脓毒症小鼠不同组织炎症因子及T细胞亚群动态变化

目的 探讨通过盲肠结扎穿孔术(CLP)建立的脓毒症小鼠在疾病发展过程中,不同脏器炎症浸润程度以及免疫状态的变化特点。方法 对40只小鼠进行CLP建立脓毒症模型(CLP组),在术后0 h、6 h、12 h、24 h、48 h及72 h检测小鼠血液、肺组织及回肠组织中IL-6、IL-10、IL-2、IL-4的含量变化,并用流式细胞技术检测小鼠脾脏中Treg及Th17、回肠黏膜固有层中CD4⁺T及CD8⁺T淋巴细胞比例变化。另选择40只小鼠进行假手术,作为对照(假手术组)。结果 CLP组小鼠肺组织及回肠组织中IL-6含量于术后6 h达峰值,血浆中IL-6含量于术后12 h达峰值,均高于同时间点假手术组小鼠(P<0.01)。CLP组小鼠回肠组织中IL-10含量于术后6 h达峰值,高于假手术组(P<0.01);IL-2含量于术后持续上升,在术后24 h达峰值,高于假手术组(P<0.01)。CLP组小鼠术后6 h及24 h的脾脏淋巴细胞中Th17、Treg比例明显高于同时间点假手术组(P<0.01);回肠黏膜固有层中CD4     

调节性T细胞对脓毒症中T淋巴细胞凋亡的影响

目的:探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Treg)对脓毒症过程中效应性T细胞(Teff)凋亡的影响。方法:应用SPF级健康雄性BALB/C小鼠制备盲肠结扎穿孔术(CLP)脓毒症模型。小鼠随机分为正常对照组、假伤组、CLP组、CLP+PC61(Treg特异性抑制剂)组、CLP+HRPN(PC61的同型对照蛋白IgG)组。免疫磁珠法分选小鼠脾脏CD4~+CD25~+Treg。采用流式细胞术观察T淋巴细胞毒性相关抗原(CTLA)-4及转录因子叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)表达以及CD25比例的变化,并检测各组小鼠CD4+CD25-T细胞的凋亡率。ELISA法检测外周血中白细胞介素(IL)-10、IL-2、IL-4和干扰素(IFN)-γ的含量变化。结果:CLP+PC61组术后48h小鼠生存率(90%)较CLP组(60%)明显升高;CLP+PC61组CD4~+CD25~+Treg中Foxp3及CTLA-4表达恢复至正常对照组水平,与CLP组差异有统计学意义(P0.05),并且CLP+PC61组CD25表达水平最低。CLP+PC61组IL-2、IFN-γ水平显著升高,与CLP组差异明显(P0.05),但IL-4、IL-10水平较CLP组出现不同程度地下降(P0.05)。此外,CLP+PC61组效应性T细胞凋亡率明显低于CLP组(P0.05)。结论:拮抗小鼠体内调节性T细胞活性可有效地减轻脓毒症状态下效应性T细胞凋亡,提高小鼠生存率。     

脓毒症小鼠CD4~+ CD25~+ Foxp3~+T细胞变化及其意义

目的观察脓毒症小鼠血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞的变化特点,探讨它与脓毒症病程发展间的关系。方法选择清洁级KM雄性小鼠,用盲肠结扎穿孔术(CLP)制作脓毒症小鼠模型(CLP组),分别于2h、6h、12h、24h、48h、72h采血处死12只,并留取远端回肠HE染色光镜检查;流式细胞仪检测血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞计数及其占CD4+T细胞的百分比,ELISA法测定细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10的表达水平,全自动生化分析仪检测AST、ALT、BUN、Cr等肝肾功能生化指标。以假手术组(Control组)作为对照,标本采集时间点、检测方法同CLP组。结果 CLP组血CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞百分比持续增高,12h后即高于假手术组,随病程进展增高更为显著(P<0.01)。CLP2h后TNF-α水平升高即超过假手术组(P<0.01),12h到达顶峰,随后开始下降,但至CLP后72h仍高于假手术组;IL-6水平于CLP后6h出现快速升高,12h达到峰值,与假手术组相比增幅有统计学差异(P<0.01),随后下降,72h与假手术组比较无统计学差异(P>0.05);CLP2h后IL-10水平即已高于假手术组(P<0.01),12h出现快速上升改变,并持续攀升,至72h未见下降拐点。CLP后ALT、AST升高早于BUN、Cr,前者术后24h明显升高,增幅大于假手术组(P<0.01),而后者术后48h明显升高,增幅大于假手术组(P<0.01),随着时间的延长,ALT、AST、BUN、Cr均进一步升高,假手术组指标则回落到基线水平。结论 CLP小鼠模型CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例增加与脓毒症严重程度成正比,这种变化可能是机体逃避过度的炎症反应引发严重的组织器官损伤的自身调节反应,但有一定限度,调控Treg或将为脓毒症免疫调节治疗提供新的思路。     

