重组DNA技术及其在精神医学领域的应用

本文扼要介绍了国外精神医学领域常用的两组重组DNA技术及连锁研究方法,概括了应用这些方法在情感障碍、阿尔采木氏病及亨丁顿舞蹈病等的遗传研究中所取得的重要成果,探讨了评价这些成果时应注意的若干问题,呼吁我国的精神医学和遗传学工作者携手合作,开展精神障碍的分子遗传学研究。     

DNA微阵列技术检测Duchenne型/Becker型肌营养不良患者的临床应用研究

目的 研究检测Duchenne型肌营养不良(：DMD)／Becker型肌营养不良(BMD)患者基因缺失的可行技术。方法 应用分子克隆的方法扩增DMD基因18个常见易缺失外显子片段，以此作为探针制备出简易DNA微阵列，对30例DMD／BMD患者和5例健康对照的基因进行检测分析。部分结果与PCR的方法作了比较。结果 应用简易：DNA微阵列检测出21例DMD／BMD患者具有不同程度的外显子缺失，10例经PCR检测得到了完全验证。结论 DNA微阵列技术检测：DMD／BMD患者简便、准确、灵敏，可在临床诊断中应用。     

DNA混合池技术及其在精神分裂症遗传研究中的应用

DNA混合池技术近年来在国际上逐渐被广泛应用于各种遗传性疾病的研究,尤其是对复杂性遗传病的大样本全基因扫描关联分析。这种方法可以大大减少工作量,降低研究成本,缩短研究周期。本文综述了DNA混合池(DNA pooling)技术的原理、实验方法、统计学处理以及在精神分裂症遗传研究中的应用。     

温度成像技术在神经病学中的应用

简要介绍了温度成像技术的近期发展及其在神经病学中的应用情况。重点说明了热像遥控图像与液晶热像图的造影方法、正常及异常图像。认为本技术有可能成为另一种无损伤性的、有重大价值的临床诊断方法。     

DNA甲基化和miRNA在胶质瘤中的研究进展

DNA甲基化、微RNA（miRNA）在胶质瘤的发生、发展中起重要作用。多条癌症通路相关基因启动子区域的CpG岛甲基化发生频率与胶质瘤的发生与发展、组织类型和病理分级密切相关。miRNA的异常表达通过调控靶向基因、作用于癌症相关通路及脑肿瘤干细胞等机制扮演着抑癌或致癌角色。而miRNA的表达也受到甲基化的调控,这对综合评价肿瘤的发生、发展具有重要的意义。本文即对这两者在胶质瘤中的作用机制进行综述。     

神经心理学在神经病学中的重要作用

神经心理学是研究高级认知功能或心理活动神经机制的一门学科，它从神经科学的角度研究心理和认知，以脑作为心理活动的神经基础来研究脑与心理活动或认知功能的关系。传统上，它常常通过研究脑损伤患者的高级认知功能缺损，来推断正常状态下其心理活动或功能的神经机制。近年来，神经心理学家已经能够利用各种神经功能成像技术研究损伤脑和正常脑在从事某一特定认知加工时的实时脑区激活，为了解脑结构和功能关系提供了一个更为直接的窗口。     

重组Endostatin基因治疗大鼠胶质瘤及其微血管密度改变

目的探讨重组Endostatin基因（EScDNA）对大鼠胶质瘤的治疗效果及肿瘤微血管密度的变化.方法对质粒包埋的Endostatin基因（pSecTagA-EScDNA）测序鉴定后,转染人脐静脉内皮细胞（ECV-304）,验证Endostatin基因对血管内皮细胞增殖的抑制作用;以C6胶质瘤细胞植于SD大鼠腋部皮下制作胶质瘤模型,将pSecTagA-EScDNA直接瘤内注射.分别观察记录肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线：对肿瘤标本进行微血管标记、计数,并比较治疗前后肿瘤微血管数量的变化.结果重组Endostatin基因治疗后的肿瘤生长明显受抑制,使肿瘤退缩至休眠甚至完全消失;肿瘤微血管密度明显低于未治疗者.结论重组Endostatin基因通过抑制肿瘤血管新生对大鼠胶质瘤有良好的治疗效果.     

