全反式维甲酸对Rb细胞的生长及Cx43蛋白分子表达的影响

目的研究全反式维甲酸（ATRA）对视网膜母细胞瘤（Rb）细胞的生长及细胞间隙连接蛋白（Cx）43分子表达的影响，探讨其作用机制。方法设立3种浓度（10^-3mol／L、10^-6mol／L和10^-7mol／L）ATRA分别作用于Rb细胞，采用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）比色法检测细胞生长抑制率，流式细胞术检测细胞周期改变及凋亡率，免疫组织化学方法检测细胞Cx43蛋白的表达。结果经ATRA作用后，Rb细胞增生率下降，G0／G1期细胞比例增高而S期比例相对下降，细胞凋亡率升高，Cx43蛋白表达上调。上述效应均呈药物浓度及作用时间依赖性。结论ATRA通过将Rb细胞生长周期阻滞于G0／G1期并促进凋亡而抑制其生长，同时可诱导细胞Cx43分子表达上调。     

全反视黄酸对豚鼠视网膜色素上皮细胞分2泌TGF-β2及细胞内第二信使IP3和cAMP的影响

目的观察全反视黄酸（ATRA）对培养的豚鼠视网膜色素上皮（RPE）细胞增殖以及分泌转化生长因子p2（TGF—β2）的影响，并观察细胞内第二信使cAMP和IP3的含量变化。方法培养原代豚鼠RPE细胞，传2代后用于实验。实验分3组进行。第1组用不同浓度ATRA（5×10^-6、10×10^6、40×10^-6mol／L）作用于豚鼠RPE细胞，24h后用MTT法检测细胞增殖情况。第2组加入10×10^-6mol／L的ATRA．分别于2、4、6、8、16h后收集培养液，用ELISA方法检测RPE细胞TGF—β2的分泌量。第3组以10×10^-6mol／L的ATRA作用于豚鼠RPE细胞．分别于0min、5min、30min、2h、6h后收集细胞裂解液。行放射免疫和ELISA方法检测细胞内cAMP和IP3的含量变化。每组均以等量溶剂DMSO作为对照。对不同浓度ATRA组间MTT结果行方差分析，其余实验组与对照组间比较行配对t检验。结果5×10^-6、10×100、40×100mol／LATRA作用RPE细胞24h后，DD值分别为0．099±0．008、0．117±0．008、0．087±0．011。与对照组（0．103±0．017）比较，40×10^-6mol／LATRA作用时OD值显著降低，差异有统计学意2（P〈0．05），其他浓度组与对照组相比差异无统计学意义（p〉0．05）。10×10^-6／mol／L的ATRA作用RPE细胞后，TGF—β2的分泌量在作用2、4、6h时较对照组明显升高，差异均有统计学意义（P〈0．05）．8h时无明显变化，16h时降低（P〈O．05）。10×10^-4mol／L的ATRA作用于豚鼠RPE细胞后，IP3的含量在各时间点均较对照组显著下降，且随时间的延长下降越明显；cAMP的含量只有在作用30min和2h时升高．其他时间变化不明显。结论浓度为40×10^-6mol／L的ATRA对豚鼠RPE细胞的增殖有抑制作用。10×10^-6mol／L的ATRA作用RPE细胞后．TGF-β2的分泌量在6h内增加，之后随时间延长而降低。ATRA对RPE细胞的作用可能与IP3的下降有关。     

