NADPH氧化酶参与兔晶状体上皮细胞中超氧阴离子的生成

目的:观察兔晶状体上皮细胞内是否存在内源性超氧阴离子生成机制。方法:用不同浓度的花生四烯酸作用于兔晶状体上皮细胞N/N1003A,利用化学发光检测仪测定超氧阴离子的浓度变化,观察超氧阴离子歧化酶(Superoxide anion dismutase,SOD)和NADPH氧化酶抑制剂DPI对超氧阴离子的影响;用RT-PCR方法检测NADPH氧化酶(NADPH oxidase)亚单位NOX家族在N/N1003A细胞中的表达。结果:花生四烯酸可以刺激兔晶状体上皮细胞N/N1003A迅速生成超氧阴离子,该活性氧能被SOD有效清除,黄素蛋白抑制剂DPI能显著抑制N/N1003A细胞生成超氧阴离子。RT-PCR结果表明,NOX蛋白的5种同源异构体[包括NOX1、NOX2(gp91phox)、NOX3、NOX4、NOX5]的mRNA在兔晶状体上皮细胞中都有表达。结论:NADPH氧化酶参与兔晶状体上皮细胞中超氧阴离子的产生,NOX蛋白5种同源异构体的mRNA都在N/N1003A细胞中表达。眼科学报2007;23:199-204.     

错配修复基因MSH3在人晶状体中的表达

目的　研究错配修复基因MSH3在人晶状体上皮细胞系SRA01/04、年龄相关性白内障（age-related cataract,ARC）患者晶状体组织以及24周人胎眼晶状体组织中的表达情况，探讨其与ARC形成的关系。方法　采用RT-PCR检测人晶状体上皮细胞系SRA01/04、ARC患者晶状体组织和健康人脐带（阳性对照）中MSH3基因的表达水平，免疫荧光检测24周人胎眼晶状体中MSH3蛋白的表达。结果　MSH3在晶状体上皮细胞系SRA01/04中高表达，在ARC患者晶状体组织中表达下调。MSH3在24周人胎眼晶状体纤维细胞、晶状体上皮细胞以及晶状体前囊组织中均有表达，且在晶状体上皮细胞中高表达。结论　MSH3在人胎眼晶状体组织和SRA01/04中高表达，而在ARC患者晶状体组织中表达下调，这种表达差异可能会影响DNA的错配修复过程，进而影响晶状体发育导致ARC的发生。     

茶多酚对高糖条件下大鼠晶状体上皮细胞死亡率及线粒体膜电位的影响

目的探讨茶多酚对高糖条件下培养的大鼠晶状体上皮细胞死亡率（CDR）及线粒体膜电位（MMP）的影响,阐明糖尿病性白内障的发生机制及茶多酚干预的疗效及机制。设计实验研究。研究对象体外培养的大鼠晶状体上皮细胞。方法体外培养大鼠晶状体上皮细胞,培养基中葡萄糖浓度分别为5、30mmol／L（L1组和L2组）,另在30mmol／L葡萄糖浓度培养基中加入0．1μM和0．3μM的茶多酚进行干预（L3组和L4组）。流式细胞仪检测各条件下大鼠品状体上皮细胞MMP和CDR的变化。主要指标大鼠晶状体上皮细胞CDR及MMP。结果LI、L2、L3、L4组大鼠晶状体上皮细胞CDR分别为（0．68±0．32）％、（13．50±4．48）％、（0．64±0．48）％、（0．50±0．30）％,L1与L2组比较、L2与L3组比较差异均有统计学意义（P．0．04,P=0．04）,L3与L4组比较差异无统计学意义（P=0．99）。L1、L2、L3、L4组大鼠晶状体上皮细胞MMP分别为95．53±4．61、37．38±3．56、110．02±8．04、102．63±9．48,L1与L2组比较、L2与L3组比较差异均有统计学意义（P=0．01,P=0．01）,L3与L4组比较差异无统计学意义（P=1．00）。结论高糖条件下培养的大鼠晶状体上皮细胞线粒体膜电位降低、细胞死亡率明显升高。茶多酚具有稳定线粒体膜电位的作用,可延缓细胞凋亡,降低细胞死亡牢：（眼科,2009,18：104—107）     

