金三莪对实验性肝纤维化大鼠TGF-β1、Smad3、Smad7及CTGF表达的影响

[目的]观察中药金三莪抗四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的疗效及作用机制。[方法]将50只Wistar大鼠分为正常对照组、模型对照组、中药治疗1组及2组,于造模第1周及第4周开始用金三莪治疗。免疫组化技术检测转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3、Smad7及结缔组织生长因子(CTGF)在肝内表达及其在细胞中的定位,肝组织电镜检查,放射免疫法检测血清透明质酸(HA)含量。[结果]经中药金三莪治疗后肝纤维化大鼠肝组织内TGF-β1、Smad3及CTGF表达降低,而Smad7的表达增加,TGF-β1、Smad3及CTGF的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞浆,Smad7则主要在肝细胞浆表达。电镜检查中药治疗组大鼠肝细胞结构趋于正常,纤维组织变薄。模型组血清HA含量明显高于正常组(P<0.01),中药治疗1、2组血清HA含量明显低于模型组(P<0.05)。[结论]中药金三莪能有效地减轻四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的损伤及纤维化程度,其机制可能是抑制肝内TGF-β1、Smad3及CTGF并促进Smad7表达。     

实验性肝纤维化大鼠TGF-β_1、Smad3、Smad7、CTGF的表达及其意义

目的 :研究四氯化碳 ( CCl4 )诱导肝纤维化大鼠肝脏转化生长因子β1( TGF-β1)、Smad3、Smad7和结缔组织生长因子 ( CTGF)的表达及定位。方法 :将 2 4只大鼠随机分为正常对照组与模型组 ,模型组大鼠予以 40 %四氯化碳皮下注射 8周后处死。免疫组化技术检测 TGF-β1、Smad3、Smad7和 CTGF在肝脏的表达及细胞内的定位 ,放射免疫方法检测透明质酸 ,并进行肝组织病理检查。结果 :与正常组大鼠比较 ,模型组大鼠肝内 TGF-β1、Smad3、CTGF表达增加 ,而 Smad7的表达降低。 TGF-β1、Smad3及 CTGF的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞浆 ,Smad7主要在肝细胞浆表达 ;模型组大鼠血清 HA及肝组织Van Giseon染色、HE染色和电镜检查均支持肝纤维化改变。结论 :肝内 TGF- β1、Smad3和CTGF表达增强、Smad7表达减弱 ,提示 TGF- β1轴、CTGF参与了肝纤维的发生发展 ,可能作为防治肝纤维化发生发展的新途径之一     

肝复健方对肝纤维化大鼠TGF-β/Smad信号通路的影响

目的 观察以"浊毒"立论的肝复健方对猪血清诱导的大鼠肝纤维化(HF)肝脏转化生长因子-β1(TGF-β1)及其Ⅱ型受体(TβRⅡ) mRNA水平和Smad2/3、Smad4、Smad7蛋白表达的影响.方法 SD大鼠腹腔注射猪血清0.5 mL,每周2次,连续8周制备HF模型,每天灌胃分别给予不同剂量的肝复健方(15.0、22.5、30、0 g/kg)和秋水仙碱(0.154 g/kg)治疗至12周末.实验结束后,RT-PCR法检测肝组织TGF-β1及其受体TβRⅡmRNA的表达,Weston-blot法检测肝组织Smad2/3、Smad4、Smad7蛋白的表达.结果 与正常对照组相比,模型组TGF-β1、TβRⅡ及Smad2/3、Smad4表达明显增强,Smad7表达明显下降;经肝复健方治疗后大鼠肝脏TGF-β1及其受体TβRⅡ表达均比模型组减弱,Smad2/3、Smad4的表达减弱而Smad7蛋白的表达增强.结论 肝复健方能抑制TGF-β1及其受体TβRⅡ mRNA的表达,下调Smad2/3、Smad4蛋白表达,上调Smad7蛋白的表达.肝复健方对大鼠HF肝脏TGF-β/Smad信号通路有明显的影响,这可能是其治疗HF的机制之一.     

