凝血酶促血管平滑肌细胞增殖的信号转导研究进展

血管平滑肌细胞异常增殖在动脉粥样硬化和血管成形术后狭窄等血管增殖性疾病的发病机制中起着重要作用.近来研究表明,凝血酶具有生长激素样作用,参与了血管增殖性疾病的发展.本文就凝血酶及其受体的特性,促血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的信号转导作一综述.     

葛根素抑制凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖

目的　观察葛根素对T诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法　建立凝血酶(T)诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖模型,以细胞计数法和流式细胞仪DNA含量测定的方法观察T及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。结果　T对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在2 4小时末达峰,且T浓度在0 . 1U/L～1 . 0U/L之间有剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制T诱导的细胞增殖与DNA合成。结论　葛根素能抑制T诱导的VSMC增殖。     

凝血酶促血管平滑肌细胞增殖的信号转导研究进展

血管平滑肌细胞异常增殖在动脉粥样硬化和血管成形术后狭窄等血管增殖性疾病的发病机制中起着重要作用。近年来研究表明，凝血酶具有生长激素样作用，参与了血管增殖性疾病的发展，本文就凝血酶及其受体的特性，促血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的信号转号作一综述。     

血管平滑肌细胞增殖在动脉粥样硬化中的研究进展

心血管疾病是全人类死亡的主要原因之一,来源于中动脉层的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖是形成动脉粥样硬化斑块的核心机制之一。在动脉粥样硬化形成过程中,VSMCs经历了复杂的结构和功能变化,产生不同的表型促进VSMCs的增殖[1]。VSMCs动态调节表型后增殖的能力促使其在控制血压、血液分布以及维持血管结构完整性方面发挥着重要作用,参与生理和病理性血管重塑。VSMCs增殖的调控过程极为复杂,包含多种调控分子和信号途径的共同作用,因此详细了解VSMCs的特征及其增殖过程对研究用于血管治疗的新药物至关重要。本文就VSMCs增殖在动脉粥样硬化中的研究进展及当前药物研究情况做一综述。     

凝血酶与血管平滑肌细胞增殖研究进展

凝血酶是血管平滑细胞表达的选择增殖促进剂，其作用通过血管平滑肌细胞表达的选择性受体所介导。凝血酶受体的激活导致细胞内信号传递和内源性血小板源生长因子A链和碱性纤维母细胞生长因子的产生。凝血酶抑制剂可阻断凝血酶受体的激活、细胞内信号传递和凝血酶诱导的血小板源生长因子A链和碱性纤维母细胞生长因子表达。凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖可被抗血小板源生长因子和碱性纤维母细胞生长因子抗体所阻断，因而认为凝血酶对血管平滑肌细胞的增殖作用可能是通过诱导血小板源生长因子A链和碱性纤维母细胞生长因子自分泌和（或）旁分泌来实现的。     

中药调控高血压血管平滑肌细胞增殖的研究进展

血管平滑肌细胞作为血管中膜的主要成分,其异常增殖是高血压血管重构以及血管增殖性疾病的主要病理基础。中药治疗高血压的临床效果肯定,目前对中药治疗高血压的机制等相关研究越来越深入。本文就近年来中药调控高血压血管平滑肌细胞增殖的研究进展做一综述。     

家兔主动脉平滑肌细胞条件培养基抑制血管平滑肌细胞增殖

为探讨血管平滑肌细胞自分泌和旁分泌对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,采用家兔主动脉贴块培养法培养血管平滑肌细胞 ,并制备平滑肌细胞条件培养基。采用孔径 10 0kDa和 10kDa的Millipore滤膜 ,将平滑肌细胞条件培养基分部。平滑肌细胞增殖测定采用宝灵曼试剂盒XTT法。结果提示 ,家兔血管平滑肌细胞条件培养基抑制血管平滑肌细胞的增殖 ,浓度 5 0 %的平滑肌细胞条件培养基抑制血管平滑肌细胞的增殖率高达 45 % ,且该生长抑制活性物质具有剂量依赖、加热 5 6℃ 30min稳定和分子质量小于 10kDa的特点。     

芦丁抑制氧化低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖

目的:探讨芦丁在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用。方法:制备ox-LDL,采用贴壁法分离培养C57BL/6J小鼠的VSMC,将细胞分为对照组、芦丁组、ox-LDL组和芦丁+ox-LDL组,MTT法检测各组VSMC细胞增殖活性,Western blot检测VSMC中磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)的表达情况。结果:芦丁组与对照组细胞增殖活性及p-ERK蛋白表达水平均无明显差异(P均0.05);ox-LDL组细胞增殖活性及p-ERK蛋白表达水平均显著高于对照组(P均0.05);与ox-LDL组相比,芦丁+ox-LDL组细胞增殖活性及p-ERK蛋白表达水平均明显降低(P均0.05)。结论:芦丁可能通过抑制ERK信号通路,抑制ox-LDL诱导的VSMC的增殖。     

