微量水溶性维生素对胰岛素分泌的影响

目的研究各种微量水溶性维生素对胰岛素分泌的影响。方法每种水溶性维生素和混合的B族维生素配制成浓度为0、0、05、0．25、0．5和1μmol／L的不同维生素溶液，将维生素溶液添加于含葡萄糖0、8．3和16．7mmol／L的大鼠胰岛培养液中，孵化90min后测定胰岛素分泌量。结果维生素B1和维生素B6在0．25～1μmol／L浓度范嘲内埘秧岛索分泌没有影响；生物素和泛酸在16．7mmol／L的葡萄糖浓度条件下能刺激胰岛素的分泌；炯酸在16．7mmlol／L葡萄糖浓度条件下对胰岛素分泌有刺激作用，在8．3mmol／L葡萄糖浓度条件下则抑制胰岛素的分泌；叶酸、维生素C、维生素B2以及混合B族维生素在16．7mmol／L葡萄糖浓度条件下抑制胰岛素的分泌。结论水溶性维生素对胰岛素分泌的作用各不相同，胰岛素分泌量依赖于葡萄糖和维牛素的浓度。糖尿病患者应该注意食物中水溶性维生素的摄入。     

恶性疟原虫Pf332基因片段的分泌型、非分泌型真核表达重组质粒的构建

目的 构建包含恶性疟原虫Pf332基因片段的分泌型、非分泌型真核表达重组质粒。方法 从FCCl／HN株基因组DNA中PCR扩增P1332基因片段，P332-RO、P332-R1和P332-R2；用PCR扩增法合成鼠IgG轻链信号肽的编码序列。用定向克隆法分别构建分泌型重组质粒pcDNA3-s—P332-R0、pcDNAl-s—P332-R1、pcDNA3-s—P332-R2和非分泌型重组质粒pcDNA3-s—P332-R0、pcDNA3—s—P332-R1、pcDNA3—s—P332-R2。阳性克隆的重组质粒DNA经酶切、PCR扩增及测序鉴定。结果 PCR扩增得到特异的FCCl／HN株P1332基因片段，P332-R0、P332-R1、P332-R1，大小分别为489、429和393bp。用PCR扩增法合成63bp的Balb／c小鼠IgG轻链信号肽的编码序列。酶切、PCR及测序鉴定表明获得了正确的含P1332基因片段的分泌型、非分泌型重组质粒。结论 成功构建分别包含恶性疟原虫P1332基因片段-1332-R0、P332-R1和P332-R2的分泌型、非分泌型真核表达重组质粒。     

5-羟色胺在胆管上皮细胞与门管成纤维细胞自分泌／旁分泌中的作用

目的探讨5-羟色胺（5_hydmxytryptamine,5-HT）在胆管上皮细胞（biliary epithelia cells,BECs）与门管区成纤维细胞（portal fibroblasts,PFs）之间自分泌／旁分泌效应中的意义,阐述两种细胞之间的相互作用。方法体外细胞培养分为6组：1）BECs组单独培养;2）BECs＋TGF—β1组,BECs单独培养,用2ng／ml重组TGF—β1干预24h后更换培养液;3）BECs＋5-HT组,BECs单独培养,以60ng／ml的5-HT干预48h后更换培养液;4）PFs组单独培养;5）PFs＋5-HT组,PFs单独培养,以60ng／ml的5-HT干预48h后更换培养液;6）BECs＋PFs,共同培养。各组均在培养72h后,以酶联免疫吸附分析法（ELISA）检测培养介质内5-HT、TGF—β1含量;实时荧光定量多聚酶链反应（QRT—PCR）检测BECs内色氨酸羟化酶（TPHl、TPH2）和5-HT受体1A、1B表达;以BrdU、α—SMA分别作为BECs增殖及PFs转化为肌纤维母细胞（myofibroblasts,MFs）的标志,免疫细胞化学检测。结果单独培养的BECs表达5-HT合成限速酶TPH1、TPH2及5-HTRIA、5-HTR1B,5-HT分泌较高而BECs增殖不明显;经TGF—β1处理或与PFs共培养后,TPH1、TPH2表达各减少80％和87％,5-HTR1A、5-HTR1B表达分别减少75％和85％,BECs增殖明显。单独培养的PFs分泌TGF—β1,部分呈α—SMA阳性的MFs;经5-HT处理或与BECs共培养后,TGF—β1表达及MFs显著增加。结论BECs来源的5-HT以及PFs来源的TGF—β1介导BECs与PFs之间的自分泌与旁分泌效应,维持BECs增殖和PFs向MFs的转化,在胆管病发病机制中可能具有重要意义。     

