角膜致病性丝状真菌基因分型与临床意义分析

目的研究丝状真菌性角膜炎致病菌株的基因分型及临床意义。方法收集北京同仁医院眼科中心2006年1—12月经病原学检查诊断为丝状真菌性角膜炎的患者52例,对分离的致病菌株进行rDNAITS基因分型和形态学鉴定与分析,并对患者进行治疗和随访,分析基因分型与临床多因素的关系。结果基因分型与形态学鉴定种的一致率达90．3％。根据rDNAITS基因的亲缘关系,将52株丝状真菌分为4组：第1组22株（20株茄病镰刀菌和2株尖孢镰刀菌）;第2组12株（8株串珠镰刀菌、3株层生镰刀菌和1株雪腐镰刀菌）;第3组5株（4株少见眼部真菌和1株串珠镰刀菌）;第4组13株（10株曲霉菌属和3株链隔孢属）。第1组、第2组与第3组、第4组相比,患者发病时间、诱发因素、溃疡严重程度、抗真菌治疗的疗效比较,差异均有统计学意义（P=0．000,P=0．03,P=0．01,P=0．035）。结论rDNAITS基因分型能够准确地鉴定角膜丝状真菌,对于少见或鉴定困难的菌株具有明显的优势。由于菌株的基因型不同,丝状真菌性角膜炎的临床特点具有一定的差异。     

天津地区角膜外伤后真菌感染的病原学调查分析

目的调查分析天津地区角膜真菌感染的病原菌种类。方法自2006年1月至2009年6月间,在天津市眼科医院采集角膜外伤后疑似真菌性角膜炎病变角膜标本170份,分别进行真菌直接涂片镜检和接种于沙保罗培养基进行真菌培养,对培养阳性者进行菌种鉴定。结果在170份角膜病变标本中,直接涂片镜检阳性98份,阳性率为57．65％。真菌培养阳性123株,阳性率为72．35％;涂片镜检和真菌分离培养的一致性为84．75％。其中镰刀菌属占66．67％,镰刀菌属中茄病镰刀菌占30．89％,尖孢镰刀菌占15．45％,串珠镰刀菌占13．82％。曲霉菌属占23．58％,曲霉菌属中黄曲霉菌占13．01％,烟曲霉菌占8．14％。结论镰刀菌属和曲霉菌属是天津地区眼部真菌感染的主要致病真菌。     

丝状真菌所致真菌性角膜炎的临床研究及相关分析

目的 探讨丝状真菌所致真菌性角膜炎的临床研究方法及指导临床治疗的意义。方法 对110例真菌性角膜炎进行10％KOH湿片镜检、大体培养、鉴定培养、药敏试验、病理检查和动物模型实验以指导临床分型及治疗。结果 本组110例中10％KOH湿片镜检可见大分生孢子59例，小分生孢子51例，有隔菌丝101例，无隔菌丝6例，关节状菌丝3例；鉴定培养镰刀菌59株，曲霉菌31株，青霉菌7株，无孢菌5株，头孢子菌2株，链互隔菌2株，附球菌2株，枝顶孢霉菌2株；药敏试验提示氟康唑对丝状菌均呈现耐药性，其他药物对不同的菌属呈现不同的敏感性和耐药性；病理检查可见病变角膜内大量炎细胞及菌丝浸润；15只实验兔角膜划痕接种的动物模型中4例出现角膜真菌感染。结论进行丝状真菌所致真菌性角膜炎的临床研究，对确定真菌在角膜内的生长情况和指导临床分型及选择个性化治疗、减低医疗成本有较大意义。     

眼外伤所致尖端赛多孢菌性眼内炎

目的 探讨眼外伤所致尖端赛多孢菌性眼内炎的临床特点和治疗方法.方法 回顾分析我院2003年至2008年经玻璃体培养证实为尖端赛多孢菌的眼内炎12例（12眼）,分析其发病原因、临床表现、治疗经过及治疗结果.结果 患者入院后均急诊行玻璃体切除术,并口服伊曲康唑.玻璃体标本细菌培养结果为尖端赛多孢菌.11例感染控制后出院,随访视力无光感1例,手动～数指8例,0.1～0.3者2例,随访期无复发.1例术后感染不能控制,行眼内容物摘除术,术后角膜病检提示为真菌性角膜溃疡.结论 尖端赛多孢菌是一种新出现的侵袭性真菌感染的病原菌,眼科临床工作者应提高对该病的认识.     