紫杉醇对人Tenon囊成纤维细胞增生的抑制作用及机制

背景人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）的异常增生是导致抗青光眼滤过手术失败的主要原因。寻找抑制HTFs增生的药物对抑制青光眼术后功能性滤过泡的瘢痕化有重要意义。目的观察紫杉醇对体外培养的HTFs增生、凋亡、细胞周期以及基质金属蛋白酶-1（MMP-1）表达的影响。方法收集抗青光眼滤过术中切除的人眼Tenon囊组织,用组织块培养法培养HTFs并进行传代,取3～6代细胞用于实验。采用小鼠抗人角蛋白抗体、小鼠抗人波形蛋白抗体、小鼠抗人结蛋白抗体、小鼠抗人S-100抗体行免疫组织化学染色鉴定培养的HTFs。在培养基中分别加入0、1×10^-8、1×10^-8、1×10^-6mol／L紫杉醇,采用实时细胞电子分析系统（RT—CES）观察不同浓度紫杉醇作用后HTFs的细胞指数变化;采用DAPI染色法观察各组细胞的凋亡情况;用流式细胞术检测不同浓度紫杉醇作用后HTFs各细胞周期比例;采用实时定量PCR（real—timePCR）和ELISA法检测各组HTFs中MMP-1mRNA和蛋白的表达量,分别以MMP-1mRNA／GAPDHmRNA和MMP-1蛋白质量浓度（μg／L）表示。结果组织块原代培养7d内可见细胞游出,呈长梭形和不规则三角形,培养的细胞抗波形蛋白抗体染色阳性,而抗角蛋白抗体、抗结蛋白抗体和抗S-100抗体染色阴性。培养基中加入紫杉醇作用24h后,1×10^-8、1×10^-7、1×10^-6mol／L紫杉醇组平均细胞指数值分别为1．09±0．191、0．665±0．093和0．473±0．117,均明显低于0mol／L紫杉醇组的1．514±0．283,差异均有统计学意义（均P=0．000）;紫杉醇作用后,HTFs的细胞核内可见呈DAPI蓝色荧光的颗粒状物质,荧光强度随着紫杉醇浓度的增加而增强。l×10^-8、1×10^-7、1×10^-6mol／L紫杉醇分别作用12h后,G,／M期HTFs的比例分别为（9．20±0．80）％、（12．37±0．45）％和（13．80±0．35）％,明显高于0mol／L紫杉醇组的（7．17±0．50）％,差异均有统计学意义（P=0．005、0．000、0．000）。与0mol／L紫杉醇组比较,1×10^-8、1×10^-7、1×10^-6mol／L紫杉醇作用30min后HTFs中MMP-1mRNA的相对表达量均明显下降,差异均有统计学意义（均P=0．000）;1×10^-8、1×10^-7、1×10^-6mol／L紫杉醇作用24h后,HTFs中MMP-1蛋白的表达量均明显低于0mol／L紫杉醇组,差异均有统计学意义（P=0．010、0．002、0．001）。结论1×10^-8～1×10^-6mol／L紫杉醇可抑制体外培养HTFs的增生,诱导细胞凋亡,阻断细胞的有丝分裂,其作用机制可能与下调细胞中MMP-1的表达有关。     

雌二醇及丙酸睾酮对H2O2诱导泪腺上皮细胞凋亡的抑制作用

背景性激素在干眼症的发病过程中起着重要的作用,尤其是对泪腺的功能起到非常重要的调控作用,但其对泪腺上皮细胞凋亡作用的机制尚不完全明确。目的探讨雌二醇及丙酸睾酮对H2O2诱导的兔泪腺上皮细胞的凋亡作用。方法分离2～3月龄雄性普通级新西兰兔的泪腺组织,用组织块培养法体外培养兔泪腺上皮细胞,用细胞角蛋白（CK）抗体对培养的细胞进行免疫细胞化学鉴定。取对数生长期的细胞,以5×10^-5个／ml接种于96孔板培养44h后,培养基中分别加入1×10^-5、1×10^-6、1×10^-7、1×10^-8mol／L的雌二醇或丙酸睾酮培养24h,再加入1×10^-4 mol／L H2O2培养1h诱导细胞凋亡,仅用H2O2作用的细胞作为凋亡对照组,常规培养的细胞作为空白对照组。MTT比色法检测各组细胞570nm处泪腺上皮细胞活性的吸光度（A570）值,流式细胞仪Annexin V／PI双染法检测各组细胞的凋亡情况。结果培养的细胞呈不规则多边形,其中80％以上的细胞对CK呈阳性反应。MTT比色法检测表明,与空白对照组比较,凋亡对照组、不同浓度雌二醇组和丙酸睾酮组的A。值均明显降低,差异均有统计学意义（P〈0．01）,1×10^-5、1×10^-6、1×10^-7mol／L雌二醇组和1×10^-6mol／L丙酸睾酮组的A570值均明显高于凋亡对照组,差异均有统计学意义（P〈0．01）。与相应浓度丙酸睾酮组相比,雌二醇组A570值均明显增高,差异均有统计学意义（P〈0．01）。与凋亡对照组比较,丙酸睾酮组和雌二醇组早期及晚期细胞凋亡率均明显下降,差异均有统计学意义（P〈0．01,P〈0．05）;与丙酸睾酮组相比,雌二醇组早期及晚期的细胞凋亡率明显下降,差异均有统计学意义（P〈0．01,P〈0．05）。结论雌二醇及丙酸睾酮可抑制H2O2诱导的泪腺上皮细胞的凋亡,雌二醇的抑制作用强于丙酸睾酮。雌二醇对泪腺上皮细胞凋亡的抑制作用呈一定的剂量依赖性。     

