TRAIL对人乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌细胞抗肿瘤作用的实验研究

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人乳腺癌(MCF-7)、宫颈癌(Hela)、卵巢癌(SKOV-3)细胞体外抗肿瘤的杀伤作用。方法:通过MTT法、流式细胞术检测重组人TRAIL蛋白对3种肿瘤细胞和人胚肾(HEK-293)正常细胞系的作用和诱导凋亡情况。结果:一定浓度的TRAIL可有效抑制MCF-7、SKOV-3、Hela细胞,其生长抑制呈剂量依赖。TRAIL对SKOV-3细胞最敏感,用2.5 mg/L TRAIL作用SKOV-3,12h后发生凋亡,其细胞凋亡率呈时间依赖。结论:重组人TRAIL对人乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌细胞系具有生长抑制作用,并能够诱导SKOV-3细胞凋亡。     

SAHA和TRAIL联合作用对MDA-MB-231细胞增殖影响

目的探讨辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合作用对三阴乳腺癌细胞系细胞增殖影响。方法以乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究对象,实验设对照、SAHA、TRAIL、SAHA+TRAIL组,应用自动细胞分析仪检测MDA-MB-231细胞活力、细胞凋亡率和细胞周期变化,采用实时定量PCR和固相凋亡抗体芯片技术检测MDA-MB-231细胞凋亡相关因子mRNA和蛋白的表达。结果与对照组(96.6%)比较,SAHA、TRAIL、SAHA+TRAIL组MDA-MB-231细胞活力(分别为82.5%、87.1%、57.6%)明显降低,细胞增殖被明显抑制,SAHA与TRAIL联合应用对MDA-MB-231细胞生长的抑制作用具有协同效应;与对照组比较,SAHA与TRAIL联合应用使MDA-MB-231活细胞比率降低39%,活细胞总数下降超过40%;实时定量PCR和凋亡抗体芯片筛查结果表明,与对照组比较,SAHA与TRAIL联合应用后MDA-MB-231细胞caspase-3、TRAIL DR5以及p21~(CIP1)表达量明显增加,Bcl-2、Bcl-x、p53表达量明显减少。结论 SAHA与TRAIL联合应用对三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231生长具有协同抑制作用,其机制可能与激活TRAIL相关细胞凋亡通路,诱导细胞凋亡有关。     

紫杉醇联合顺铂对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的逆转作用

目的:探讨紫杉醇联合顺铂对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的逆转作用。方法:取对数生长期SK-OV3/DDP细胞进行实验。实验分为顺铂组、紫杉醇组、联合组和空白对照组。顺铂组细胞给予顺铂15μg/ml;紫杉醇组细胞给予紫杉醇3.13μg/ml;联合组细胞给予顺铂15μg/ml+紫杉醇3.13μg/ml;空白对照组细胞不给予任何药品。所有细胞均培养48 h后进行实验。采用MTT法检测细胞的生长抑制率。采用流式细胞术检测各组细胞的细胞周期和凋亡率。结果:顺铂组细胞生长抑制率与空白对照组无明显增加(P<0.05),证实SKOV3/DDP对顺铂的耐药,紫杉醇组和联合组细胞生长抑制率较空白对照组和顺铂组明显增加(P﹤0.05),联合组细胞生长抑制率最高,较紫杉醇组增加更为明显(P﹤0.05)。顺铂组与空白对照组细胞多被阻滞于G1和S期,紫杉醇及联合组细胞多被阻滞于G2/M期,联合组作用较紫杉醇组更加明显(P﹤0.05)。顺铂组细胞凋亡率与空白对照组无明显差异(P>0.05),紫杉醇组和联合组细胞凋亡率较空白对照组和顺铂组明显增加(P﹤0.05),联合组细胞凋亡率最高,较紫杉醇组增加更为明显(P﹤0.05)。结论:紫杉醇联合顺铂可明显逆转卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP对顺铂的耐药性。     