毛果芸香碱促进培养的兔泪腺上皮细胞蛋白合成和分泌

目的研究毛果芸香碱对体外培养兔泪腺上皮细胞蛋白分泌与合成的影响。设计实验研究。研究对象培养的兔泪腺上皮细胞。方法对培养细胞进行广谱细胞角蛋白、波形蛋白免疫组化染色及电镜观察鉴定后,培养的兔泪腺上皮细胞中,分别加入700、70、7、0．7和0．07μmol／L的毛果芸香碱,培养24小时,分别测定培养液和细胞中的β－氨基已糖苷酶活性。在不同浓度毛果芸香碱的培养细胞中加入70μmol／L阿托品,培养24小时,分别测定培养液和细胞中的β－氨基已糖苷酶活性。主要指标β－氨基已糖苷酶活胜（光密度值,OD）。结果毛果芸香碱在700、70、7、0．7和0．07μmol／L浓度时使泪腺上皮细胞培养液β－氨基已糖苷酶活性OD值分别增加17．7％（P＝0．015）、14．7％（P＝0．038）、5．7％（P＝0．399）、413％（P=0．517）和2．0％（P=0．7641,使泪腺上皮细胞冻融液β－氨基已糖苷酶活性OD值分别增加25．0％（P=0.000）、16．8％（P＝0．001）、10．6％（P=0．023）、7．6％（P=0．089）和4．8％（P=0．271）。阿托品抑制毛果芸香碱的作用,使泪腺上皮细胞培养液β-氨基已糖苷酶活性OD值分别减少20．5％（P=0．018）、15．1％（P=0．029）、10．1％（P=0．097）、11．5％（P=0．118）和7．9％（P=0．085）,使泪腺上皮细胞冻融液B一氨基已糖苷酶活性OD值分别减少10．0％（P=0．039）、4．8％（P=0．113）、6．2％（P=0．162）、2．9％（P=0．315）和0％（P=0．300）。结论毛果芸香碱可增加培养的泪腺上皮细胞的蛋白分泌和合成,阿托品可抑制毛果芸香碱的作用。     

Bax抑制因子1对紫外线B诱导下人晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用

目的 探讨Bax抑制因子1(BI-1)对紫外线B(UVB)诱导下人晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用.方法 取对数生长期的人晶状体上皮细胞(HLEC)系SRA01/04细胞,将BI-1过表达质粒及其空载质粒转染至SRA01/04细胞中,分别记为BI-1组、Vector组,另取不做任何处理的SRA01/04细胞作为blank组...     

bFGF、EGF和NGF对人角膜内皮细胞生长调控的实验研究

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（Basicfibroblastgrowthfacfor，bFGF）、表皮细胞生长因子（Epidermalgrowthfactor，EGF）和神经细胞生长因子（Nervegrowthfactor，NGF）对体外培养的人角膜内皮细胞的生长调控作用。方法：将相同数量的人角膜内皮细胞接种于96孔板。加入浓度分别为0ng／ml、1ng／ml、3ng／ml、10ng／ml、30ng／ml、100ng／ml的EGF、bFGF和NGF进行培养。5天后MTT法用检测增殖情况。结果：在0ng／ml、1ng／ml、3ng／ml、10ng／ml、30ng／ml、100ng／ml浓度下bFGF组的平均OD值分别为：0．224±0．045、0．239±0．040、0．262±0．0342、0．278±0．0319、0．281±0．0324、0．260±0．0310。EGF组的平均OD值分别为：0．228±0．0304、0．245±0．0418、0．267±0．0454、0．275±0．0347、0．271±0．0449、0．250±0．0253。NGF组的平均OD值分别为：0．216±0．0187、0．228±0．0226、0．231±O．0225、0．242±0．0279、0．245±0．0294、0．247±0．0349。结论：bFGF在30ng／ml范围内对内皮细胞生长有促进作用，并具有剂量依赖性。高于100ng／ml时促生长作用降低。EGF在10ng／ml范围内对内皮细胞生长有促进作用，并具有剂量依赖性。高于30ng／ml时促生长作用降低。NGF本次实验剂量范用内对角膜内皮细胞生长无明显作用。     