内皮素-1对体外培养人小梁网细胞纤维连接蛋白及Ⅰ型胶原表达的影响

目的观察内皮素-1（ET-1）对人小梁网细胞（TMCs）细胞外基质纤维连接蛋白（FN）、Ⅰ型胶原（COL Ⅰ）的影响。方法取死亡24h内尸眼小梁网组织,行TMCs原代和传代培养,并用FN、层黏连蛋白（LN）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和Ⅷ因子相关抗原（FⅧRAg）鉴定为人TMCs后,取传3代的人TMCs,给予不同浓度ET-1（10^-9、10^-8、10^-7mol／L）孵育72h后,免疫荧光和Western blot观察ET-1对TMCs中FN、COLⅠ表达的影响;然后取传3代的人TMCs,分别给予10^-7mol／L ET-1、10^-7mol／L ET-1＋10^-7mol／L ETA受体拈抗剂、10^-mol／L ET-1＋10^7mol／L ETB受体拈抗剂后孵育72h,Western blot观察ET受体拮抗剂对FN、COL Ⅰ表达的影响。结果研究受到伦理委员会的批准,取材前征得供体家属的知情同意。培养的细胞形态多样,含少许色素颗粒,FN、LN、NSE染色均呈阳性反应,FⅧRAg呈阴性反应。人TMCs与10^-9～10^-7mol／L ET-1共孵育后FN表达上调（F=18．41,P〈0．05）;与10^-8mol／L、10^-7mol／L ET-1共孵育后COLⅠ表达上调（F=39．81,P〈0．05）,并呈浓度依赖性,10^-7mol／L时作用最明显;给予ETA受体拮抗剂后,与ET-1组相比,FN、COLⅠ的表达均降低（qFN=7．213,P〈0．05;qCOLⅠ=6．187,P〈0．05）,但给予ETB受体拮抗剂后,FN、COLⅠ的表达均无明显变化。结论ET-1能够促进体外培养的人TMCs中FN、COLⅠ的表达,其机制可能是通过激动ETA受体而非ETB受体发挥作用的。     

