头针对急性脑梗死大鼠不同时间窗Bax与Bcl-2影响的研究

目的:观察头针电刺激对不同时间点脑梗死大鼠Bax与Bcl-2 mRNA的变化,探讨其对脑梗死可能作用机制。方法:采用线栓法制作大鼠局灶性脑梗死模型。将180只健康Wistar雌性大鼠,随机分为3组,头针电刺激组、模型对照组和假手术组。各组又依据脑梗死后治疗时间点不同分为4个亚组,即1天组、3天组、7天组与14天组。3组大鼠造模结束24 h起,给予头针电刺激组大鼠针刺百会穴与大椎穴,并进行电刺激治疗,1次/日,30 min/次,余2组在每天相应时间固定大鼠于针刺台,不予任何处置。疗程治疗结束后,断头取脑。运用RT-PCR检测梗死脑组织Bax与Bcl-2 mRNA。3组大鼠在造模结束清醒后、每日治疗前后均要进行神经功能缺损程度评分,采用Zea-longa 5级评分标准。结果:头针电刺激组中7天与14天的亚组大鼠Zea-longa 5级评分明显低于同组1天与3天的亚组(P0.05),14天的Zea-longa 5级评分与模型组比较,具有显著性差异(P0.05);头针电刺激组经RTPCR检测后,Bax mRNA的表达逐渐降低,Bcl-2逐渐增加,且14天的亚组与模型组14天比较,有显著性差异(P0.05),与假手术组14天比较则无显著性差异(P0.05)。结论:头针电刺激能明显降低脑梗死大鼠的神经功能缺损程度评分,改善大鼠运动功能;头针电刺激能降低Bax mRNA的表达,提高Bcl-2 mRNA的表达,从而抑制缺血区细胞凋亡,保护脑组织,促进肢体康复的功效,其中以头针电刺激14天疗效最佳。     

头穴丛刺对大鼠脑梗死灶周围Nogo-A表达的影响

目的：研究头穴丛刺对大鼠脑梗死灶周围Nogo-A表达的影响。方法：选用20只Wistar大鼠，用改良的Longa法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型，随机分为头穴丛刺组10只，对照组10只。头穴丛刺组每天行头穴丛刺，留针30min，对照组不予任何治疗。每组于术后1天、14天、21天行行为评分，并处死5只大鼠，取脑组织，采用免疫组化法观察每个时间点脑梗死灶周围Nogo-A的表达。结果：头穴丛刺组评分明显低于对照组（P〈0．05）。头穴丛刺组于14天、21天Nogo-A阳性细胞的表达水平明显低于对照组（P〈0．05）。结论：头穴丛刺能降低脑梗死大鼠梗死灶周围脑组织细胞表达Nogo-A水平。     

头穴丛刺对脑梗死大鼠海马区微管蛋白表达的影响

目的：研究头穴丛刺对脑梗死大鼠海马区微管蛋白（Tubulin）表达的影响。方法：选用50只Wistar大鼠，用改良的Longa法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型，随机分为头穴丛刺组25只，对照组25只。头穴丛刺组每天行头穴丛刺，对照组不予任何治疗。每组于术后1、3、7、14、21天参照Bederson等拟订的标准行行为评分，并处死5只大鼠，取脑组织，采用免疫组化法观察每个时间点海马区Tubulin的表达。实验表明，7、14天时，海马区Tubulin阳性细胞明显增多，头穴丛刺组Tubulin表达较对照组明显，2组比较有统计学意义（P〈0．05）。21天2组Tubulin表达均有回落，2组比较仍有统计学意义（P〈0．05）。结果：头穴丛刺组评分明显低于对照组（P〈0.05），康复组于14天、21天Tubulin阳性细胞的表达水平明显高于对照组（P〈0.05）。结论：头穴丛刺能促进脑梗死大鼠海马区细胞表达较高水平的Tubulin。     