湖北地区真菌性角膜炎病原体菌属分布及药物敏感性研究

目的研究湖北地区真菌性角膜炎患者眼部感染真菌的菌属分布及药物敏感性。方法对我院2004年8月至2009年7月送检的289份眼部标本进行真菌培养,并对真菌培养的阳性率、菌属分布及药物敏感性(分别采用法国梅里埃ATB FUN-GUS2试条及E-test法检测)进行回顾性分析。结果 289份眼部标本中,真菌培养阳性188株(65.1%)。感染真菌中镰刀菌属124株(66.0%),曲霉菌属16株(8.5%),链隔孢霉属、弯孢霉属及其他未知暗色孢科真菌共26株(13.8%)。镰刀菌属对两性霉素B、伊曲康唑、氟康唑敏感性分别为71.0%、29.0%、16.1%,曲霉菌属对这3种药物敏感性分别为25.0%、75.0%、25.0%,暗色孢科真菌分别为100.0%、85.7%、85.7%。ATB FUNGUS2试条与E-test法同时检测两性霉素B、伊曲康唑和氟康唑,这3种药物药敏结果的符合率分别为95.8%、93.8%和87.5%,经配对χ2检验,差异无统计学意义(P>0.05)。结论镰刀菌属是湖北地区主要的眼部致病真菌菌属,链隔孢霉属等暗色孢科真菌致病比例有升高趋势,上述致病菌属对两性霉素B敏感性最高。     

行大植片角膜移植的真菌性角膜炎患者病原学及临床特征分析

目的分析行大植片穿透性角膜移植的真菌性角膜炎患者的致病菌菌属、危险因素及临床特征,为临床严重真菌性角膜炎的诊断和治疗提供客观依据。方法回顾性系列病例研究。选取2005年1月至2013年12月在青岛眼科医院确诊为真菌性角膜炎并接受大直径角膜移植（植片直径 >9 mm）患者132例（132眼）,其中男82例,女50例。职业农民76例,工人10例,其他46例。统计感染的菌种、发病来院就诊时间、就诊时病变严重程度、感染的临床特征（包括伪足、卫星灶、内皮斑、苔被、前房积脓、溃疡面积）等情况,分别就菌属差异与临床特征差异的关系进行分析,应用χ²检验分析数据。结果感染菌种中镰刀菌属85例（64.4%）,曲霉菌属10例（7.6%）,其他菌属37例（28.0%）。132例患者发病至接受LDPK术的平均时间为（23.7±11.2）d。镰刀菌属感染前3位临床特征是伪足、前房积脓、卫星灶;曲霉菌属感染前三位临床特征使前房积脓、苔被、伪足。镰刀菌属和曲霉菌属感染角膜溃疡面积分别为（48.3±12.3）mm2和（44.8±20.2）mm2,镰刀菌属感染的29例患者溃疡累及全层角膜。结论镰刀菌属和曲霉菌属是常见致病真菌,可以引起严重的真菌感染。大量前房积脓出现是严重真菌感染的重要指标,对于药物控制不佳的患者及早选择角膜移植手术控制病情是积极的治疗策略。     

洋葱种植者与真菌性角膜炎的流行病学调查

目的 探讨民勤县洋葱种植者与真菌性角膜炎的发病关系.方法 通过对甘肃民勤县52例真菌性角膜炎的临床观察及微生物培养及对洋葱采挖现场的土壤、腐烂洋葱及采挖者手指采样的微生物培养分析.结果 52例患者真菌培养,25例培养出真菌,菌种以尖孢镰刀菌最多(48％);洋葱采挖现场调查发现,洋葱刺激气味造成60％的作业者角膜上皮糜烂;现场采样真菌培养,3类标本中均培养出多种真菌,腐烂洋葱中尖孢镰刀菌最多,土壤中黄曲霉菌、茄病镰刀菌居多,作业者手指尖孢镰刀菌最多.结论 采挖洋葱的农民因洋葱刺激性气味造成角膜上皮糜烂,为真菌感染创造有利条件;农民接触腐烂的洋葱及土壤,手上污染了大量真菌,在擦拭眼泪时将真菌带入结膜囊造成感染.大多数致病菌是尖孢镰刀菌,主要来源于腐烂的洋葱.     