视黄酸对豚鼠离焦性近视眼视网膜色素上皮通透性的调控

背景视网膜视黄酸在离焦性近视形成中起重要作用,但目前尚不清楚其如何通过视网膜色素上皮（RPE）屏障向脉络膜传递近视信号。目的研究全反式视黄酸（atRA）对离焦性近视眼RPE屏障功能的影响。方法21日龄清洁级三色豚鼠30只,用随机数字表法分为正常对照组和离焦组,一6D凹透镜缝合于离焦组豚鼠左眼15d以制备离焦性近视模型,每天光照与黑暗周期为12h／12h。用角膜曲率计测量各组豚鼠的角膜曲率半径,行复方托吡卡胺滴眼液扩瞳检影验光以测量豚鼠眼球屈光度,应用A型超声法测量各组豚鼠的眼轴长度。于造模15d时处死动物并分离视网膜,体外培养RPE细胞并传代,将第3代RPE细胞用于实验,制备视网膜铺片,接种于Millcell—PET微孔滤膜插入式培养池,分别加入1×10-6、1×10-7、1×10-8和1×10-9mol／LatRA培养RPE细胞24h,以加入等体积atRA溶剂的培养孔作为阴性对照,以完全培养基加MTT溶液的无细胞孔作为空白对照。采用MTT比色法检测各组RPE细胞的存活率,用CN10一EVOM2型电阻测量仪测定单层细胞跨上皮电阻（TER）,计算RPE细胞的TER值,采用FM1-43型荧光染色技术检测得出RPE细胞FM1-43阳性荧光染色的相对强度值,评价RPE细胞膜泡运输变化。结果豚鼠模型眼屈光度为（-2．20±O．95）D,对照组为（＋1．15±0．30）D,差异有统计学意义（t=14．57,P〈0．01）;豚鼠模型眼的眼轴长度为（8．24±0．09）mm,明显长于对照组的（7．81±0．05）mm,差异有统计学意义（t=17．20,P〈0．01）。原代培养豚鼠近视眼的RPE细胞,取第3代细胞用于实验。RPE细胞接种于Millcell培养池1周后细胞长满滤膜,呈单层生长。加入atRA干预24h,RPE细胞的存活率随药物浓度的升高而逐渐降低,1×10^-9 mol／LatRA组RPE细胞存活率为93．3％,1×10-8mol／LatRA组为88．2％,1×10-6mol／LatRA组和1×10-7mol／LatRA组的RPE细胞大量死亡。不同浓度atRA组RPE细胞的TER值和RPE细胞FMl_43阳性荧光染色的相对强度值的总体比较差异均有统计学意义（F：43．89,P=0．00;F=26．13,P=0．00）,其中1×10-mo[／LatRA组RPE细胞的TER值为（107．32±9．58）Ω）／cm2,荧光染色强度为55．29±9．79,均明显高于1×10-、1×10-、1×10-mol／LatRA组,差异均有统计学意义（P〈0．05）,FMl_43荧光染色部位主要在RPE细胞的细胞膜和细胞质。结论AtRA能够通过增加豚鼠近视眼RPE的紧密连接功能及膜泡运输改变RPE细胞的屏障功能。     