小柴胡汤通过TGF-β1/Smad通路改善大鼠肝纤维化

目的研究小柴胡汤通过转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad通路改善大鼠肝纤维化的作用及机制。方法雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、中药+SRI组,采用四氯化碳皮下注射的方式建立大鼠肝纤维化模型,给与小柴胡汤灌胃及Smad2/3激活剂SRI-011381腹腔注射干预。比较各组大鼠肝脏病理改变、血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白蛋白(ALB)、透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)含量,以及肝脏中TGF-β1、Smad2、Smad3表达的差异。结果与对照组比较,模型组大鼠出现了典型的肝纤维化病理改变,血清中ALB的含量降低,血清中ALT、AST、HA、LN、PCⅢ的含量及肝脏中TGF-β1、Smad2、Smad3的表达水平增加;与模型组比较,中药组大鼠肝纤维化的病理改变减轻,血清中ALB的含量增加,血清中ALT、AST、HA、LN、PCⅢ的含量及肝脏中TGF-β1、Smad2、Smad3的表达水平降低;与中药组比较,中药+SRI组大鼠肝纤维化的病理改变加重,血清中ALB的含量降低,血清中ALT、AST、HA、LN、PCⅢ的含量及肝脏中TGF-β1、Smad2、Smad3的表达水平增加。结论小柴胡汤能够改善大鼠的肝纤维化,抑制TGF-β1/Smad通路是介导这一改善作用可能的分子机制。     

肝纤维化大鼠星状细胞Smad3、Smad7基因表达差异的研究

通过检测肝纤维化大鼠原代肝星状细胞 (HSC)的 Sm ad3和 Smad7编码基因的表达 ,探讨 HSC活化及转化机制。皮下注射四氯化碳 (CCl4)制备大鼠肝纤维化模型 ,于注射 CCl4后 1、 4、 8周分批分离 HSC并计算 HSC平均得率 ;RT- PCR检测其 Sm ad3、Smad7m RNA的表达变化。结果显示 :1CCl4注射后第 1、 4、 8周大鼠 HSC平均得率分别为 :(3.34± 0 .36 )× 10 7/只、 (4 .2 1± 0 .6 4)× 10 7/只、 (5 .88± 0 .79)× 10 7/只 ,均高于正常大鼠 HSC平均得率(2 .2 3± 0 .19)× 10 7/只 ,组间比较有显著性差异 ,P<0 .0 5。 2与正常对照组相比 ,注射 CCl4后 1、 4、 8周大鼠 HSC中 Sm ad3m RNA表达增加 ,P<0 .0 5。注射 CCl4后 1周 Sm ad7m RNA较正常明显升高 ,P<0 .0 5 ,到第 4周和第 8周表达水平则持续下降 ,P<0 .0 1。提示 Sm ad3和 Smad7在肝纤维化发生、发展中对 HSC的活化及转化起不同的介导作用。     

实验性血吸虫病肝纤维化中TGF-β1、Smad3的表达变化

目的 :研究TGF - β1、Smad3蛋白在血吸虫病肝纤维化家兔肝组织中的表达及意义。 方法 :日本血吸虫尾蚴腹贴法制备家兔肝纤维化模型 (n =32 ) ,按诱导时间将动物随机分为 4、8、12周及正常对照共 4组 ,采用逆转录多聚酶链反应 (RT -PCR)检测肝组织中转化生长因子TGF - β1mRNA表达水平 ,免疫组织化学法检测Ⅰ型胶原的表达 ,同时应用Westernblot检测Smad3蛋白的表达。结果 :肝纤维化形成过程中TGF - β1mRNA表达进行性增强 ,且伴有肝组织Ⅰ型胶原含量的明显增高 ,两者呈正相关 (r =0 .6 2 9,P <0 .0 1)。与正常对照组相比 ,各期肝纤维化家兔肝组织中Smad3蛋白表达增加 ,与TGF - β1mRNA表达趋势基本一致。该Smad蛋白上调与肝纤维化程度呈明显正相关 (r =0 .5 2 7,P <0 .0 1)。结论 :TGF - β1/Smad信号通路参与了血吸虫病肝纤维化进程 ,Smad3的上调在肝纤维化发生、发展中起重要的介导作用。     

