抗狂犬病病毒中和活性单克隆抗体对狂犬病街毒暴露后的治疗

目的 研究鼠抗狂犬病病毒中和活性单克隆抗体(单抗)2C、5C,对狂犬病街毒暴露后的治疗效果.方法 用3个街毒代表株CQ92、HN06、GX-4分别感染Balb/c小鼠腓肠肌,30rain后用2C、5C、狂犬病人免疫球蛋白(Hu-man Rabies Immunoglobulin,HRIG)进行治疗.结果 2C、5C、HRIG对狂犬病街毒暴露后小鼠具有相近的保护率.结论 鼠抗狂犬病病毒中和活性单抗可用于狂犬病病毒暴露后的治疗.     

国内首次在鼬獾中检测到狂犬病毒

目的:调查鼬獾中狂犬病毒的感染情况,为防制该病提供科学依据.方法:用DFA和RT-PCR方法分别检测鼬獾脑组织狂犬病毒特异性抗原及核酸,确定阳性标本.结果:在丽水地区捕获鼬獾23只,检测到狂犬病毒阳性标本1份,阳性率为4.35%.结论:疫区鼬獾中存在狂犬病毒.     

单克隆抗体免疫荧光法检测解脲支原体

非淋性尿道炎 (ＮＧＵ)是指由淋球菌以外的其他病原体所引起的尿道炎。解脲支原体 (ＵＵ)是ＮＧＵ最常见的病原体。ＵＵ的实验检测方法有 :培养法 ,细胞学检查 ,直接荧光抗体检查 ,酶免疫法 ,分子生物学方法 ,血清学检查等。快速、简便、价廉、特异性好是临床检验的基本要求 ,自 2 0 0 0年 6月至 2 0 0 0年 12月对 10 0例泌尿、生殖系感染患者 ,应用单克隆抗体免疫荧光法检测ＵＵ。同时做ＵＵ培养对照。现报告如下。1　材料与方法1·1　标本采集　先用消毒棉签将尿道或宫颈口分泌物擦干净 (女性患者需用扩阴器 ) ,再换一支棉签将其深入到尿…     

单克隆抗体免疫荧光法检测解脲支原体

<正> 非淋菌性尿道炎(NGU)是指由淋球菌以外病原体引起的尿道炎。解脲支原体(UU)是NGU最常见的病原体之一。UU的实验室检测方法有培养法、细胞学检查、直接荧光抗体检查、酶免疫法、分子生物学方法、血清学检查等。快速、简便、价廉、特异性好是临床检验的基本要求,自2000年6月～12月对100例泌尿、生殖道感染患者,应用单克隆抗体免疫荧光法检测UU,同时做UU培养对照。现报告如下。     

单克隆抗体在真菌毒素检测中的应用进展

本文介绍了单克隆抗体技术在真菌毒素检测方面的应用进展，其中包括对黄曲霉毒素及其ＤＮＡ加合物、单端孢霉烯族化合物、赭曲霉素素、杂色曲霉素等的检测方法，以及有关的免疫化学方法，如ＥＬＩＳＡ、亲和柱层析等方法。免疫化学方法的进一步发展必将在真菌毒素的研究方面得到越来越广泛的应用。     

甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体制备及其初步应用

目的 制备甲型流感病毒核蛋白(NP)单克隆抗体,为甲型流感病毒诊断试剂盒以及相关研究提供材料.方法 大肠埃希菌BL21 (DE3)表达NP作为免疫原,免疫Balb/c小鼠后取脾脏细胞与SP2/0细胞融合,筛选获得阳性细胞株,注射小鼠腹腔得到单克隆抗体,纯化后进行Western印迹法、ELISA法、细胞免疫染色和荧光法、双抗夹心ELISA法确定NP抗体的生物学特性,探索应用范围.结果 从Western印迹法、ELISA和细胞免疫染色法的结果可得知,抗NP单克隆抗体可以与免疫原特异性结合,也可以与H1N1、H3N2亚型流感病毒的NP特异性结合,具备检测流感病毒的能力.双抗夹心ELISA法进一步提升了抗体对抗原的检测灵敏度至128 pg.同时,通过细胞免疫荧光法观察到抗体可在细胞内显示NP从细胞核扩散到细胞质的过程.结论 制备的抗体成功检测H1N1、H3N2两种亚型的流感病毒,可作为用于流感防治的流感病毒诊断试剂盒的材料.     