丁苯酞预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的干预研究

目的探讨预防性应用丁苯酞对SD大鼠脑缺血再灌注损伤是否具有保护作用及其可能机制。方法 36只SD大鼠随机分为假手术组、对照组、预处理组(均n=12);预处理组制模前给予丁苯酞80 mg/(kg.d)灌胃14 d。改良Zea Longa线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉阻断(MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,于再灌注后24 h行Zea Longa评分标准进行神经功能缺损评分;2%氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测量梗死体积;免疫组化法观察Caspase-3的表达。结果对照组和预处理组神经功能缺损评分较假手术组均明显增高(P均<0.01);预处理组神经功能缺损评分较对照组明显降低(P<0.01);对照组和预处理组脑梗死体积较假手术组均明显增高(P均<0.01);预处理组脑梗死体积较对照组明显减少(P<0.01);对照组和预处理组的Caspase-3表达较假手术组均明显增高(P均<0.01);预处理组的Caspase-3表达较对照组明显降低(P<0.01)。结论预防性应用丁苯酞可以减轻SD大鼠神经功能缺损症状,缩小梗死体积,减少Caspase-3表达;预防性应用丁苯酞具有神经保护作用,其机制可能与减少Caspase-3表达抑制细胞凋亡有关。     

头针电刺激对急性脑梗死大鼠神经胶质细胞及凋亡基因相关蛋白的影响

目的观察头针电刺激对急性脑梗死大鼠神经胶质细胞及凋亡基因相关蛋白的影响。方法将大鼠分为假手术组、模型组和头针电刺激组,采用线栓法制备动物大脑中动脉栓塞模型,在造模成功24 h后头针电刺激组进行电针治疗,刺激时长每日1次,每次30 min,假手术组和模型组每天固定于针刺台上30 min,不进行头针电刺激,持续14 d。在实验结束时进行大鼠神经功能Bederson′s评分,处死大鼠后对脑组织进行TTC染色,计算梗死体积;检测脑组织中Bax、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)蛋白的表达量;用TUNEL法检测神经胶质细胞凋亡情况。结果假手术组大鼠表现正常,未见梗死灶;与模型组相比,头针电刺激组梗死体积明显减小,神经功能Bederson′s评分降低,差异有统计学意义(P 0.05);与假手术组相比,模型组和头针电刺激组大鼠脑组织中细胞凋亡率、Bax和Caspase-3蛋白表达量均增加,Bcl-2蛋白表达量均降低,差异有统计学意义(P 0.05);与模型组比较,头针电刺激组大鼠脑组织中细胞凋亡率、Bax和Caspase-3蛋白表达量均降低,Bcl-2蛋白表达量增加,差异有统计学意义(P 0.05)。结论头针电刺激能减小脑梗死体积,改善急性脑梗死大鼠的神经功能,其机制可能与下调Bax和Caspase-3蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,抑制神经胶质细胞凋亡有关。     

头针电刺激对急性脑梗死大鼠血小板活化标志物CD62P、CD63的影响

目的观察头针电刺激不同时间点对急性脑梗死大鼠血清CD62P和CD63水平、神经功能缺损的调节作用并探讨其机理。方法将160只健康的雄性Wistar大鼠,随机分为头针电刺激组、普通针刺组、假手术组和模型对照组,各组又根据治疗的时间点不同分为1 d组、3 d组、7 d组和14 d组4个亚组,每组10只大鼠。头针电刺激组、普通针刺组及模型对照组采用改良的线栓法制作右侧大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血大鼠模型,4组大鼠在造模成功1 d起,每天同一时间进行干预,头针电刺激组给予大鼠头针电刺激干预,以疏密波进行电刺激治疗,普通针刺组给予大鼠普通头针干预,选取百会和大椎穴,假手术组及模型组大鼠于同一时间固定于针刺台,不做处理。于治疗1、3、7、14 d后,检测血清中CD62P、CD63的表达。各组大鼠造模结束清醒后及治疗前后均采用Bederson评分法评分。结果头针电刺激组较各组能显著降低CD62P、CD63的表达(P 0.01),头针电刺激组中各治疗时间点比较,血清中CD62P、CD63表达明显减少(P 0.01)。头针电刺激组、普通针刺组及模型对照组Bederson评分比较,3、7及14 d组差异具有统计学意义(P 0.05);头针电刺激组中各治疗时间点评分比较,随着时间增加,评分降低(P 0.05),且以14 d为最佳。结论通过比较各组大鼠血清CD62P、CD63表达及Bederson评分,结果均表明头针电刺激能降低CD62P、CD63表达,改善脑梗死大鼠神经功能,且随着时间延长,改善越明显,以14 d为最佳。     

