弓形虫棒状体蛋白及其核酸疫苗研究现状

弓形虫病目前尚无理想的特效治疗药物和防治措施,研制安全便捷、保护力强的核酸疫苗是弓形虫病防治的有效策略。棒状体蛋白（Rhoptry protein, ROPs）是弓形虫在入侵宿主细胞过程中所分泌的一类蛋白,其在弓形虫入侵宿主细胞、纳虫空泡（Parsitophorous vacuole, PV）形成及胞内弓形虫的增殖调控等方面发挥着重要作用,是最具潜力的疫苗候选抗原分子之一。本文就ROPs家族重要成员特性、表达载体选择及其核酸疫苗在动物实验中的免疫原性,以及免疫保护作用等方面进行了概述。     

弓形虫棒状体蛋白研究进展

弓形虫的棒状体蛋白（Ｒｈｏｐｔｒｙｐｒｏｔｅｉｎ，ＰＯＲ）是棒状体分泌的对弓形虫侵入宿主细胞起重要作用的蛋白，其中研究最多的是ＲＯＰ１及ＲＯＰ２。研究认为ＲＯＰ２是最具潜力的疫苗候选因子，已用于弓形虫病的ＥＬＩＳＡ检测，本概述了ＲＯＰ的研究进展。     

弓形虫棒状体蛋白研究进展

弓形虫的棒状体蛋白(Rhoptry protein,POR)是棒状体分泌的对弓形虫侵入宿主细胞起重要作用的蛋白,其中研究最多的是ROP1及ROP2。研究者认为ROP2是最具潜力的疫苗候选因子,已用于弓形虫病的ELISA检测。本文概述了ROP的研究进展。     

弓形虫棒状体蛋白与宿主细胞互作的研究进展

棒状体蛋白是弓形虫分泌于宿主细胞的主要效应因子, 定位于宿主细胞的不同部位, 并与其存在复杂的相互作 用。通过调控膜系及骨架结构, 该蛋白可影响宿主细胞的生物活性因子, 从而阻断其内在的防御机制, 使弓形虫成功实 现胞内入侵、 寄生及增殖。棒状体蛋白对宿主细胞的功能及作用方式反映了弓形虫的致病机制, 对探寻治疗弓形虫病的 药物靶点及安全有效的疫苗候选分子意义重大。本文就近年来弓形虫棒状体蛋白与宿主细胞间相互作用的研究进展进 行综述。     

弓形虫棒状体蛋白ROP16的研究进展

棒状体蛋白16（ROP16）是弓形虫棒状体蛋白家族成员, 其蛋白结构存在丝氨酸、 苏氨酸激酶区, 是弓形虫入侵 过程中的重要毒力因子。ROP16可分泌到宿主细胞核, 能磷酸化宿主细胞的转录活化因子STAT3/6, 干扰宿主细胞信号 通路传导, 在弓形虫入侵宿主细胞过程中发挥着重要作用。本文对弓形虫ROP16的发现、 功能、 免疫保护性等方面进行 综述。     

弓形虫棒状体分泌毒性因子-假激酶的研究进展

弓形虫ROPs包括数十种速殖子分泌蛋白,在虫体的入侵、纳虫泡形成、增殖、出胞和逃避宿主细胞效应分子的攻击中发挥重要作用。ROPs属于蛋白激酶家族,其部分成员虽具有激酶结构域,但是由于某些关键位点的突变,失去了磷酸化宿主信号分子的作用,故称为假激酶。近年的研究认为,假激酶同样具有重要功能,例如通过变构调节激酶的活性;作为支架蛋白促进蛋白质分子间的相互作用。本文对弓形虫假激酶的结构特点和部分假激酶的功能进行了综述,对于研究弓形虫ROPs与宿主的相互作用、候选分子疫苗筛选和药物研发具有参考意义。     

弓形虫棒状体蛋白2重要家族成员核酸疫苗的研究进展

弓形虫呈世界性分布,可感染几乎所有的温血动物并引起弓形虫病,目前已成为危害人类健康和影响畜牧业生产的重要公共卫生问题,但迄今尚无理想的药物和防治手段。伴随着弓形虫重要毒性因子作用机制研究的日趋深入,研制安全有效的抗虫疫苗是防治弓形虫病的有效策略。棒状体蛋白(rhoptry proteins,ROPs)是弓形虫在入侵宿主细胞过程中向宿主胞内分泌的效应蛋白因子,因在弓形虫入侵及逃避宿主免疫清除过程中发挥着重要的作用,目前已成为研制弓形虫疫苗的重要候选分子,其中棒状体蛋白2(ROP2)家族是研究最为深入的重要成员。本文就近年来ROP2家族重要成员的疫苗研究进展进行综述,旨在为研发安全有效的抗弓形虫病疫苗提供思路。     

弓形虫棒状体蛋白ROP38的原核表达与鉴定

目的原核表达弓形虫棒状体蛋白ROP38,并对重组蛋白rROP38的反应原性进行鉴定。方法根据已发表 的ROP38基因序列设计引物,通过RT?PCR方法扩增弓形虫RH株的ROP38基因。将ROP38部分基因克隆到原核表达 载体pET?28a（＋）后,重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,IPTG诱导表达并优化表达条件,SDS?PAGE分析表 达情况,并通过Western blot鉴定其反应原性。结果SDS?PAGE显示在上清和包涵体均有rROP38表达,分子量约为43 kD。Western blot结果显示,rROP38蛋白能被His标签抗体和感染弓形虫的人阳性血清识别,说明ROP38具有良好的反 应原性,可以作为潜在的血清学诊断抗原。结论本研究成功获得了具有良好反应原性的弓形虫重组蛋白rROP38。     