吉林地区135例真菌性角膜炎病原菌的调查分析

目的 调查吉林地区真菌性角膜炎的病原菌种类及分布情况.方法 取2004～2008年间135例疑似真菌性角膜溃疡患者行KOH涂片镜检,发现真菌菌丝或孢子者,取角膜刮片进行病原菌的分离培养及鉴定.结果 真菌培养阳性率为70.37%(95/135),其中混合感染为14.74%(14/95).培养阳性的真菌菌株中镰刀菌最多(45.87%),其次为念珠菌(20.18%)和曲霉(15.60%).结论 吉林地区真菌性角膜炎的优势病原菌为镰刀菌.     

没食子酸丙酯对抗真菌药体外抗丝状真菌活性的影响

目的探讨没食子酸丙酯(PG)对抗真菌药体外抗丝状真菌活性的影响,为开发有效的眼科抗真菌药物提供实验依据。方法用微量液基稀释法测定两性霉素B(AMB)、特比奈芬(TBF)、布替奈芬(BTF)及酮康唑(KCZ)单独应用及与PG联合应用对6株眼科常见致病丝状真菌(茄病镰刀菌、串珠镰刀菌、梨孢镰刀菌、尖孢镰刀菌、烟曲霉菌、黄曲霉菌)及2株质控菌(白色念珠菌、近平滑念珠菌)的最低抑菌浓度(M IC)。将抗真菌药贮存液分别用1640液及PG-1640液稀释至2倍终浓度。将各浓度药液加入96孔微量板中,每孔100μl,再向各孔加入100μl菌液(最终菌浓度5×104CFU/m l),各种药物终浓度范围为0.0313~16μg/m l,含PG组PG的终浓度为400μg/m。lAMB的M IC终点判定标准是100%的真菌生长抑制,TBF、BTF、KCZ及PG的终点判定标准是约75%的真菌生长抑制。结果单纯应用PG 400μg/m l对实验菌均无抗真菌活性。PG与AMB联合应用使AMB对茄病镰刀菌的抗菌活性增加8倍,对串珠镰刀菌、梨孢镰刀菌及烟曲霉菌的抗菌活性增加4倍,对尖孢镰刀菌、黄曲霉菌的抗菌活性增加2倍。PG与TBF联合应用使TBF对茄病镰刀菌的抗真菌活性增加32倍,对梨孢镰刀菌、尖孢镰刀菌的抗真菌活性增加4倍,对烟曲霉菌、黄曲霉菌的抗真菌活性增加2倍,但对串珠镰刀菌的抗菌活性有明显拮抗作用。PG与BTF联合应用使BTF对茄病镰刀菌的抗真菌活性增加32倍,但对其他实验菌无抗真菌协同作用,对串珠镰刀菌有明显拮抗作用。PG与KCZ联合应用,除对茄病镰刀菌的抗菌活性增加2倍外,对其他丝状真菌的抗菌活性均有明显拮抗作用。结论PG与AMB联合应用,对全部实验眼科致病丝状真菌均有明显抗真菌协同作用;PG与TBF联合应用,对部分实验菌有明显的抗真菌协同作用。     

眼部主要感染真菌对两性霉素B和氟康唑的敏感度

目的探讨两性霉素B（amphomricin B）和氟康唑（fluconazole）这两种常见的抗真菌药物对眼科常见的致病真菌（镰刀菌属、念珠菌属、曲霉菌属）的体外抗菌活性。方法经刮片收集的眼部真菌感染58例。将标本接种于Sabouraud培养基中分离培养，阳性菌株42例。根据真菌培养的形态学特征和糖发酵、糖同化及硝酸盐还原试验，分离鉴定出镰刀菌属14例，念珠菌属14例，曲霉菌属9例，其他5例。共对37例这3株眼部体外培养真菌进行研究，amphotericin B和fluconazole体外单独用药时，用NCCLS推荐使用常量肉汤稀释法（M27-A，1997）进行真菌的药敏试验。分析方法采用t检验。结果Amphotericin B对镰刀菌属的最小抑菌浓度（MIC）50为0.55μg／ml，MIC90为2．50μg／ml；对念珠菌属的MICSO为0.68μg／ml，MICgO为2．90μg／ml；对曲霉菌属的MICSO为2．50μg／ml，MICgO为4．36μg／ml。而fluconazole对镰刀菌属和念珠菌属的MIC≥128μg／ml；对曲霉菌属的MIC50为1．32μg／ml，MIC90为2．68μg／ml。结论hmphotericinB对镰刀菌属和念珠菌属均有明显的体外抗菌活性（MIC〈8μg／m1），而fluconazole对曲霉菌属的抗菌活性高于amphoricin B，治疗眼部曲霉菌属感染应首选fluconazole。     

