肿瘤患者自然杀伤细胞受体NKG2A和NKG2D的表达

目的通过研究肿瘤患者外周血自然杀伤（NK）细胞表面NKG2A和NKG2D的表达情况，探讨二者表达失衡与肿瘤免疫逃逸的关系。方法采用流式细胞术检测40例肿瘤患者和10名正常对照者外周血NK细胞表面NKG2A和NKG2D的表达情况。用全自动五分类血液分析仪测定各病例的血常规。结果肿瘤患者和正常对照组白细胞数值差异无统计学意义；肿瘤患者淋巴细胞比率低于对照组，而NK细胞明显高于对照组；肿瘤患者NK细胞表面抑制性受体NKG2A和活化性受体NKG2D均明显高于对照组，但肿瘤患者NKG2D荧光强度呈降低趋势。结论肿瘤患者NK细胞表面NKG2A／NKG2D表达失衡，可能是肿瘤免疫逃逸的机制之一。     

刺激NKG2D配体表达在血液肿瘤免疫治疗中的意义

NKG2D是表达在自然杀伤细胞（NK细胞）表面的重要的活化性受体。它能够识别不同的NKG2D配体分子,激活NK细胞的抗肿瘤活性。大多数正常组织不表达NKG2D配体,而病毒感染或者基因毒性药物等细胞压力可以通过DNA损害的途径刺激NKG2D配体分子表达,从而增强肿瘤细胞对NK细胞的敏感性。本文主要阐述刺激NKG2D配体表...     

NKG2D介导正常人NK细胞对白血病细胞的杀伤作用

目的 探讨诱导白血病细胞NK细胞表面活性受体(NKG2D)配体表达增加,增强NKG2D与其配体相互作用介导的NK细胞对白血病细胞杀伤活性.方法 用羟基脲处理慢性髓性白血病细胞系OUN-1及白血病患者原代白血病细胞24 h,用流式细胞术检测培养前后其表面NKG2D配体的表达水平.取正常人外周血分离NK细胞并在含IL-2的培养液中培养72 h作为效应细胞,用羟基尿培养前后的OUN-1细胞作为靶细胞,用51Cr释放实验检测NK细胞对OUN-1 细胞的杀伤作用.结果 用羟基脲处理后的OUN-1细胞表面NKG2D配体MIC A/B 和ULBP2表达[平均荧光强度(MFI)值分别为23.5±3.4和33.5±4.8]较未处理的OUN-1细胞(MFI值分别为8.9±0.9和14.5±0.6)明显增加(P\%值分别为0.01和0.03),而ULBP1和ULBP3的表达无明显变化.羟基脲亦能诱导白血病患者原代白血病细胞表面NKG2D配体表达增加.正常人NK细胞对羟基尿处理过的OUN-1细胞杀伤作用明显增强[杀伤率为(62.0±5.6)%对(76.0±5.3)%,P\%=0.02],这种杀伤作用可以被抗NKG2D抗体部分抑制[(76.0±5.3)%对(46.0±4.5)%,P\%=0.00].结论 羟基脲可以诱导白血病细胞系OUN-1细胞表面NKG2D配体表达增加,从而增强NKG2D和其配体的相互作用介导的NK细胞对白血病细胞杀伤作用.     

结直肠癌患者NKG2D及其配体MICA/B的表达

目的:观察结直肠癌患者NKG2D及其配体MICA/B的表达,研究自然杀伤细胞免疫状态及肿瘤逃避免疫监视的机制。方法:流式细胞术检测40例结直肠癌患者及30例健康体检者外周血自然杀伤细胞绝对计数,NKG2D及其配体MICA/B的表达。ELISA检测血清可溶性MICA的浓度。结果:结直肠癌患者自然杀伤细胞绝对计数、NKG2D、MICA/B的表达均降低,可溶性MICA浓度增高,与对照组比较差异有统计学意义。NKG2D的表达与结直肠癌组织分化程度呈负相关(P<0.01),与病理分期无关(P>0.05);血清可溶性MICA浓度与结直肠癌的病理分期呈正相关(P<0.01),与组织分化程度无关(P>0.05)。结论:结直肠癌患者血清高水平的可溶性MICA,抑制了NKG2D介导的抗肿瘤免疫,可能是肿瘤逃避免疫监视的机制之一。外周血NKG2D的表达与血清可溶性MICA浓度可以作为判断上皮类肿瘤恶性程度的指标。     

