实验检测细胞侵袭活性;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测mRNA水平变化,Western印迹检测蛋白水平变化.结果 PTEN siRNA能明显抑制RPMI8226细胞PTEN mRNA及蛋白表达.MTT结果显示,转染后4d,与NS-siRNA组相比,PTEN-siRNA组细胞生存率为(141.55±8.34)％(P＜0.01).细胞周期分析显示PTEN-siRNA转染RPMI8226细胞48 h后,与未转染细胞相比,处于G0/G1期细胞比例升高,G2/M期和S期细胞比例降低,凋亡峰显示凋亡的细胞比例减少.PTEN-siRNA转染RPMI8226细胞后24h,未转染组、NS-siRNA转染组和PTEN-siRNA转染组黏附于下室面的细胞数量分别为:49.33±7.63、47.17 ±7.76和79.50±11.89,NS-siRNA和PTEN-siRNA组相比,差异显著(P＜0.01).转染PTEN siRNA后凋亡相关基因Survivin mRNA及蛋白表达水平增加,Caspase-3/-7 mRNA及蛋白活性表达水平减低.FAK mRNA MMP-2,MMP-9 mRNA p-FAK蛋白表达水平升高.结论 转染PTEN siRNA能够促进RPMI8226细胞增殖及侵袭能力,抑制细胞凋亡.     

吉非替尼对肺腺癌细胞增殖和表皮生长因子受体表达的影响

目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂吉非替尼对肺腺癌A549细胞株增殖和EGFR表达的影响.方法 不同浓度吉非替尼干预肺癌A549细胞24、48、72 h后,倒置相差显微镜观察药物干预后细胞形态学变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞抑制率;钙依赖性磷脂结合蛋白(AnnexinⅤ)/碘化丙啶(PI)法和HoechsT_33258染色法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测药物作用周期;免疫荧光检测EGFR蛋白表达情况;实时荧光定量PCR检测EGFR mRNA的表达情况.结果 各干预组细胞出现空泡和颗粒,细胞碎片增多,且随吉非替尼剂量增加和干预时间的延长日益明显.吉非替尼明显抑制了A549细胞的生长,呈时间、剂量依赖性.吉非替尼组细胞凋亡率明显高于正常对照组(P<0.01),S期细胞比例明显减少(P<0.01),G0/G1期细胞比例明显增加(P<0.01),EGFR mRNA和蛋白表达明显减弱(P<0.01).结论 吉非替尼显著抑制A549细胞生长,可能机制是促进凋亡、增强G0~G1期阻滞和进一步下调活化的EGFR mRNA和蛋白的表达.     

热疗诱导人肝癌细胞HepG2的凋亡

目的 观察热疗诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的效果,并初步探讨其可能的机制.方法 以人肝癌细胞株HepG2为研究对象,试 验分对照组、43℃热疗组(分别加热0.5,1,1.5h),流式细胞术检测凋亡率;RT-PCR检测Bax、Bcl-2 mRNA的表达.结果 流式细胞仪凋亡检测显示热疗组凋亡率显著高于对照组(P ＜0.01)RT-PCR检测显示各热疗处理组较之对照组都有上调Bax、下调Bcl-2 mRNA表达的作用,以加热1.5h组最为显著(P＜0.01).结论 热疗能显著增加HepG2细胞的凋亡率,这可能与上调Bax、下调Bcl-2 mRNA的表达促进凋亡有关.     

MUC5AC特异性siRNA对胆管癌细胞株HCCC-9810增殖及凋亡的影响

目的:探讨黏蛋白5AC特异性siRNA对人肝内胆管癌细胞珠HCCC-9810体外增殖及凋亡能力的影响.方法:设计合成三对特异性siRNA, 构建了三个可在哺乳动物细胞中表达siRNA的表达质粒, pRNAT-U6.1/Neo-MUC5AC-siRNA1/2/应用脂质体转染技术分别将三个稳定表达的质粒和对照质粒( 空质粒对照) 转染HCCC-9810, 应用有荧光标记的非特异性小分子的siRNA检测转染效率, RT-PCR检测黏蛋白5AC基因mRNA水平;SABC免疫组化染色技术检测黏蛋白5AC的表达;MTT检测细胞生长增殖情况;流式细胞仪分析细胞凋亡.结果:基因测序表明成功构建质粒;转染后荧光蛋白表达率28.57%;RT-PCR结果表明在mRNA水平, 三个质粒都可抑制黏蛋白5AC基因的表达, 并可使黏蛋白5AC的表达下降,MTT结果对细胞的生长有一定的抑制作用,流式细胞仪分析结果使肿瘤细胞凋亡增加.结论:构建pRNAT-U6.1/Neo-MUC5ACsiRNA1/2/3质粒明显抑制了黏蛋白5AC基因在mRNA水平及蛋白的表达, 并可抑制肿瘤细胞的生长增殖和诱导其凋亡.