长江中下游地区真菌性角膜炎发病特征及转归分析

目的:分析长江中下游地区真菌性角膜炎流行病学特征及治疗预后状况。方法:对2004-01/2009-12我院212例212眼确诊为真菌性角膜炎患者的完整资料进行回顾性分析,调查内容包括职业、发病时间、发病原因、就诊经过、治疗情况及转归等。结果:患者中男159例,女53例,平均年龄44.5岁。职业为农民者177例(83.5%)。98例(46.2%)患者有明确植物性外伤史或接触史。发病时间在10～12月份者136例(64.2%)。从发病到我院平均就诊时间为24.1d。就诊时视力<0.05者158眼(74.5%)。眼部标本真菌培养阳性者194例(91.5%),主要致病菌属为镰刀菌属144株(74.2%),其次为曲霉菌属16株(8.3%),暗色孢科真菌共32株(15.1%),念珠菌属2株(1.0%)。117例(55.2%)患者经药物治疗好转;59例(27.8%)患者行角膜移植术,植片透明率64.4%;20例(9.4%)行球结膜瓣遮盖术治愈。随访6～25mo,最终视力<0.05者63眼(29.7%);眼球保存率96.6%。结论:长江中下游地区真菌性角膜炎高发季节为10～12月份,高发人群为中青年农民,主要致病菌属为镰刀菌属,积极的药物和手术治疗是挽救眼球、保存视力的有效手段。     

In vitro investigation of voriconazole susceptibility for keratitis and endophthalmitis fungal pathogens

PURPOSE: To update the spectrum of ocular fungal isolates and investigate the in vitro efficacy of voriconazole and other antifungals. DESIGN: Experimental study. METHODS: Microbiology database was scanned and fungal isolates associated with keratitis (419) and endophthalmitis (122) were analyzed for classification and isolate frequency. The Sensititre YeastOne microdilution antifungal susceptibility test was used to evaluate susceptibility (MICs) of 34 common fungal pathogens against amphotericin B, fluconazole, ketoconazole, 5-flucytosine, itraconazole, and voriconazole. Ten of the test isolates were sent to a reference laboratory to validate the Sensititre results. RESULTS: Fusarium species remains the most frequent corneal fungal pathogen (60.1%). Colletotrichum species (4.1%) has emerged as the fifth most common mold in keratitis. Top yeast isolates from cornea included Candida albicans (52.3%) and Candida parapsilosis (37.3%). Half of the intraocular pathogens were Candida species. Paecilomyces (2.9%) and Philophora (1.9) were unusual pathogens. In vitro susceptibility profiles were voriconazole (100%), ketoconazole (82.4%), amphotericin (76.5%), itraconazole (67%), fluconazole (60%), and 5-FC (60%). Voriconazole MIC(90) were lowest for Candida species (0.016 microg/ml) and highest for Fusarium species (2 microg/ml). Reference laboratory MICs correlated 100% for yeast isolates (0.016 microg/ml) but were fourfold higher for Fusarium species (8 microg/ml). MIC(90) for Aspergillus species was 0.5 microg/ml. CONCLUSIONS: Candida, Fusarium, and Aspergillus species remain frequent fungal pathogens. Voriconazole may have a role in the therapeutic management of Candida and Aspergillus ocular infections. Clinical efficacy must determine the role for other fungal pathogens. Human use and animal models will determine its use in the clinical setting.     

