脑缺血后脑组织NO含量和NOS活性变化及三七总皂甙的影响

为了探讨一氧化氮 (NO)在缺血神经元坏死中的作用机制及三七总皂甙 (PNS)是否通过影响NO的变化而起脑保护作用。　　方法　用栓线法建立大鼠局灶性脑缺血模型 ,测定脑缺血后不同时间脑组织NO含量和一氧化氮合成酶 (NOS)活性变化及PNS对其的影响。　　结果　缺血后 3 0分钟脑组织NO含量和NOS活性均显著升高 (P <0 0 1 ) ,而PNS能防止脑缺血后两者的升高。NO含量与NOS活性呈显著正相关。　　结论　NO在缺血神经元损伤中起重要作用 ,PNS是通过降低NO的含量而起保护脑组织作用     

急性脑缺血后NO与ET代谢的相互关系

在兔大脑中动脉阻断(MCAo)型局灶脑缺血前后分别应用外源性-氧化氮合成酶(NOS)抑制剂L-NNA和一氧化氮(NO)合成底物L-Arginine,观察缺血4h后脑组织内皮素(ET)含量的变化。结果发现L-NNA组较缺血对照组脑组织ET含量明显增加(1262.9±387.6 vs789.3±188.4pg/mg·pro,P<0.01),脑水肿显著;而L-Arginine用药组脑组织ET含量较缺血对照组明显减少(P<0.05),且脑水肿减轻。本研究提示促进NO代谢能抑制缺血脑组织ET的产生。NO影响早期脑缺血可能与此途径有关。     

小鼠实验性脑梗塞病理及生化的长时程动态变化

目的观察脑梗塞后,脑组织的长时程病理及生化变化规律,进而探索相应的治疗时间窗。方法应用光化学脑梗塞模型,测定48h、1周、2周、1个月、2个月脑组织脂质过氧化产物(MnA)、一氧化氮合酶(NOS)活性、脑组织含水率、梗塞体积及巴曲酶等药物的作用。结果缺血后NOS活性经历了升高、降低、再升高的变化过程,MDA含量于梗塞后1个月仍维持在高水平,梗塞后1周内脑水肿明显。结论脑缺血后上述各生化指标及病理改变有各自不同的变化特征,可做为确定治疗时间窗的参考。除溶栓作用外,适时应用巴曲酶具有一定的神经保护作用。     

局灶脑缺血后早,晚期一氧化氮合成酶的活性变化

一氧化氮(NO)在脑缺血中起重要作用,一氧化氮合成酶(NOS)作为NO合成的关键酶,其活性变化直接调节NO的生成量及生物学效应。本文在建立兔MCAO局灶脑缺血模型基础上,测定缺血后不同时间缺血区和正常脑组织的NOS活性。结果显示,脑缺血早期(1h内)NOS活性突然升高,随之下降;脑缺血后24h NOS活性又升高,至48h、96h明显升高。     

NOS活性在局灶脑缺血后的时相变化

一氧化氮(NO)在脑缺血中起重要作用,一氧化氮合成酶(NOS)作为NO合成的关键酶,其活性变化直接调节NO的生成量及生物学效应,本文在建立兔MCAO局灶脑缺血模型基础上,测定缺血不同时间缺血区和正常脑组织的NOS活性。结果显示脑缺血早期(1小时内)NOS活性突然升高,随之下降;脑缺血后24小时NOS活性又回升,48小时、96小时明显升高。     