恢刺“阳陵泉”穴对脑卒中大鼠肌痉挛状态和脑梗死体积的影响

目的:观察恢刺"阳陵泉"穴对卒中后痉挛大鼠脑梗死体积和运动相关行为学的影响,为恢刺法在针灸临床治疗卒中后肢体痉挛提供依据。方法:45只SD大鼠随机分为假手术组(n=9)、模型组(n=18)和恢刺组(n=18)。采用改进的线栓法制作卒中后痉挛模型。术后第3天,恢刺组恢刺"阳陵泉"穴,留针30 min,1次/d,连续7 d。于造模前、后各时间点分别行Zea Longa神经功能损伤评分、改良Ashworth肌张力评分(MAS)和网屏实验运动功能评分。治疗后进行2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)脑切片染色观察脑梗死体积变化。结果:与假手术组比较,模型组大鼠造模后Zea Longa评分和MAS评分均显著升高(P 0.01),网屏实验评分显著降低(P 0.01),脑梗死体积比显著升高(P 0.01)。与模型组比较,恢刺组大鼠治疗后Zea Longa评分及MAS评分均显著降低(P 0.01),网屏实验评分显著升高(P 0.01),脑梗死体积比显著降低(P 0.01)。结论:恢刺法可缓解卒中后痉挛大鼠的肌痉挛,提高其运动功能,改善其脑缺血状态,发挥一定的神经功能保护作用。     

microRNA363在缺血性脑损伤中的表达及头电针调控作用研究

目的:观察microRNA363在缺血性脑损伤中的表达及头电针的调控作用。方法:将SD大鼠80只,随机分为模型组、非穴区组、头针组和头电针组,用Longa线栓法造成左侧大脑中动脉缺血模型,另选取20只同质鼠作为假手术组。干预7天后检测大鼠神经功能、脑梗死体积、Caspase-3蛋白及microRNA363表达。结果:急性脑缺血大鼠microRNA363明显降低,Caspase-3表达明显提高,两者呈负相关(r=-0. 930,P 0. 01)。非穴区组、头针组及头电针组在Longa评分、脑梗死体积、Caspase-3表达及microRNA363均明显优于模型组,但非穴区组与头针组比较没有明显差别;头电针组在上述指标中,均明显优于非穴区组和头针组。结论:miRNA363具有神经保护作用;100 Hz/2 Hz疏密波头电针可通过调控microRNA363表达,进而影响Caspase-3水平,以达到抑制神经细胞凋亡的目的。     