异丙酚对脓毒症大鼠外周血CD4~+CD25~+T细胞及IL-6、IL-10的影响

目的观察异丙酚对脓毒症大鼠外周血CD4+CD25+T细胞数量以及炎症因子IL-6与IL-10浓度的影响,探讨异丙酚与脓毒症时调节性T细胞(Treg)及炎症反应的关系。方法 SPF级SD雄性大鼠48只,10～12周龄,体重230～300g,以盲肠结扎穿孔术法(CLP)制作脓毒症模型。采用随机数字表法,将其随机分为三组(n=16):异丙酚干预组(CLP+异丙酚,Pro组,n=16)、赋型剂对照组(CLP+10%脂肪乳剂,FE组,n=16)和脓毒症对照组(CLP+生理盐水,CLP组,n=16)。Pro组和FE组术毕分别经股静脉泵注射异丙酚50μg·kg-1·min-1和与异丙酚等容量的10%脂肪乳注射液,注射时间持续1h,CLP组同法注射等时等容量生理盐水。分别于术后6、12、24h经尾静脉采血,流式细胞仪检测血中CD4+CD25+T细胞计数及其占CD4+T细胞的百分比,ELISA法测定血清IL-6、IL-10的含量;计算各组大鼠24h生存率。结果 Pro组24h生存率绝对值高于CLP组和FE组,但差异无统计学意义(χ2=2.133,P=0.344)。三组大鼠术后外周血CD4+CD25+T细胞计数均随时间延长而上升,组内比较差异均有统计学意义(P<0.05);三组间比较,术后6h组间无统计学差异(P>0.05),12、24hPro组和FE组均明显低于CLP组(P<0.05),同时Pro组又显著低于FE组(P<0.05);三组CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的百分比随时间变化不一致,Pro组逐渐下降而CLP组和FE组均逐渐升高,组内比较差异均有统计学意义(P<0.05),组间比较与细胞计数组间比较结果类似。三组大鼠术后血清IL-6和IL-10浓度均显著升高,组内比较差异有统计学意义(P<0.05);不同的是CLP组和FE组术后6hIL-6即达到高峰,随后渐降,Pro组则高峰推迟到12h;而术后IL-10均呈持续升高改变;组间比较,Pro组术后6、12、24h血清IL-6和IL-10水平均低于CLP组和FE组(P<0.05);但FE组仅术后6h低于CLP组(P<0.05),12、24h时两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论异丙酚不能显著降低脓毒症大鼠模型24h病死率,但具有抑制急性脓毒症模型外周血中CD4+CD25+T细胞增加、降低血清炎症因子浓度的效应,从而对机体炎症反应失衡有调节作用。     

栀子苷通过调控单核细胞表型改善小鼠盲肠结扎穿孔技术脓毒症模型预后

目的:探讨不同剂量栀子苷治疗脓毒症的疗效和主要生物学机制。方法:雄性BALB/c小鼠通过盲肠结扎穿孔技术(cecal ligation and puncture, CLP)复制脓毒症模型。在生存实验中，动物被随机分为以下各组，每组20只：于CLP术后0 h、24 h经小鼠尾静脉分别注射栀子苷20 mg/kg、40 mg/kg或生理盐水(对照组);于CLP术后24 h经小鼠尾静脉注射栀子苷40 mg/kg或生理盐水(对照组)。观察不同组别的生存预后；并流式检测单核细胞CD16、MHC-Ⅱ、TLR2、TLR4表达水平；ELISA检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10浓度；Western Blot测定PPARγ浓度。结果:40 mg/kg栀子苷CLP后0 h和24 h静脉给药能显著改善脓毒症小鼠模型生存预后，小剂量(20 mg/kg)栀子苷和延迟给药(24 h)无显著获益。与对照组相比，有效剂量栀子苷能不同程度地全面抑制脓毒症小鼠血清细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10浓度，差异有统计学意义(P<0.05);能降低脓毒症小鼠24 h单核细胞CD16表达，差...     