荔枝核总黄酮对肝纤维化大鼠TGF-β1及Smad3、7表达的影响

目的探讨荔枝核总黄酮(TFL)对胆汁性肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3、7表达的影响及其抗肝纤维化可能的作用机制。方法将雄性SD大鼠70只随机分为假手术组、模型组、TFL大剂量组[200mg/(kg.d)]和TFL小剂量组[100mg/(kg.d)]。采用胆总管结扎制备肝纤维化大鼠模型。分别于术后第2、3、4周处死大鼠,留取肝脏组织。HE染色观察大鼠肝组织病理改变;免疫组织化学法检测TGF-β1、Smad3、7在肝组织内的动态表达。结果假手术组肝组织内TGF-β1、Smad3有少量表达,Smad7呈高表达。与模型组比较,TFL大剂量治疗后大鼠肝组织内纤维化程度降低。随着肝纤维化的形成和发展,第2、3、4周TFL大剂量组大鼠肝组织TGF-β1(3.000±1.309、2.000±1.309、1.800±1.649)、Smad3(2.875±1.458、2.000±1.309、1.833±0.753)与模型组TGF-β1(3.750±1.488、4.333±1.211、5.000±0.817)、Smad3(3.375±0.916、4.000±0.894、4.250±0.500)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TFL能有效地减轻胆总管结扎所致肝纤维化大鼠肝损伤及肝纤维化程度,其机制可能与抑制TGF-β1、Smad3高表达,上调Smad7表达有关。     

中药软肝饮对CCl4诱导的肝纤维化大鼠TGF-1/Smad信号通路的影响

[目的]研究中药软肝饮对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝脏TGF-1及Smad3,Smad7表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。[方法]Wistar大鼠40只,随机分成正常对照组,模型对照组,软肝饮治疗组,鳖甲软肝片对照组,采用CCl4背部皮下注射构建肝纤维化模型,行HE和VG染色,光镜下观察肝组织肝纤维化程度。同时免疫组化SABC方法检测各组TGF-1、Smad3和Smad7的表达。[结果]与正常对照组相比,模型组TGF-1、Smad3表达明显增强,Smad7表达明显下降。经软肝饮治疗后大鼠肝脏TGF-1表达比模型组减弱。软肝饮同时下调Smad3的表达,上调Smad7的表达。另外,软肝饮组大鼠肝脏病理变化显著改善。[结论]肝炎平对大鼠肝纤维化肝脏TGF-1/Smad信号通路有明显的影响,能抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化,其作用机制可能为抑制TGF-1表达,下调Smad3及上调Smad7的表达。     

硫化氢对大鼠肝纤维化的预防作用

目的:探讨外源性硫化氢对实验性大鼠肝纤维化的预防及其作用机制。方法:雄性大鼠24只,随机分为3组,即正常对照组(n=8)、模型组(n=8)、硫化氢预防组(n=8)。四氯化碳(CCl4)腹腔注射诱导大鼠肝纤维化模型,硫化氢预防组除腹腔注射40%CCl4外,还给予NaHS腹腔注射,每日1次,至第8周。实验结束后,检测肝功和肝纤维化指标;观察肝组织病理学变化;应用RT-PCR和Western印迹法检测肝组织转化生长因子β1(TGF-β1)的表达。结果:与模型组比较,硫化氢预防组能降低血清丙氨酸氨基转换酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、三型前胶原(PCⅢ)水平(P<0.01或P<0.05),升高白蛋白(P<0.05),改善肝功能,且TGF-β1表达明显减少,肝组织病理明显改善。结论:外源性硫化氢能有效抑制肝纤维化的发生发展,其机制可能与硫化氢降低TGF-β1的表达,减少细胞外基质在肝脏中的沉积,从而延缓肝纤维化的进程有关。     