穴位电刺激对卒中后抑郁大鼠行为学及神经递质水平影响

目的 观察穴位电刺激对卒中后抑郁模型大鼠抑郁样行为及神经递质水平的影响，探讨其治疗卒中后抑郁的可能机制。方法 将36只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组，每组12只。模型组、治疗组采用改良Zea Longa线栓法联合慢性不可预知温和刺激法建立卒中后抑郁模型，假手术组仅作颈动脉分离，不进行造模。治疗组于造模结束后1天对百会、内关、大椎、太冲进行电刺激治疗，每次干预15min，每天1次，连续干预21天。于造模结束后及干预21天后对各组大鼠进行Zea Longa神经行为学评分、糖水消耗实验和敞箱实验；酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测大鼠血清5-羟色胺（5-HT）、脑源性神经营养因子（BDNF）含量；实时荧光定量PCR法检测大鼠海马组织BDNF、酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)、环磷腺普效应元件结合蛋白(CREB)mRNA表达情况。结果 与假手术组比较，造模后模型组及治疗组大鼠Zea Longa神经行为学评分升高(P<0.05)，糖水消耗百分比、敞箱实验水平与垂直运动评分降低(P<0.05)，提示模型构建成功。经穴位电刺激干预后，模型组、治疗组、假手术组Zea Longa神经行为学评分依次降低，糖水消耗百分比、敞箱实验水平与垂直运动评分依次增高，血清5-HT、BDNF含量依次增高，海马组织BDNF、TrkB、CREBmRNA表达水平依次增高(P<0.05)。结论 穴位电刺激可改善卒中后大鼠抑郁样行为、提高神经递质水平，其作用机制可能与上调CREB/BDNF/TrkB信号通路表达有关。     

头针电刺激对急性脑梗死大鼠Bax与Bcl-2蛋白的影响

目的:观察头针电刺激对急性脑梗死大鼠Bax与Bcl-2蛋白的变化,探讨其作用于脑梗死的机理。方法:将健康的雌性Wistar大鼠,随机分为头针电刺激组、模型对照组、假手术组,每组又依据脑梗死后治疗时间点分出7天组、14天组,每个时间点15只大鼠。用线栓法制作大鼠局灶性脑梗死模型,然后3组大鼠于造模结束1天起,头针电刺激组予大鼠针刺干预,选取百会穴与大椎穴针刺,以参数为100 Hz的密波进行电刺激治疗,1次/日,30 min/次,余2组大鼠固定于针刺台后,不进行任何干预。于7天、14天治疗结束后,断头取脑,行Western blot技术检测,测定梗死脑组织的Bax及Bcl-2蛋白表达相对值。结果:头针电刺激组Bax表达逐渐下降,Bcl-2表达逐渐上调;模型对照组Bax与Bcl-2表达均下降。与模型组比较,头针电刺激组7天、14天的Bax蛋白表达、Bcl-2蛋白表达差异具有统计学意义(P0.05)。结论:头针电刺激具有良好的保护梗死脑组织作用,可以下调Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,使两种蛋白表达差值达到最大,抑制缺血区细胞凋亡,这可能是头针电刺激改善梗死大鼠的作用机制。     

夹脊电针及预处理对大鼠脊髓损伤后内源性神经干细胞的影响

目的:观察夹脊电针疗法对脊髓损伤大鼠内源性神经干细胞(NSCs)增殖水平的影响,进一步探讨夹脊电针治疗脊髓损伤的作用机制。方法:96只Wistar成年雄性大鼠,随机分为假手术组、模型组、电针刺组和预针刺组。各组随机分成3 d、7 d、14 d共3个治疗时间点。假手术组仅暴露胸10节段脊髓,不予损伤和治疗,其余各组用改良Allen’s重物坠落法制备脊髓损伤模型,于胸10节段打击致伤。模型组不予任何治疗,电针刺组在造模后给予夹脊电针治疗,至各时间点取材时止。于各时间点对脊髓组织行免疫组织化学染色和荧光实时定量PCR,检测Nestin、GFAP的表达。结果:在3 d、7 d、14 d时电针刺组和预针刺组的Nestin、GFAP阳性表达细胞数明显高于模型组,且有统计学意义(P<0.05),在3 d、7 d、14 d时预针刺组的Nestin、GFAP阳性表达细胞数高于电针刺组,且有统计学意义(P<0.05)。基因表达情况也表现出如上的结果。结论:夹脊电针疗法能够对内源性神经干细胞的增殖发挥促进作用。     