不同糖耐量个体胰岛β细胞功能观察及评价

目的评价正常糖耐量（NGT）、糖调节受损（IGR）、新诊断2型糖尿病（T2DM）个体胰岛β细胞功能及其相关指标的适用性。方法178例入选者行口服和静脉葡萄糖耐量试验。检测胰岛素生成指数（ΔI30/ΔG30）、胰岛素急性分泌时相（AIR）、β细胞功能指数（HOMA β）、空腹胰岛素原（FPI）及胰岛素原／胰岛素（PI／I）比值反映胰岛素分泌功能。结果IGR组的ΔI30／ΔG30、AIR较NGT组分别下降了38％、39％,HOMA β轻度下降（19％）;T2DM组的胰岛β细胞功能降低更明显,其中AIR下降84％,ΔI30／ΔG30下降70％、HOMA β下降62％。T2DM组FPI和PI／I比值也比NGT组明显升高（24．4pmol／L±18．0pmol／L or 10．9pmol／L±6．7pmol／L;14．7％±10．5％or10．0％±6．5％,P〈0．05）。ΔI30／ΔG30和AIR相关性好（r=0．75,P〈0．001）。结论IGR患者主要表现胰岛素分泌时相缺陷和HOMA β降低,至糖尿病阶段则伴有胰岛素分泌质量下降。ΔI30／ΔG30和AIR均可准确反映IGR患者胰岛β细胞功能,而在新诊断2型糖尿病患者中AIR更适用,若应用ΔI30／ΔG30须校正胰岛素抵抗。     

游离脂肪酸对大鼠胰岛分泌功能和胰岛细胞凋亡的影响研究

目的：研究游离脂肪酸对体外培养SD大鼠胰岛功能和胰岛细胞凋亡的影响并探讨可能机制。方法：取健康雄性SD大鼠胰岛原代分离培养,分为6组,培养1d：NC1组（5．6mmol／L葡萄糖）、FFA1组（0．25mmol／L）、FFA2组（0．5mmol／L）;培养3d：NC2组（5．6mmol／L葡萄糖）、FFA3组（0．25mmol／L）、FFA4组（0．5mmol／L）;每组6个样本,每个样本20个胰岛。采用RT—PCR扩增胰岛素、PDX-1、Bax、Caspase-3基因mRNA表达,TUNEL法检测胰岛细胞凋亡率,放射免疫法检测胰岛素水平。结果：①FFA1、FFA2组Insulin、PDX-1基因表达量、胰岛素分泌较NC1组明显下降,FFA1、FFA2组凋亡基因Bax、Caspase-3表达量及胰岛细胞凋亡率较NC1组明显升高,差异有统计学意义（P〈0．05）;②FFA3、FFA4组Insulin、PDX-1基因表达量、胰岛素分泌较NC2组明显下降,FFA3、FFA4组凋亡基因Bax、Caspase-3表达量及胰岛细胞凋亡率较NC2组明显升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：游离脂肪酸抑制体外培养SD大鼠胰岛细胞的胰岛素分泌功能,其可能机制是FFA抑制胰岛素基因、PDX-1基因的合成,刺激胰岛细胞凋亡基因Bax、Caspase-3表达,并导致胰岛细胞凋亡,最终导致胰岛细胞分泌功能下降。     

公鸡促进产后乳汁分泌的临床观察

目的　研究产后进食公鸡对乳汁分泌的影响。方法　选择正常产妇 2 98名 ,随机分为对照组、催乳组、公鸡组 3组 ,记产后 2 4小时 ,4 8小时 ,72小时乳量及产妇第 4天哺乳后 2小时乳汁量测定并乳汁微量元素。结果　三组产妇产后 2 4小时血液检测结果无统计学差异 ;产后 3天泌乳量有显著差别 ,且乳汁中的微量元素含量无统计学差异。结论　公鸡有促进产后乳汁早分泌和增加泌乳量的作用。     