NKG2D及其配体在肿瘤免疫中的作用

1991年Houehins等人在对NKG2家族cDNA序列分析时，首次分离得到NKG2D。NKG2D是表达于大多数NK细胞、CD8^＋T细胞、γδT细胞及活化的巨噬细胞的活化性受体，通过识别感染细胞及应激细胞表面诱导产生的配体，并与之结合，从而杀伤靶细胞发挥免疫监视的作用。     

NKG2D在NK细胞杀伤血液肿瘤细胞中的作用

本研究旨在探讨NKG2D在NK细胞杀伤血液肿瘤细胞时是否发挥作用。将多种血液肿瘤细胞株作为靶细胞,并在靶细胞中检测NKG2D相应配体的表达,而后进行杀伤实验。将靶细胞与羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)共孵育,同时将NK细胞系NK92MI分别与NKG2D特异性封闭抗体或同型对照抗体共孵育。之后将NK92MI分别与多种血液肿瘤细胞共同培养,2 h后用流式细胞分析方法检测靶细胞的凋亡率。结果显示:加入NKG2D特异性封闭抗体后,NK细胞对于急性髓系白血病细胞Kasumi-1的杀伤作用减弱约30%,而在其他血液肿瘤细胞株中封闭NKG2D并未明显影响NK细胞对于靶细胞的杀伤。结论:在NK细胞作用于某些靶细胞时,NKG2D促进NK细胞的杀伤作用。     

NKG2D在细胞因子诱导的杀伤性细胞（CIK）抗血液肿瘤细胞的作用

本研究探讨细胞因子诱导的杀伤性细胞（CIK）通过NKG2D受体和配体相互作用杀伤血液肿瘤细胞的机制。用含有rhIL-2,抗CD3抗体,IFN-1的培养液培养健康人的外周血单个核细胞（PBMNC）2周后,用流式细胞仪分析CIK细胞的细胞亚群以及细胞表面NK细胞受体,同时检测血液肿瘤细胞株表面NKG2D配体的表达水平。CAM标记靶细胞,用流式细胞仪检测CIK细胞对血液肿瘤细胞的杀伤作用。结果表明,大部分CIK细胞为CD3＋细胞（97．85±1．95％）,CD3＋CD8＋细胞和CD3＋CD56＋细胞的比率较培养前明显升高（P〈0．001;P=0．033）;约86％的CIK细胞表达NKG2D受体,几乎不表达CDl58a,CDl58b和NCR受体;血液肿瘤细胞株U266、K562和Daudi均表达-定水平的NKG2D配体,CIK细胞对这3种血液肿瘤细胞株均具有较高的杀伤作用,这种杀伤作用可以被抗NKG2D抗体部分抑制（U26652．67±4．63％VS32．67±4．81％。P=0．008;K56271．67±4．91％VS50．33±4．91％,P=0．007;Daudi68．67±5．04I）S52．67±2．60％,P=0．024）。结论：大多数的cIK细胞表达NKG2D受体,NKG2D受体和配体的相互作用可能是CIK细胞杀伤血液肿瘤细胞的作用机制之-。     