华蟾素对卵巢癌3AO细胞芳香化酶表达的影响和意义

目的探讨华蟾素对体外培养的卵巢癌3AO细胞芳香化酶和雌二醇表达的影响和意义。方法体外培养卵巢癌3AO细胞,不同浓度的华蟾素干预后,应用RT-PCR检测芳香化酶的表达,放射免疫法检测雌二醇的表达,流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果卵巢癌3AO细胞对照组的芳香化酶mRNA表达为1.39±0.13,其合成的雌二醇为(8.69±13.46)pmol/L,细胞凋亡率为2.31±0.98%;0.25mg/ml华蟾素对卵巢癌3AO细胞芳香化酶mRNA和雌二醇的表达以及凋亡率无影响(P>0.05);2.5mg/ml华蟾素干预后,卵巢癌3AO细胞芳香化酶mRNA表达为0.87±0.16,雌二醇为(10.42±4.23)pmol/L,癌细胞凋亡率为28.69±4.16%,均与卵巢癌3AO细胞对照组有统计学差异(P<0.05);25mg/ml华蟾素与2.5mg/ml华蟾素对卵巢癌3AO细胞芳香化酶mRNA、雌二醇表达和癌细胞凋亡率的影响无统计学差异(P>0.05)。结论卵巢癌3AO细胞可利用芳香化酶合成内源性雌二醇,2.5mg/ml华蟾素即可抑制癌细胞芳香化酶mRNA的表达和雌二醇的合成,抑制癌细胞的增殖。     

黄芩提取物联合顺铂对人卵巢癌细胞株SKOV-3凋亡的研究

目的:探讨黄芩提取物(Scutellaria Baicalensis)与顺铂(cisplatin,DDP)联合应用对卵巢癌细胞系SKOV-3增殖及凋亡的影响。方法:采用MTT比色法检测S.Baicalensis与DDP联合应用对SKOV-3细胞增殖的影响,吖啶橙染色观察诱导细胞凋亡情况,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡并计算细胞平均凋亡率,Westernblot技术观察细胞内p53、ERK1/2、p-STAT3的表达。结果:300μg/mlS.Baicalensis联合5μg/ml DDP给药:①48h后可使肿瘤细胞抑制率由单独应用DDP的15.8%提高到37.3%;②吖啶橙荧光染色可见细胞呈现明显凋亡形态,其凋亡率与10μg/ml DDP组相当;③流式细胞检测结果显示,可使细胞凋亡率从15.1%提高到42.2%(P<0.05);④westernblot结果显示,p53、ERK1/2、p-STAT3表达较5μg/ml DDP组单独给药组降低(P<0.05)。结论:S.Baicalensis与DDP联合应用增强对卵巢癌细胞株SKOV-3的致凋亡效应,联合应用可达到减毒增效的效果。     

Wortmannin与ABT-737诱导卵巢癌细胞凋亡的协同作用研究

目的:探讨磷酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂wortmannin单用以及与Bcl-2蛋白抑制剂ABT-737联合应用对人卵巢癌细胞系存活率和凋亡率的影响。方法:①CCK-8法分别测定Wortmannin、ABT-737单独以及联合应用对人卵巢癌细胞ES-2和SKVO-3生长的抑制率,并计算其IC50。②Annexin-V/PI法流式细胞仪检测细胞凋亡率以及对细胞周期的影响,Western blot法检测相关蛋白的表达水平,分别测定Wortmannin、ABT-737单独以及联合应用对人卵巢癌细胞ES-2和SKVO3凋亡的影响。结果:①Wortmannin和ABT-737单独作用对ES-2细胞株的IC50分别为14.12μM和31.31μM,两药联合应用的IC50为8.15μM;Wortmannin和ABT-737单独作用对SKVO-3细胞的IC50分别为16.72μM和37.56μM,联合用药的IC50为9.25μM。②0.2μM的Wortmannin作用48 h后ES-2和SKVO-3细胞的凋亡率分别为9.9%和8.7%,5μM的ABT-737作用48 h后ES-2和SKVO-3细胞凋亡率分别为10.2%和9.1%,两者联合应用对两种细胞的凋亡率分别为45.0%和53.0%,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。③Wortmannin和ABT-737联合应用可以明显的增加cleaved-caspase-3、细胞色素C以cleaved-PARP的表达量,Wortmannin和ABT-737联合应用可以明显的对人卵巢癌ES-2和SKVO-3细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:Wortmannin和ABT-737能够通过线粒体途径抑制卵巢癌细胞株的生长并诱导其凋亡,且Wortmannin和ABT-737联合应用具有协同作用。     

