晚期糖基化终末产物与糖尿病足

糖尿病是世界上最常见的代谢性疾病,糖尿病足是糖尿病比较严重的并发症之一,也是糖尿病患者致残、致死的重要原因之一,严重威胁着糖尿病患者的健康。糖尿病足的形成是一个多因素多环节参与的病理过程,发病机制目前尚不完全清楚,主要与血管病变、神经病变、感染、创面愈合延迟等密切相关,近10年来,大量的实验研究已经证实,     

糖基化终末产物对健康大鼠视网膜单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的观察外源性非酶糖基化终产物(AGEs)对大鼠视网膜单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法应用鼠血清白蛋白(RSA)体外孵育AGEs修饰蛋白,并将其注入健康大鼠体内,每日一次,连续两周。取大鼠视网膜行HE染色及MCP-1免疫组织化学检查。结果AGEs组大鼠视网膜内核层,神经节细胞层细胞排列疏松,细胞间隙增大,细胞数减少。MCP-1在大鼠视网膜内核层,神经节细胞层部分细胞的胞浆中呈阳性表达,AGEs组表达明显增强,其平均灰度值为126.83±2.91,同正常对照组及RSA组相比,差别有统计学意义。结论AGEs可作为独立因素导致视网膜组织损害,并引起正常大鼠视网膜组织中MCP-1表达增高,进而共同参与糖尿病视网膜病变的发展。     

糖基化终末产物对视网膜色素上皮细胞表达NF-κB及VEGF的影响

目的研究糖基化终末产物(AGEs)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞表达核因子kappaB(NF-κB)及血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法体外培养人RPE细胞,分别加入浓度为50mg/L、100 mg/L、200 mg/L的AGEs,采用免疫细胞化学法检测VEGF蛋白的表达,免疫荧光染色观察NF-κB活化情况,应用Western Blot方法检测VEGF的蛋白水平。结果免疫细胞化学染色结果表明,对照组仅少量细胞有VEGF弱阳性表达,AGEs各浓度可见细胞浆黄色或棕黄色着染,随作用浓度的增加其表达逐渐增强。免疫荧光染色显示AGEs各浓度组可见NF-κB p65向细胞核内转移,但未见明显的浓度依赖性。Western Blot检测显示VEGF蛋白在50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L AGEs组比空白组及对照组VEGF含量明显升高(P0.05),200 mg.L-1组较其它组VEGF含量明显升高(P0.01)。结论AGEs能促使人RPE细胞VEGF表达上调,并可促进RPE细胞NF-κB的活化。     

银杏叶提取物减轻糖基化终末产物对大鼠肾脏TGF-β及CTGF表达的影响

目的观察银杏叶提取物对糖基化终末产物（AGEs）引起的大鼠肾脏TGF-β及CTGF过表达的影响。方法每日给正常大鼠尾静脉注射AGE-修饰大鼠血清蛋白（AGEs组）,部分大鼠同时灌胃给予银杏叶提取物（GBE组）,注射天然大鼠血清蛋白（RSP组）和不施加处理的正常大鼠（空白对照组）作为对照。Elisa法检测肾皮质TGF-β及CTGF蛋白的表达,RT-PCR检测TGF-β及CTGF mRNA的表达。结果与RSP组及空白对照组比较,AGEs组大鼠尿蛋白含量明显增加（P〈0.05）,TGF-β及CTGF蛋白、mRNA的表达均增高（P〈0.01）,给予GBE后尿蛋白含量明显降低（P〈0.01）,TGF-β及CTGF蛋白含量及mRNA表达均明显降低（P〈0.05,P〈0.01）。结论 GBE改善AGEs引起的肾功能变化,减轻AGEs诱导的大鼠肾皮质TGF-β及CTGF过表达。提示GBE可通过抑制AGEs引起的TGF-β及CTGF过表达而在糖尿病中起到肾脏保护作用。     

糖基化终末代谢产物及其受体与动脉粥样硬化的关系及抑制剂的研究进展

正随着人类社会文明的发展,随之而来的各种慢性疾病成为了困扰世界各国的公共健康问题,尤其糖尿病的患病率呈逐年增加趋势。糖尿病的各种大血管和微血管病变成为患者致残率和致死率增加的重要原因,这是因为糖尿病患者的持续高血糖状态导致晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)明显增加,该产物与糖基化终末产物受体(receptor of advanced     

晚期糖基化终末产物的临床检测进展

晚期糖基化终末产物（AGE）已被证实与衰老及其相关性疾病有关。因此,AGE的临床检测对于以上慢性疾病的早期预测和干预以及长期监测具有重要价值。现有多种AGE的检测方法,但由于AGE具有高度异质性,结构复杂,临床上尚缺乏标准化的检测方法。该文简要概述目前AGE的检测方法及其优缺点,以期为AGE的临床检测指明未来方向。     