水飞蓟宾对硫代乙酰胺诱导的肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad3信号通路的调节作用

目的 探讨水飞蓟宾对硫代乙酰胺(TAA)诱导的肝纤维化大鼠肝组织的保护作用及对TGF-β1/Smad3信号通路的调节作用。方法45只大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组及水飞蓟宾组,每组15只。除对照组外,其余大鼠使用硫代乙酰胺建立肝纤维化大鼠模型,水飞蓟宾组大鼠按照756 mg/kg的剂量给予水飞蓟宾灌胃,对照组及模型组大鼠给予等量生理盐水灌胃,1次/d,给药6周。全自动生化分析仪检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)及Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)水平,苏木精 伊红（HE）染色法检测各组大鼠肝组织病理学变化,免疫印迹(Western blot)检测大鼠肝组织TGF-β1、Smad3水平。结果 与对照组比较,模型组肝纤维化大鼠血清ALT、AST、ALP、GGT、HA、LN、PCⅢ、ColⅣ水平及肝组织TGF-β1、Smad3水平显著升高(均P＜0.05),肝组织发生明显病理学变化;与模型组比较,水飞蓟宾组大鼠血清ALT、AST、ALP、GGT、HA、LN、PCⅢ、ColⅣ水平及肝组织TGF-β1、Smad3水平显著降低(P＜0.05),肝组织病理学明显改善。结论 水飞蓟宾能够明显改善硫代乙酰胺诱导的肝纤维化大鼠肝功能,抑制肝纤维化因子水平,改善大鼠肝组织病理学进展,其机制可能与调节TGF-β1/Smad3信号通路有关。     

半夏、水半夏及其炮制品中β-谷甾醇含量比较

目的:比较半夏、水半夏及其炮制品中β-谷甾醇的含量。方法:采用双波长薄层扫描法进行测定。结果:β-谷甾醇点样量在0.6~3.0μg范围内线性关系良好,相关系数r=0.999。回收率为97.48%,RSD=1.70%(n=5)。结论:水半夏生品及炮制品中β-谷甾醇含量要高于半夏生品及炮制品中β-谷甾醇含量。     

虎杖升麻升高白细胞作用的实验研究

用昆明系小鼠，对虎杖升麻水煎液升高外周血白细胞的作用进行了实验研究。结果表明：虎杖升麻水煎液在正常生理条件下，并不引起实验动物白细胞的增加，对环磷酰胺所致白细胞减少的动物，在５５．０ｇ／ｋｇ的剂量下，使白细胞总数从６．２２×１０＾９／Ｌ上升到１２．８５×１０＾９／Ｌ。同时观察到白细胞总数的增加，主要是中性白细胞的升高，说明虎杖升麻水煎液有增加白细胞的作用。     

坎离砂中当归川芎的鉴别

目的 建立坎离砂中当归川芎同时鉴别的方法.方法 采用TLC法同时鉴别当归、川芎,展开剂为正己烷-乙酸乙酯-甲酸(5:5:0.4).结果 供试品TLC图谱中,在与当归川芎对照药材及阿魏酸(FA)对照品色谱相应的位置上,显示相同颜色斑点.结论 该方法快速、准确、专属性强、重现性好,可用于坎离砂的质量控制.     

高效液相色谱法测定土茯苓中薯蓣皂苷元的含量

目的:采用高效液相色谱法测定土茯苓中薯蓣皂苷元的含量.方法:色谱柱为Diamonisil(TM钻石)C18柱(150mm×4.6mm,5um);以乙腈-水(90:10)为流动相;检测波长203nm;柱温35℃;流速:1.0mL·min-1.结果:薯蓣皂苷元进样量在0.4896ug～2.448ug范围内线性关系良好(r=0.9995);加样回收率为97.1%,RSD为1.23%.结论:方法操作简便,分离效果良好.     