基于STAT3信号通路探讨艾司洛尔对脓毒症大鼠急性肝损伤的保护作用

目的探讨艾司洛尔(ES)对脓毒症大鼠急性肝损伤的保护作用及相关信号通路。方法48只雄性SPF级大鼠随机分为假手术(Sham)组、盲肠结扎穿孔(CLP+NS)组和艾司洛尔干预(CLP+ES)组(每组16只)。Sham组采用盲肠探查术,CLP+NS组、CLP+ES组采用CLP法建立脓毒症大鼠模型。CLP+ES组经颈内静脉微量泵入ES稀释液6 h,Sham组和CLP+NS组给予等质量生理盐水。术后6 h、24 h各组分别处死8只大鼠。采用HE染色,观察脓毒症大鼠肝组织形态学变化,生化分析仪检测血清肝功能指标,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织中炎性细胞因子水平,Western blot检测肝组织中STAT3信号通路标志蛋白的表达。结果CLP+NS组脓毒症大鼠肝组织炎性细胞浸润明显,而CLP+ES组炎性细胞减少,肝细胞坏死程度好转。术后6 h、24 h,CLP+NS组血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)和肝组织匀浆中高迁移率族蛋白B-1(HMGB-1)、白细胞介素-6(IL-6)均升高(P<0.05);而CLP+ES组较CLP+NS组均降低(P<0.05)。术后6 h,与CLP+NS组比较,CLP+ES组脓毒症大鼠肝组织中磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)表达水平明显下降(P<0.05),细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)表达明显上升(P<0.05)。术后24 h,CLP+ES组上述蛋白表达与CLP+NS组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论艾司洛尔通过抑制STAT3信号通路,抑制炎性细胞因子释放,从而发挥对脓毒症大鼠急性肝损伤的保护作用。     

外周血T淋巴细胞亚群和细胞因子在儿童肺炎支原体肺炎诊断中的意义

目的探讨外周血T淋巴细胞亚群(CD4~+、CD8~+T细胞)及细胞因子[白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-10和肿瘤坏死因子(TNF)-α]在儿童肺炎支原体肺炎(MPP)诊断中的意义。方法采用流式细胞仪和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测153例MPP患儿(疾病组)和122例健康儿童(对照组)外周血CD4~+、CD8~+T细胞比例,IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α水平,并对疾病组治疗前、治疗后及疾病组并发胸腔积液伴肺纤维化(纤维化组)与不伴有肺纤维化(非纤维化组)数据进行统计分析。结果疾病组治疗前外周血IL-6、IL-8、IL-10和TNF-ɑ水平及CD8~+T细胞比例均显著高于治疗后和对照组,CD4~+T细胞比例和CD4~+/CD8~+均低于治疗后和对照组,差异有统计学意义(P0.05)。疾病组治疗后外周血IL-6、IL-8、IL-10水平高于对照组,CD4~+、CD8~+T细胞比例低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。纤维化组外周血IL-6、IL-8、IL-10水平和CD8~+T细胞比例高于非纤维化组,CD4~+T细胞比例和CD4~+/CD8~+低于非纤维化组,差异有统计学意义(P0.05)。受试者工作特征曲线表明,IL-6和IL-8辅助诊断肺纤维化的敏感性和特异性较高,敏感性分别为100.0%和92.6%,特异性分别为95.6%和93.0%。结论联合检测外周血CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+比例及细胞因子IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α水平有助于全面了解MPP患儿治疗前、后免疫功能的变化。外周血IL-6和IL-8最有助于MPP患儿肺纤维化的辅助诊断。     