川芎嗪可影响肿瘤坏死因子α刺激肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB及相关基因产物的表达

背景：川芎嗪延缓肝纤维化形成的机制尚不清楚。目的：观察川芎嗪对肿瘤坏死因子α刺激的肝星状细胞增殖及结缔组织生长因子、核因子κB及其相关基因产物白细胞介素6表达的影响。方法：体外培养HSC-T6细胞株,取对数生长期的细胞用于实验。实验分为4组：对照组仅加入细胞;TNF-α组加入10μg/L TNF-α;川芎嗪干预组先加入终浓度为10μg/L的TNF-α作用30min后,分别加入川芎嗪50,100,200,400,600,1000mg/L;PDTC组先加入终浓度为10μg/L的TNF-α作用30min后,再加入终浓度18μmol/L的核因子κB阻断剂PDTC。结果与结论：MTT结果显示100,200,400,600,1000mg/L的川芎嗪均能抑制HSC-T6增殖,且呈剂量依赖性。免疫细胞化学染色及Western blot检测发现10μg/L的肿瘤坏死因子α刺激后,HSC-T6细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达明显增多（P〈0.01或P〈0.05）,200,400,600mg/L的川芎嗪及18μmol/L的PDTC均可明显降低肿瘤坏死因子α刺激后HSC-T6细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达（P〈0.01）,且随着川芎嗪质量浓度的增加,抑制作用增强,PDTC的抑制作用最明显。相关性分析结果显示HSC-T6细胞结缔组织生长因子和核因子κB的表达呈正相关（r=0.980,P〈0.01）。说明川芎嗪可以抑制肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达,抑制肝星状细胞的增殖。     

运动预处理对脑缺血再灌注大鼠血清炎症因子水平的影响

目的探讨运动预处理对脑缺血再灌注大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量的影响。方法雄性Sprague-Dawley大鼠24只分为运动预处理组(n=8)、模型组(n=8)、假手术组(n=8)。线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)缺血再灌注模型。再灌注后2 h、24 h分别行神经功能缺损评分。随后取材,HE染色观察大鼠缺血侧脑组织病理形态变化,酶联免疫吸附法检测血清TNF-α、IL-1β及IL-6的含量。结果脑缺血再灌注后24 h,运动预处理组神经功能评分较模型组改善(P0.05),血清TNF-α、IL-1β及IL-6含量明显降低(P0.01);脑缺血区皮质病理损伤减轻,间质水肿程度减轻,细胞排列较整齐,缺血区变性和坏死的神经元数量明显减少。结论运动预处理可以降低急性脑缺血再灌注大鼠炎症反应,降低神经功能缺损。     

晚期糖基化终末产物的检测和临床意义

晚期糖基化终末产物（advancedglycosylationendprodrcts,AGEs）在糖尿病慢性并发症发病中起重要作用。近年AGEs作为监视伴慢性并发症糖尿病病人治疗效果的一项重要指标,正被认识并在临床应用。本文介绍AGEs的形成过程、化学结构、检测方法和临床意义。     

晚期糖基化终末产物与冠状动脉病变程度的相关性研究

目的探讨晚期糖基化终末产物（AGEs）水平与冠心病（CHD）患者冠状动脉病变程度的关系。方法对132例行冠状动脉造影检查者,采用ELISA法测定血清AGEs水平。依照冠状动脉造影结果分为非冠心病组（n=38）和冠心病组（n=94）,病变程度定量采用Gemini评分系统。根据冠状动脉病变支数,分为冠状动脉正常组（n=32）、单支病变组（n=34）、双支病变组（n=35）及多支病变组（n=31）。结合AGEs、Gemini积分对各组进行比较和综合分析。结果冠心病组血清AGEs浓度显著高于非冠心病组（P〈0．01）,随冠状动脉病变支数和Gensini积分增加血清AGEs水平相应升高。校正年龄、血压、血脂、血糖等影响后,AGEs与ISI、Gensini积分呈显著正相关（r=0．717、r=0．658,P〈0．01）,与冠状动脉病变支数亦呈正相关（r=0．742,P〈0．05）。线性回归分析显示年龄、Gensini积分、BMI、ISI是影响AGEs的独立因素;ISI、BMI、AGEs、年龄、SBP是影响Gensini积分的独立因素。结论血清AGEs在冠心病患者中明显升高,且随着冠状动脉病变程度加重而升高,提示AGEs不仅参与了冠心病的病理生理过程,而且还可作为判断冠状动脉病变严重程度的一项指标。     