苦参碱对白血病细胞NKG2D配体表达的作用研究

本研究旨在探讨人白血病细胞表面NK细胞活化性受体NKG2D配体分子的表达水平及中药苦参碱对白血病细胞NKG2D配体表达的作用。流式细胞术检测白血病细胞表面MICA／B和ULBP1、2、3四种NKG2D配体的表达。苦参碱处理白血病细胞株K562、OUN-1、U937和K562／A02及原代培养的人白血病细胞,流式细胞术分析药物处理后细胞表面NKG2D配体的表达改变。结果表明,几株常见人白血病细胞及原代人白血病细胞表面均有NKG2D配体分子的表达,多数有ULBP分子的高表达或ULBP表达明显高于MICA／B,但不同细胞表面NKG2D配体的表达模式明显不同。苦参碱处理可上调白血病细胞表面部分NKG2D配体的表达水平,提示苦参碱对不同白血病细胞NKG2D配体分子的表达调节不同。K562细胞表面NKG2D配体ULBP2和ULBP3分子的高表达可能是介导NK细胞对其高杀伤性的重要原因。结论：人白血病细胞及原代人白血病细胞表面均有NKG2D配体的表达,但不同细胞NKG2D配体的表达模式不同。苦参碱可上调白血病细胞表面部分NKG2D配体分子的表达。     

NKG2D-IL-21融合基因修饰的结肠癌细胞体外刺激NK细胞活化的研究

目的观察含NKG2D-IL-21融合基因的重组表达载体转染结肠癌细胞后对NK细胞活化的影响。方法首先利用DNA限制性内切酶鉴定插入真核表达载体(pcDNA3.1-NKG2D-IL-21)的NKG2D和IL-21基因序列,并通过脂质体介导质粒转染结肠癌细胞株CT-26。流式细胞术胞内染色法检测CT-26内NKG2D-IL-21融合蛋白的表达,酶联免疫吸附实验鉴定细胞培养上清NKG2D-IL-21蛋白的含量。最后将经基因转染的CT-26细胞与小鼠脾脏NK细胞共培养,流式细胞术检测NK细胞表面活化性受体CD69的表达。结果 NKG2D-IL-21融合基因稳定插入pc DNA3.1载体。CT-26细胞经外源性NKG2D-IL-21融合基因转染后,表达含有NKG2D和IL-21的融合蛋白。分泌NKG2D-IL-21融合蛋白的CT-26细胞具有明显促进NK细胞表达CD69的活性。结论重组pcDNA3.1-NKG2D-IL-21真核表达载体可作为一种新型DNA疫苗。     

食管癌放疗中MICA—NKG2D系统功能变化与疗效的临床研究

目的探讨食管癌在放疗中MICA-NKG2D配受体功能变化,以及其变化与放疗疗效的关系。方法取食管鳞癌细胞株ECA109,用不同剂量照射后用流式细胞术检测MICA表达。采用ELISA法检测接受不同放疗剂量的食管癌患者血清中sMICA浓度,采用流式细胞术检测NK细胞NKG2D受体的表达,胞内染色法分析NK细胞杀伤靶细胞功能的变化,并在结束时及结束后4周,用WHO评价标准评价放疗疗效,研究NK细胞NKG2D受体的表达率提高与放疗疗效的关系。1年后评价生存率与NK细胞NKG2D受体的表达率提高的关系。结果食管鳞癌细胞株ECA109仅当32Gy的照射量才能诱导MICA明显表达并促进NK细胞对其的杀伤效应。放疗中食管癌患者血清内sMICA含量无明显变化,40～60gy的放疗剂量时NKG2D阳性的NK细胞数增加,同时其NK细胞毒活性最强。放疗前后NKG2D阳性的NK细胞数增加越高的放疗后疗效评价越好。但1年后的评价未证实此结论。结论放疗可以促使食管鳞癌细胞诱导MICA明显表达并促进NK细胞对其的杀伤效应。放疗中食管癌患者血清sMICA含量无明显变化,但放疗可使NKG2D阳性的NK细胞数增多,增加越明显的患者短期放疗疗效越好,但对远期1年生存率没有明显的影响。     

