血清BMP-2、BMP-4检测在慢性肾脏病大鼠主动脉钙化中的意义

目的建立慢性肾脏病(CKD)大鼠主动脉钙化模型,探讨血清骨形态发生蛋白2(BMP-2)、骨形态发生蛋白4(BMP-4)与主动脉钙化程度的相关性。方法 55只SD大鼠随机分为对照组(20只)和CKD组(35只,由于预实验中CKD组大鼠后期存在死亡现象,为保证实验过程每个时间的实验样本量充足,因此CKD组样本量较对照组多),分别于第2、4、6、8周收集血液、尿液、主动脉、肾脏;肾脏HE染色评估肾脏病理改变;茜素红染色法、钙含量测定评估主动脉钙化程度; ELISA测定大鼠血清BMP-2、BMP-4水平;免疫组织化学检测主动脉BMP-2、BMP-4蛋白表达。结果与对照组各时间点相比,CKD组大鼠24 h尿蛋白定量、血清尿素氮、肌酐、胱抑素C水平明显增加(P0.05)。肾脏HE染色显示,自第2周起,肾小管出现扩张,小管内棕黄色物质沉积,随时间进展,逐渐出现间质纤维化,肾小球部分萎缩,血管减少,炎性细胞浸润。茜素红染色随时间进展,第8周出现大量橘红色颗粒物沉积伴钙结节形成。CKD组钙含量明显增加且与血清BMP-2 (r=0.929,P0.01)及BMP-4 (r=0.702,P0.01)明显正相关。同时,自模型成功建立第4周,主动脉BMP-2、BMP-4蛋白表达即明显增加。结论血清BMP-2、BMP-4表达增加可作为CKD血管钙化的血清标志物。     

冠状动脉钙化患者的血浆BMP-2水平及其临床意义

目的:研究冠状动脉钙化患者血浆骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的水平及临床意义。方法:根据冠状动脉造影(CAG)结果将171例患者分3组:正常对照组、冠状动脉狭窄无钙化组,冠状动脉狭窄伴钙化组,比较3组患者BMP-2水平的差异。结果:CAG发现有冠状动脉钙化的患者组BMP-2水平高于正常组及冠状动脉狭窄而无钙化组。结论:BMP-2水平升高可能是动脉钙化标志之一。     

慢性肾脏病患者血清PTH与BMP-2的变化及意义

选择慢性肾脏病(CKD)患者65例和健康查体者20例(对照组),根据肾小球滤过率(GFR)将CKD患者分为五组,分别采用化学发光法和酶联免疫吸附法测定血清血清甲状旁腺激素(PTH)及骨形态发生蛋白-2(BMP-2)浓度,分析血清PTH及BMP-2浓度变化的规律.结果 CKD患者血清PTH、BMP-2浓度均明显高于对照组(P<0.01);CKD患者血清BMP-2浓度与PTH呈正相关(r=0.678,P=0.006).认为CKD患者血清PTH及BMP-2浓度随肾功能损害程度加重逐渐升高,提示PTH、BMP-2与CKD患者病情进展有一定关系.     

BMP-7过表达抑制大鼠肝星状细胞上皮-间叶转化

目的观察慢病毒介导的BMP-7高表达是否能抑制大鼠HSC-T6细胞发生上皮-间叶转化（epithelial to mesenchymal tran-sition,EMT）,并能拮抗TGF-β1的促EMT作用。方法构建大鼠BMP-7慢病毒表达载体,体外感染HSC-T6细胞株,将成功感染BMP-7重组慢病毒的细胞给予TGF-β1（5 ng/mL）或溶酶体处理。Real-time PCR检测α-SMA、S100A4、E-cadherin mRNA转录水平。Western blotting检测α-SMA、S100A4、E-cadherin、Ⅰ型胶原蛋白表达水平。结果 BMP-7慢病毒感染HSC-T6后,无论TGF-β1存在与否,real-time PCR检测到α-SMA、S100A4 mRNA转录下调,E-cadherin转录上调。Western blotting显示α-SMA、S100A4及Ⅰ型胶原蛋白表达下调,E-cadherin蛋白表达上调。实验组与空病毒对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,空病毒对照组与空白组比较,差异无统计学意义。结论 BMP-7能有效拮抗TGF-β1对HSC-T6的促EMT作用,可能成为肝纤维化治疗的新途径。     