八肽胆囊收缩素对正常及脑缺血大鼠大脑皮层NO水平的调节作用

目的 探讨中枢八肽胆囊收缩素(CCK—8)对正常及脑缺血大鼠脑组织一氧化氮(NO)水平的影响及其可能的机制。方法 给正常或局部脑缺血1h再灌注24h大鼠脑室内(icv)分别注射体积均为5μl的溶剂(人工脑脊液)、CCK—8、丙谷胺或丙谷胺十CCK—8。给药后25h分别取正常大鼠的大脑皮层及脑缺血大鼠缺血中心区、半暗区、非缺血半球皮层，检测脑组织NO水平及一氧化氮合酶(NOS)活性。结果 (1)与假手术组相比，缺血溶剂组大鼠脑缺血中心区及半暗区NO水平显著增加(P＜0．05)，缺血CCK—8组NO水平无明显变化；与缺血溶剂组相比，缺血CCK—8组脑缺血中心区及半暗区NO水平显著降低(P＜0．05或0．01)；缺血CCK—8组非缺血半球皮层NO水平显著高于假手术组(P＜0．05)，而缺血溶剂组非缺血半球NO水平的升高不明显。(2)正常大鼠给CCK—8后，脑皮层NO水平、NOS活性明显升高(P＜0．05或0．005)，丙谷胺可部分拮抗这一作用；单独给丙谷胺对NO水平、NOS活性无影响。结论 中枢给予CCK—8对局部脑缺血再灌注引起的脑皮层缺血中心区及半暗区NO水平的升高具有抑制作用；对正常脑皮层组织NO水平、NOS活性有上调作用，丙谷胺可部分拮抗这一作用。     

NO增加兔局灶脑缺血后缺血脑组织VEGF表达

目的一氧化氮(NO)和血管内皮生长因子(VEGF)参与血管再生并且可能在脑缺血相互影响,本实验探讨NO对局灶脑缺血后VEGF表达的影响。方法兔局灶脑缺血后应用NO合成底物:左旋-精氨酸(L-Arg),荧光RT-PCR分析缺血脑组织VEGF mRNA表达,ELISA分析VEGF蛋白,脑组织含水率评价脑水肿。结果L-Arg明显增加缺血区VEGF蛋白(1.180±0.433ng/ml vs0.649±0.274ng/ml,P<0.05)和mRNA表达(0.3402±8.876×10-3vs0.2025±0.0413,P<0.05),同时减轻脑水肿(P<0.01)。结论外源性NO增加缺血区VEGF表达,减轻脑水肿,提示联合应用NO合成底物和VEGF对脑缺血后神经保护可能起到更好的协同作用。     

一氧化氮对沙土鼠缺血性脑损伤的影响

目的:研究一氧化氮(NO)在缺血性脑损伤中的作用。方法:沙土鼠前脑缺血性脑损伤模型,分组、分剂量进行。结果:小剂量N~G-硝基-L-精氨酸(LNNA)能明显减轻缺血性损伤后脑含水量。脑损伤后一氧化氮合酶(NOS)活力明显升高,LNNA能抑制NOS活力,抑制程度与剂量相关。缺血性损伤后海马神经元严重缺失。中、小剂量LNNA能减轻海马神经元缺失,而大剂量LNNA能加重神经元缺失。结论:脑缺血后NOS活性明显增加,加重缺血性脑损伤。适当降低脑组织NOS活性能明显减轻脑水肿和海马细胞坏死。提示NO对脑损伤毒性作用和保护作用与NO浓度相关。     

大鼠局灶性脑缺血/再灌注脑组织NADPH-d染色研究

目的　NO作为中枢神经系统的信使物质和损伤状态下的氧自由基物质在脑缺血性损害中的作用非常复杂 ,研究缺血脑组织内NOS表达的变化对探讨脑缺血损害机制和脑保护十分必要。方法　大鼠大脑中动脉阻塞 (MCAO)脑缺血 /再灌注模型采用线栓法制作 ;脑组织NOS的表达采用常规NADPH d组化染色法。结果　缺血 /再灌注后脑组织神经元NADPH d染色变浅 ,阳性神经元数量减少或消失 ,而脑损伤区内NADPH d染色阳性的脑血管数量增加 ,染色加深。缺血 /再灌注 7d后NADPH d染色逐渐恢复正常。结论　缺血 /再灌注脑损伤中NO的增加可能与脑组织NADPH d表达增加有关 ,但脑组织NADPH d染色尚不能反映缺血脑组织内炎性细胞和胶质细胞NOS(主要是iNOS)表达情况 ,有必要进一步研究。     