组织蛋白酶B对凋亡诱导配体诱导胃腺癌细胞凋亡作用机理研究

目的探讨组织蛋白酶B(Cathepsin B)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导的胃腺癌细胞凋亡的影响,并探讨其作用机理。方法应用RT-PCR法检测人胃腺癌细胞株SGC-7901的TRAILR的表达;用不同浓度TRAIL和CathepsinB特异性抑制剂CA-074(Me)作用于SGC-7901细胞24 h,检测细胞凋亡率和线粒体跨膜电位改变;用不同浓度TRAIL及TRAIL联合CA-074(Me)处理SGC-7901细胞24 h,用Western Blotting法检测细胞Cathepsin B、Bcl-2和caspase-3蛋白的表达变化。结果 SGC-7901细胞仅表达死亡受体DR4(TRAIL-R1)、DR5(TRAIL-R2)。随着TRAIL浓度增高(0mg/L、100 mg/L、400 mg/L),细胞凋亡率增加,差异有统计学意义(P0.05);与TRAIL+CA-074(Me)组比较,仅用TRAIL组凋亡率更高,差异有统计学意义(P0.05);不同浓度TRAIL作用SGC-7901细胞24 h的Bcl-2蛋白表达无影响,加入CA-074(Me)后,Bcl-2蛋白表达增加,差异有统计学意义(P0.05);与0 mg/L比较,100 mg/L和400 mg/L TRAIL作用SGC-7901细胞24 h后Cathepsin B、caspase-3蛋白表达均有增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论组织蛋白酶B在TRAIL诱导SGC-7901细胞凋亡中具有促进作用,其机理可能是TRAIL通过DR4、DR5增加细胞内Cathepsin B、caspase-3、Bcl-2蛋白的表达。     

热化联合对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响

目的研究热化联合对肺部肿瘤细胞生长的影响及其可能的机制。方法参考临床常用剂量,采用43℃加热联合120μg/L紫杉醇(热化联合组)、43℃加热联合120μg/L紫杉醇并加入30μmol/L活性氧(ROS)特异抑制剂NAC(NAC组)、单纯使用120μg/L紫杉醇(单纯化疗组)处理H446细胞,以未处理的H446细胞作对照,应用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,荧光法检测细胞内活性氧(ROS),蛋白免疫印记法(Western blotting)检测Caspase-3的表达,SPSS 13.0对数据进行统计分析。结果热化联合组细胞凋亡率高于其余各组(P<0.05);ROS在热化联合组增高(P<0.05),NAC可抑制其表达;Caspase-3表达在热化联合组中表达明显增高(P<0.05),但可被NAC抑制(P<0.05)。结论热化联合应用可以明显诱导H446细胞发生凋亡,可能是通过诱导ROS的产生,通过caspase途径实现的。     

雷利度胺联合干扰素对多发性骨髓瘤U266细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其受体表达的影响