EGF诱导人RPE细胞表达整合素α5过程中丝裂原激活的蛋白激酶的作用

目的探讨表皮生长因子（EGF）诱导人视网膜色素上皮（RPE）细胞表达整合素α5过程中丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）的作用。方法将人RPE细胞分为对照组、EGF组和PD98059组,RT—PCR及流式细胞术观察各组整合素α5mRNA和蛋白的表达;Westernblot法检测各组人RPE细胞中MAPK的磷酸化水平。结果对照组的整合素α5mRNA／β-actinmRNA像素值的比值为0．93±0．06,PD98059组为1．06±0．07,EGF组为1．97±0．09,EGF组与其他2组相比,差异有统计学意义（P〈0．01）;流式细胞术检测显示,24h后整合素α5的荧光强度分别为1．94±0．22、4．56±0．25、2．39±0．104,差异有统计学意义（P〈0．05）。Westernblot检测显示,30min后EGF组细胞外信号调节激酶（ERK）1／2的磷酸化激活水平最高,PD98059组抑制ERK1／2的磷酸化激活,对照组ERK1／2的磷酸化激活作用很弱。结论ERK1／2的磷酸化激活参与EGF诱导人RPE表达整合素α5的过程。EGF激活ERK1／2通路刺激人RPE细胞整合素α5mRNA的表达。     

表皮生长因子对氧化损伤的人眼Muller细胞增生及迁移的保护作用

背景目前认为氧化损伤机制在年龄相关性黄斑变性（AMD）的发病中起着重要作用,主要与血一视网膜屏障的破坏有关,而Mailer细胞是稳定血一视网膜内屏障功能的主要细胞成分。研究表明,表皮生长因子（EGF）可促进实验动物视网膜Muller细胞的增生和迁移,但其对人Muller细胞的作用研究较少。目的探讨EGF对体外氧化损伤的人眼Muller细胞增生和迁移的影响及其作用机制。方法将人眼Maller细胞系MIO—M1细胞进行培养并用胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、第Ⅷ因子、a-平滑肌肌动蛋白（Ot—SMA）、人角蛋白及S-100免疫组织化学法进行鉴定。在无血清DMEM中加入不同质量浓度（0、1、10、30、100mg／L）EGF,用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记法测定MIO—M1细胞的阳性率。根据干预方式的不同将培养细胞分为EGF组、H2O2损伤组、EGF＋H2O2组、葡萄糖氧化酶（GO）组、GO＋EGF组、EGF＋LY294002＋H2O2组,采用MTT比色法测定各组培养细胞的增生情况（A590）。对培养的人眼Muller细胞采用划痕实验观察H2O2损伤条件下0、1、10、30、100mg／LEGF作用24、48、72h后对Miiller细胞增生、迁移的影响;采用Westernblot技术检测EGF对体外不同培养条件下MUller细胞Akt信号传导通路的作用。结果正常培养条件下10、30、100mg／LEGF作用后Muller细胞的增生率分别为28．0％、32．9％、39．O％,明显高于0mg／L、1mg／LEGF组（24．5％、26．2％）。在H2O2和GO分别培养细胞的条件下,高质量浓度的EGF组Muller细胞的吸光度（A570）值明显大于低质量浓度组,各组总体差异有统计学意义（F=23．582,P=0．000）。与EGF＋H2O2组比较,EGF＋LY294002＋H2O2组Muller细胞的吸光度（A570）值明显下降。10mg／LEGF促进Muller细胞迁移的作用最强。0．08mmol／L H2O2作用Mfiller细胞后Akt信号通路激活,提前2h加入外源性EGF后,100mg／LEGF对抗氧化所致Mtiller细胞的损伤作用最明显,同时提前2h加入外源性EGF和Akt信号通路阻断剂LY294002后,Akt信号传导通路的保护作用减弱。结论EGF对体外培养的Muiler细胞具有促进增生及迁移的作用,10mg／LEGF促进Muller细胞迁移作用最强。100mg／L外源性EGF抗Muller细胞氧化损伤作用最强,其作用机制是激活Akt信号传导通路。     