NKG2D-MICA/B在急性白血病免疫逃逸机制中的作用

目的探讨NK细胞活化性受体（NKG2D）-MICA/B在急性白血病肿瘤免疫逃逸机制中的作用。方法选择20例初发未治疗的急性白血病患者,应用流式细胞术检测白血病细胞表面MICA/B表达水平、ELISA法检测血清可溶性MICA及MICB（sMICA,sMICB）水平,同时检测患者NKG2D表达水平。选择5例健康人做为对照。结果（1）20例急性白血病患者白血病细胞表面不表达或弱表达MICA/B,正常人淋巴细胞表面不表达MICA/B。（2）患者血清sMICA和sMICB水平均高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）。（3）患者NKG2D表达水平低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论白血病细胞表面MICA和MICB的脱落损伤基于NKG2D-MIC的抗白血病效应,可能是导致急性白血病免疫逃逸的机制之一。     

F-box蛋白4和端粒重复序列结合因子1相互作用核蛋白2mRNA表达与食管鳞癌发生发展关系研究

目的 检测食管鳞癌组织中F-box蛋白4(FBX4)和端粒重复序列结合因子1相互作用核蛋白2(TIN2)mRNA表达,并分析其与食管鳞癌相关临床指标的关系.方法 收集110例明确诊断的食管鳞癌中心组织及其30例癌旁组织,采用SBYR Green实时荧光定量PCR方法检测FBX4和TIN2基因在食管鳞癌中心组织和癌旁组织mRNA水平的表达,并分析FBX4和TIN2 mRNA表达临床相关指标的关系.结果 FBX4 mRNA在食管鳞癌组织中的相对表达量为0.24±0.43(n=110),而在肿瘤旁组织中为0.40±0.27(n=30),两者差异具有统计学意义(P=0.008);食管鳞癌组织中TIN2 mRNA的相对表达量为1.59±1.19(n=101);肿瘤旁为2.54±1.89(n=30),两者差异具有统计学意义(P=0.000).TIN2 mRNA表达在临床各参数不同分组内均未发现有统计学差异(P>0.05),而FBX4 mRNA表达虽在不同性别、年龄、钡餐分型、临床分期和肿瘤长度中均没有统计学差异(P>0.05),但在不同病理分型中存在统计学差异,即相对于高分化鳞癌,低分化和中分化的鳞癌组织中的FBX4 mRNA表达增加,差异具有统计学意义(P<0.05).FBX4和TIN2在肿瘤组织中的表达呈正相关(r=0.671,P=0.000).结论 FBX4和TIN2 mRNA在食管鳞癌组织中均表现表达增高,且存在直线相关关系,提示FBX4和TIN2可能在食管癌的发生发展中具有重要的临床意义;肿瘤分化程度与FBX4表达相关,而与TIN2不相关,表明肿瘤分化还与FBX4介导的泛素化相关.     

NKG2D和NKG2A及相应配体MHC-I A/B和HLA-E在急性白血病的表达及意义

本研究旨在初步探讨NK细胞受体NKG2D和NKG2A在初发ALL和AML患者NK细胞、CD3+T细胞的表达其及相应配体MHC-I A/B和HLA-E在白血病细胞表达差异性和免疫学意义.用流式细胞术检测NK92细胞对8种白血病细胞系的杀伤效率,并检测60例初发急性白血病患者(ALL和AML各30例)骨髓中NKG2D和NKG2A在NK和CD3+T细胞的表达及其相应配体MHC-I A/B和HLA-E在白血病细胞的表达.结果表明,NK92对不同白血病细胞系的杀伤效率存在差异.ALL患者NK细胞和CD3+T细胞的NKG2D及NKG2A阳性表达率与AML患者相比均无显著差异(p>0.05),但是ALL患者白血病细胞MHC-I A/B和HLA-E阳性表达率均明显高于AML患者(p<0.05).结论:ALL与AML患者免疫细胞功能的差异性可能与白血病细胞配体表达的不同有关,而与本身NK及T细胞表达的杀伤和抑制性受体无关.     