铁调素基因干扰对脓毒症小鼠淋巴细胞凋亡的影响

目的：探讨铁调素基因干扰对脓毒症小鼠淋巴细胞凋亡的影响。方法选择6-8周BALB/C 雄性健康小鼠10只,随机均分为实验组（铁调素基因干扰组,n=5）和对照组（对照RNA干扰腺病毒组,n=5）。采用尾静脉高动力注射的方法分别给予两组小鼠铁调素特异性shRNA腺病毒和对照RNA干扰腺病毒。13 d后,两组小鼠采用盲肠结扎穿孔（CLP）法复制脓毒症模型。CLP模型制备24 h后处死小鼠,留取全血和脾脏标本。采用流式细胞术测定脾脏T淋巴细胞亚型CD4＋和CD8＋的数量百分比、外周血和脾脏T淋巴细胞的凋亡百分比;采用Western blot法检测脾脏组织凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-9的活化水平。结果实验组CLP模型24 h后脾脏CD4＋T细胞、CD8＋-T细胞百分比明显低于对照组（t分别=3.28、3.21, P均＜0.05）;实验组小鼠脾脏和外周血T淋巴细胞凋亡率较对照组明显增高（t分别=4.76、5.12, P均＜0.05）;实验组小鼠脾脏组织凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-9活化水平较对照组明显增强（t分别=9.86、6.16, P均＜0.05）。结论铁调素基因干扰引起脓毒症小鼠淋巴细胞凋亡增加,铁调素可能在脓毒症的免疫调控中发挥重要作用。     

脓毒症小鼠心和肾组织中巨噬细胞移动抑制因子的表达

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在脓毒症小鼠心脏和肾组织中的表达规律.方法采用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症BALB/c小鼠模型.30只小鼠随机分为5组,分别为假手术组,CLP后12、24、36、48 h组,其中假手术组小鼠在假手术后24 h取标本检测作为对照组,其余四组小鼠分别在CLP术后的12 h、24 h、36 h和48 h取标本待检.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western Blotting)检测脓毒症小鼠心脏和肾组织中NIF的mRNA和蛋白表达.采用单因素方差分析(one-way AN0vA)方法进行计量资料的统计分析.结果 与对照组比较,MIF在脓毒症小鼠心脏组织中的表达增加,在CLP术后12 h开始升高(P<0.05),36 h达峰值(P<0.01),48h仍维持较高水平(P<0.05);肾组织中MIF mRNA的表达在CIP术后12 h开始增加(P<0.05),24h达峰值(P<0.01),48 h后才开始减少,MIF蛋白则只在CLP术后24 h和36 h增加明显(P<0.05).结论脓毒症发生后的12 h～48 h,MIF在脓毒症小鼠心脏和肾组织中的表达有不同程度增加,表达时相基本一致,提示N1F可作为晚期细胞因子参与小鼠脓毒症的发病.     

参芪扶正注射液对脓毒症患者免疫功能的影响

目的 观察参芪扶正注射液对脓毒症患者外周血T细胞亚群、T细胞凋亡和细胞因子的影响并探讨其意义.方法 选择天津医科大学总医院普通外科收治的40例脓毒症患者,按随机数字表法分为常规治疗组(20例,给予常规西医治疗)和参芪扶正治疗组(20例,在西医常规治疗基础上加用参芪扶正注射液 250 mL静脉滴注,每日1次),两组均以7 d为1个疗程.两组患者均于治疗1、3、7 d进行急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHE Ⅱ)评分;用流式细胞仪检测外周血T细胞亚群CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和细胞凋亡情况,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素 (IL-6、IL-10)水平.结果 两组治疗后3 d APACHEⅡ评分均较治疗后1 d明显降低,并持续到治疗后7 d,且参芪扶正治疗组的降低程度较常规治疗组更显著(分:10.05±3.71比13.15±4.65,P<0.05).随着治疗时间的延长,两组外周血TNF-α、IL-6水平均逐渐下降;IL-10水平先升高,到7 d时又下降;7 d时参芪扶正治疗组TNF-α和IL-6明显低于常规治疗组〔TNF-α(ng/L):204.6±18.1比218.9±21.3,IL-6(ng/L):3.68±0.30比3.95±0.49,均P<0.05〕;而参芪扶正组与常规治疗组IL-10比较差异无统计学意义(ng/L:173.8±23.3比174.8±18.9,P>0.05).两组治疗后1、3、7 d CD4+T细胞和CD4+/CD8+先下降后上升,CD8+T细胞逐渐下降及CD4+、CD8+T细胞凋亡率先升后降,参芪扶正治疗组治疗后7 d CD4+T细胞、CD4+/CD8+及CD4+T细胞凋亡率与常规治疗组比较差异均有统计学意义〔CD4+T细胞:(38.3±4.7)%比(35.5±5.5)%,CD4+/CD8+:1.55±0.29比1.36±0.27,CD4+T细胞凋亡率:(11.2±3.8)%比(14.1±5.5)%,均P<0.05〕;两组各时间点CD8+T及其细胞凋亡率比较差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 参芪扶正注射液可有效降低脓毒症患者CD4+T细胞凋亡率,增加CD4+T细胞和CD4+/CD8+,降低炎症指标,改善脓毒症患者的免疫功能及病情严重程度.     