局灶性脑缺血和再灌注期一氧化氮合成酶的活性和局部脑血流量的动态变化

研究局灶性脑缺血和再灌注期一氧化氮合酶的活性和局部脑血流量的动态变化.用改良Koizumi’s大鼠局灶性脑缺血和再灌注模型及改良Bredt和Snyder’s法测定了缺血和再灌注期缺血侧脑组织一氧化氮合成酶(NOS)总活性,并同步以激光多普勒血流仪(LDF)对缺血周边区局部脑血流量(ICBF)进行了测定.结果:缺血早期,缺血侧半球脑组织NOS活性急剧升高至缺血前2～3倍(P<0.01),缺血后期NOS活性降至缺血前水平(P>0.05);缺血10～20 min缺血周边区ICBF回升至缺血前的30%左右(P<0.05);再灌注10min出现高灌,30min后持续下降.提示:缺血期因为钙内流,使NOS活性剧增,有利于维持缺血区和周边区的脑血流量,但过量产生的NO可造成细胞损伤.再灌注期由于表达增加,加之钙超载使NOS活性再度升高,NO可与再灌注期大量产生的超氧阴离子反应生成毒性自由基而损伤细胞.     

疏血通对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其对NO、NOS含量的影响

目的　探讨疏血通对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法　 4 8只成年雄性沙土鼠随机分成假手术组、缺血再灌注组和治疗组 ,阻断双侧颈总动脉 7分钟后血液复流 ,制成沙土鼠脑缺血再灌注模型。每组随机取 8只沙土鼠于再灌注后 2 4小时处死 ,分离出海马区及额顶部脑组织 ,作脑组织匀浆。测定脑组织匀浆中的NO、NOS含量 ,同时对再灌注后 12小时、3天、7天海马区的病理学改变进行观察。然后比较假手术组、缺血再灌注组和治疗组上述指标的变化。结果　缺血再灌注后 12小时治疗组较缺血再灌注组海马CA1区神经元变性、坏死程度明显减轻 ,随再灌注时间的推移两组变性、坏死及形态不规则的神经元均逐渐增多 ;超微结构显示治疗组细胞器、细胞核及细胞内膜系统的损伤性改变较缺血再灌注组明显减轻。治疗组NO、NOS含量则明显低于缺血再灌注组 (P <0 .0 5 ) ,而缺血再灌注组NO、NOS含量明显高于假手术组 (P <0 .0 5 ) ;治疗组与假手术组NO、NOS含量差别无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　疏血通可能通过抑制NO合成来对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用。     

甘草总黄酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注损害的脑保护作用

目的　研究甘草总黄酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注损害的脑保护作用。方法　我们拟采用线栓法建立的大鼠大脑中动脉 (MCA)缺血再灌注模型 ,并用 3种不同剂量的甘草总黄酮灌服后 ,测定缺血 2h再灌注 2 4h时血清和脑组织中丙二醛 (MDA)、超氧化物歧化酶 (SOD)、一氧化氮 (NO)、一氧化氮合酶 (NOS)活性。结果　发现甘草总黄酮能促进大鼠MCA、缺血再灌注 2 4h后神经功能恢复 ,甘草总黄酮能明显降低血清、脑组织中的MDA、NO含量 ,提高体内SOD的活性。结论　提示中药甘草总黄酮有抗氧化作用     