糖适平诱导离体大鼠胰岛β细胞脱敏及敏感性恢复的研究

目的 探讨糖适平诱导离体大鼠胰岛β细胞脱敏及敏感性恢复的规律。方法 采用小剂量链脲佐菌素(STZ25mg／kg)腹腔一次注射并高热量饮食的方法建立肥胖2型糖尿病模型,观察不同剂量的糖适平(500、1000、1500ng／m1)在不同作用时间对正常和2型糖尿病鼠离体胰岛细胞胰岛素分泌的影响,了解糖适平对胰岛β细胞脱敏及敏感性恢复的条件。结果 500、1000ng／ml的糖适平刺激正常鼠胰岛β细胞能于2h时产生胰岛素分泌高峰,以后逐渐下降,而1500ng／ml糖适平则无此现象;不同剂量糖适平预处理的正常鼠胰岛β细胞对相应剂量糖适平的即刻刺激均无反应,10min短期脱敏不能使胰岛素分泌恢复,20h长期脱敏,胰岛素分泌在500ng／ml糖适平刺激时能完全恢复。结论 鼠胰岛β细胞对糖适平诱导的脱敏作用及敏感性恢复具有时问和剂量依赖性。     

孕激素对子宫平滑肌瘤生长的影响

目的：探讨孕激素对子宫平滑肌瘤生长的影响。方法：对n3例子宫平滑肌瘤标本的组织切片进行分析，观察每100个高倍视野中核分裂相数与增生期和分泌期以及与患者年龄的关系。结果：发现孕激素水平最高的分泌晚期核分裂相数（3．8／100HP）明显高于增生期（2．1／100HP，P〈0．01），分泌期核分裂相数青年组明显高于老年组（P〈0．01）。结论：孕激素是子宫平滑肌瘤的促生长因素之一。     

短期胰岛素强化治疗对初诊2型糖尿病患者胰岛β细胞功能的影响研究

目的：探讨短期胰岛素强化治疗时初诊2型糖尿病患者胰岛β细胞功能的影响。方法：时空腹血糖（FPG）≥11．1mmol／L和／或餐后2小时血糖（2hPG）≥14mmol／L的60例初诊2型糖尿病患者进行了2周严格血糖控制．对比治疗前后FPG，静脉葡萄糖耐量试验（IVGTT）时胰岛素及C肽曲线下面积和第一时相胰岛素分泌（AIR）。结果：经短期胰岛素强化治疗后，血糖可得到良好控制，IVGTT时出现明显胰岛素及C肽分泌相，部分患者恢复了AIR。结论：短期胰岛素强化治疗可改善B细胞功能，有利于血糖控制。     

Th1型/Th2型细胞因子对蜕膜细胞活性及其泌乳素分泌的影响

目的：研究Th1型／Th2型细胞因子对人孕早期蜕膜细胞活性及泌乳素（PRL）分泌的影响。方法：蜕膜细胞活性采用MTT法进行检测，蜕膜组织分泌PRL的活性采用放免法（RIA）进行分析测定。结果：Th1型细胞因子IFNγ低浓度时（1－10ng/ml)对蜕膜细胞活性及PRL分泌有促进作用（P＜0．05），高浓度时（100－1000ng/ml) 则有抑制作用（P＜0．01）。而Th2型细胞因子IL－4在一定浓蔗人（1－10ng/ml) 可明显促进蜕膜的上述功能（P＜0．01）。结论：Th1型／Th2型细胞因子可能是通过影响蜕膜细胞活性及PRL分泌而在早期妊娠中起重要的免疫调节作用。     

黄体不健的生殖内分泌变化

黄体不健是不孕症的重要原因之一。本文对52例黄体不健者采用放射免疫法测定其早卵泡期血请FSH、LH、PRL、E_2和黄体中期血清PRL、E_2,P_0水平,并与正常对照组进行比较。结果表明:黄体不健组早卵泡期FSH、LH、E_2及黄体中期P_0水平较正常对照组低,而PRL水平则高于正常对照组,其差别均有显著或非常显著性意义(P<0.05或P<0.01)。由此说明,黄体不健与卵泡发育障碍有关。因而认为对黄体不健的治疗,如果采用补充黄体酮的方法仅是“治标”,而促进卵泡发育成熟才是“治本”。并认为中医药的周期疗法可能为此打开一条有效途径。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7 z0986-z1444双缺失突变株构建

目的 采用Red重组方法敲除肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7 z0986和z1444基因,构建双缺失突变株.方法 首先构建z0986、z1444打靶片段;其次以电击法转化感受态细胞,之后通过PCR鉴定所得菌株;最终所得阳性单克隆测定生长曲线.结果 z1444单基因缺失突变株(Δz1444/933)及z0986-z1444双基因缺失突变株(Δz0986/Δz1444/933)构建成功,其生长曲线与野生型EHEC O157:H7差异均无统计学意义.结论 z0986与z1444基因缺失对EHEC的生长无影响.构建Δz1444/933及Δz0986/Δz1444/933为深入研究z1444基因的功能及作用机制奠定了基础.     