脂联素对脓毒症大鼠白细胞介素-6/信号转导及转录激活因子3通路的影响

目的 研究脂联素（APN）对脓毒症大鼠肺组织白细胞介素-6（IL-6）/信号转导及转录激活因子3（STAT3）通路的影响.方法 盲肠结扎穿孔（CLP）法制作脓毒症动物模型,雄性Wistar大鼠120只,10～ 14周龄,体重250～ 300 g,随机分为对照组（C组）、脓毒症模型组（CLP组）和脂联素预处理组（APN组）,分别于术后2h、6h、12 h、24h、48 h处死,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测肺组织匀浆中IL-6表达水平,半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测肺组织匀浆中IL-6 mRNA的表达水平;凝胶阻滞电泳分析技术（EMSA）检测肺组织STAT3的DNA结合活性;同时检测肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性;各组剩余10只大鼠观察术后7d的生存率,并绘制生存曲线.结果 与C组比较,CLP组大鼠肺组织IL-6 mRNA及蛋白表达水平升高,STAT3的DNA结合活性表达升高,肺组织匀浆中MPO活性显著升高,死亡率升高（P均＜0.05）;与CLP组比较,APN组大鼠肺组织IL-6 mRNA及蛋白表达水平下降,STAT3的DNA结合活性表达降低,肺组织匀浆中MPO活性显著下降,死亡率明显降低（P均＜0.05）.结论 脂联素可能通过抑制IL-6/STAT3信号转导通路,从而减轻脓毒症性肺损伤.     

参麦注射液对早期脓毒症大鼠血清C反应蛋白和促炎性介质水平的影响

目的研究参麦注射液(shenmai,SM)对盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)脓毒症大鼠模型早期促炎性介质IL-6、IL-8和C反应蛋白(CRP)水平的影响。方法96只SD大鼠随机分为A组(假手术组,n=32)、B组(0.9%氯化钠溶液组,n=32)和C组(参麦注射液组,n=32),分别于CLP造模后1/2、12、24、36 h A组、B组皮下注射0.9%氯化钠溶液(5 ml/kg),C组皮下注射参麦注射液(5 ml/kg),并于术后12、24、36、48 h测量三组SD大鼠血清中IL-6、IL-8、CRP水平。结果CLP造模后B、C两组血清IL-6、IL-8、CRP水平均明显升高,C组在各时点的IL-6、IL-8、CRP水平显著低于B组(P<0.01)。结论参麦注射液可显著降低早期脓毒症大鼠血清CRP、IL-6、IL-8水平,可能对早期脓毒症大鼠具有保护作用。     

