谷氨酸对培养大鼠皮层神经细胞的毒性作用

目的 探讨谷氨酸对体外培养的大鼠皮层神经细胞的损伤作用。方法 在对体外新生大鼠（0－1d)大脑皮层神经细胞进行原代培养的基础上，分组加入不同浓度的谷氨酸作用10min,24h后测定细胞死亡率、乳酸脱氢酶（LDH）和超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量。结果 大鼠皮层神经细胞在50μmol/L谷氨酸作用10min后，细胞死亡率和LDH活性增加，SOD活性降低，神经细胞MDA含量增高。随着谷氨酸浓度的增加，上述变化更明显。结论 谷氨酸可损伤培养大鼠皮层神经细胞，这种作用在某种程度上由氧自由基介导。     

米帕明对谷氨酸损伤中枢神经细胞的保护作用

目的研究米帕明(Imi)对谷氨酸损伤培养大鼠皮层神经细胞的保护作用.方法分离培养15～18 d胎龄的大鼠神经细胞,加入谷氨酸(Glu),观察谷氨酸对神经细胞的损伤作用及米帕明的保护作用.结果加入谷氨酸后,神经细胞出现明显损伤性变化,死亡率升高,培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)含量增加,细胞匀浆中丙二醛(MDA)生成增加,超氧化物歧化酶(SOD)含量明显减少.Imi能不同程度地减轻上述损伤性变化.结论 Imi对谷氨酸所致的神经细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与钙拮抗作用有关.     

天麻素对谷氨酸致培养皮层神经细胞损伤的保护作用

取新生大鼠大脑皮层进行体外神经细胞培养,用谷氨酸建立离体的神经元损害模型,观察天麻素对兴奋性氨基酸神经毒性的影响。结果表明：２００μｍｏｌ／Ｌ谷氨酸作用１０ｍｉｎ能造成培养神经元的大量死亡,培养液中乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）含量明显增高;在培养液中加入天麻素或氯胺酮可明显降低神经细胞死亡率,减少乳酸脱氢酶的漏出。提示天麻素可拮抗兴奋性氨基酸神经毒性。     

促红细胞生成素对谷氨酸作用的视网膜神经细胞的保护作用

目的 评价促红细胞生成素(Epo)对视网膜神经细胞的生存影响.方法 原代新生大鼠视网膜神经细胞体外混合培养;免疫细胞化学法检测培养细胞Epo和EpoR的表达;经与不同浓度Epo共同培养,用MTT比色法检测细胞存活,评价Epo对细胞存活的影响.经不同浓度Epo预培养12 h,再用谷氨酸刺激,MTT法检测细胞存活,观察Epo是否能抵抗谷氨酸兴奋毒性.结果 培养的神经样细胞表达Epo和EpoR;Epo不影响正常培养神经细胞的存活,但是能提高谷氨酸刺激后的神经细胞存活.结论 Epo能部分抵抗谷氨酸对混合培养视网膜神经细胞的兴奋毒性.     

促红细胞生成素对谷氨酸作用的视网膜神经细胞的保护作用

目的评价促红细胞生成素(Epo)对视网膜神经细胞的生存影响。方法原代新生大鼠视网膜神经细胞体外混合培养;免疫细胞化学法检测培养细胞Epo和EpoR的表达;经与不同浓度Epo共同培养,用MTT比色法检测细胞存活,评价Epo对细胞存活的影响。经不同浓度Epo预培养12 h,再用谷氨酸刺激,MTT法检测细胞存活,观察Epo是否能抵抗谷氨酸兴奋毒性。结果培养的神经样细胞表达Epo和EpoR;Epo不影响正常培养神经细胞的存活,但是能提高谷氨酸刺激后的神经细胞存活。结论Epo能部分抵抗谷氨酸对混合培养视网膜神经细胞的兴奋毒性。     

谷氨酸对原代培养海马神经细胞兴奋毒作用的研究

为更清楚地了解药物对神经元的损伤和保护作用，在体外对新生大鼠（０－１ｄ）海马神经细胞进行原代培养，建立了谷氨酸对原代培养海马神经细胞兴奋性神经毒损伤模型。通过检测神经细胞乳酸脱氢酶泄漏率和相关显微镜下对神经细胞形态变化的观察，发现只有发育成熟的神经元对谷氨酸兴奋毒损伤最敏感，神经元的兴奋毒损伤对谷氨酸在一定范围内有剂量信赖性或接触时间依赖性关系，提示谷氨酸通过与其受体结合造成神经元兴奋毒损伤。     