针刺对大鼠脑外伤认知功能的影响

目的：探讨针刺对大鼠脑外伤认知功能的影响。方法：取自由落体所致的脑外伤模型大鼠,分为模型组、针刺治疗组、电针治疗组、假手术组。分别在第1天、3天、7天、14天、21天进行Morris水迷宫测量。结果：假手术组认知功能无明显变化,模型组、电针治疗组、针刺治疗组有明显的认知功能障碍,针刺治疗组和电针治疗组在治疗后认知功能明显改善（P〈0．05）,且电针治疗组明显优于针刺治疗组（P〈0．05）。结论：针刺治疗能明显改善脑外伤模型大鼠的认知功能,电针治疗明显优于传统针刺治疗。     

电针对脑梗死大鼠神经功能及胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察电针对高血压基础上形成脑梗死大鼠的不同时间点神经功能评分及灶周胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响,证实电针对星形胶质细胞（AST）变化的影响是其促进脑梗死功能恢复的机制之一。方法双肾双夹法制备RHRSP模型,双侧肾动脉狭窄术后12周,取血压≥l80mmHg大鼠,电凝法制备大脑中动脉闭塞（MCAO）模型,随机分为MCAO假手术组、MCAO组（模型组）、穴位治疗组、非穴位治疗组,后两组行电针刺激。MCAO后各组分别于1d、3d、7d、14d、21d进行神经功能缺损评分,HE染色观察病理形态变化,GFAP免疫荧光染色观察电针对局灶性脑梗死缺血灶周围GFAP的表达。结果假手术组大鼠在各时间点神经功能缺损评分均为0分;各时间点模型组神经功能评分均高于穴位治疗组,1d时两组差异无统计学意义,3d、7d、14d、21d,两组差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。3d时模型组大鼠神经缺损症状最重,而电针组随着时间的延长其神经功能缺损评分在逐渐降低。在各时间点模型组与非穴位组无明显差异。HE染色可见穴位治疗组ASI及组织肿胀较模型组明显减轻。在五个时间点模型组和电针组GFAP表达都明显增高,与假手术组比较（P〈0.01）,电针组GFAP表达均明显低于同时段模型组（P〈0.05）。各时间点模型组GFAP表达与非穴位组比较无显著性差异。结论穴位电针治疗能下调脑缺血后GFAP表达,进而改善神经功能。     

当归补血汤对大鼠永久性局灶性脑缺血后脑源性促红细胞生成素的影响

目的:观察当归补血汤对大鼠永久性局灶性脑缺血的保护作用及对脑源性促红细胞生成素(erythropoie-tin,EPO)表达的影响。方法:将动物随机分为假手术组、模型组和给药组,采用改良线栓法建立大鼠永久性局灶性脑缺血模型,按缺血时间每组分为4h、1d和7d亚组,给药组灌胃当归补血汤。在缺血相应时间后取材,行甲苯胺蓝染色,观察组织病理变化;行TTC染色,计算脑梗死体积百分比;行Fluoro-Jade B(FJB)染色,计算半暗带阳性细胞数;行EPO免疫荧光染色,计算半暗带阳性细胞数。结果:与模型组相比,当归补血汤可以减轻缺血脑组织的病理改变,降低缺血7d亚组脑梗死体积百分比(P<0.05),减少缺血1d、7d亚组半暗带FJB阳性细胞数(P<0.05,P<0.01);给药组缺血1d、7d亚组半暗带EPO阳性细胞数明显多于模型组(P<0.01)。结论:当归补血汤对永久性局灶性脑缺血大鼠具有一定的保护作用,可能与增强脑缺血后脑源性EPO表达有关。     