维拉帕米对人晶状体上皮细胞整合素表达的抑制作用

目的研究钙通道阻滞剂维拉帕米对人晶状体上皮细胞（LECs）株SRA01/04整合素表达的影响。方法对人LECs株SRA01/04进行培养并传代,分别以0.02、0.04、0.08mmol/L的维拉帕米作用于SRA01/0424h,经流式细胞仪检测SRA01/04各整合素的阳性表达率。结果整合素α2、α3、α5、β1、β2在人LECs株SRA01/04中呈阳性表达,维拉帕米对其表达具有抑制作用,并随药物浓度的增加而逐渐增强（P〈0.05）。结论钙通道阻滞剂维拉帕米对LECs整合素的表达具有抑制作用,可能阻碍整合素介导的LECs黏附、移行和增生,有望成为防治后发性白内障的有效药物。     

重组水蛭素Ⅲ对半乳糖损伤的人晶状体上皮细胞凋亡相关基因表达的影响

背景重组水蛭素Ⅲ（rHV3）对半乳糖损伤的人晶状体上皮细胞（LECs）有较好的保护作用,但其分子机制尚不清楚。目的探讨rHV3对半乳糖损伤的人LECs凋亡相关基因表达的影响。方法用本课题组构建的表达重组水蛭素工程菌,参照Markwardt的凝血酶滴定方法进行水蛭素生物学活性的测定。将培养的人LECs分为3组,培养于含质量分数10％胎牛血清（FBS）的D／F12培养液作为正常组、用含125×10^-3mol／LD一半乳糖的D／F12培养液建立人LECs株SRAOI／04损伤模型为模型组,用2000U／ml（商品单位）rHV3加入部分损伤模型培养液中进行干预作为rHV3组。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测各组人LECs内凋亡相关基因的表达,包括醛糖还原酶（AR）、bcl2、bax、p53基因mRNA的表达水平,各目的基因表达丰度用目的基因的吸光度（A）值与3一磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）A值的比值表达。结果与正常组比较,模型组人LECs中ARmRNA／GAPDHmRNA、baxmRNA／GAPDHmRNA和p53mRNA／GAPDHmRNA值明显高于对照组,差异均有统计学意义（t=3．90E一06、t=8．44E一04、t=5．15E一08,P〈0．叭）,而水蛭素干预组人LECs中ARmRNA／GAPDHmRNA、baxmRNA／GAPDHmRNA和p53mRNA／GAPDHmRNA值明显低于模型组,差异均有统计学意义（t=5．90E一06、t=1．51E．04、t=3．42E一06,P〈0．01）。与正常组比较,模型组人LECs中的bcl2mRNA／GAPDHmRNA值明显降低,差异有统计学意义（t=1．86E一05,P〈O．01）,与模型组相比,水蛭素干预后人LECs中的bcl2mRNA／GAPDHmRNA值显著提高,差异有统计学意义（t=8．56E一05,P〈0．01）。结论D一半乳糖导致人LECs损伤,rHV3可能通过抑制多元醇途径和线粒体介导的凋亡途径对人LECs起保护作用。     

人参皂苷Rg3对人晶状体上皮细胞生长的抑制作用

目的:观察人参皂苷Rg3对体外人晶状体上皮细胞SRA01/04生长的抑制作用。方法:不同质量浓度的Rg3处理体外培养SRA01/04细胞后,应用MTT比色法分析其细胞生长抑制作用;AO/EB染色法观察细胞的形态学改变;流式细胞仪测定48h细胞凋亡率。结果:Rg3在一定范围内抑制SRA01/04细胞生长,其抑制率随时间和质量浓度增加而增加。AO/EB染色可见实验组SRA01/04细胞核着黄色荧光或橘红色荧光,细胞核呈固缩状或圆珠状。流式细胞仪检测凋亡率随药物质量浓度增加而增加。结论:Rg3能有效抑制SRA01/04细胞增殖、并诱导其凋亡。     