分娩发动前后体内NK细胞、NKT细胞表型分析

目的研究分娩发动前后蜕膜及外周血中NK细胞、NKT细胞表面NKG2A和NKG2D受体的表达情况,探讨其在产程发动中的作用。方法选取正常孕足月孕妇分为分娩发动经阴道分娩组（以下简称分娩组20例）和分娩未发动行选择性剖宫产术组（以下简称剖宫产组20例）,分离蜕膜及外周血中单个核细胞后采用流式细胞学技术分别检测CD56＋细胞、NK细胞、NKT细胞表面NKG2A和NKG2D受体的表达情况。结果外周血单个核细胞中分娩组CD56＋NKG2A＋细胞构成下降、CD56＋NKG2D＋细胞构成增加,NK细胞、NKT细胞表面NKG2D表达上升。蜕膜单个核细胞中分娩组CD56＋NKG2A＋和CD56＋NKG2D＋细胞构成及NK细胞表面NKG2A和NKG2D表达均下降,NKT细胞表面NKG2A和NKG2D表达无显著差异。结论临产前体内NK细胞、NKT细胞表面NKG2A和NKG2D受体表达的变化可能在在产程的发动中起着重要作用。     

食管鳞癌患者血清IGF-1的检测分析

目的：探讨食管鳞癌患者血清IGF-1的浓度及其临床意义。方法：设立食管鳞癌组合正常对照组。以化学发光法检测65例食管鳞癌患者和30例正常人血清IGF-1的浓度。结果：正常健康人血清IGF-1的含量是（195.35±48.21）ng/ml,食管鳞癌患者为（1 082.29±301.24）ng/ml,明显高于正常对照组（P〈0.01）,且血清IGF-1水平随临床病理分期的进展而逐步增高（P〈0.05）。结论：血清IGF-1有可能作为食管鳞癌诊断或病情监测的一个指标。     

葡萄糖调节蛋白78在人食管鳞状细胞癌中的表达及意义——附59例检测报告

目的：探讨葡萄糖调节蛋白78（glucose-regulatedprotein 78,GRP78）在人食管鳞状细胞癌中的表达情况,并了解其与食管鳞状细胞癌临床、病理特征的关系。方法：食管鳞状细胞癌手术切除标本59份,距癌组织5em以上的手术远端切缘的食管正常鳞状上皮组织20份,用免疫组织化学方法检测GRP78的表达情况,并分析GRP78的表达与临床、病理特征的关系。结果：食管鳞状细胞癌组织中GRP78的阳性表达率明显高于食管正常鳞状上皮组织（P〈0．01）;GRP78的表达程度随着浸润深度的增加而增高;随着分化程度的降低而增高;病理分期高者表达高于病理分期低者;有淋巴转移者明显高于无淋巴转移者（P〈0．05～0．01）。GRP78表达与患者性别及肿瘤长度无关（P〉0．05）。结论：食管鳞状细胞癌患者多呈GRP78的阳性表达,说明GRP78可能参与了人类食管鳞状细胞癌的发生、发展。     

PTEN在食管鳞状细胞癌中的表达和意义

目的研究人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)在食管鳞状细胞癌中的表达与临床病理特点的关系。方法采用免疫组织化学及荧光定量聚合酶链反应(PCR)法分别检测60例胸外科食管鳞状细胞癌手术患者食管鳞状细胞癌组织、癌旁组织和正常食管黏膜组织中PTEN的表达水平。分析PTEN在食管鳞状细胞癌浸润、分化、转移中的作用。结果 PTEN在正常食管组织(2.01±0.07)、癌旁组织(1.50±0.10)、食管鳞状细胞癌组织(0.89±0.08)中的表达逐渐降低(P0.01)。PTEN在有淋巴结转移的食管鳞状细胞癌组织中(0.87±0.08)的表达比在无淋巴结转移(0.94±0.07)的表达低;PTEN在高分化(0.91±0.06)、中分化(0.90±0.07)、低分化(0.85±0.10)的食管鳞状细胞癌组织中的表达逐渐降低,PTEN在浸润深(0.88±0.08)的食管鳞状细胞癌组织中的表达比浸润浅(0.93±0.07)的表达低(P0.05或0.01)。在60岁组与≥60岁组中的阳性表达差异无统计学意义(P0.05)。结论 PTEN基因的丢失或突变均与食管鳞状细胞癌的生长、分化和浸润转移相关。