硝酸银与三种抗真菌药物体外抗眼部致病真菌活性的对比实验研究

目的 探讨硝酸银与氟康唑、酮康唑及两性霉素B对眼部致病真菌的体外抗菌活性.方法 实验研究.参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)制定的M38-A方案,用微量液基稀释法研究硝酸银对260株(15属29种)眼部分离真菌的体外抗菌活性,并与抗真菌药物氟康唑、酮康唑及两性霉素B进行对比研究.实验药物浓度范围分别为硝酸银、酮康唑及两性霉素B 0.031～16.000 mg/L,氟康唑O.5～256.0 mg/L.硝酸银和两性霉素B的最低抑菌浓度(MIC)为100%的真菌生长抑制,氟康唑和酮康唑的MIC为75%的真菌生长抑制.结果 硝酸银、氟康唑、酮康唑及两性霉素B对镰刀菌属抑制90%菌株的最低抑菌浓度(MIC90)分别为2.000、512.000、32.000及2.000 mg/L;对曲霉菌属的MIC90分别为1.000、256.000、2.000及2.000 ms/L;对互隔交链孢霉的MIC90分别为2.000、128.000、4.000及2.000 mg/L;对新月弯孢霉的MIC90分别为2.000、4.000、0.125及0.500 mg/L;对罕见眼部致病菌的MIC90分别为1.000、256.000、1.000及1.000 mg/L.硝酸银对92.9%曲霉菌的MIC≤1.0 ms/L,对96.3%镰刀菌的MIC≤2.0 mg/L.镰刀菌属和曲霉菌属对氟康唑的耐药率分别为95.6%和90.8%,对两性霉素B的耐药率分别为44.1%和42.9%;镰刀菌属对酮康唑的耐药率为66.2%.硝酸银对氟康唑、酮康唑及两性霉素B耐药的曲霉菌属和氟康唑及酮康唑耐药的镰刀菌属有显著的体外抗菌活性.结论 硝酸银对眼部分离真菌有较强的广谱体外抗菌活性,该药适当的浓度、眼用剂型及给药方法将可能对治疗真菌性角膜炎具有临床意义.     

眼部真菌感染的病原学分析

目的：分析眼部感染的真菌菌属分布与变化。方法：对首都医科大学北京同仁眼科中心1989－2000年送检的2609份眼部真菌标本进行培养,并对真菌培养的阳性率、季节分布、菌属分布及其变化进行回顾性分析。结果：2609份眼部真菌培养标本中,真菌培养阳性775株（29．70％）。其中角膜标本707株（91．22％）,结膜标本22株（2．84％）,前房标本15株（1．94％）,玻璃体标本9株（1．16％）,泪囊标本3株（0．39％）,其他19株（2．45％）。培养阳性菌株季节特点：1－6月份共培养出249株（32．13％）,7－12月份培养出526株（67．87％）,两者比约1∶2．1。主要培养阳性菌属为镰刀菌属,共455株（58．71％）。其中1989－1994年共培养出阳性镰刀菌96株,占总检出菌数的53．63％;1995－2000年共培养出359株,占总检出菌数的60．23％,后6年校前6年增加了6．60％。其次为曲霉菌属,共130株（16．77％）,前6年培养出40株（22．35％）,后6年90株,占总检出菌数的15．10％,后6年校前6年下降7．25％。结论：镰刀菌属是我国北方地区主要的眼部致病菌属,曲霉菌属致病的比例有所下降。     

板层角膜切除术联合那他霉素治疗真菌性角膜溃疡的临床及病理研究

目的：研究板层角膜切除术联合那他霉素治疗真菌性角膜溃疡的临床疗效及组织病理学基础。方法：选取2009-12/2011-11真菌性角膜溃疡患者32例32眼,角膜病变未累及内皮层,行角膜板层切除联合那他霉素滴眼治疗,观察记录治疗前后视力、角膜情况、病程、并发症及致病菌种类,对切除组织行组织病理学检查。结果：治疗前视力≤0.05者20眼,～0.3者11眼,〉0.3者1眼。板层切除术后联合那他霉素治疗痊愈28例（87.5%）,治愈时间7～32（平均13.2±8.5）d,痊愈时视力≤0.05者5眼,～0.3者8眼,〉0.3者15眼。病情控制不良改行角膜移植术者4例。31例真菌培养阳性（96.9%）,其中镰刀菌18例,曲霉菌属8例,链格孢霉3例,未知菌属2例。病理学检查显示溃疡灶中有多量中性粒细胞浸润,过碘酸-希夫（PAS）染色显示角膜组织中菌丝多数位于角膜浅层,并呈与板层胶原纤维平行方向生长,但也有少数呈斜形或垂直生长方式,侵及切除组织全层。不同菌属之间菌丝在角膜中生长方式无明显差异。结论：对于病变未累及全层的真菌性角膜溃疡患者,及时行板层角膜切除术可大大提高那他霉素药物治疗有效性,缩短病程,恢复视力。     