一氧化氮和一氧化氮合酶在大鼠局灶性脑缺血中的表达特点

目的建立脑缺血SD大鼠模型,探讨一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)在脑缺血模型中的表达特点。方法应用线栓法制作大脑中动脉阻塞(MCAO)局灶性脑缺血模型,根据缺血不同时间分为8组,设立假手术组和正常对照组,每组各有6只大鼠。应用硝酸还原酶法测定脑组织NO的含量,流式细胞术(FCM)定量检测硝基酪氨酸(NT)表达,化学比色法测定脑组织NOS的活性,免疫组织化学方法定位检测eNOS、nNOS和iNOS表达位置,逆转录反应系统(RT-PCR)半定量分析eNOS、nNOS和iNOS的 mRNA在脑缺血区域的表达。结果神经功能缺失评分发现缺血时间越长,神经功能缺失越明显;脑组织中NO含量与缺血时间正相关;缺血1h后NT阳性细胞百分比开始明显升高(9.50%);缺血0.5h时NOS的活性开始升高,缺血3d达到高峰[0.94nmol/(g.min)];免疫组织化学提示eNOS在神经细胞和血管内皮细胞胞浆均有表达,nNOS和iNOS抗体主要在神经细胞胞浆中表达;RT-PCR半定量分析在缺血早期(0.5h~6h),随着缺血时间延长,eNOS和nNOS表达增加,iNOS未见表达或低表达;缺血中晚期(6h~5d),iNOS高表达,并与缺血时间呈正相关,eNOS和nNOS表达明显减少。结论脑缺血时间延长,NOS的活性升高,NO在体内特异性代谢产物NT量增加,神经功能缺失越明显;NOS在缺血早期以eNOS和nNOS为主,在缺血晚期以iNOS为主。     

巴曲酶对大鼠缺血再灌注损伤的保护作用——降低NO神经毒性作用

本文用Ｗｉｓｔａｒ大鼠四条血管关闭的全脑缺血再灌注模型，观察脑缺血再灌注脑组织ＮＯ含量的变化及巴曲酶对它的影响。提示巴曲酶通过降低ＮＯ的神经毒性作用起到保护脑组织、减轻缺血再灌注损伤作用。     

自发性高血压大鼠脑缺血后脑区一氧化氮的变化

目的：研究自发性高血压大鼠（SHR）脑缺血后大脑皮质、海马、纹状体和小脑组织中一氧化氮（NO）的变化。采用放射免疫法和荧光分光光度法检测脑组织中一氧化氮合酶（NOS）和亚硝酸盐（NO2）的含量。结果显示SHR脑缺血10min,各脑区NOS和NO2,的含量均明显高于假手术组（P<0．01或P＜005）。说明了SHR脑缺血早期脑组织NO的生成增加．提示用特异的NO生成抑制剂类药物,可能有助于脑缺血的治疗。     

急性局灶性鼠脑组织缺血后NO含量的变化及其意义

NO被认为是一种自由基,与脑缺血关系密切,可能对缺血性脑损伤有直接的影响。方法:本文在建立线栓法制成大脑中动脉缺血模型的基础上,测定缺血侧与非缺血侧脑组织NO,SOD,LPO等含量的变化。结果:缺血早期,缺血侧与非缺血侧脑组织NO增加的速度很快,推测与NOS活性增加有关,也可能是脑缺血后产生神经毒性的早期反应;缺血侧脑组织SOD显著下降,LPO上升,表明由于自由基生成过多,SOD消耗过多,清除自由基的能力下降,这些早期的神经毒性作用在缺血性脑血管病的发病机制方面的意义值得深入研究。结论:缺血组织产生大量LPO及NOS活性增加,NO合成增多,自由基的堆积可能是脑组织损伤加重的重要因素。     

脑缺血后cNOSmRNA表达：NO在脑缺血早期的保护作用

在SHR MCAO局灶脑缺血模型基础上,分别测定脑缺血后不同时限NOS活性变化及cNOS mRNA表达水平,并应用外源性NOS抑制剂L-NNA,观察NO代谢变化对脑缺血脑水肿的影响。结果发现脑缺血早期cNOS mRNA表达增加,NOS活性增高,L-NNA则促进脑水肿发生,提示NO在脑缺血早期可能具有保护作用。     