糖基化终产物对大鼠视网膜VEGF表达的定位研究

目的观察外源性非酶糖基化终产物(AGEs)诱导的大鼠模型血管内皮生长因子(VEGF)在视网膜细胞中的定位。方法应用鼠血清白蛋白(RSA)体外孵育AGEs修饰蛋白,并将其注入健康大鼠体内,每日一次,连续两周。对大鼠视网膜行免疫荧光双重标记,激光共聚焦显微镜下观察胶质纤维素酸性蛋白(GFAP)与VEGF的共表达。结果C组及R组大鼠视网膜内界膜下、神经节细胞层见GFAP阳性染色,但整个视网膜未见VEGF阳性染色。A组大鼠除视网膜内界膜下、神经节细胞层有GFAP阳性染色外,其余各层也可见丝条状贯穿于内外界膜之间的GFAP阳性染色,并且在上述部位有GFAP和VEGF的共表达。结论AGEs可使大鼠视网膜Müller细胞分泌VEGF。     

吡哆胺对体外晚期糖基化及其终产物形成的抑制作用

目的体外观察吡哆胺对晚期糖基化和晚期糖基化终产物(AGEs)形成的抑制作用。方法应用牛血清白蛋白-葡萄糖试验和N-乙酰-甘氨酰-赖氨酸甲基酯-核糖两种体外试验,观察吡哆胺对糖基化反应及AGEs形成的抑制效果。结果牛血清白蛋白-葡萄糖试验显示,吡哆胺对糖基化反应具有明显抑制效果。在50 mmol/L和200 mmol/L葡萄糖浓度下,当吡哆胺浓度为50 mmol/L时,相对抑制率均在50%以上。200 mmol/L吡哆胺对糖基化的抑制作用最强,其相对抑制率分别达到92.12%和86.73%。N-乙酰-甘氨酰-赖氨酸甲基酯-核糖试验证明,吡哆胺能明显抑制晚期糖基化产物AGEs的形成。随着吡哆胺剂量的增大,吡哆胺对AGEs形成的抑制作用明显增强。结论吡哆胺对体外晚期糖基化反应和AGEs形成有明显抑制作用。     

糖基化终产物对大鼠视觉诱发电位变化的影响

目的 观察外源性非酶糖基化终产物（AGEs）诱导的大鼠模型视觉诱发电位（VEP）的变化。方法 应用鼠血清白蛋白（RSA）体外孵育AGEs修饰蛋白，并将其注入健康大鼠体内，每日一次，连续两周。对大鼠行VEP检查后取视网膜行HE染色检查。结果 AGEs组大鼠视网膜内核层，神经节细胞层细胞排列疏松，细胞间隙增大，细胞数减少。其VEP表现为潜伏期延长，振幅下降，同正常对照组及RSA组相比，差别有统计学意义。结论 AGEs可作为独立因素导致视网膜组织损害，并引起大鼠VEP改变。     

糖基化终产物对大鼠视网膜超微结构及凋亡的影响

目的观察外源性非酶糖基化终产物(AGEs)对大鼠视网膜超微结构以及细胞凋亡的影响。方法应用鼠血清白蛋白(RSA)体外孵育AGEs修饰蛋白,并将其注入健康大鼠体内,每日一次,连续两周。TUNEL法检测大鼠视网膜凋亡细胞,透射电镜下观察内核层神经细胞的超微变化。结果AGEs组大鼠视网膜内核层可见凋亡阳性细胞,透射电镜下深染细胞明显增多,细胞核缩小、不规则,染色质形成大小不等的团块凝结、边聚于核膜处。胞质深染,细胞器损害。结论AGEs可使大鼠视网膜内核层神经细胞凋亡,超微结构改变。     

晚期糖基化终末产物对术后下肢深静脉血栓的影响

目的探讨晚期糖基化终末产物(AGEs)含量变化与下肢深静脉血栓后遗症(PTS)严重程度相关性。方法选取PTS患者44例作为PTS组(共58条静脉梗阻),应用彩色多普勒超声检测患者患处的病变情况及血流动力学情况;选取下肢深静脉栓塞经过治疗疗后未患PTS的患者30例作为非PTS组;另选择正常体检者作为30例作为对照组,检测所有对象血清中AGEs含量,观察其变化特征。结果 PTS组血清AGEs含量明显高于非PTS组及对照组(P0.05);非PTS组血清AGEs含量明显高于对照组(P0.05)。全肢型血清AGEs含量明显高于局段发作的栓塞患者(P0.05);在全肢型中,I型患者血清AGEs含量明显高于II A及II B型(P0.05),ⅡA型与ⅡB型差异无统计学意义(P0.05)。血流动力学严重障碍患者血清AGEs含量明显高于中度及轻度障碍患者(P0.05);血流动力学中度障碍患者血清AGEs含量明显高于轻度障碍患者(P0.05)。结论 AGEs与PTS发生、发展及病情严重性息息相关。     