重组质粒pEGFP-mDlX5的构建及其在SVZa神经干细胞中的表达研究

目的构建真核表达重组质粒pEGFP-mDlx5,并了解它在室管膜前下区(SVZa)神经干细胞(NSCs)中的mRNA及融合蛋白表达情况。方法运用DNA重组技术自原核表达载体上将小鼠来源的mDlx5基因克隆到增强型绿色荧光蛋白(EGFP)载体上,并用双酶切、测序进行鉴定;将重组质粒用电穿孔的方法转染SVZa NSCs,荧光显微镜下动态观察荧光变化情况;培养24h后提取转染细胞的总RNA及总蛋白,通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)了解其mRNA表达情况,用Western blot 检测其蛋白表达情况。结果重组质粒通过双酶切产生了0．78 kb目的插入片段及4．68 kb载体片段;测序后证实0．78 kb片段碱基序列与mDlx5基因完全同源;重组质粒转染SVZa NSCs 8 h后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,12 h后逐渐增多,24-48 h达高峰,且稳定表达较长时间;24 h后通过 RT-PCR检测到mRNA表达,Western blot检测到58 kD目的蛋白表达。结论新构建的真核表达重组质粒pEGFP-mDlx5通过鉴定,结构正确:转染到SVZa NSCs后能在其中表达、发挥功能,为后续研究奠定了基础。     

原子力显微镜在DNA研究中的应用

目的探索原子力显微镜(AFM)研究DNA的分子结构的方法和优势。方法利用该显微镜对DNA分子进行扫描成像。结果AFM能够得到清晰分散的DNA图像，由于针尖的原因，其直径比理论值大。结论AFM在DNA表面结构研究巾的具有很大的优势。     

DNA甲基化与胶质瘤

DNA甲基化在胶质瘤的发生、发展中起重要作用。多条重要通路相关基因启动子区域的CpG岛甲基化,其甲基化发生频率与胶质瘤的发生发展、组织类型和病理分级密切相关。某些基因的DNA甲基化可为胶质瘤的早期诊断提供分子生物学标志物,同时由于DNA甲基化具有可逆性,可以为胶质瘤基因治疗提供新的靶点,还可以用来评价预后。     

BDNF基因重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-BDNF的构建与鉴定

目的构建脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组逆转录病毒表达载体。方法根据 BDNF基因已知序列,设计合成一对引物并导入HindⅢ和BamH Ⅰ酶切位点;从大鼠海马组织提取总 RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得编码BDNF的基因片段,与克隆载体pMD 18-T Simple连接构建pMDT-BDNF质粒;经HindⅢ、BamHⅠ双酶切,获得BDNF基因片断再克隆至逆转录病毒载体 pLEGFP-N1中构建重组质粒pLEGFP-BDNF。结果限制性内切酶酶切分析和PCR法鉴定表明为正确重组子,测序结果证实与已知序列吻合。结论构建的重组逆转录病毒表达载体 pLEGFP-BDNF含有序列正确的大鼠BDNF基因,可以作为今后治疗老年性痴呆动物模型转基因实验的基因来源。     

PBL教学法在神经病学临床实习中的应用

目的 探讨基于问题的学习(PBL)教学模式在神经病学临床实习教学中的应用效果.方法 根据PBL教学理论,选取首都医科大学2008级五年制学生共76人作为研究对象,按班级分为实验组(n=38)和对照组(n=38),实验组采用PBL教学法,对照组采用传统教学法,采用比较两组学生的出科考试成绩以及问卷调查评价教学效果.结果 实验组的出科考试成绩(87.58±4.77)分明显优于对照组(82.08±4.24)分,差异有统计学意义(P＜0.01);实验组肯定“有利于激发你的学习兴趣”“有助于只是的理解和记忆”“提高自学能力”和“有助于培养分析解决问题的能力”4个方面人数明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 在神经病学临床实习教学中应用PBL教学模式,不影响学生对基础知识、知识要点难点的掌握,有助于提高学生学习的积极性和主动性,促进其对知识的理解与掌握,有利于培养其临床思维能力,促进学生自我认识和成长综合素质水平的提高.     

基因重组葡激酶和重组链激酶溶栓作用的实验研究

目的:比较基因重组葡激酶和重组链激酶对脑血栓的溶化效果及对出凝血系统的影响。方法:制成猪血栓性脑栓塞模型,4h后分组自颈内动脉灌注基因重组葡激酶(rSak,0.2mg/kg)或重组链激酶(rSK,30000IU/kg),脑血管造影观察血栓是否溶化,测定凝血系统指标。结果:两实验组在用药后1.5h血管再通均高于对照组,rSak组在0.5h、1.0h的再通率高于rSK组。rSak组对纤维蛋白原、纤溶酶原影响小,凝血酶元时间、凝血酶时间延长的幅度小于rSK组。结论:基因重组葡激酶及链激酶能溶化脑血栓,但前者溶栓效果较好,对凝血功能影响较小。     