沙门氏菌属特异性单克隆抗体在快速检测中的应用

本文应用两株沙门氏菌属特异性单克隆抗体CB8，de7，采用直接ELISA法，对人类样品进行检测，结果表明，本法对沙门氏菌属具有高度的特异性，而与所试的其他肠杆菌科细菌无交叉反应。对A－F群代表菌株的最小检出量为106个／L，在沙门氏菌与E.coli混合菌液中，E.Coli菌量100倍于沙门氏菌时，不经任何选择性培养，仅在M肉汤增菌6h便可检测出沙门氏菌。通过对1743份体检人员大便样品检测表明，本法的敏感性和特异性分别为100％和97％，在选择性增菌后6h，即可筛除97％以上的阴性样品，将为医疗、卫生防疫部门提供一种快速有效的筛检手段。     

河南省两株狂犬病毒核蛋白和糖蛋白基因的序列分析

目的分析河南省2株狂犬病毒核蛋白及糖蛋白的基因序列,了解狂犬病毒街毒株与人用及兽用狂犬病疫苗株间的差异。方法以免疫荧光法检测2004年采自河南省的100只犬脑标本,取阳性犬脑组织悬液接种鼠脑分离病毒。以RT-PCR法扩增病毒核蛋白及糖蛋白全基因,克隆测序后进行遗传学分析。结果分离到2株狂犬病毒,分别命名为Henan Hb1与Henan Sq1,序列分析表明2株病毒均为基因1型狂犬病毒,2株病毒的N基因与G基因核苷酸的同源性分别为99.3%和98.9%,氨基酸的同源性分别为98.7%和98.4%。2株病毒与CTN疫苗株同源性较高,N基因与G基因的核苷酸同源性分别为89.1%和85.6%～85.7%,氨基酸同源性分别为97.6%～98.0%和92.3%。与已知的基因1型狂犬病毒相比,2株病毒与印度尼西亚从犬中分离到的2株病毒同源性最高,N基因与G基因核苷酸同源性分别为92.1%～93.2%和91.9%～92.1%,氨基酸同源性分别为97.5%～98.6%和96.0%～96.2%。Henan Sq1株病毒在糖蛋白关键的毒力位点333位由W替换了R。系统发育分析表明Henan Hb1与Henan Sq1与印度尼西亚株、疫苗株CTN、中国分离株,以及泰国与马来西亚分离株进化关系最近,而与疫苗株3aG、PV、ERA及攻击毒CVS株等进化关系较远。结论2株狂犬病毒是基因1型狂犬病毒,但无论是N基因还是G基因的核苷酸序列,以及推导出来的氨基酸序列与已知的1型狂犬病毒株及疫苗株均有一定的差异。     

单克隆抗体在血清幽门螺杆菌可溶性抗原检测中的应用

目的建立一种血清幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)可溶性抗原检测方法,并评价其在Hp感染诊断中的作用。方法利用抗Hp单克隆抗体,采用双抗体夹心法检测血清中可溶性Hp抗原。并对其特异性和敏感性进行分析,同时与临床常用的血清特异性抗体检测、快速尿素酶试验、涂片镜检、14C尿素呼气试验和细菌培养5种方法进行了比较,并对药物根除效果进行了评价。结果血清可溶性Hp抗原检测方法敏感性和特异性分别为96.5%和96.0%,此方法明显优于血清特异性抗体检测、快速尿素酶试验、涂片镜检和细菌培养,与14C尿素呼气试验无显著差别,药物治疗前后血清Hp可溶性抗原含量有显著差异。结论血清可溶性Hp抗原检测方法是一种简便、高敏感性和特异性检测Hp感染的方法,可用于Hp感染药物根除效果的评价。     

Live attenuated rabies virus co-infected with street rabies virus protects animals against rabies

While current rabies post-exposure prophylaxis (PEP) is highly effective, it is costly and the vaccination regimen is complicated, requiring both inactivated vaccines and immunoglobulins. A one-dose rabies vaccine for human PEP remains a long-term goal. Here, we describe development of a highly attenuated rabies virus ERAg3m, with a mutation in the glycoprotein (G) gene and a switch of the G gene with the matrix protein gene in the viral genome. After a one-dose intramuscular vaccination, the ERAg3m virus protected 100% of mice and hamsters from lethal challenge. In co-infections, using a lethal dose of street rabies virus mixed with ERAg3m, 100% of hamsters and 90% of mice survived and were protected against subsequent infection. A mock co-infection, using inactivated commercial human rabies vaccine and a lethal dose of street rabies virus, protected 100% and 40% of hamsters and mice, respectively. In co-infections, when vaccine was administrated in the left leg and challenge virus in the right leg, the ERAg3m virus protected 40% of mice, while the inactivated vaccine showed no protection. Therefore, live attenuated rabies virus when given pre-exposure or co-infected with street rabies virus, is capable of preventing rabies in two different animal models. Overall, this highly attenuated live rabies virus offered better protection than the inactivated vaccine.     