谷氨酸对原代培养海马神经细胞兴奋毒作用的研究

为更清楚地了解药物对神经元的损伤和保护作用，在体外对新生大鼠（０～１ｄ）海马神经细胞进行原代培养，建立了谷氨酸对原代培养海马神经细胞兴奋性神经毒损伤模型。通过检测神经细胞乳酸脱氢酶泄漏率和在相差显微镜下对神经细胞形态变化的观察，发现只有发育成熟的神经元对谷氨酸兴奋毒损伤最敏感，神经元的兴奋毒损伤对谷氨酸在一定范围内有剂量依赖性或接触时间依赖性关系，提示谷氨酸通过与其受体结合造成神经元兴奋毒损伤。     

凝血酶对培养大鼠皮层神经细胞的毒性作用研究

目的通过研究凝血酶对培养神经细胞的毒性作用,探讨脑出血凝血酶致神经细胞损伤的机制.方法采用新生1～2 d大鼠皮层神经元进行原代分散培养,分别在含150 U/ml凝血酶、150 U/ml凝血酶 150 U/ml重组水蛭素以及正常的培养液中孵育3 d后测定下列指标:①甲苯胺蓝染色法测定残存细胞数并计算神经细胞丧失率;②TdT介导的dUTP缺口末端标记法检测TUNEL阳性细胞的表达;③免疫组化二步法测caspase-3免疫反应性(Immune Reactivity,IR)细胞的表达;④培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果凝血酶组较水蛭素干预组及对照组神经细胞明显减少(P＜0.05);凝血酶组有较多的TUNEL阳性细胞及caspase-3 IR细胞表达,并明显多于对照组及水蛭素干预组(P＜0.05),凝血酶组TUNEL阳性细胞比率及caspase-3 IR细胞比率明显高于对照组及水蛭素干预组(P＜0.01或P＜0.05);与实验前相比,实验三组各组LDH活性均升高(P＜0.05),三组间两两比较LDH活性无统计学差异(P＞0.05).结论 150 U/ml的凝血酶可导致培养的神经细胞死亡,并可被凝血酶的特异抑制剂水蛭素阻断,细胞死亡的原因可能为细胞凋亡而非坏死,脑出血后凝血酶的释放是脑出血神经细胞凋亡性损伤的机制之一.     

黄连解毒汤有效部位对培养大鼠皮层神经元谷氨酸损伤的保护作用

目的观察黄连解毒汤有效部位对培养神经细胞谷氨酸兴奋毒性的保护作用.方法体外培养新生大鼠皮层神经细胞,加入谷氨酸观察谷氨酸对神经细胞的兴奋毒性及黄连解毒汤有效部位的保护作用.结果黄连解毒汤有效部位305 mg/kg能明显增高模型细胞的活性;610、305、153 mg/kg能显著降低模型细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,降低MDA生成;305、153 mg/kg可减少NO生成,610 mg/kg还可提高SOD活性.结论黄连解毒汤有效部位对培养神经细胞谷氨酸兴奋毒性具有显著的保护作用,其机制可能与降低NO含量、抗过氧化作用有关.     

谷氨酸对培养神经元的兴奋毒性及氯胺酮的保护作用

对１６－１８ｄ胎龄的大鼠皮层细胞进行分离培养，观察过量谷氨酸对皮层神经元的影响以及氯胺酮的保护作用。表明；培养１０ｄ的神经元置于１０μｍｏｌ／Ｌ谷氨酸和低糖ＤＭＥＭ培养注中后，随着作用时间延长，乳酸脱氢酶性增加。     

苯海索对血红素所致大鼠胚胎皮层神经细胞损伤的保护作用

目的 :观察苯海索对血红素所致大鼠胚胎皮层神经细胞损伤的保护作用。方法 :体外培养大鼠胚胎皮层神经细胞 ,加入血红素建立神经细胞血红素损伤模型 ,以不加血红素者为正常对照 ,观察不同浓度苯海索对血红素损伤模型神经细胞死亡数 ,乳酸脱氢酶 (LDH)的漏出量 ,培养液中丙二醛 (MDA)和超氧化物歧化酶 (SOD)活性的影响。结果 :苯海索 10 -9mol·L-1、10 -8mol·L-1、10 -7mol·L-1能浓度依赖性地显著减少细胞死亡 ,降低LDH漏出量及MDA生成 ,提高SOD活性。结论 :苯海索对血红素所致神经细胞损伤具有显著的保护作用 ,其机制可能与苯海索抗过氧化作用有关。     