目的观察雷利度胺联合干扰素对多发性骨髓瘤U266细胞凋亡率的影响,并探讨U266细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体(DR4、DR5)表达的变化。方法将培养到对数期的骨髓瘤U266细胞随机分为4组,1组不进行任何处理,2组给予100μg/ml雷利度胺,3组给予200 U/ml干扰素,4组给予100μg/ml雷利度胺和200 U/ml干扰素。继续孵育48 h后,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率、TRAIL及其受体表达情况。结果第4组细胞平均凋亡率(41.05%)明显高于其他3组(1、2、3组分别为8.27%、17.19%和21.50%),雷利度胺、干扰素均对细胞凋亡有作用(P0.05),且二者存在交互作用(P0.05)。2、3、4组TRAIL(分别为86.76%±2.57%、86.54%±2.41%和89.94%±1.58%)、DR4(分别为1.44%±0.13%、1.42%±0.18%和1.74%±0.10%)及DR5水平(分别为14.57%±0.64%、14.73%±0.57%和16.33%±0.75%)均较第1组(分别为81.16%±1.85%、0.83%±0.11%和12.56%±0.53%)升高,差异均有统计学意义(P0.05),4组与2组、3组的差异无统计学意义(P0.05)。结论雷利度胺及干扰素均可上调TRAIL及其受体的表达,并联合促进U266细胞凋亡,但在促进TRAIL及其受体表达方面无交互作用。     

蛋白酶体抑制剂通过内质网应激途径诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的:探讨内质网应激在蛋白酶体抑制剂MG132诱导卵巢癌细胞凋亡中的作用。方法:将人卵巢癌细胞系SKOV3设空白对照组、不同浓度MG132处理组、生长停滞及DNA损伤(chop)基因siRNA组、随机序列核酸siRNA组4组。四唑盐比色法和流式细胞术检测细胞活力和凋亡率;实时定量PCR和Western blot检测各组细胞葡萄糖调节蛋白78(grp78)以及chop基因的mRNA和蛋白表达。结果:MG132处理抑制SKOV3细胞活力,增加SKOV3细胞凋亡率。MG132处理还可诱导SKOV3细胞grp78和chop基因的表达。当chop siRNA靶向沉默chop表达后,MG132作用后SKOV3细胞活力明显增加。结论:MG132诱导卵巢癌细胞内质网应激;chop基因介导内质网应激凋亡途径在MG132的抗卵巢癌活性中发挥重要作用。     

白细胞介素-18对荷卵巢癌裸鼠的肿瘤生长抑制作用

目的:研究白细胞介素-18(IL-18)对荷卵巢癌裸鼠的肿瘤生长抑制作用,并探讨治疗前后肿瘤的病理改变。方法:采用人卵巢癌细胞株HO-8910建立24只裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,种植后1周随机分4组,每组6只,分别用不同浓度的IL-18进行腹腔注射治疗,并于种植后第4周处死裸鼠,测量瘤重,计算抑瘤率,绘制肿瘤生长曲线,计算镜下肿瘤细胞平均坏死率。结果:IL-18剂量为0μg/100μL、0.25μg/100μL、0.5μg/100μL和1μg/100μL时,瘤体重量分别为:(0.600 8±0.189 5)g、(0.247 8±0.047 3)g、(0.223 0±0.112 0)g和(0.169 0±0.112 1)g,抑瘤率分别为58.76%、62.88%和71.87%,治疗后2周,平均相对体积分别为12.028 9±1.575 2、6.831 5±2.514 8、5.502 9±1.443 6和4.126 4±1.881 2,光镜下可见治疗组中肿瘤细胞呈片状、条带状坏死,肿瘤组织细胞核碎裂、溶解,部分坏死组织呈均质红染无结构区域,镜下肿瘤细胞的平均坏死率分别为0.120 0±0.059 8、0.385 3±0.137 1、0.435 6±0.121 1和0.554 8±0.117 8。与对照组相比,卵巢癌生长的抑制作用和肿瘤细胞坏死率有显著性差异(P<0.01),且随着IL-18剂量的增加,抑制作用越明显。结论:细胞因子IL-18能通过引起更多卵巢癌肿瘤细胞的坏死,从而有效地抑制卵巢癌的生长。     