Wnt3a促进人晶状体上皮细胞增生及相关机制的研究

背景 晶状体上皮细胞(LECs)的异常增生是晶状体后囊膜混浊(PCO)的重要病理基础,以往研究证实Wnt3a信号可促进上皮细胞的增生,但其对LECs的作用机制尚不清楚. 目的 研究Wnt3a对人LECs增生的作用,探讨相关分子机制,为PCO的临床治疗提供新的靶点.方法 将人LECs系SRA01/04细胞进行培养后以4×105个/孔的密度接种于6孔板继续孵育.构建Wnt3a cDNA表达载体,采用脂质体介导转染技术将Wnt3a cDNA表达载体瞬时转染人SRA01/04细胞中,对照组转染pcDNA3-HA表达载体.采用Western blot技术验证载体在转染细胞中的表达;MTT法和流式细胞仪检测Wnt3a在SRA01/04细胞中的过表达对细胞增生能力的影响;Western blot法检测Wnt3a过表达对Wnt/β-catenin下游信号分子β-catenin、cyclin D1和c-myc蛋白表达的影响;应用免疫荧光法检测Wnt3a过表达后β-catenin表达的定位变化;采用免疫细胞化学法检测Wnt3a过表达后增生细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的变化.结果 本研究成功构建了人Wnt3a基因的表达载体Wnt3a cDNA,获得Wnt3a过表达的Wnt3a/SRA01/04细胞及对照pcDNA3-HA/SRA01/04细胞.Western blot检测证实,与pcDNA3-HA/SRA01/04相比,Wnt3a/SRA01/04细胞内Wnt3a蛋白表达明显升高.MTT法检测表明,Wnt3a cDNA转染组SRA01/04细胞的增生率明显高于对照组(F分组=15.235,P=0.005;F时间=369.677,P=0.000),转染后各时间点2个组间SRA01/04细胞的增生率差异均有统计学意义(t=20.843,P=0.001;t=26.214,P＜0.01;t=25.177,P=0.001;t=35.516,P＜0.01;t=615.056,P＜0.01).细胞周期分析发现,Wnt3a cDNA转染组G1期细胞比例为51.74％,明显少于对照组的79.44％,而S期细胞的比例为36.23％,明显多于对照组的12.34％.Wnt3a cDNA转染组SRA01/04细胞PCNA蛋白表达阳性率为47.00％±7.58％,明显高于对照组的16.00％±3.61％,差异有统计学意义(t=8.256,P＜0.01).转染后48 h,β-catenin蛋白密集分布于Wnt3a/SRA01/04细胞核和细胞质中,而在对照组仅出现于细胞质之中.Wnt3a/SRA01/04细胞中Wnt3a蛋白表达水平上调,β-catenin细胞定位由细胞质转入细胞核;Wnt/β-catenin信号通路靶蛋白Cyclin D1和c-Myc蛋白表达上调. 结论 在SRA01/04细胞中,Wnt3a过表达使Wntβ-catenin信号通路活化,下游靶蛋白Cyclin D1和c-Myc表达上调,可促进人LECs的增生.     

泛素羧基末端水解酶L1在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中的表达及其抗氧化作用

背景 氧化损伤是年龄相关性白内障发生的主要原因,而泛素蛋白酶系统参与晶状体的分化发育,研究发现其关键酶泛素羧基末端水解酶L1( UCHL1)参与帕金森病和阿尔茨海默病等年龄相关性疾病的发生发展,且与氧化应激有关. 目的 研究UCHL1在年龄相关性白内障发病过程中的作用.方法 收集24例单纯年龄相关性白内障患者术后获得的晶状体囊膜(皮质性白内障12例、核性白内障12例)、5例正常人晶状体前囊膜上皮和人晶状体上皮细胞(LECs)系SRA01/04细胞,采用免疫荧光法检测UCHL1在各组人晶状体前囊膜上皮细胞中的表达情况.构建UCHL1真核表达质粒,鉴定后采用脂质体转染法转染SRA01/04细胞作为UCHL1过表达组,同时采用绿色荧光蛋白(GFP)真核表达质粒转染SRA01/04细胞作为GFP过表达组,使用梯度过氧化氢叔丁醇(TBHB)处理24h后,采用MTT法检测各组人LECs的活性变化.结果 免疫荧光检测表明,UCHL1在各组人LECs中均有表达,但在正常晶状体囊膜、皮质性白内障以及核性白内障晶状体囊膜上皮细胞表达量的总体差异有统计学意义(F=13.441,P=0.000).皮质性白内障组以及核性白内障组晶状体囊膜上皮细胞中UCHL1的表达量均低于正常晶状体组(P=0.000、0.000),但皮质性白内障组和核性白内障组之间UCHL1的表达量差异无统计学意义(P=0.164).Western blot鉴定结果表明,UCHL1真核表达质粒转染后可见SRA01/04细胞中UCHL1的强表达.MTT检测结果显示,0.3 mol/L TBHB处理24 h后,UCHL1过表达组细胞活性吸光度(A570/630)值与GFP过表达组比较有增高的趋势,而0.2、0.4、0.5 mol/LTBHP均导致SRA01/04细胞的耐受或者大量凋亡. 结论 UCHL1具有抗氧化作用,且可能在年龄相关性白内障的发生发展过程中起抑制作用.     