积雪草颗粒对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞BMP-7表达的影响

目的观察积雪草颗粒（CAG）对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的肾小管上皮细胞NRK52E骨形态发生蛋白-7（BMP-7）及TGF-β1表达的影响。方法将体外培养的NRK-52E分为正常对照组（N组）、TGF-β1刺激组（T组）和CAG小（C1组）、中（C2组）、大（C3组）及蒙诺组（M组）。细胞培养48h后取出,采用RT—PCR技术和细胞免疫化学技术检测其BMP-7、TGF-β1 mRNA及蛋白。结果与N组比较,T组BMP-7mRNA及蛋白的表达明显减少,TGF-β1 mRNA及蛋白的表达均明显增加（P〈0．05）;C2、C3、M组TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平均显著低于T组（P均〈0．05）,BMP-7 mRNA及蛋白表达水平均显著高于T组（P均〈0．05）;G3、M组BMP-7 mRNA及蛋白和TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平与N组比较,P均〉0．05。结论CAG可通过直接抑制NRK52E中TGF-β1的表达并维持BMP-7的表达,而发挥抗肾间质纤维化的作用。     

血清N-MID、BMP-7水平与骨质疏松性椎体压缩性骨折术后骨折延迟愈合的关系

目的 探讨血清骨钙素N端中分子片段(N-MID)、骨形态发生蛋白7(BMP-7)水平与骨质疏松性椎体压缩性骨折(OVCF)术后骨折延迟愈合的关系.方法 选择接受经皮椎体成形术治疗的OVCF患者254例,术后12周出现骨折延迟愈合20例(观察组)、未出现骨折延迟愈合234例(对照组).术后12周,采集空腹肘静脉血,离心留...     

肾移植急性排异的治疗─—对抗排异反应药物作用的新认识

肾移植急性排异的治疗─—对抗排异反应药物作用的新认识杨俊伟，黎磊石关键词肾移植；急性排异；免疫抑制；单克隆抗体免疫抑制治疗在器官移植中历来占有举足轻重的作用。理想的免疫抑制治疗应该是长期、有效、安全，而且仅针对移植物的选择性免疫抑制，其目的是达到宿主...     

重组人骨形态发生蛋白-7抗体的制备及鉴定

目的利用重组人骨形态发生蛋白-7（rhBMP-7）制备抗体,为BMP-7临床应用奠定基础。方法采用皮内多点注射法将rhBMP-7免疫新西兰大白兔4次,每次间隔2周。免疫后颈动脉插管取血。ELISA法测定抗血清效价,蛋白免疫印迹技术确定抗血清特异性、最佳稀释度、灵敏度。结果抗血清效价为1：640000;通过从小鼠骨组织及肾脏组织中提取的BMP-7证实抗体有很好的特异性,抗血清的最佳稀释度为1：5000-1：50000,灵敏度为1～100ng。结论成功制备了rhBMP-7抗体,该抗体具有很高的特异性及灵敏度。     

重组骨形态发生蛋白-7的复性及纯化

目的探讨重组骨形态发生蛋白-7（rhBMP-7）的复性及纯化获得高纯度rhBMP-7二聚体的方法。方法表达rhBMP-7的工程菌经发酵、裂菌、提取包涵体后,4℃下依次在尿素浓度为4、2、1 mol/L的磷酸盐缓冲液中透析使蛋白复性,然后再通过层析色谱纯化去除杂蛋白。结果纯化后rhBMP-7以单体和二聚体形式存在,纯度达95%以上,其中rhBMP-7二聚体含量可达60%以上。结论初步建立了先复性然后在低脲浓度下纯化的方法,能够获得含量较高的rhBMP-7二聚体。     

2型糖尿病肾病患者血清中骨形态发生蛋白-7及转化生长因子-β1水平的变化及意义

目的探讨2型糖尿病肾病患者(DN)血清中骨形态发生蛋白-7(BMP-7)及转化生长因子-β1(TGF-β)水平的变化及意义。方法用ELISA法检测T2DM组(87例)及同期门诊健康体检者D组(24例)人群血清中TGF-β1、BMP-7水平,根据尿微量白蛋白/肌酐值(ACR)(<30 mg/g;30³00 mg/g;>300 mg/g)将T2DM组分为正常白蛋白尿A组32例,微量白蛋白尿B组31例,临床白蛋白尿C组24例,同时检测糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、总胆固醇(TC)、体重指数(BMI)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。结果糖尿病组患者血清中的水平较健康对照组显著升高,BMP-7的水平较健康对照组显著降低。A组与B组中TGF-β1因子水平未见统计学差异(P>0.05),A组与C组比较有统计学差异(P<0.05);A组与B组、A组与C组以及B组与C组中BMP-7比较均有统计学差异(P<0.05);整体糖尿病组ACR与TGF-β1呈正相关(r=0.433,P<0.001),与BMP-7呈负相关(r=-0.493,P<0.001)。结论 TGF-β1和BMP-7的表达变化可能与DN的进展有关,对其检测和早期靶向治疗可能成为诊断和治疗早期DN的新方向。     