2-甲氧基雌二醇诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）诱导卵巢癌细胞系OVCAR-3细胞和卵巢癌原代培养细胞凋亡的作用及其机制。方法以2-ME作用于卵巢癌OVCAR-3细胞和原代培养细胞,采用MTT法检测细胞存活率、Annexin V—FITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1染色流式细胞术检测细胞线粒体膜电位（△ψm）,比色测定试剂盒检测caspase-3和caspase-8活性。结果与对照组相比,OVCAR-3细胞2-ME组存活率显著下降（100％vs70．5％）,凋亡率明显增加（5．3％VS40．5％）;卵巢癌原代培养细胞2-ME组存活率显著下降（100％vs61．8％）,凋亡率明显增加（5．4％VS36．9％）;此外,2-ME明显降低卵巢癌OVCAR-3细胞和原代培养细胞的AtOm,提高caspase-3和caspase-8活性。而预先以Z—VAD阻断caspase能逆转2-ME的效应。结论2-ME通过凋亡信号通路的内源性和外源性途径,诱导卵巢癌细胞凋亡。     

亚硒酸钠抑制人胃癌BGC823细胞的作用及其机制探讨

目的观察亚硒酸钠对体外培养的人胃癌BGC823细胞增殖的抑制作用及其作用机制。方法用不同浓度(0、4.0、8.0、10.0μmol/L)的亚硒酸钠处理BGC823细胞24h后,采用四甲基偶氮噻唑蓝比色法(MTT法)检测亚硒酸钠对细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪PI染色检测细胞周期,AnnexinV/PI双染法定量检测BGC823细胞凋亡率,FAS蛋白染色流式细胞仪定量检测各实验组细胞间FAS蛋白表达,荧光显微镜观察DAPI染色细胞形态。结果亚硒酸钠可明显抑制BGC823胃癌细胞的增殖,呈剂量依赖性;亚硒酸钠可阻滞细胞于S期和增加BGC823胃癌细胞凋亡率并随剂量增大作用增强;DAPI染色观察到亚硒酸钠给药组出现细胞核浓缩、边缘化以及凋亡小体等细胞凋亡的形态特征;亚硒酸钠可呈剂量依赖地增强FAS蛋白表达。结论亚硒酸钠可显著抑制人BGC823胃癌细胞的增殖,使细胞阻滞于S期,并可诱导细胞凋亡,其机制可能与上调FAS蛋白有关。     

RI基因稳定转染的SKOV3细胞系的建立及其对细胞增殖的作用

目的:建立稳定表达RI基因的卵巢癌SKOV3细胞系,并观察外源基因对细胞体外增殖的作用。方法:以脂质体为介导,将携有RI基因的重组载体pLNCX-ri转染SKOV3细胞,实验分3组,RI基因转染组(SKOV3/RI组)、空质粒转染组(SKOV3/Neo组)和空白对照组(SKOV3组)。采用G-418筛选获得稳定转染的细胞系后,通过RT-PCR技术和免疫细胞化学染色方法鉴定各组细胞中RI基因的表达;通过MTT、细胞周期分析、细胞凋亡检测方法观察该基因对细胞生长的影响。结果:外源性RI基因已整合于细胞基因组中,并获得稳定表达。转染RI基因后的细胞生长速度减慢,明显低于对照组,差异有统计学意义。细胞周期分析显示,实验组G1期细胞增至69.23%,S期细胞降至24.34%,与另外两组相比差异有统计学意义(P<0.05)。细胞凋亡检测表明SKOV3/RI组细胞凋亡率为58.25%,与SKOV3组(17.97%)及SKOV3/Neo组(21.42%)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:通过脂质体介导,可以建立RI基因稳定表达的卵巢癌细胞系,且RI基因对SKOV3细胞的体外增殖有抑制作用。     

体外培养人卵巢癌细胞株SKOV-3、SKOV-3/DDP并探讨卵巢癌顺铂耐药机制

目的:通过对人卵巢癌细胞株SKOV-3、SKOV-3/DDP体外培养,探讨卵巢癌顺铂耐药机制。方法:用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞仪测定SKOV-3、SKOV-3/DDP细胞顺铂耐药指数及细胞周期变化,并分析细胞内Bcl-2蛋白及细胞膜上Fas、Fas-L表达情况。结果:相对于SKOV-3细胞;SKOV-3/DDP细胞顺铂耐药指数约为4倍,其细胞周期主要分布于G0/G1期、S期,细胞内Bcl-2蛋白表达及细胞膜Fas、Fas-L水平明显升高。结论:细胞主要分布于潜伏期、细胞内凋亡抑制蛋白Bcl-2水平升高及细胞膜Fas、Fas-L表达增加,可能是卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV-3/DDP顺铂耐药的部分机理。     