氧化应激和糖基化终末产物在2型糖尿病心肌病变中的作用及其相关性

目的研究氧化应激因素和糖基化终末产物(AGEs)在2型糖尿病(T2DM)心肌病变(DCM)的作用及其相关性。方法选择泰安地区的T2DM患者78例,根据超声心动图、冠状动脉造影等情况,分为单纯T2DM组40例,DCM组38例,另选取正常对照组(NC)40例。测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)以及谷胱甘肽过氧化物酶(GHS-PX)等氧化应激指标和糖基化终末产物(AGEs),进行数据统计,并进行相关性分析。结果 T2DM组SOD、NO、GHS-PX较NC组均明显下降,MDA、AGEs则较NC组均明显升高;而DCM组较T2DM组SOD、GHS-PX明显下降,MDA、AGEs明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01),而血清NO水平T2DM组较NC组下降,DCM组再次升高,且高于NC组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论氧化应激因素和AGEs在DCM的进展中均有重要作用,促进DCM的发生和发展,且二者之间有相关性,SOD的下降和MDA的升高是AGEs的独立相关因素。     

一氧化氮及血液净化治疗对糖尿病肾病患者血浆晚期糖基化终产物水平的影响

目的　观察不同血液净化治疗方法及血浆一氧化氮 (NO)对终末期糖尿病肾病 (DN)患者血浆晚期糖基化终产物 (AGEs)的影响。方法　终末期DN患者应用不同血液净化方式治疗 2个月 ,应用荧光分光光度法检测血浆AGEs水平 ;应用α -萘胺显色分光光度计比色法测定血浆中NO浓度。结果　随着肾功能的恶化 ,DN患者的血浆AGEs水平逐渐升高 ,二者呈明显正相关 (r=0 .781)。血液透析 (HD)治疗后AGEs水平变化不明显。单次血液透析滤过 (HDF)使血浆AGEs水平明显降低 (P <0 .0 1) ,治疗两个月后AGEs水平无明显变化。血浆AGEs的水平与NO水平成正相关 (r =0 .5 97)。结论　终末期DN患者血浆AGEs水平受血糖和肾功能双方面的影响 ,其中肾功能对其影响较大。HDF可以有效清除AGEs,但不能有效控制AGEs的透析前水平。未见NO对AGEs在体内有明确的抑制作用。     

骨形成蛋白-7对晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化的影响

目的探讨骨形成蛋白-7(BMP-7)对晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化(EMT)的影响。方法晚期糖基化终产物诱导发生上皮-间叶转化的体外培养大鼠腹膜间皮细胞,分别经含5 ng/mL及80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基和含10 ng/mL BMP-7及80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基培养48 h,以含80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基为对照,应用实时定量PCR法检测间皮细胞E-cadherin、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Collagen I)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达;应用Western印迹法检测E-cadherin、α-SMA蛋白的表达;应用ELISA法检测间皮细胞TGF-β1、VEGF蛋白表达水平。结果 BMP-7作用后,上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin mRNA和E-cadherin蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。BMP-7作用后,上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮α-SMA、Collagen I、TGF-β1、VEGFmRNA和α-SMA、TGF-β、VEGF蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。结论 BMP-7能上调上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin表达和下调α-SMA、Collagen I、TGF-β、VEGF表达,BMP-7能逆转晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT。     

Elevation of Nepsilon-(carboxymethyl)lysine-modified advanced glycation end products in chronic liver disease is an indicator of liver cirrhosis

OBJECTIVES: Progression of liver fibrosis to cirrhosis is a dire consequence of chronic liver diseases (CLD). Nepsilon-(carboxymethyl)lysine (CML)-modified advanced glycation end products (AGEs) in patients with CLD could reflect the degree of severity of the disease. DESIGN AND METHODS: In 110 patients with CLD and 124 healthy controls, CML serum levels and their diagnostic sensitivity and specificity were determined and compared to hyaluronan (HA). RESULTS: Serum levels of CML were significantly affected by the stage of liver cirrhosis and were closely associated with liver function capacity. CML correlated positively with HA (r = 0.639, P < 0.0001). In ROC analysis, the diagnostic sensitivity and specificity in distinguishing healthy controls from liver disease patients for CML (AUC 0.908; 95%-CI 0.863-0.942, cut-off 640 ng/mL, sensitivity 74.5% and specificity 97.6%) resembled HA (AUC 0.948; 95%-CI 0.907-0.974; cut-off 50 ng/mL, sensitivity 80.7% and specificity 97.9%). The combination of CML and HA shows an AUC of 0.932; 95%-CI 0.888-0.962; sensitivity 82.6%; and specificity 95.8%. CONCLUSIONS: Our data suggest that serum levels of CML could provide a supplementary diagnostic marker for advanced stages of liver cirrhosis. However, the quality of interaction needs further investigation.