川芎-天麻不同比例配伍药效成分含量变化的研究

目的建立HPLC法测定川芎-天麻药对70%(体积分数,下同)乙醇提取液中药理活性成分阿魏酸、天麻素和天麻苷元的质量浓度,研究药对中不同比例配伍对目标组分的影响。方法采用Waters e2695高效液相色谱仪、GL Science Inertsil ODS-3色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);柱温25℃,流速1 m L·min-1。阿魏酸检测的流动相为甲醇-0.05%(体积分数)H3PO4水溶液(体积比40∶60),波长为320nm;天麻素、天麻苷元检测的流动相为乙腈-0.05%(体积分数)H3PO4水溶液(体积比3∶97),波长为220nm。结果用本法测定得到不同比例配伍的川芎-天麻药对70%乙醇提取液中各指标成分质量浓度随药材比例改变而改变。结论本试验建立的HPLC法可有效测定不同比例配伍的川芎-天麻药对的70%乙醇提取液中阿魏酸、天麻素和天麻苷元的质量浓度,可为川芎-天麻药对体内外的成分研究和临床运用提供参考。     

人参、黄连及其药对治疗糖尿病研究进展

现代药理研究表明,人参具有调节免疫力、改善微循环、调节血糖等作用,其中人参皂苷在治疗和改善糖尿病及其并发症方面具有显著效果;黄连具有抗氧化、抗病毒、正性肌力及降压与降糖的作用,分离出来的生物碱主要有小檗碱、药根碱等,其中小檗碱的含量最高,其降糖作用也最好。     

泽泻药材的GC指纹图谱研究

目的建立泽泻药材的GC指纹图谱。方法采用毛细管气相色谱法测定了16个不同批次的泽泻样品。色谱条件:SGE30QC3/AC20石英毛细管色谱柱,程序升温65～185℃,进样口温度250℃,检测器(FID)温度250℃,分流比为10∶1。结果泽泻药材的GC指纹图谱由18个特征峰构成,不同产地药材的GC指纹图谱有一定差异。结论本研究建立的GC指纹图谱有较好的稳定性和重现性,能反映不同来源泽泻药材中挥发性成分的差异。     

中药白及的质量标准研究

目的对中药白及进行鉴别及含量测定研究.方法采用<中国药典>2000年版一部(附录VI B)薄层色谱法;HPLC法测定含量,样品用甲醇提取后再经酸水解提取,流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(85:15),色谱柱为Shim-pack vp-ODS柱,检测波长为254nm.结果及结论为白及质量标准的制订提供了依据.     

延胡索中生物碱成分的研究

目的 提取分离延胡索中的生物碱供延胡索种质评价使用。方法 运用色谱学和波谱学方法分离鉴定延胡索中的生物碱。结果 从延胡索总碱中分离得到了13种生物碱，鉴定了其中12种生物碱的结构，分别为:d-紫堇碱，四氢巴马亭，脱氢紫堇碱，四氢黄连碱，四氢小檗碱，异紫堇球碱，原托品碱，四氢非洲防己胺，氯仿巴马亭，saulatine，海罂粟碱，脱氢海罂粟碱。结论 生物碱saulatine为首次从罂粟科植物中分得，异紫堇球碱为首次从延胡索中分得。     

虎杖药材指纹图谱研究

目的应用RP-HPLC对不同产地虎杖药材进行指纹图谱研究。方法K rom as il C18色谱柱(150 mm×4.6mm,5μm),乙腈-水二元梯度洗脱,体积流量:1 mL/m in,检测波长303 nm。结果根据选择的色谱条件制订了不同产地虎杖药材的指纹图谱。结论色谱图对各产地虎杖药材中各成分得到了很好的分离,可作为虎杖药材的专属性指纹图谱。