辅酶Q10对人视网膜色素上皮细胞氧化应激损伤的保护作用

背景有多种因素参与年龄相关性黄斑变性（AMD）的发病,其中视网膜色素上皮（RPE）细胞的氧化应激损伤与AMD的发病密切相关。实验和临床研究表明,辅酶Q10是一种强抗氧化剂,探讨其对人RPE细胞的氧化应激损伤是否有保护作用对于AMD的防治有重要的临床意义。目的探讨辅酶Q10对体外培养的人RPE细胞氧化应激损伤的保护作用及其作用机制。方法体外培养人RPE细胞,分为正常对照组（单纯培养基培养）、不同浓度（0．01、1、100μmol／L）辅酶Q10预处理组和单纯叔丁基过氧化氢（TBHP）处理组,其中各浓度辅酶Q10预处理组以辅酶Q10预处理后暴露于TBHP,光学显微镜下观察各组RPE细胞的形态;用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测各组RPE细胞活性的变化;AnnexinV—FITC／PI染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;TBARS法检测细胞的脂质过氧化水平;用DCFH—DA荧光法检测细胞内活性氧簇（ROS）水平;实时定量PCR法检测RPE细胞中促凋亡基因FasmRNA的表达;Westernblot法检测细胞中Fas蛋白的表达。结果单纯TBHP处理组RPE细胞贴壁数量较正常对照组明显减少,而0．01、1、100μmol／L辅酶Q10预处理组贴壁细胞数较单纯TBHP处理组增加,高浓度辅酶Q10预处理组细胞形态的改善和细胞存活的数目更接近正常对照组。与单纯TBHP处理组比较,1μmol／L、100μmol／L辅酶Q10预处理组RPE细胞吸光度（A450）值明显增高（0．52±0．10VS．0．25±0．03、0．59±0．06VS．0．25±0．03）,差异均有统计学意义（P=0．041、0．002）;RPE细胞的凋亡率明显下降[（72．1±6．6）％VS．（91．7±2．3）％、（69．0±4．4）％VS．（91．7±2．3）％],差异均有统计学意义（P=0．032、0．004）;0．01、1、100μmol／L辅酶Q10预处理组的细胞脂质过氧化水平依次降低,与单纯TBHP处理组比较差异均有统计学意义（P=0．047、0．030、0．015）,与单纯TBHP组相比,0．01、1、100μmol／L辅酶Q10预处理组细胞内ROS水平逐渐下降,I;xmol／L、100μmol／L辅酶Q10预处理组细胞内ROS水平明显低于单纯TBHP处理组（5．25±0．90 vs11．39±2．30、7．91±0．80VS．11．39±2．30）,差异均有统计学意义（P=0．028、0．007）;与单纯TBHP处理组相比,辅酶Q10预处理组细胞中FasmRNA表达量均有不同程度的下降,1μmol／L、100μmol／L辅酶Q10预处理组细胞中FasmRNA表达量的差异均有统计学意义（P=0．049、0．008）;0．01、1、100μmol／L辅酶Q10预处理组细胞中Fas蛋白表达量均明显下降,差异均有统计学意义（P=0．001、0．000、0．000）。结论辅酶Q10对体外培养的人RPE细胞具有保护作用,其作用在一定范围内呈浓度依赖性,这种保护作用可能与减少细胞的氧化应激损伤和抑制细胞凋亡有关。     

蛋白激酶C活性调节剂对豚鼠近视眼视网膜Mtiller细胞的作用及意义

目的研究蛋白激酶C（PKC）激活剂PMA和抑制剂GF109203X对豚鼠近视眼视网膜Mailer细胞生长状态及PKC蛋白表达的影响。方法眼罩遮盖诱导近视模型,酶消化法培养其视网膜Mailer细胞,并鉴定。PMA、GF109203X分别干预近视眼Mailer细胞。MTT测细胞活力,TUNEL染色检测凋亡细胞,Westren blotting测PKC蛋白表达。结果95％以上的培养细胞阳性表达胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和波形蛋白（Vimentin）。近视组PKC蛋白表达较正常组上调（P〈0．05）。PMA、GF109203X均能引起近视眼Mailer细胞的抑制率升高和诱导其凋亡（P〈0．05）。PMA诱导近视眼Mailer细胞PKC蛋白表达进一步上调,100nmol／L组和1000nmol／L组表达量高于10nmol／L组（P〈0．05）。1μmol／L和10μmol／L GF109203X均能引起近视眼Mailer细胞PKC蛋白表达下调,10μmol／L的抑制作用大于1μmol／L（P〈0．05）。结论PKC蛋白在豚鼠近视眼视网膜Mailer细胞表达升高,且其表达受PMA和GF109203X调控。     

蛋白激酶C活性调节剂对豚鼠近视眼视网膜Mller细胞的作用及意义

目的研究蛋白激酶C（PKC）激活剂PMA和抑制剂GF109203X对豚鼠近视眼视网膜Mailer细胞生长状态及PKC蛋白表达的影响。方法眼罩遮盖诱导近视模型,酶消化法培养其视网膜Mailer细胞,并鉴定。PMA、GF109203X分别干预近视眼Mailer细胞。MTT测细胞活力,TUNEL染色检测凋亡细胞,Westren blotting测PKC蛋白表达。结果95％以上的培养细胞阳性表达胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和波形蛋白（Vimentin）。近视组PKC蛋白表达较正常组上调（P〈0．05）。PMA、GF109203X均能引起近视眼Mailer细胞的抑制率升高和诱导其凋亡（P〈0．05）。PMA诱导近视眼Mailer细胞PKC蛋白表达进一步上调,100nmol／L组和1000nmol／L组表达量高于10nmol／L组（P〈0．05）。1μmol／L和10μmol／L GF109203X均能引起近视眼Mailer细胞PKC蛋白表达下调,10μmol／L的抑制作用大于1μmol／L（P〈0．05）。结论PKC蛋白在豚鼠近视眼视网膜Mailer细胞表达升高,且其表达受PMA和GF109203X调控。     