BMP-7对油酸诱导肾小管上皮细胞转分化的影响

目的观察骨形态发生蛋白（BMP）-7对油酸（OA）诱导的人肾小管上皮细胞转分化的拮抗作用。方法应用体外细胞培养技术培养人肾小管上皮细胞株HK-2。分别用不同浓度BMP-7（0、1、5、10、50ng／ml）和一定浓度的OA（400μmol／L）共刺激体外培养的HK-2 48h,收集细胞,采用ELISA法和RT-PCR法检测转化生长因子（TGF）-β1蛋白、mRNA的水平和表达变化,采用RT-PCR法检测α-平滑肌动蛋白（SMA）mRNA的表达变化。结果BMP-7可以显著减少OA诱导的HK-2中TGF-β1和α—SMA mRNA的表达（P〈0．01）。结论BMP-7可以拮抗OA诱导的肾小管上皮细胞转分化。     

脊柱融合术患者BMP-2基因突变的检测及其意义

目的检测脊柱融合术患者的骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因突变状况。方法从80例行脊柱融合术患者的术前空腹静脉血中提取DNA,采用聚合酶链反应—单链构象多态性分析(PCR-SSCP)及测序技术,检测其BMP-2基因部分编码区及其侧翼序列的突变。结果脊柱融合术患者的外周静脉血中BMP-2基因有突变:TCG→GCG,TCA→TCG,并引起相应多肽的结构改变。结论脊柱融合术患者中存在BMP-2基因突变及多态性分布,并有可能影响植骨融合效果。     

骨形态发生蛋白-7生物学功能的研究进展

最初发现骨形态发生蛋白(BMP)-7的作用是异位诱导成骨,并根据这一特点应用于治疗临床一些难治性骨缺损疾病.新近发现BMP-7还与泌尿系统、生殖系统关系密切,可用于治疗动物模型中缺血性肾病、炎性肾病、高转换率肾性骨营养不良和血管钙化等.因此,BMP-7具有广泛的功能与应用前景.     

应用转染BMP7基因组织工程软骨修复兔膝关节软骨缺损观察

目的 构建转染骨形态发生蛋白-7(BMP7)基因组织工程软骨,观察对家兔膝关节软骨缺损的修复作用.方法 将转染BMP7基因的软骨细胞(5×109个/L)接种于胶原-纤维蛋白凝胶的支架中,培养14 d后移植于家兔膝关节软骨表面,直径为5.0 mm,深达软骨下骨板的全层软骨缺损部位.移植后4、8、12周处死家兔,通过创面形态观察、组织形态的光镜观察、BMP7基因在移植部位的表达,评价转染BMP7基因组织工程软骨对兔膝关节软骨缺损的修复作用.结果 转染BMP7和未转染BMP7基因组织工程软骨培养物的体积分别为9 mm × 9 mm×2 mm和8 mm×8 mm×2 mm.转染BMP7基因组移植于家兔膝关节软骨后4、8、12周,均有软骨缺损修复作用,且移植部位有红褐色BMP7 mRNA和棕红色BMP7蛋白表达.移植后12周修复效果佳.优于未转染BMP7基因组.结论 转染BMP7和未转染BMP7基因组织工程软骨对兔膝关节软骨缺损均有修复作用,但转染BMP7基因组织工程软骨修复作用更强.     

老年大鼠脑出血后BMP-7 mRNA表达的动态变化

目的 初步了解骨形成蛋白(BMP)-7对老年脑出血后神经修复的作用及其可能机制.方法 制作老年大鼠自体血脑出血模型(ICH),设正常对照组、模型组和假手术组,用RT-PCR法分别观察BMP-7 mRNA在脑出血后1、7、14、28 d脑内的动态表达.结果 模型组脑出血1 d时BMP-7 mRNA表达降低(P<0.05),7 d以后持续增高,一直到28 d仍高于正常对照(P<0.05).结论 老年期ICH后不同时间BMP-7mRNA的表达变化可能有助于神经修复.     