Orf1/SpcS chaperones ExoS for type three secretion by Pseudomonas aeruginosa

Objective Pseudomonas aeruginosa is a ubiquitous and opportunistic pathogen that uses the type Ⅲ secretion system （TTSS） to inject effector proteins directly into the cytosol of target cells to subvert the host cell＇s functions. Specialized bacterial chaperones are required for effective secretion of some effectors. To identify the chaperone of ExoS, the representative effector secreted by the TTSS of P aeruginosa, we analyzed the role of a postulated chaperone termed Orfl. Methods By allelic exchange, we constructed the mutant with the deletion of gene Orfl. Analysis of secreted and cell-associated fractions was performed by SDS-PAGE and Western blotting. Using strain expressing in trans Orfl, tagged by V5 polypeptide and histidine, protein-protein interaction was determined by affinity resin pull-down assay in combination with MALDI-TOF The role of Orfl in the expression of exoS was evaluated by gene reporter analysis. Results Pull-down assay showed that Orfl binds to ExoS and ExoT. Secretion profile analysis showed that Orfl was necessary for the optimal secretion of ExoS and ExoT. However, Orfl had no effect on the expression of exoS. Conclusion Orfl is important for the secretion of ExoS probably by maintaining ExoS in a secretion-competent conformation. We propose to name Orfl as SpcS for ＂specific Pseudomonas chaperone for ExoS＂.     

铜绿假单胞菌T3SS和T6SS的基因分布特性及与耐药的相关性

目的：了解痰液及血液来源铜绿假单胞菌III型分泌系统（T3SS）和VI型分泌系统（T6SS）的基因分布特性及其与耐药的相关性。方法：收集2016年至2018年温州医科大学附属第一医院住院患者中不同标本来源的铜绿假单胞菌共92 株（痰液来源61株,血液来源31株）;PCR法检测菌株T3SS效应蛋白基因exoS、exoT 、exoU 、exoY 、pscC 和T6SS效应蛋白基因tssB1、tse1、tse2 、tse3 、tssB2 、pldA 、tssB3 、pldB 的携带情况;琼脂稀释法检测菌株对临床常用抗菌药物的敏感性;统计分析不同感染与分泌系统基因携带情况的关联性,并进一步分析不同基因与耐药的关系。结果：痰液及血液来源的菌株中T3SS蛋白基因exoT 以及T6SS蛋白基因tssB1、tse2 、tssB2 、pldB 的检出率均高达90%以上,痰液来源菌株T3SS蛋白基因exoU 的携带率（32.8%）显著高于血液来源菌株的携带率（9.7%）,差异有统计学意义（P ＜0.05）,其对亚胺培南的耐药率也显著高于血液来源菌株（P ＜0.05）;Spearman相关性分析结果表明exoU 和pldA 之间存在正相关（r =0.474,P ＜0.01）;携带不同T3SS及T6SS基因的菌株对临床常用抗菌药物亚胺培南、环丙沙星、头孢他啶、阿米卡星的耐药率差异无统计学意义（P ＞0.05）。结论：T6SS效应蛋白基因pldA 与T3SS效应蛋白基因exoU具有较强的正相关性,常同时存在于铜绿假单胞菌中;痰液和血液来源铜绿假单胞菌T3SS效应蛋白编码基因exoU 的携带率和对亚胺培南的耐药率存在明显差异,提示我们要及时检测T6SS效应蛋白基因pldA 在菌株中的分布,关注菌株致病特性,并关注痰液来源菌株的毒力及耐药性情况,为临床用药及治疗提供策略。     

Type IV secretion system in Helicobacter pylori: a new insight into pathogenicity

Objective To review the research progress on Type IV secretion system (T4SS) in Helicobacter pylori.Data sources The data used in this review were identified by searching of PUBMED (1995-2007) online resources using the key terms ‘Type IV secretion system’ and ‘Helicobacter pylori’.Study selection Mainly original articles and critical reviews written by major pioneer investigators of this field were selected.Results The research progress on T4SS in Helicobacter pylori was summarized. The structure and function was discussed.Conclusions T4SS is not only involved in toxin secretion and injection of virulence factors into eukaryotic host target cells, but also involved in horizontal DNA transfer to other bacteria and eukaryotic cells, through DNA uptake from or release into the extracellular milieu. It provides a new insight into the pathogenicity of Helicobacter pylori and a novel target for antimicrobials development. However, many challenges remain for us in understanding the biological role of T4SS in Helicobacter pylori.     