辛伐他汀预处理对脓毒症大鼠血清血管性血友病因子的影响

目的 评价辛伐他汀预处理对脓毒症大鼠血管内皮细胞功能的影响.方法 清洁级雌性Wistar大鼠96只,体质量200～250 g,4月龄.采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组:假手术组32只、脓毒症组32只和辛伐他汀组32只.脓毒症组和辛伐他汀组采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型.辛伐他汀组制模前胃内灌注辛伐他汀20 mg·kg-1 ·d-1,每日l次,连续2周;假手术组和脓毒症组胃内灌注等容量生理盐水.分别于术后3、6、24和48小时取8只大鼠,采集颈动脉血样,测定白细胞计数;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清血管性血友病因子(vWF)水平;记录术后3小时内、＞3～6小时、＞6～24小时和＞24～48小时各时段大鼠的死亡情况.结果 与假手术组比较,脓毒症组和辛伐他汀组术后各时点白细胞计数和血清vWF浓度升高,术后6小时达峰值,白细胞计数分别为(7.45±0.69)×109/L,(12.79±0.51)×109/L,(10.36±0.19)×109/L; vWF水平分别为(0.543±0.001)μg/L,(1.198±0.035)μg/L,(1.018±0.005)μg/L( P＜0.05);与脓毒症组比较,辛伐他汀组术后各时点白细胞计数和血清vWF水平降低,术后24～48小时内病死率降低(脓毒症组75.0％,辛伐他汀组50.0％)(P＜0.05).结论 辛伐他汀可保护脓毒症大鼠的内皮细胞功能,从而降低48小时内的病死率.     

外源性一氧化碳分子对脓毒症时心脏炎症反应的抑制作用及机制

目的:探讨外源性一氧化碳释放分子2(CORM-2)对脓毒症时心脏炎症反应的抑制作用和心脏功能的影响。方法:将45只雄性BALB/c小鼠按随机数字表法分为假手术组、盲肠结扎和穿孔术(CLP)组和CLP+CORM-2组。CLP+CORM-2组除伤后使用CORM-2外,其他处理同CLP组。于伤后24h检测小鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;用流式细胞术检测心肌细胞凋亡率;同时用彩色多普勒超声成像系统进行心脏超声检查。结果:与假手术组比较,24hCLP组血浆AST、LDH的水平明显增加,心肌细胞凋亡率明显增高,心脏超声检查显示LVEF、LVFS均显著低于假手术组(P<0.05);CLP+CORM-2组AST、LDH的水平降低,心肌细胞凋亡率明显下降,心脏超声检查显示LVEF、LVFS均显著提高(P<0.05)。结论:外源性CORM-2能明显抑制脓毒症心脏炎症反应,降低心肌细胞凋亡率,提高左室泵血能力,从而有效防止脓毒症时心肌损伤,提高心脏功能。     

还原型谷胱甘肽对大鼠脓毒症肺损伤外周血淋巴细胞凋亡率及TNF-α、IL-6水平的影响

目的观察还原型谷胱甘肽对大鼠脓毒症肺损伤外周血淋巴细胞凋亡率及血浆细胞因子TNF-α、IL-6水平的影响，探讨还原型谷胱甘肽对大鼠脓毒症肺损伤的保护作用及其机制。方法应用盲肠结扎穿孔（CLP）法复制大鼠脓毒症肺损伤模型。将清洁级雄性SD大鼠112只，随机分成假手术组（Sham）、脓毒症肺损伤组（ALI）、还原型谷胱甘肽治疗组（GSH）、左旋氧氟沙星治疗组（LEV），每组再分为3、6、12、24h等4个亚组，每个亚组n=7。观察大鼠脓毒症肺损伤肺组织的病理形态学改变，并检测外周血淋巴细胞凋亡率及血浆TNF-α、IL-6水平的变化。结果在脓毒症肺损伤组及左旋氧氟沙星治疗组淋巴细胞凋亡率较假手术组及GSH治疗组明显升高（P〈0．05）；在脓毒症肺损伤组血浆TNF-α水平在CLP术后6h出现升高，较GSH治疗组升高明显（P〈0．01）。脓毒症肺损伤组大鼠血浆IL-6水平于CLP术后3h升高，GSH治疗组CLP术后3h血浆IL-6水平较脓毒症肺损伤组低（P〈0．05）。脓毒症肺损伤组大鼠病理显示明显肺损伤，GSH治疗组大鼠肺损伤程度明显减轻。结论还原型谷胱甘肽能显著抑制外周血淋巴细胞凋亡及血浆TNF-α和IL-6表达水平，对大鼠脓毒症急性肺损伤具有明显的保护作用。     