白藜芦醇对体外培养的大鼠皮层神经元谷氨酸神经毒性的干预作用

目的：研究白藜芦醇（Res）对体外培养皮层神经元的影响;探索谷氨酸对皮层神经元的损伤作用及Res对抗谷氨酸损伤的机制.方法：体外培养新生大鼠大脑皮层神经元,实验组加入20μmol/L的Res,在不同时间点观察Res对培养的皮层神经元的作用,应用MTT法检测神经元存活率作为反应指标;通过在培养基中加入谷氨酸造成皮层神经元兴奋毒性损伤模型,加入最适剂量的Res,观察Res对上述损伤的作用;通过培养细胞形态学观察、MTT法测定存活细胞数及Bax免疫细胞化学染色检测指标来反映谷氨酸对神经元的损伤作用,同时观察Res对抗损伤的机制.结果：20μmol/LRes对体外培养的皮层神经元的存活率无明显影响;谷氨酸对皮层神经元产生强烈的兴奋毒性,导致大量神经元死亡,MTT结果表明神经元存活率明显下降;免疫组化染色表明谷氨酸可诱导神经元大量表达Bax,促进神经元凋亡;Res可对抗谷氨酸损伤而保护神经元,它可减轻谷氨酸的神经元兴奋毒性,提高神经元的存活率,同时抑制谷氨酸引发的Bax表达上调.结论：适宜剂量的Res对体外培养的皮层神经元无毒副作用,对神经元的存活率无影响,Res可以通过调节Bax的表达对抗谷氨酸兴奋毒性而保护神经元.     

绞股蓝总皂苷对谷氨酸所致大鼠海马组织损伤的保护作用

目的探讨绞股蓝总皂苷(gypenosides, GP)对大鼠侧脑室注射谷氨酸(glutamate, Glu)引起的海马组织氧化损伤的保护作用。方法将大鼠随机分为假手术组、Glu损伤组、GP低（200mg/kg）、中（400mg/kg）、高（800mg/kg）剂量组。GP组预先灌胃给药10d。大鼠经侧脑室注射Glu后2h取脑,测定各组大鼠海马组织匀浆中的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px) 活性及产生羟自由基的能力;制备海马组织切片,观察各组形态学变化。结果Glu损伤组大鼠海马组织中MDA含量和羟自由基生成能力均高于假手术组(P＜0.05),而SOD和GSH-Px活性降低(P＜0.05);与Glu损伤组比较,GP组MDA含量和产生羟自由基的能力降低(P＜0.01),SOD和GSH-PX活性明显增强(P＜0.01);HE染色显示, GP组海马神经元变性及坏死较Glu损伤组明显减少。GP 400mg/kg对Glu所致海马组织氧化损伤的保护作用最为明显。结论GP通过增强抗氧化酶活性,抑制羟自由基和脂质过氧化物生成而减轻Glu介导的氧化性神经损伤,发挥神经保护作用。     

谷氨酸摄取抑制剂对电针抗大鼠脑缺血损伤作用的影响

为了研究谷氨酸载体在电针对脑缺血性神经元死亡保护中的作用，研究观察了谷氨酸载体摄抑制剂Ｌ－反式吡咯烷－２，４－二羧酸对电针抗脑缺血性神经元死亡作用的影响。结果提法 ：电针对缺血性神经元死亡的保护作用与电针激活谷氨酸载体功能有关。     