顶复门原虫棒状体颈部蛋白研究的新进展

顶复门原虫是一类专一性的细胞内寄生原虫。这类原虫具有相似的亚细胞结构和保守的入侵机制,入侵过程是由大量的入侵相关蛋白分子所介导的,包括微线体、棒状体及致密颗粒所分泌的相关蛋白等。棒状体分泌的颈部蛋白对虫体入侵宿主细胞起着关键作用,是这类寄生原虫的毒力因子。本文综述了顶复门原虫棒状体颈部蛋白的最新研究进展。     

弓形虫棒状体蛋白ROP2基因的克隆与表达

目的从弓形虫RH株总DNA中克隆棒状体蛋白ROP2基因片段，克隆至表达载体pET22b中，导入大肠杆菌中表达。方法采用半巢式PCR扩增法从基因组DNA中扩增编码ROP2基因片段，克隆至质粒pUC119中，经PCR和酶切鉴定后，进行DNA序列测定，并以SacⅠ／HindⅢ双酶切克隆至表达载体pET22b上，重组质粒pET22b—ROP2转化大肠杆菌BL21，CodonPlus（DE3）-RIL菌株中，经IPTG诱导表达。结果从弓形虫RH株总DNA中扩增到1．0kb的ROP2基因片段．构建成功重组质粒pUC119，ROP2，经DNA序列分析与已报道序列基本一致，重组质粒pET22b，ROP2在大肠杆菌中表达，产生一分子量约为45kDa的预期重组蛋白。结论克隆到的弓形虫棒状体蛋白ROP2在大肠杆菌中得到表达，构建成功的重组盾粒pUC119-ROP2可用千下一步多基因融合的市隆操作。     

弓形虫致密颗粒蛋白的生物学功能及免疫原性研究的新进展

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)可引起严重的人兽共患弓形虫病,给全世界经济造成巨大的损失,给公共卫生安全带来巨大的隐患。致密颗粒(dense granule)分泌的致密颗粒蛋白(dense granule proteins, GRAs)参与调节纳虫泡(parasitophorous vacuole, PV)及纳虫泡膜(parasitophorous vacuole membrane, PVM) 的形成并能维持其结构稳定性,部分GRAs可参与宿主细胞的转录。近几年来,不断发现了多种新的GRA蛋白家族新成员,并随着对该家族成员研究的逐步深入,发现GRAs是研制抗弓形虫疫苗的候选分子之一。本文综述了弓形虫致密颗粒蛋白的生物学功能和免疫原性研究的新进展,旨在为研究弓形虫致病机理和研发新的抗弓形虫疫苗提供思路。     

顶复门原虫棒状体蛋白ROP18的研究进展

顶复门原虫是一类专性的细胞内寄生原虫,包括刚地弓形虫、隐孢子虫、疟原虫、巴贝斯虫和球虫等,是人和动物的重要病原。这类原虫具有相似的亚细胞结构并能分泌与入侵相关的保守蛋白,尤其是在入侵宿主细胞阶段分泌的棒状体蛋白(rhoptry proteins, ROPs)被认为是保护寄生虫入侵和繁殖的关键分子。其中ROP18是具有丝氨酸-苏氨酸激酶活性的ROP2家族蛋白成员之一,在刚地弓形虫入侵宿主细胞阶段发挥重要作用,是纳虫空泡(PV)形成时宿主细胞免疫的抑制因子。随着基因组学和蛋白质组学技术的不断发展,其相关研究也越来越深入。本文以目前研究最多的刚地弓形虫ROP18为主,对其发现历史、结构、分泌及定位、对宿主的毒力机制及应用现状做一综述。     

巴贝虫棒状体蛋白的研究进展

巴贝虫是一类专性的细胞内寄生的顶复门原虫,是人和动物的重要病原。这类原虫具有相似的亚细胞结构并能分泌与入侵相关的保守蛋白,尤其是在入侵宿主细胞阶段分泌的棒状体相关蛋白被认为是保护寄生虫入侵和繁殖的关键分子,其在虫体入侵的纳虫空泡形成过程中发挥重要作用。随着基因组学和蛋白质组学技术的不断发展,其相关研究也越来越深入。因此,本文就目前研究较多的牛巴贝虫、羊巴贝虫、吉氏巴贝虫、双芽巴贝虫和东方巴贝虫等棒状体相关蛋白的研究现状进行了综述。     

采用弓形虫T7噬菌体文库筛选黏附相关蛋白基因的研究

目的用原代培养的猫肠上皮细胞（IECs）对已构建的弓形虫T7噬菌体展示文库进行筛选,期望得到将新的弓形虫入侵宿主细胞黏附相关蛋白基因。方法将猫IECs与混有噬菌体文库的DMEM培养基孵育培养后进行洗脱筛选,再与宿主菌BI．T5403共同培养扩增文库,筛选噬菌体DNA并进行基因序列测定与分析。结果洗脱下的噬菌体滴度从第1轮7．6×10-5到第5轮的3．6×10-7,富集了230倍,非特异性结合和亲和力低的噬菌体被成功去除;核苷酸序列分析表明含捕入片段为394bp的噬菌体富集量最大,经检索为弓形虫棒状体蛋白基因,是棒状体蛋白基因ROP2和ROP8的共有序列。结论初步证明弓形虫棒状体蛋白为黏附相关蛋白基因,其表达产物为ROP2．     

弓形虫弱毒疫苗的研究进展

弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫,可感染包括人在内的几乎所有的温血动物,全球约有1/3的人口感染弓形虫病.宿主感染弓形虫后常呈隐性感染,但对于免疫力低下的人群,如艾滋病患者或者孕妇,可引起严重的临床症状甚至死亡.随着人类生活质量的不断提高,弓形虫给人类健康、畜牧业发展和公共卫生安全带来的隐患与日俱增.目前,尚无针对弓形虫...