ω-3多不饱和脂肪酸廿烷五烯酸单剂以及联合卡铂对人肺腺癌A-549细胞系增殖和凋亡的影响

目的观察廿烷五烯酸（EPA）单剂以及与卡铂联合应用对人肺腺癌A-549细胞系增殖和凋亡的影响。方法分别用100μg／ml卡铂、80μg／mlEPA以及100μg／ml卡铂联合80μg／mlEPA孵育A-549细胞48h后,采用MTr法检测药物对h-549细胞增殖的抑制率,HE染色观察细胞形态学,流式细胞术定量分析细胞凋亡率。结果100μg／ml卡铂联合80μg／mlEPA对A-549细胞系的增殖抑制率为85．20％±5．00％,显著高于80μg／mlEPA（32．85％±3．00％,P=0．0001）或100μg／ml卡铂（53．25％±3．00％,P=0．0013）单独的作用。HE染色显示：药物干预后部分A-549细胞出现凋亡形态学改变。卡铂联合EPA组A-549细胞凋亡率为17．05％4-4．00％,显著高于单用卡铂组（9．49％±1．00％,P20．0252）。结论EPA可能具有增强卡铂抑制人肺腺癌A-549细胞系增殖、促进A-549细胞系凋亡的作用。     

内皮抑素质粒联合顺铂对上皮性卵巢癌细胞株A2780增殖和凋亡的影响

目的:探讨内皮抑素质粒联合顺铂对上皮性卵巢癌细胞株A2780增殖和凋亡的影响。方法:通过瞬时转染内皮抑素质粒到卵巢癌细胞A2780后,采用MTT法和流式细胞术检测内皮抑素以及内皮抑素和顺铂联合应用对细胞增殖和凋亡的影响。结果:MTT法检测发现转染内皮抑素质粒后,A2780细胞的增殖明显减慢,顺铂对其生长抑制作用明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测发现与空白组相比,转染内皮抑素质粒后A2780细胞的G0/G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少,细胞的凋亡率由(1.59±0.86)%增加到(8.66±1.27)%;内皮抑素质粒联合顺铂治疗后,上述差异更加显著(P<0.01)。结论:内皮抑素联合顺铂可通过抑制A2780细胞的生长和增加其凋亡而产生协同抗瘤作用。     

三氧化二砷联合全反式维甲酸对人卵巢癌细胞的抑制作用

目的:探讨三氧化二砷(AS2O3)联合全反式维甲酸(ATRA)对人浆液性卵巢癌细胞株SKOV3的抑制作用及其机制。方法;四甲基偶氮唑蓝光吸收法(MTT)、流式细胞术及免疫荧光法检测体外培养的SKOV3细胞在AS2O3单独作用及联合ATRA作用下对卵巢癌细胞生长的抑制及促凋亡作用。结果:单用ATRA对SKOV3细胞的生长无影响;单用AS2O3可以抑制SKOV3细胞的生长;联合使用AS2O3和ATRA较单用AS2O3对SKOV3细胞的抑制作用强(P<0.05);流式细胞术证实:5.0μmol/LAS2O3联合1.0μmol/LATRA作用48h时,SKOV3细胞出现G2/M期阻滞增强、S期减低(P<0.05);AnnffxinV染色检测到早期凋亡细胞增多,晚期凋亡及继发性坏死细胞减低(P<0.05)。结论:AS2O3能上调SKOV3细胞中细胞周期抑制蛋白P27的表达,ATRA联合AS2O3可以增强上述效应。故ATRA对诱导SKOV3细胞凋亡有增敏效应,该效应过程可能依赖于细胞周期负性调控因子P27蛋白的过度表达。