Genetic and antigenic analysis of street strains of rabies virus in GuangxiP.R.China

ＲａｂｉｅｓｗａｓａｓｅｒｉｏｕｓｄｉｓｅａｓｅｉｎＧｕａｎｇｘｉ．Ｉｔｈａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｆａｔａｌｉｔｙｒａｔｅｓａｎｄｎｏｅｆｆｅｃｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄｓｉｎｔｈｅｒａｐｙ．Ｐｏｓｔｅｘｐｏｓｕｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ,ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ,ｓｔｉｌｌｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｗａｙｆｏｒｈｕｍａｎｒａｂｉｅｓｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ．Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｔｙｐｉｎｇ ｗｉｔｈｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｎｄｒｅｃｅｎｔｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｅ ｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｉｎＮｇ…     

浙江省不同宿主来源狂犬病病毒N基因分子特征分析

目的 测定浙江省不同宿主（人、鼬獾、犬）来源的狂犬病病毒街毒株N基因序列, 分析病毒遗传变异特征及其与流行的关系。方法 采用直接免疫荧光试验和反转录聚合酶链式反应检测狂犬病病毒阳性标本N基因核苷酸序列, 利用生物信息学软件分析基因序列和编码蛋白。结果 共获得浙江省2 个人源、5 个鼬獾源和11 个犬源狂犬病病毒街毒株N基因核苷酸序列, 18 个核苷酸和氨基酸序列同源性在89.7%～100.0%和98.4%～100.0%, N蛋白一级结构上绝大部分为稳定区域, 编码基因的核苷酸变异多为无义突变, 系统发育分析显示18 个街毒株均属于传统的基因1 型。结论 浙江省不同宿主来源狂犬病病毒的流行具有地域性特征, 同类宿主动物病毒株或来自同一县域/相邻县域的毒株在地理位置上最为近缘, 但人源株病毒更具有复杂性。浙江省狂犬病病毒街毒株的流行具有通过犬向鼬獾和人传播, 并在犬、鼬獾中跨区域循环传播的特点。     

狂犬病病毒致病机制研究概况

狂犬病病毒（RV）是一种高度嗜神经性病毒，由RV引发的狂犬病通常是一种急性致死性神经系统损伤性疾病。RV通过周围神经末梢和中枢神经系统（CNS）的神经元进行病毒的复制和传播。绝大多数狂犬病例CNS病理学表现为急性脑脊髓炎，常常没有显著的显微镜下改变，脑部可以轻度肿胀，脑膜和脑实质血管轻度充血并伴有少量炎症细胞浸润，这也是其他急性病毒性脑炎常见的共同表现。     

中国不同地区狂犬病病毒种群分布的差异

目的 明确我国不同地区流行的狂犬病病毒种群类别及其流行特征。方法 汇总GenBank数据库所有中国狂犬病流行株的N、G和全基因组序列以及国家狂犬病实验室新测定毒株序列,分别构建N基因和G基因种系发生树,明确每个毒株的种群归属。统计各地区流行株的种群类别及不同种群的毒株数量。结果 全国共流行6个毒株群（ChinaⅠ~Ⅵ）,云南和湖南是我国大陆种群最丰富省份,均有多达4个群流行;河南、福建等6省份均有3个毒株群流行;上海、江西等8省份皆流行2个病毒种群;北京、天津等14省份目前只监测到1个毒株群流行。优势毒株群ChinaⅠ已蔓延至我国东北部和西部地区,共计覆盖25个省份;China Ⅲ群近年在内蒙古、新疆地区的野生动物中流行且溢出至家畜中;China Ⅳ是青海、西藏地区的流行种群,同时流行于内蒙古、黑龙江地区的野生动物中。结论 我国不同地区狂犬病病毒种群类别和数量差异明显。     

狂犬病病毒时空进化研究进展

目前人类正处于传染性疾病全球性危机的境地，任何一个国家都不可能幸免新老传染病的威胁。之所以不断有新病原体产生是因为传染病病原体一直在变异，这种变异来源于对外界环境阻力和免疫压力的反应，通过变异企图突破阻力进一步扩散或逃过宿主的免疫压力继续生存。因此传染病的发生和不断流行都与病原体的变异有关，这种变异就是进化，     