氧化还原信号转导抑制剂对人晶状体上皮细胞增殖的调控作用

目的 观察过氧化氢酶、N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)、二碘基苯(DPI)、AACOCF3四种氧化还原信号转导抑制剂对人晶状体上皮细胞(HLEC)SRA 01/04细胞增殖的作用.方法 为实验研究.取5～10代SRA 01/04细胞逐步降低血清浓度,在无血清培养液中培养2 h,分别用过氧化氢酶、NAC、DPI、AACOCF3预处理细胞30 min后,给予EGF 20μg/L或bFGF 20μs/L,48 h后检测3H-胸腺嘧啶脱氧核苷掺入量,计数活细胞数.在短期实验中,抑制剂只作用于细胞30 min;长期实验中,抑制剂共作用48.5 h.采用单因素方差分析对不同浓度EGF、bFGF对细胞增殖作用的样本均数进行统计.抑制剂对细胞增殖作用的实验设计属于非平衡多因素组合设计,采用拆分组别法进行统计分析.其中对照组与生长因子组间比较采用独立样本t检验,生长因子组与不同抑制剂组间比较采用单因素方差分析,不同抑制剂的不同浓度间比较采用嵌套设计定量资料方差分析.结果 作用30 min(短期实验)和作用48.5 h(长期实验),四种抑制剂都能显著抑制EGF或bFGF引起的细胞增殖.在EGF刺激下的短期实验中,105U/L过氧化氢酶,0.5 mmol/L NAC,0.1 izmoL/L DPI或0.5μmol/LAACOCF3预处理细胞30 min可以使EGF引起的细胞DNA合成分别减少18.0%(t=6.132,P<0.01),24.6%(t=6.188,P<0.01),28.5%(t=6.386,P<0.01)和16.4%(t=3.705,P=0.001).在EGF刺激下的长期实验中,能抑制细胞增殖的最低浓度低于短期实验需要的最低浓度,分别为5×104U/L过氧化氢酶,0.2 mmol/L NAC,0.01 μmol/L DPI和0.1μmol/L AACOCF3.短期实验及长期实验中抑制剂的作用强度均有剂量依赖性.相同浓度下,长期实验的抑制效果强于短期实验.在bFGF刺激下的短期实验及长期实验中得到了相似的结果.结论 氧化还原信号转导对HLEC SRA01/04增殖有重要的调控作用,阻断活性氧的产生或清除细胞内的活性氧能显著抑制LEC增殖.     