IGF—I调节血管平滑肌细胞增殖的研究进展

介绍ＩＧＦ－Ｉ促进血管平滑肌细胞增殖作用以及其它血管活性物质对ＩＧＦ－Ｉ这一生物效应的调节。同时也对ＩＧＦ－Ｉ受体后分子机制进行探讨。     

The Capsid Protein of Rubella Virus Antagonizes RNA Interference in Mammalian Cells

Rubella virus (RuV) is the infectious agent of a series of birth defect diseases termed congenital rubella syndrome, which is a major public health concern all around the world. RNA interference (RNAi) is a crucial antiviral defense mechanism in eukaryotes, and numerous viruses have been found to encode viral suppressors of RNAi (VSRs) to evade antiviral RNAi response. However, there is little knowledge about whether and how RuV antagonizes RNAi. In this study, we identified that the RuV capsid protein is a potent VSR that can efficiently suppress shRNA- and siRNA-induced RNAi in mammalian cells. Moreover, the VSR activity of the RuV capsid is dependent on its dimerization and double-stranded RNA (dsRNA)-binding activity. In addition, ectopic expression of the RuV capsid can effectively rescue the replication defect of a VSR-deficient virus or replicon, implying that the RuV capsid can act as a VSR in the context of viral infection. Together, our findings uncover that RuV encodes a VSR to evade antiviral RNAi response, which expands our understanding of RuV–host interaction and sheds light on the potential therapeutic target against RuV.     

RNA干扰沉默生存素基因表达对移植静脉内膜增生的影响

目的研究RNA干扰沉默生存素基因表达对移植静脉内膜增生的抑制作用。方法Wistar大鼠48只,建立自体静脉移植模型,术后随机分为对照组、空载体组s、hRNA对照组s、hRNA组,施加不同的处理因素,在移植12、周取材。比较内膜增生程度,半定量逆转录聚合酶链反应检测生存素基因的mRNA表达,Western blot检测生存素基因的蛋白产物表达,免疫组织化学法检测生存素及增殖细胞核抗原的表达,TUNEL法检测血管平滑肌细胞凋亡的变化。结果移植12、周内膜增生明显,局部转染靶向生存素基因的shRNA表达载体能够明显抑制内膜增生(P<0.05)。血管移植后,对照组及空载体组生存素的mRNA及蛋白产物表达显著增加,而shRNA组却显著减少(P<0.05),血管平滑肌细胞中增殖细胞核抗原表达减少,而TUNEL法阳性细胞明显增加。结论采用RNA干扰沉默生存素基因表达可显著抑制移植静脉的内膜增生,其作用机制可能是通过抑制生存素的基因及蛋白产物表达,从而抑制血管平滑肌细胞增殖,促进其凋亡而实现的。     

RNAi的作用机制及抗病毒研究进展

由于RNAi具有特异性的抑制甚至关闭相关序列基因表达的特点,已应用于重大传染病治疗、肿瘤治疗、基因功能研究和新基因的发现等领域．现对近年来有关RNAi的机制、抗病毒应用及前景作一综述．     

富含半胱氨酸蛋白61RNA干扰质粒抑制血管平滑肌细胞的增殖

目的 观察富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)RNA干扰质粒(pCyr61-shRNA)对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响.方法 构建Cyr61 RNA干扰质粒转染大鼠血管平滑肌细胞,采用半定量逆转录聚合酶链反应及Western blot检测Cyr61 RNA和蛋白表达;采用MTT法检测细胞增殖;3H-标记胸腺嘧啶掺入法检测细胞DNA含量.结果 测序证实成功构建Cyr61 RNA干扰质粒;转染pCyr61-shRNA组mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0 01);pCyr61-shRNA组细胞数、吸光度值和DNA含量均明显降低(P<0 01).结论 Cyr61 RNA干扰质粒抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖.     