依达拉奉对脑缺血-再灌注大鼠的神经保护作用及其机制研究

目的探讨依达拉奉对局灶性脑缺血-再灌注损伤的影响及其可能的神经保护机制。方法用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤模型,用试剂盒检测脑组织丙二醛(MDA)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性;分别测定脑组织含水量;免疫组织化学染色检测水通道蛋白4(AQP-4)的表达水平。结果缺血再灌注损伤后,大鼠脑组织脂质过氧化产物丙二醛含量和一氧化氮合酶活性增高,MDA含量和NOS合酶活性于脑缺血-再灌注后30min开始增高,于3d达到高峰,于7d基本恢复正常;脑组织含水量于脑缺血再灌注后1d开始增高,于3d达到高峰,于7d时下降至大致正常水平;AQP-4的表达于脑缺血-再灌注后6h开始增高,于3d达到高峰,于7d时下降至大致正常水平。依达拉奉干预能显著降低MDA含量和NOS活性,降低脑组织的含水量,并使AQP-4的表达明显下降。结论在脑缺血-再灌注损伤后,依达拉奉能通过清除自由基而减轻脂质过氧化损伤,并通过抑制AQP-4的表达减轻脑水肿,从而起到神经保护作用。     

大剂量伽玛刀照射后脑组织一氧化氮合酶亚型表达改变及其与急性脑水肿的关系

目的探讨大剂量伽玛刀(γ刀)照射后脑组织一氧化氮合酶(NOS)亚型表达改变及其与急性脑水肿的关系。方法200Gy量γ刀照射正常大鼠脑,采用光镜、电镜、免疫组化及原位杂交技术研究照射后急性脑水肿的发生发展及脑组织NOS亚型表达变化。结果①照射后30min出现急性脑水肿病理改变,照射后2h出现明显血管源性脑水肿,照射后6h出现明显细胞性脑水肿,照射后3d急性脑水肿达高峰。②脑组织NOS亚型表达在照射后30min开始增高,内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达分别于照射后2h及6h显著增高,神经元型一氧化氮合酶(nNOS)表达亦增高,但nNOS阳性表达细胞数量较少。3种NOS亚型表达增高持续时间长,伴行于脑水肿的急性发展阶段。结论大剂量γ刀照射后脑组织NOS亚型表达增高与急性脑水肿的发生发展有关。     

一氧化氮和一氧化氮合酶在大鼠脑损伤组织中的表达

目的 探讨创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后脑组织匀浆中一氧化氮(nitric oxide,NO)含量、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性以及与脑水肿之间的关系.方法 SD大鼠52只,36只随机分为正常对照组(n=6)和手术组(n=30),手术组按受伤到处死的不同时间(6、24、72、120、168 h)分成5个亚组,每亚组6只,各组取脑组织匀浆检测NO、NOS及测定脑组织含水量.16只随机分4组,正常对照组、伤后6h、72 h、168 h各4只,行尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸黄递酶(Nicoti-namide adenine dinucleotide phosphate diaphorase,NADPHd))组化染色检测皮层及脑底NOS阳性细胞.结果:TBI后脑组织内NO含量、NOS活力即有升高,与对照组比较有明显差异(NO含量比较F=468.89,NOS活力比较F=84.32,P＜ 0.05).脑组织含水量在外伤后升高,与对照组比较有明显差异(F=1963.51,P＜0.05).NADPHd组化染色显示TBI皮层NOS阳性细胞明显多于正常对照组,伤灶脑底也出现了染色块及浓染的细胞群与阳性纤维束.结论 大鼠TBI后损伤灶外确实发生了NO、NOS的升高,伤后1周内持续存在；NO含量、NOS活性与脑组织含水量的变化趋势基本一致,为临床治疗脑水肿提供实验依据.