肥胖小鼠血清BMP4/7与炎症因子分布特征和指标间的相关性

目的 观察肥胖小鼠体内动脉血管与脂肪组织中骨形态发生蛋白-4、7(BMP4、BMP7)的表达,研究血清BMP4/BMP7比率变化与动脉血管炎症相关性。方法 以ob/ob小鼠为肥胖组,C57BL/6小鼠为正常组,每组各8只。普通饮食喂养12周后,心脏取血并处死,分别取腹主动脉与腹部脂肪组织,用荧光定量PCR和Western blot检测各组织中BMP4、BMP7、IL-1β、IL-9及p-Smad1 mRNA与蛋白的表达。结果 肥胖组血清中BMP4的表达水平显著高于正常组(P<0.05),BMP7的表达两组无明显差异,肥胖组血清BMP4/BMP7比率显著高于正常组(P<0.05);肥胖组BMP4 mRNA与蛋白在动脉血管的表达高于正常组,在脂肪组织中的表达少于正常组(P<0.05)。BMP7 mRNA与蛋白在动脉血管与脂肪组织中的表达均无显著差异。肥胖组在动脉血管处BMP4mRNA/BMP7mRNA比率显著高于正常组(P<0.05),而在脂肪组织中的表达二者差异不明显。IL-1β和IL-9 mRNA与二者蛋白在动脉血管与脂肪组织中的表达水平均高于正常组(P<0.05)。结论 肥胖小鼠体内动脉血管的炎症反应明显,与血清BMP4/BMP7比率增加相关。     

重组人骨形态发生蛋白-7对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7)对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法 采用线栓法建立局灶脑缺血再灌注模型,随机分为对照组(C组)、缺血再灌注组(I组)和rhBMP-7处理组(B组),B组于再灌注开始前30 min给予rhBMP-7 250 μg/ kg尾静脉注射,C组和I组给予等量生理盐水.于血流再灌注后24 h行神经功能缺陷评分后取脑,行脑含水量和梗死体积测定,计算脑梗死体积比,并电镜下观察脑超微结构变化.结果 B组大鼠脑局灶性缺血再灌注24 h后,神经功能缺陷评分明显下降,脑含水量和梗死体积比明显低于I组(P<0.01).神经细胞的坏死程度也明显轻于I组.结论 rhBMP-7缩小梗死体积,减轻脑水肿,对脑缺血再灌注损伤具有保护作用.     

老年骨肉瘤患者VEGF、bFGF和BMP-2的表达与意义

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维因子(b FGF)和骨形态发生蛋白(BMP)-2在老年骨肉瘤患者中的表达情况。方法随机选取老年骨肉瘤患者57例,利用免疫组化法(S-P法)测定肿瘤组织中VEGF、b FGF和BMP-2的表达情况,并结合临床资料综合评价。结果VEGF在正常骨组织和骨肉瘤中的阳性表达率分别为5.0%和71.93%;b FGF在正常骨组织和骨肉瘤中的阳性表达率分别为0%和78.95%;BMP-2在正常骨组织和骨肉瘤中的阳性表达率分别为0%和77.19%。三项指标的阳性表达率与年龄、性别、骨肉瘤发生部位和组织学类型无关(P0.05),而与骨肉瘤的病理分期和肿瘤直径有关,Ⅱb~Ⅲ期骨肉瘤中VEGF、b FGF和BMP-2的阳性表达率也显著高于Ⅰ~Ⅱa期(P0.05)。VEGF、b FGF和BMP-2在骨肉瘤中的表达具有显著相关性(P0.001)。结论 VEGF、b FGF和BMP-2在骨肉瘤的发生和发展中具有重要的作用,可以作为扼制肿瘤的新靶点,而三者在骨肉瘤的发展过程中又具有相关性,可以通过联合检测判断肿瘤的状态,并为肿瘤的转移和预后提供参考。     

不同剂量氟对大鼠成骨细胞激活与BMP-4、BMP-2和Smad-4表达的影响

目的探讨过量氟对大鼠成骨细胞系BMP-2、BMP-4及其信号转导物Smad-4表达水平的影响及其与氟骨症发病机制的关系。方法利用饮水加入氟化钠(NaF)进行大鼠染氟实验,采用原位杂交技术、 Western blot技术、免疫组织化学方法,对氟中毒大鼠骨组织成骨细胞系进行BMP-4、Smad-4的mRNA水平和 BMP-2、BMP-4蛋白质水平的定量分析。结果 NaF可刺激慢性氟中毒大鼠椎骨各包被成骨细胞增殖,并诱导 BMP-2、BMP-4和Smad-4的表达。在低钙偏食组慢性氟中毒大鼠BMP-4、Smad-4 mRNA和BMP-2、BMP-4 蛋白质水平稍增高但与对照组相比差异无统计学意义(P>0．05);在高钙和低钙加氟组Smad-4 mRNA的表达均增高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0．001);在低钙加氟组Smad-4 mRNA水平与BMP-4 mRNA水平和BMP-2、BMP-4蛋白质表达水平具有一定相关性(r=0．53)。结论过量氟可刺激大鼠成骨细胞系激活、增殖能力增强,但在增殖能力增强的成骨细胞中BMP-4 mRNA和BMP-2、BMP-4蛋白质水平表达无明显增高,可能与氟骨症的骨化不良有关;NaF刺激Smad-4 mRNA过表达可能与氟骨症骨相损害的信号转导途径激活有关。