恩施地区外伤性真菌性角膜炎回顾性分析

目的 了解恩施地区外伤性真菌性角膜炎临床流行病学特点.方法 回顾性分析2009年7月至2013年6月恩施州中心医院收治的外伤性真菌性角膜炎病例.记录患者人口学特征、病史、职业、致伤原因、病程、先前诊断用药情况,来院后裂隙灯检查、微生物学检查、治疗方法、转归及随访结果,对资料进行分析.结果 4年间,69例（69眼）根据患病诱因、微生物学检查结果诊断为外伤性真菌性角膜炎.随访时间1 ～14个月.男51例,女18例,年龄27 ～71岁.农民64例.主要诱因为植物外伤.外院曾经过微生物学检查诊断为真菌性角膜炎2例.来院后沙氏培养基培养阳性67例,其中镰刀菌属54例（80.6％）,曲霉菌属10例（14.9％）.59例用药物治愈,清创及板层切除术8例,穿透性角膜移植术1例,眼球摘除1例.结论 恩施地区外伤性真菌性角膜炎首位病原体是镰刀菌属,多见于青壮年男性农民,植物外伤是主要原因,可导致严重视力损害.     

Fungal spectrum identified by a new slide culture and in vitro drug susceptibility using Etest in fungal keratitis

PURPOSE: To investigate the spectrum of fungal species causing keratitis and to test antifungal drug susceptibility to each isolate using Etest. METHODS: Microbial cultures were performed for patients who were clinically diagnosed with fungal keratitis between September 2002 and July 2004. Modified slide culture was established to identify the fungal species of the isolates. Etest (AB BIODISK, Solna, Sweden) was applied to determine the antifungal agent susceptibility of each isolate to itraconazole, fluconazole, and amphotericin B in vitro, respectively. RESULTS: Among 73 eyes of 73 patients with clinical diagnosis of fungal keratitis, 61 strains of fungi were isolated from 61 eyes. The rate of positive culture was 81.3% of all cases. The spectrum of fungal species involved: 58 (95.1%) isolates of filamentous fungi, including the two most common genera-Fusarium (n = 33, 54.1%) and Aspergillus (n = 9, 14.8%),-followed by 16 (26.2%) isolates of other genera of filamentous fungi such as Alternaria (n = 3, 4.9%), Trichophyton (n = 3, 4.9%), Curvularia (n = 2, 3.3%), Chrysosporium (n = 2, 3.3%), Acremonium (n = 2, 3.3%), and Scedosporium (n = 1, 1.6%), 1 (1.6%) yeast of Candida, as well as two (3.3%) dimorphic fungi of Blastomyces and Sporothrix isolate each. Three filamentous fungi of the isolates failed to be identified according to the information provided by slide culture. The results of Etest showed that 20 (60.6%) isolates of Fusarium were susceptible to amphotericin B, whereas all of them were resistant to itraconazole and fluconazole. All nine (100%) isolates of Aspergillus were sensitive to itraconazole, whereas four (44.4%) of them were sensitive to amphotericin B, and only two (22.2%) of them were sensitive to fluconazole. Seventeen (89.5%), 13 (68.4%), and 10 (52.6%) isolates of the remaining 19 organisms were sensitive to amphotericin B, itraconazole, and fluconazole, respectively. CONCLUSIONS: Fusarium and Aspergillus are the most frequent pathogenic organisms in causing fungal keratitis, whereas other species of fungi can also cause corneal infection. In vitro Etest for assessing antifungal drug susceptibility is a simple and practical method and may provide referential information for clinical consideration of choosing antifungal agents to treat fungal keratitis.