类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统BPSS1395蛋白表达及其抗体制备与鉴定

目的 重组表达类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统蛋白BPSS1395,利用其抗体检测该蛋白在细菌中的分布.方法 以pET-22b为表达系统,采用DNA重组技术在大肠杆菌中表达BPSS1395蛋白;用纯化重组蛋白免疫新西兰大白兔,Western blot及ELISA法鉴定其免疫学性质;以制备的抗血清Western blot分析该蛋白的亚细胞定位.结果 从类鼻疽杆菌BPC006株基因组DNA中PCR得到了BPSS1395目的基因,并成功构建pET-22b-BPSS1395重组质粒,转化到E.coli宿主菌BL21(DE3)经IPTG诱导表达、纯化得到了相对分子质量为32×103的高纯度BPSS1395蛋白,制备的兔抗血清ELISA效价均高达1:1280000,并能与目的蛋白发生特异性抗原抗体反应.亚细胞分离后BPSS1395在类鼻疽杆菌中主要定位于细胞质.结论 重组表达了具有生物活性的BPSS1395蛋白,制备了其特异性多克隆抗体,证明了该蛋白定位于细胞质.     

类鼻疽伯克霍尔德菌Ⅲ型分泌系统蛋白BsaL的制备和免疫反应性分析

目的 构建表达重组的类鼻疽伯克霍尔德菌Ⅲ型分泌系统结构蛋白BsaL的大肠工程菌,制备高纯度、高质量的重组BsaL蛋白样品,探讨其作为类鼻疽菌检测的候选抗原的可行性.方法 基因工程技术构建表达重组BsaL蛋白的大肠工程菌,通过亲和层析、凝胶过滤层析等纯化方法得到高纯度的BsaL蛋白.包被BsaL蛋白于96孔板,分析其用于检测临床类鼻疽菌株的敏感性和特异性.结果 成功构建了表达重组BsaL蛋白的大肠工程菌,诱导、表达及纯化后得到高纯度(＞99％)、高浓度(20 mg/mL)的重组BsaL蛋白.该蛋白在类鼻疽菌检测方面表现出较好的灵敏度(85％)和特异性(89％).结论 成功表达了重组的BsaL蛋白,获得了高纯度的BsaL蛋白样品,在类鼻疽菌的诊断方面展示出较好的应用价值.     

大肠埃希菌Ⅵ型分泌系统相关蛋白多克隆抗体制备及分泌蛋白检测

目的为研究新近发现的大肠埃希菌(E.coli)Ⅵ型分泌系统的组成和功能,制备与之相关的三种重要蛋白AaiC、CRP和OmpA的多克隆抗体,并对分泌蛋白AaiC进行检测。方法采用PCR技术扩增出目的基因,并将其连接到pET-22b或pQE80原核表达载体中,酶切及测序鉴定正确后转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达蛋白并纯化,使用纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western blotting检测抗体。应用AaiC抗体检测E.coli RS218菌株分泌蛋白。结果重组质粒构建成功,并能够在E.coli中高效表达,免疫得到AaiC、CRP和OmpA高效价的特异性多克隆抗体。AaiC抗体检测证实RS218菌株能够分泌AaiC蛋白。结论成功制备了E.coli三种重要蛋白AaiC、CRP和OmpA的特异性抗体,检测出RS218菌株分泌AaiC蛋白,为进一步研究E.coliⅥ型分泌系统的生物学功能以及E.coli的致病机制奠定了基础。     

中国人胆汁分泌量实验测定

本文报道作者设计的胆汁采集法，基本排除饮食及胆汁酸地循环的干扰，在人体近于正常条件下，有效地对13个成年人，进行了胆汁分泌量实验测定。对胆汁酸池循环影响胆汁分泌量和国人胆汁分泌量的计算法，作者阐明了自己的见解。