电针经穴对脑缺血再灌注损伤大鼠血清白细胞介素的影响

目的从免疫调控角度研究电针经穴对脑缺血再灌注损伤大鼠血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素咱（IL-6）的影响。方法采用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）再灌注损伤模型,将Wistar大鼠随机分为5组,正常组、假手术组、模型组、电针非经穴组和电针经穴组,各组随机分为1d、3d、7d三个时间点,运用酶联免疫吸附实验（ELISA）方法检测大鼠血清中IL-1β、IL-6含量变化。结果与正常组比较,模型组各指标的测定结果均有显著性差异（P〈0．01,P〈0．05）：在1d、3d时间点,与模型组、电针非经穴组比较,电针经穴组能明显降低模型大鼠血清IL—1β含量（P〈0．05,P〈0．01）：与模型组、电针非经穴组比较,电针经穴组能明显升高模型大鼠血清IL-6含量（P〈0．05,P〈O．01）。结论电针经穴对脑缺血再灌注损伤大鼠血清IL-1B、IL-6的调节具有相对特异性,电针经穴通过调节免疫细胞因子IL-1D、IL-6的含量变化可能是发挥脑缺血再灌注损伤后脑保护作用机制之一。     

电针对肾性高血压大鼠脑梗死Rho-A表达的影响

目的:观察电针对易卒中型肾性高血压大鼠(R HR SP)大脑中动脉闭塞(MCAO)后第1、7、14、28天脑梗死灶皮层R ho-A表达的影响。方法:SD大鼠行双肾双夹术复制R HR SP,再用线拴法制作MCAO模型。用随机数字表法分为模型组、电针组、假针刺组、假手术组与高血压组。电针组选取百会、大椎进行电针治疗,每天1次,共28天。假针刺组将针灸针贴于大鼠"百会"和"大椎"穴处皮肤。用尼氏染色检测神经元数目,Western blot检测R ho-A表达。结果:MCAO术后第7、14、28天,电针组神经元数量高于模型组与假针刺组,差异有显著性意义(P0.05),电针组Rho-A表达低于模型组、假针刺组,差异有显著性意义(P0.05)。观察第7、14、28天,模型组、电针组、假针刺组R ho-A的表达高于高血压组与假手术组,模型组、电针组、假针刺组神经元数量低于高血压组与假手术组,差异均有显著性意义(P0.05)。结论:电针对脑梗死中枢神经损伤的保护作用可能与其下调中枢神经生长抑制因子Rho-A表达等机制密切相关。     

电针对缺氧缺血性脑病模型大鼠GFRα1干预研究

目的:观察电针对缺氧缺血性脑病模型大鼠GFRα1的干预作用。方法:7日龄SD乳鼠随机分成假手术组、模型组和电针组,每组又分为1、3、7、21 d 4个亚组,电镜观察缺氧缺血侧脑组织形态变化,RT-PCR方法检测GFRα1mRNA的表达。结果:电镜显示:21 d电针组细胞核核膜模糊,核仁清晰,细胞质分布均匀,线粒体无肿胀,粗面内质网无扩张。GFRα1的表达电针组3、7、21 d与模型组比较,均表达增加,有统计学意义(P<0.05)。结论:电针能够促进GFRα1mRNA的表达,对缺氧缺血性脑损伤大鼠发挥较好的脑保护作用。     

电针对缺氧缺血性脑病模型大鼠GDNF干预研究

目的：观察电针对缺氧缺血性脑病模型大鼠GDNF的干预作用。方法：7日龄SD乳鼠随机分成假手术组、模型组和电针组,每组又分为1d、3d、7d、21d四个亚组,病理学观察缺氧缺血侧脑组织切片,RT-PCR方法检测GDNFmRNA的表达。结果：病理学观察21d电针组镜界清楚,神经细胞排列有序,神经细胞变性、坏死不明显,细胞轮廓及核仁较清晰。GDNF的表达电针组3d、7d、21d与模型组比较,均表达增加,有统计学意义（P〈0.05）。结论：电针能够促进GDNFmRNA的表达,对缺氧缺血性脑损伤大鼠发挥较好的脑保护作用。