PDGF对人RPE细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1表达的影响

背景研究表明血小板源性生长因子（PDGF）能调节多种细胞中基质金属蛋白酶／基质金属蛋白酶组织抑制剂（MMP／TIMP）的表达和平衡,但视网膜色素上皮（RPE）细胞中MMP／TIMP的表达与PDGF作用剂量和作用时间的关系尚不明确。目的观察PDGF对RPE细胞中MIP-2、MMP-9和TIMP-1表达的影响。方法体外培养人RPE细胞系ARPE-19,将达到70％～80％融合的细胞分为5个组。分别将0、0．1、1、10、50mg／LPDGF加入RPE细胞培养基作用36h,分别采用逆转录PCR（RT—RCR）法和Western blot法检测各组RPE细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA及其蛋白的表达。PDGF组采用10mg／LPDGF组PDGF分别刺激RPE细胞24、36和48h,对照组用不含PDGF的培养液培养,采用逆转录PCR（RT—RCR法和Western blot法分别检测RPE细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA及蛋白的表达。结果随着PDGF质量浓度的增加和刺激时间的延长,RPE细胞生长速度加快,细胞增生明显。PDGF刺激RPE细胞36h,随着PDGF质量浓度的增加,MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA在RPE细胞中表达相对值逐渐增加,各组间差异均有统计学意义（MMP-2 mRNA：F=79．304,P=0．000;MMP-9 mRNA：F=8．465,P=0．003）,其中1、10、50mg／LPDGF组RPE细胞中MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA表达相对值明显高于0mg／L PDGF组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。RPE细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达相对值随着PDGF质量浓度的增加而逐渐增加,各组间差异均有统计学意义（MMP-2：F=26．550,P=0．000;MMP-9：F=80．993,P=0．000）,其中1、10、50mg／LPDGF组RPE细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达相对值明显高于0mg／L PDGF组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。各质量浓度PDGF组RPE细胞中TIMP-1 mRNA和蛋白表达相对值差异均无统计学意义（F=0．143,P=0．962;F=1．955,P=0．178）。随着10mg／L PDGF刺激RPE细胞时间的延长,RPE细胞中MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA表达逐渐增加,差异均有统计学意义（MMP-2 mRNA：F时间=83．250,P=0．002;MMP-9 mRNA：F时间=6．785,P=0．019）;各时间点RPE细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达相对值明显增加,差异均有统计学意义（MMP-2：F时间=11．185,P=0．041;MMP-9：F时间=968．413,P=0．000）。PDGF作用不同时间点对照组与PDGF组间MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白在RPE细胞中的表达差异均有统计学意义（分组：均P=0．000,时间点：P〈0．05）,而各时间点2个组间RPE细胞中TIMP-1表达相对值的差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论PDGF上调PRE细胞中MMP-2和MMP-9的表达,其作用呈剂量和时间依赖性,但对PRE细胞中TIMP-1的表达无明显影响。PDGF导致RPE细胞中MMP／TIMP的平衡失调,从而导致细胞外基质的破坏,促进RPE细胞的迁移。     