富含半胱氨酸蛋白61 RNA干扰质粒抑制血管平滑肌细胞的增殖

目的观察富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)RNA 干扰质粒(pCyr61-shRNA)对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。方法构建 Cyr61 RNA 干扰质粒转染大鼠血管平滑肌细胞,采用半定量逆转录聚合酶链反应及 West-ern blot 检测 Cyr61 RNA 和蛋白表达;采用 MTT 法检测细胞增殖;~3H-标记胸腺嘧啶掺入法检测细胞 DNA 含量。结果测序证实成功构建 Cyr61 RNA 干扰质粒;转染 pCyr61-shRNA 组 mRNA 及蛋白表达均明显降低(P<0.01);pCyr61-shRNA 组细胞数、吸光度值和 DNA 含量均明显降低(P<0.01)。结论 Cyr61 RNA 干扰质粒抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖。     

Notch3表达下调的血管平滑肌细胞模型的建立

目的通过RNA干扰建立Notch3表达下调的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)模型,探讨Notch3在VSMC表型转化中的作用。方法根据Notch3序列设计siRNA,建立腺病毒表达载体;VSMC分为空白组、空载体组及试验组;将载体导入VSMC中,通过荧光实时定量PCR检测Notch3表达水平。结果在感染复数为300时,VSMC的感染效率最高。以空白组为基准,试验组Notch3的相对表达量为0.64,下降了36%,而空载体组为0.88,仅下降了12%。结论成功构建Notch3表达下调的VSMC模型,为后期研究奠定了良好的基础。     

Cdx2基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

目的:构建尾型同源盒基因Cdx2 RNA干扰(RNAi)慢病毒表达栽体并进行鉴定.方法:选取Cdx2基因的19 nt特异性序列,设计针对Cdx2的shRNA序列,应用基因重组技术插入到pLentiLox3.7(pLL3.7)慢病毒表达栽体中,Xba Ⅰ和Not Ⅰ进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,重组病毒质粒及其3种辅助包装原件载体质粒通过LipofectamineTM2000共转染293T细胞,培养48 h后,收集细胞培养上清液,将其浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度.结果:通过对pLL-Cdx2-shRNA载体进行双酶切鉴定,证实短发夹RNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确,Cdx2基因RNA干扰重组慢病毒载体经293T细胞包装成功,收集293T细胞分泌的病毒上清测定病毒的滴度为5×107TU/mL.结论:成功构建A.Cdx2基因RNAi慢病毒栽体,为研究Cdx2对胃癌生长的影响提供了稳定感染细胞载体.     

RNA介导survivin基因沉默对肝癌细胞HepG2细胞株凋亡及增殖的影响

目的观察靶向封闭survivin基因对肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响,探讨survivin基因在肝癌的发生、发展中的作用。方法设计1对survivin-siRNA,体外转录制备siRNA。应用脂质体转染技术将survivin-siRNA转染肝癌细胞株HepG2,应用有荧光标记的非特异性小分子siRNA检测转染效率;RT-PCR检测survivin-mRNA水平;SABC免疫组化染色技术检测survivin蛋白表达情况;MTT法检测细胞生长情况;流式细胞仪分析细胞凋亡。结果转染survivin-siRNA可使HepG2细胞survivin-mRNA水平下降53.8%,并可使survivin蛋白表达明显减少;转染survivin-siRNA对细胞增殖及细胞凋亡无明显影响(P>0.05)。结论抑制survivin表达对肝癌细胞株HePG2凋亡及增殖无明显影响。提示survivin在肝癌细胞增殖与调亡调控中所起的作用可能并非是关键性的。     

Modeling oncogene addiction using RNA interference

The clinical efficacy of selective kinase inhibitors suggests that some cancer cells may become dependent on a single oncogene for survival. RNAi has been increasingly used to understand such “oncogene addiction” and validate new therapeutic targets. However, RNAi approaches suffer from significant off-target effects that limit their utility. Here, we combine carefully titrated lentiviral-mediated short hairpin RNA knockdown of the epidermal growth factor receptor (EGFR) with heterologous reconstitution by EGFR mutants to rigorously analyze the structural features and signaling activities that determine addiction to the mutationally activated EGFR in human lung cancer cells. EGFR dependence is differentially rescued by distinct EGFR variants and oncogenic mutants, is critically dependent on its heterodimerization partner ErbB-3, and surprisingly, does not require autophosphorylation sites in the cytoplasmic domain. Quantitative “oncogene rescue” analysis allows mechanistic dissection of oncogene addiction, and, when broadly applied, may provide functional validation for potential therapeutic targets identified through large-scale RNAi screens.     

日本血吸虫Mago nashi基因RNA干扰系统的构建及鉴定

目的构建针对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的RNA干扰的表达载体。方法设计及化学合成日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的短发夹结构的寡核苷酸,通过退火成双链DNA片段,将其与经限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ双酶切的pSUPER质粒连接,构建表达shRNA的重组质粒。结果经酶切及测序证实针对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的RNA干扰的表达载体pSUPER构建成功。结论成功构建针对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的RNA干扰的表达载体,为进一步研究对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因RNA干扰作用及该基因功能奠定基础。