TaqMan低密度表达芯片检测DNA损伤修复基因在原发胶质瘤中的表达研究

目的运用低密度表达谱芯片检测人脑原发胶质瘤组织中DNA损伤修复基因的表达情况,进一步分析其表达变化的意义。方法使用TaqMan低密度表达芯片技术检测27个DNA损伤修复基因在40例不同级别原发胶质瘤组织和10例正常脑组织中的表达情况,并通过统计学分析其在不同级别胶质瘤和正常脑组织中的表达差异。结果与正常脑组织相比较,有13个DNA损伤修复基因在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中均表达下调,包括ERCC1、ERCC2、ERCC3、ERCCA、MGMT、MLH1、MLH3、NTHL1、OGG1、RAD50、SMUG1、XRCC4、XRCC5(P<0.05)。MSH2、MSH6、NUDT1和XRCC3只在Ⅱ级和Ⅲ级胶质瘤中表达下凋;MRE11A和MUS81只在Ⅲ级和Ⅳ级胶质瘤中表达下调。PMS2、RAD52和XRCC1只在Ⅲ级胶质瘤中表达下调,而UNG只在Ⅱ级中表达下调。结论TaqMan低密度表达芯片为多个基因的同时定量表达提供了一种准确、快速、有效的多变量检测技术,可用于发现新的肿瘤相关基因。大量的DNA损伤修复基因的表达下调,与胶质瘤的发生密切相关。     

生长抑制因子家族基因编码蛋白在DNA修复和细胞凋亡中的作用

多种内源性、外源性基因毒性闲子均可造成DNA损伤，并由此启动DNA修复过程、乃至引起应激诱导的成熟前衰老（stress—induced premature senescence．SIPS）和凋产在DNA损伤之初，细胞试图修复损伤的DNA，但是当DNA损伤程度严重，范围广泛或已经影响厂DNA代谢时，细胞将产生一系列生物渊控信号触发不同机制，共同抑制细胞增殖行促进细胞发生凋亡，防止异常的遗传倩息传递给予代细胞，以维持基因组的稳定．近来发现，[第一段]     

神经导航融合技术在颅底肿瘤中的应用

目的 探讨神经导航融合技术在颅底肿瘤中的应用。方法 通过术前准备、注册、CT与MRI等影像模式融合、术中导航定位,比较各种注册方法的精确性,融合精确度,术中定位精确性、术中持续精确性,扩大暴露范围等,提出和改进神经导航技术在颅底手术中的应用技术。结果 神经导航用于颅底肿瘤手术切除,术前有助于开颅皮肤切口及骨瓣的设计,选择最短的手术途径;术中可为肿瘤的切除定向定位,在颅底手术中使术者随时了解颅底肿瘤与周围重要解剖结构（如脑干、颅神经及重要血管等的关系）。结论 颅底肿瘤以及颅底结构位置相对固定,影响因素较小,脑移位最小,定位精确,及时反馈肿瘤的切除深度,增加手术的安全性,加快手术进程,避免脑重要结构的副损伤。     

Ⅰ型神经纤维瘤病微卫星DNA在中国人中的多态性

目的　为了评估中国人Ⅰ型神经纤维瘤病 (NF1)基因内微卫星ALU、IVS3 8GT5 3 0、EVI2 0CA、IVS2 7GT2 8 4的基因多态性及在基因诊断中的价值。方法　应用聚合酶链反应 (PCR) ,变性聚丙烯凝胶电泳 (PAGE)和银染法分析 112名无血缘关系的中国南方汉人的片段长度多态性。结果　ALU的信息含量 (PIC)为 0 3 12 ,共有 4种等位片段 ;IVS3 8GT5 3 0有 9种等位片段 ,PIC为 0 782 ;EVI2 0CA有 10种等位片段 ,PIC为 0 83 5 ;IVS2 7GT2 8 4的PIC为 0 814 ,有 14种等位片段。结论　研究人群与文献报道的白种人群相比 ,这四种微卫星在种类和分布上有差异 ;IVS3 8GT5 3 0 ,EVI2 0CA ,IVS2 7GT2 8 4是高度多态的遗传标记 ,可用于NF1的连锁基因诊断、法医学的个体鉴定和亲权鉴定。     

神经心理学在行为神经病学中的重要作用

1 神经心理学、行为神经病学概念 神经心理学(neuropsychology)是研究高级认知功能或心理活动的神经机制的一门学科,是从神经学角度研究心理学问题,以脑作为心理活动的神经基础,研究脑与心理活动或认知功能的关系.早期常常通过研究脑损伤患者的高级认知功能缺损,来推断正常状态结构和功能的关系,并为神经疾病定位诊断提供依据.