内皮素-1体外对人小梁细胞骨架肌动蛋白的影响

目的：观察内皮素-1（endothelin-1,ET—1）对人眼小梁细胞细胞骨架肌动蛋白的影响。方法：培养3代人眼小梁细胞,随机分为4组：对照组（0mol／LET-1）;ET-1低剂量组（10^-9mol／LET—1）;ET-1中剂量组（10^-8mol／LET—1）;ET-1高剂量组（10^-7mol／LET—1）,各组细胞分别处理72h后,应用Western—blot方法检测小梁细胞骨架肌动蛋白（F—aetin）的表达,并用FITC—phalloidin荧光探针观察肌动蛋白在细胞内的分布。结果：ET—1作用后人小梁细胞肌动蛋白表达明显增高,在10^-9～10^-7mol／L浓度范围内呈剂量依耐性,荧光探针示ET-1处理组小梁细胞肌动蛋白应力纤维和周边肌动蛋白明显增多浓集,细胞微丝附着与胞膜,细胞间连接及细胞贴壁部位连接明显增多。结论：ET—1能促进小梁细胞肌动蛋白表达,参与了小梁细胞骨架的重构。     

LY294002对bFGF诱导的兔晶状体上皮细胞增生的影响

目的探讨LY294002对碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）诱导的兔晶状体上皮细胞（LECs）增生的影响。方法兔眼LECs经培养后,将10^-8、10^-7、10^-6、10^-5、10^-4mol／LLY294002分别加入LECs培养基中培养48h为LY294002组。另将10^-8、10^-7、10^-6、10^-5、10^-4mol／LLY294002＋bFGF（10mg／L）加入培养基中培养LECs48h。bFGF（10mg／L）诱导LECs增生48h为阳性对照组,空白对照组仅用无血清DMEM。MTT比色法测定吸光度（A）值,分析各组药物对LECs增生的抑制率,流式细胞仪检测各细胞周期的LECs百分率。结果bFGF组与空白对照组相比A值升高,LY294002组随着药物浓度的增加,4值明显降低,差异有统计学意义（P〈0．01）。bFGF＋LY294002组与LY294002组相比,A值下降更明显,差异有统计学意义（P〈0．01）。流式细胞仪分析LY294002对LECs的抑制作用与MTT呈现相同趋势,随着LY294002浓度的增加,处于G0／G1期的LECs逐渐增加（P〈0．01）,而S期和G2／M期逐渐减少。结论LY294002可明显抑制体外培养的bFGF诱导的兔LECs的增生,并呈剂量依赖关系,为临床筛选防治后发性白内障的药物提供依据。     

HXO-RB44细胞上清液对ARPE-19细胞内VEGF表达的影响

目的探讨HXO-RB44细胞上清液对人视网膜色素上皮（RPE）细胞系ARPE-19细胞内血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响及其相关机制。方法分别利用含有10%胎牛血清的RPMI-1640培养基及MEM培养基对HXO-RB44细胞及ARPE-19细胞进行培养,在ARPE-19细胞内加入100μL HXO-RB44细胞上清液,分别干预0、4、8、12、24 h,利用RT-PCR、免疫荧光细胞化学、Western blot等方法,检测不同浓度的MLT干预后24 h ARPE-19细胞内VEGF mRNA及蛋白的表达情况。结果HXO-RB44细胞上清液加入后的不同时间点,VEGF mRNA的表达差异有统计学意义（F=195.072,P=0.000）。随着HXO-RB44细胞上清液作用时间的延长,ARPE-19细胞内VEGF mRNA表达逐渐增高（P〈0.01）。HXO-RB44细胞上清液加入后4、8、12、24 h,ARPE-19细胞内VEGF蛋白表达显著增加（F=160.687,P=0.000）,其表达与ARPE-19细胞内VEGF mRNA表达方式相同（P〈0.05）。随着HXO-RB44细胞上清液作用时间的延长,ARPE-19细胞内绿荧光蛋白强度逐渐增加。结论HXO-RB44细胞上清液能促进ARPE-19细胞内VEGF的表达。     