狂犬病病毒G蛋白基因重组研究

目的探讨狂犬病病毒G蛋白基因重组及其对病毒属性的影响。方法收集GenBank狂犬病病毒G蛋白基因全序列,经过MEGA4.1对齐、去除空位处理后,运用RDP 2.0软件进行筛查,然后利用SimPlot 3.5.1软件进行相似性分析和BOOTSCAN分析,对基因重组加以验证,并构建最大似然进化树,观察重组片断拓扑结构的改变。结果利用RDP 2.0软件共检测到3个重组序列,分别是DQ849069、AF334789与AY009100。相似性分析和BOOTSCAN分析确认重组序列DQ849069重组特征明显,重组片段为746～1 566nt,重组片断最大似然进化树的拓扑结构也发生了相应改变。而AF334789与AY009100未发现有意义重组信号;地缘分析表明DQ849069是基因重组的产物。结论狂犬病病毒G蛋白在进化过程中存在重组,重组事件对未来病毒毒力的影响有待于深入研究。     

狂犬病毒TaqMan PCR检测方法的建立

目的建立检测狂犬病毒（RV）核蛋白（N）基因片段的TaqMan PCR检测方法。方法针对RVN基因保守区域设计特异性引物与探针；优化检测体系中引物与探针的浓度；以体外转录的RV完整的N基因RNA作为定量分析模型；考核检测体系灵敏性、特异性、稳定性；初步用于RV的检测。结果引物和探针具有良好的特异性，使用浓度分别为0．6μmol／L和0．2μmol／L，可检测到2700个RNA拷贝数，较传统RT-PCR检测方法敏感性提高了10倍；同一样品Ct值重复检测5次，变异系数均〈5％，表明检测体系具有较好的稳定性；通过所建立的检测体系，绘制了以模板拷贝数为分析指标的RV定量检测标准曲线，对实验室内保存毒株的检测结果显示TaqMan PCR检测比普通PCR检测更快捷、敏感。结论所建立的RV TaqMan PCR可以用于RV的实验室检测，并且比普通PCR检测方法更灵敏、特异。     

Recombinant canine distemper virus serves as bivalent live vaccine against rabies and canine distemper

Effective, safe, and affordable rabies vaccines are still being sought. Attenuated live vaccine has been widely used to protect carnivores from canine distemper. In this study, we generated a recombinant canine distemper virus (CDV) vaccine strain, rCDV-RVG, expressing the rabies virus glycoprotein (RVG) by using reverse genetics. The recombinant virus rCDV-RVG retained growth properties similar to those of vector CDV in Vero cell culture. Animal studies demonstrated that rCDV-RVG was safe in mice and dogs. Mice inoculated intracerebrally or intramuscularly with rCDV-RVG showed no apparent signs of disease and developed a strong rabies virus (RABV) neutralizing antibody response, which completely protected mice from challenge with a lethal dose of street virus. Canine studies showed that vaccination with rCDV-RVG induced strong and long-lasting virus neutralizing antibody responses to RABV and CDV. This is the first study demonstrating that recombinant CDV has the potential to serve as bivalent live vaccine against rabies and canine distemper in animals.     

Rabies virus pathogenesis in relationship to intervention with inactivated and attenuated rabies vaccines

Despite progress in vaccine development in the past century the mechanisms behind immune responses elicited by rabies biologics or via natural infection remain largely unknown. In this study, we compared protection elicited by standard, early, or delayed prophylaxis with a reduced number of vaccine doses using inactivated and live-attenuated vaccines. Two-month-old Syrian hamsters, 4-week-old ICR mice or adult rhesus macaques were inoculated with canine rabies virus variants. Thereafter, prophylaxis was initiated 6 h, 1, 2, 3, 4, 5, 6 or 7 days post-exposure (p.e.). One or several doses of inactivated (HDCV), or reverse genetically attenuated (live), or gamma-irradiated (inactivated)-ERAG333 vaccines were administered intramuscularly. The dynamics of virus spread were measured over time in the rodent models. Rabies virus reached the spinal cord at day 4 and brain at day 6 p.e. All hamsters succumbed in groups in which live ERAG333 was delayed until days 5 and 6 p.e. However, 78%, 44%, 56% and 22% of hamsters survived when one dose of live ERAG333 was administered 6 h, 1, 2, 3, and 4 days p.e., respectively. Similarly, 67% survived when inactivated ERAG333 was administered at 24 h p.e. All hamsters succumbed when standard prophylaxis (the Essen regimen) was delayed until days 3–6, but 67% and 33% of hamsters survived when PEP began 1 or 2 days p.e., respectively. Macaques were protected by one dose of attenuated ERAG333 at 24 h p.e. The highly attenuated (live) and inactivated ERAG333 vaccines elicited potent protective immune responses, even when prophylaxis initiation was delayed. When 2–5 doses of commercial vaccine and HRIG were administered according to the Essen scheme, 89–100% of the animals survived. Reduced vaccine schedules provided efficacious intervention, regardless of the total number of vaccine doses administered.