MG132对体外培养人晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的 研究蛋白酶体抑制荆MG132对晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞增殖的影响,探讨其抑制细胞增殖的有效药物浓度及分子机制.方法 不同浓度的MG132分别处理SRA01/04细胞36h,通过MTT法检测MG132对SRA01/04细胞增殖的影响,通过流式细胞术检测MG132对SRA01/04细胞凋亡的影响,通过Annexin V-FITC/PI双染法在荧光显微镜下观察SRA01/04细胞早期凋亡形态.结果 随着MG132浓度的升高,对SRA01/04细胞增殖的抑制作用逐渐增强,半数有效抑制浓度IC50为2.48μmol·L-1.MG132可诱导SRA01/04细胞凋亡;流式细胞术结果表明:浓度为2.5μmol·L-1、5.0μmol.L-1的MG132作用SRA01/04细胞36h后,细胞早期凋亡率分别为6.55%±0.35%和13.75%±3.18%,而0μmol·L-1为0.75%±0.21%,差异均有统计学意义(均为P<0.05).凋亡细胞被Annexin V-FITC单独染色(绿色荧光),活细胞不被染色,坏死细胞被Annexin V-FITC和PI(红色荧光)同时染色.结论 蛋白酶体抑制剂MG132可通过诱导细胞凋亡来抑制SRA01/04细胞的增殖,起到防治后发性白内障的作用.     

miR-210靶向沉默Bcl-2诱导人晶状体上皮细胞凋亡

目的　观察ｍｉＲ-２１０在年龄相关性白内障晶状体组织中的表达,并探讨其对人晶状体上皮细胞凋亡的影响与调控机制。方法　收集年龄相关性白内障患者与新鲜人眼透明晶状体前囊膜（正常对照组）标本;培养人晶状体上皮细胞ＳＲＡ０１／０４,予或不予（正常对照组）紫外线照射,利用实时荧光定量ＰＣＲ检测上述组织或细胞中ｍｉＲ-２１０表达。此外,将遭受紫外线照射的ＳＲＡ０１／０４细胞分为空白对照组、阴性对照组、ｍｉＲ-２１０模拟物组和ｍｉＲ-２１０抑制物组,分别予培养液及ｍｉＲ-２１０阴性对照物、模拟物、抑制物处理４８ｈ,行实时荧光定量ＰＣＲ检测ｍｉＲ-２１０表达,以验证转染效率;Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ｍｉＲ-２１０的靶基因Ｂｃｌ-２表达,流式细胞术分析细胞凋亡率。结果　与正常对照组相比,年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜组织和紫外线诱导的ＳＲＡ０１／０４细胞凋亡模型中ｍｉＲ-２１０表达均显著上调（均为Ｐ＜０．０１）。相对于空白对照组,ｍｉＲ-２１０模拟物组ｍｉＲ-２１０水平和细胞凋亡率均增加（均为Ｐ＜０．０１）,Ｂｃｌ-２蛋白表达水平降低（Ｐ＜０．０１）;而ｍｉＲ-２１０抑制物组ｍｉＲ-２１０水平和细胞凋亡率均减少（均为Ｐ＜０．０５）,Ｂｃｌ-２蛋白表达水平升高（Ｐ＜０．０１）;阴性对照组上述指标与空白对照组比较,差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论　ｍｉＲ-２１０在年龄相关性白内障患者晶状体组织中呈高表达,ｍｉＲ-２１０可能通过靶向沉默Ｂｃｌ-２促进人晶状体上皮细胞凋亡。     

晶状体上皮细胞中骨连蛋白的研究

目的对比骨连蛋白（SPARC）在不同年龄白内障及正常人晶状体中的表达,并对人品状体上皮细胞（LECs）进行热应激、氧化损伤等预处理后检测其骨连蛋白表达的变化,以探讨其在白内障发病机制中的作用。方法将80例不同年龄白内障患者平均分为4组（〈50岁组,50～65岁组,66～80岁组,〉80岁组）,于白内障超声乳化手术中环行撕囊后取晶状体的前囊膜,对照组取6例角膜移植手术供体眼的晶状体前囊膜。常规蛋白印迹法检测样品中SPARC的含量。将永生化人LECsSRA01／04解冻,传代培养。分为正常对照组、氧化损伤组、热应激处理组,蛋白印迹法观察各组SPARC的表达情况。结果组织样本对照组未检出SPARC表达,自内障组可见明确SPARC表达,并有随着年龄增长表达增加的趋势。细胞样本正常对照组未见明确SPARC表达,氧化损伤组、热应激处理组均可见SPARC表达上调。结论白内障患者LECs中SPARC较正常人表达增高,且随年龄的增长表达逐渐增高。氧化损伤及热应激可使LECs中SPARC表达上调,提示SPARC在白内障的发生发展中可能起一定的作用。