氯胺酮对谷氨酸所致神经性PC12细胞株损伤的保护作用

目的研究氯胺酮对谷氨酸 (Glu)所致神经性PC12细胞株损伤的保护作用。方法PC12细胞株 (2× 10 3 /mL)在含10nmol/L 7S NGF的培养基中孵育 6d后 ,分化为神经性PC12细胞株。分别加入Glu、氯胺酮、Glu 氯胺酮、D AP5 Glu 氯胺酮、CNQX Glu并共同孵育 18h ,以MTT法测细胞活力。结果 30mmol/LGlu与神经性PC12细胞株共同孵育 18h ,细胞活力降至5 %以下。氯胺酮与Glu同时加入 ,对细胞活力有明显保护作用 ,且呈剂量依赖性。 0 .1mmol/L氯胺酮使细胞活力升至 (30 .94±11.75 ) % ;1.0mmol/L氯胺酮组细胞活力为 (95 .74± 2 1.4 9) % ;非NMDA受体拮抗剂 2 0 μmol/LCNQX细胞活力为 (19.31± 5 .83) % ,与Glu对照组比较均有显著差异 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论氯胺酮对Glu损伤的神经性PC12细胞具有保护作用 ,其作用机制主要在于拮抗NMDA受体     

氯胺酮对谷氨酸所致神经性PC12细胞株损伤的保护作用

目的研究氯胺酮对谷氨酸(Glu)所致神经性PC12细胞株损伤的保护作用.方法 PC12细胞株(2×103/mL)在含10 nmol/L 7S-NGF的培养基中孵育6 d后,分化为神经性PC12细胞株.分别加入Glu、氯胺酮、Glu+氯胺酮、D-AP5+Glu+氯胺酮、CNQX+Glu并共同孵育18 h,以MTT法测细胞活力.结果 30 mmol/L Glu与神经性PC12细胞株共同孵育18 h,细胞活力降至5%以下.氯胺酮与Glu同时加入,对细胞活力有明显保护作用,且呈剂量依赖性.0.1 mmol/L氯胺酮使细胞活力升至(30.94±11.75)%; 1.0 mmol/L氯胺酮组细胞活力为(95.74±21.49)%;非NMDA受体拮抗剂20 μmol/L CNQX细胞活力为(19.31±5.83)%,与Glu对照组比较均有显著差异(P<0.05或P<0.01).结论氯胺酮对Glu损伤的神经性PC12细胞具有保护作用,其作用机制主要在于拮抗NMDA受体.     

海马神经元谷氨酸损伤研究

目的:本研究通过观察体外培养的大鼠胚胎海马神经元在谷氨酸损伤后,细胞活力变化及细胞损伤的方式,初步探讨谷氨酸对神经元的损伤机制。方法:通过MTT,观察不同浓度(62.5μM、125μM、250μM、500μM)的谷氨酸损伤后不同时间(6 h、12 h、18 h、24 h)海马神经元活力的变化。经相差显微镜观察谷氨酸对海马神经元胞体及突起的影响。通过TUNEL、Hoechst染色比较正常培养组和损伤组的凋亡率,分析谷氨酸对海马神经元的损伤作用。结果:MTT结果显示,谷氨酸对体外培养的胎鼠海马神经元有兴奋毒性,在所观察的剂量范围内,随着谷氨酸浓度的增加,作用逐步增强,至500μM达峰值,随着损伤后孵育时间的延长,海马神经元活力逐渐下降。TUNEL和Hoechst染色结果也显示,125μM谷氨酸对体外培养的胎鼠海马神经元有兴奋毒性,主要引起海马神经元的凋亡。结论:谷氨酸对体外培养的胎鼠海马神经元有兴奋毒性,且这种作用呈现剂量相关性。中等剂量(125μM)谷氨酸损伤主要引起海马神经元的凋亡。     

羟基红花黄色素Ａ抗谷氨酸氧化性神经损伤的保护作用

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对谷氨酸(Glu)诱导的氧化性神经损伤的保护作用。方法以体外原代培养Wistar胎鼠大脑皮层神经元为实验材料，进行形态学观察，采用噻唑蓝（MTT）比色法、Hoechst33342/PI双荧光探针染色、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）含量检测、流式细胞仪分析细胞凋亡率以及免疫细胞化学法检测细胞色素C（CytC）荧光强度，综合评价HSYA对Glu氧化性神经损伤的保护作用。结果与Glu损伤组相比，HSYA能显著提高细胞相对存活率，维持细胞内较高SOD和GSH水平，降低Glu引起的细胞凋亡率及线粒体内CytC向胞质的释放，以160μg/mL浓度的 HSYA保护效果最为显著。结论HSYA对Glu氧化性神经损伤有显著的保护作用，其机制与抗氧化、抑制细胞凋亡有关。