玻璃体腔注射内皮素-1诱导猫视盘慢性缺血的实验研究

目的猫眼玻璃体腔注射内皮素-1（endothelin-1，ET-1）诱导视盘慢性缺血动物模型，研究慢性缺血对视神经的影响。方法将13只猫随机分为A组7只和B组6只。右眼为实验眼，左眼为对照眼。实验开始时（术前）行眼部检查和眼压测量，海德堡共焦扫描激光多普勒视网膜地形图（heidelberg retina tomography，HRT）分析视盘形态，海德堡共焦扫描激光多普勒视网膜血流分析仪（heidelberg retina flowmeter，HRF）分析视盘筛板微循环。实验眼注入10μL ET-1溶液，A组浓度为10^-6mol／L，B组为10^-5mol／L，对照眼注入10μL相应赋形剂。每周注射2次，连续4周。每次注药前后均行眼部检查、眼压测量。实验结束后检查同术前。取视神经标本进行视神经轴突计数。结果B组实验眼注药前后眼压与术前眼压比较，部分检测点差异有统计学意义；实验眼术后视盘筛板血流量降低33．80％，血流速降低57．73％，红细胞移动速率降低57．70％；术后实验眼较对照眼视神经轴突数减少10．70％。A组中实验眼和对照眼术前、术后各研究参数差异均无统计学意义。结论猫眼玻璃体腔多次微量注射10^-5mol／LET-1可诱导视盘缺血，损害视神经。     

甘油醛局部应用对大鼠角膜生物力学特性的短期影响

背景 目前已有一些角膜胶原交联的方法可用于圆锥角膜的治疗,但其安全性均存在一定问题.甘油醛是一种效果好、不良反应少的交联剂,但其对角膜生物力学特点的作用尚不清楚. 目的 评估甘油醛点眼对大鼠角膜生物力学特性的影响.方法 将15只SD大鼠按随机数字表法分为3个组,分别为0.005 mol/L甘油醛组、0.050 mol/L甘油醛组和空白对照组,每组5只,均取右眼为实验眼；每日点眼2次,连续7d.实验终点处死大鼠,获取大鼠角膜,采用读字法评估各组大鼠角膜的透明度,然后切取两端附带2 mm巩膜组织的角膜中央2 mm×6 mm的条带进行生物力学检测,比较各组大鼠角膜6％弹性模量E(MPa)、极限应力σmax (MPa)、极限应变εmax(％)等指标变化,并行组织病理学检查. 结果 0.005 mol/L甘油醛组、0.050 mol/L甘油醛组和空白对照组均可透过大鼠角膜清晰显示文字.采用6％应变时,0.005 mol/L甘油醛组角膜的平均应力为(0.463±0.065) MPa,0.050 mol/L甘油醛组为(0.846土0.240)MPa,均较空白对照组的(0.195±0.103)MPa明显升高,差异均有统计学意义(P=0.029、0.000)；0.005 mol/L甘油醛组、0.050 mol/L甘油醛组、空白对照组角膜极限应力分别为(6.043±2.084)、(10.759±3.337)、(5.295±1.313) MPa,其中0.050 moL/L甘油醛组较空白对照组明显升高,差异均有统计学意义(P=0.007),0.005 mol/L甘油醛组与空白对照组间比较差异无统计学意义(P=0.660).0.005 mol/L甘油醛组、0.050 mol/L甘油醛组角膜极限应变分别为(36.57±3.09)％、(28.53±1.89)％,均较空白对照组的(43.87±1.89)％明显降低,差异均有统计学意义( P=0.009、0.000).0.005 mol/L甘油醛组、0.050mol/L甘油醛组6％弹性模量E值是(7.718±1.076) MPa和( 14.102±4.011) MPa,明显高于空白对照组的(3.252±1.717)MPa,差异均有统计学意义(P=0.029、0.000).空白对照组大鼠角膜组织切片显示胶原纤维密度最低,0.050 mol/L甘油醛组较0.005 mol/L甘油醛组大鼠角膜胶原纤维密度致密,角膜上皮层及内皮层完整.结论 甘油醛交联明显改善了角膜的生物力学指标和胶原纤维密度,但如用于对圆锥角膜的治疗仍需进一步研究角膜交联的长期效果及其安全性.