还原型谷胱甘肽对脓毒症大鼠心肌组织中Toll样受体4表达的影响

目的:探讨还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)对脓毒症大鼠急性心肌损伤的保护作用及其机制。方法:采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)建立SD大鼠脓毒症致急性心肌损伤模型。按照随机数字表将大鼠随机分为正常组(n=6)、假手术组(n=18)、脓毒症组(n=18)、GSH干预组(n=18)。GSH干预组于CLP术后经尾静脉注射GSH60 mg/kg,共0.1 mL;假手术组和脓毒症组则给予等量0.9%氯化钠溶液。除正常组外,每组大鼠再按术后6 h、12 h、24 h分为3个亚组(每组各6只),各亚组组大鼠在CLP术后相应时间点采集血清及心肌组织标本。所有大鼠均于血标本采集完毕后处死。HE染色观察心肌组织病理改变;采用自动生化分析仪检测血清肌酸激酶同工酶(creatine kinase MB isoenzyme,CK-MB)的水平,采用实时荧光定量逆转录–聚合酶链反应法检测心肌组织Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)的mRNA表达。结果:与假手术组及正常组比较,脓毒症组大鼠术后6 h血清CK-MB水平和心肌组织TLR4 mRNA表达开始升高,12 h达到高峰,24 h仍明显升高,差异有统计学意义(P0.05),且术后24 h心肌组织HE染色显示肌纤维结构排列疏松紊乱,间质充血水肿,见大量炎性反应细胞浸润等损伤性改变;与脓毒症组比较,GSH干预组大鼠术后6 h血清CK-MB水平和心肌组织TLR4 mRNA表达已有所下降,术后12 h、24 h明显下降,差异均有统计学意义(P0.05),且术后24 h时心肌组织上述病理学损伤性改变也明显减轻。结论:心肌组织TLR4 mRNA的高表达在脓毒症致急性心肌损伤中起着重要的作用,而在脓毒症早期应用GSH干预可抑制心肌组织TLR4 mRNA的表达,对脓毒症致急性心肌损伤有保护作用。     

窒息新生儿干预前后血清细胞因子的变化及对缺氧缺血性脑病发病的影响

目的 探讨窒息新生儿干预前后血清白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)对新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)发病的临床意义.方法 选择我院出生的正常新生儿40名(健康对照组)、窒息新生儿70例(窒息组),将窒息组随机分为两组,常规治疗组30例,维持良好的通气与换气功能,维持心率、血压在正常范围,维持血糖在正常高值,控制惊厥,降低颅内压,消除脑干症状等；1,6-二磷酸果糖组(FDP组)40例,在常规治疗基础上于出生6h内静脉注射FDP注射剂250mg/(kg·d),疗程10 d.健康对照组无特殊处理,已出院者于出生10 d返院回访.监测3组新生儿出生6h、3d、10 d血清IL-6、IL-8、TNF-α浓度,观察窒息新生儿72 h内HIE的发生率.结果 窒息组出生6h内IL-6、IL-8、TNF-α与健康对照组比较差异均无统计学意义(P均＞0.05),出生3 d IL-6低于健康对照组[(2.22±1.26)、(3.04±0.98) ng/L,P＜0.05],IL-8、TNF-α高于健康对照组[(18.62±14.56)、( 15.65±11.25) ng/L,(50.28±18.74)、(42.02±12.25) ng/L,P均＜0.05].出生3 d FDP组IL-6高于常规治疗组[(2.65±1.13)、( 1.24±1.06) ng/L,P＜0.05],IL-8、TNF-α明显低于常规治疗组[(17.24±12.48)、(22.46±10.88) ng/L,(44.62±18.27)、( 54.25±17.28) ng/L,P均＜0.01]；3组间IL-6于出生10 d时差异均无统计学意义(P均＞0.05),而FDP组IL-8、TNF-α明显低于常规治疗组[(14.25±12.75)、(17.23±11.33) ng/L,(37.41 ±17.55)、(48.21±16.54) ng/L,P均＜0.01]；FDP组HIE的发生率[22.5％ (9/40)]及中、重度HIE的发生率[5.0％(2/40)]明显低于常规治疗组[46.7％ (14/30)与26.7％ (8/30)],差异均有统计学意义(x2=4.53,P＜0.05;x2=4.59,P＜0.05).结论 围产期窒息患儿外周血IL-6降低,IL-8、TNF-α升高,其可能参与HIE的发病过程.早期干预能降低HIE的发生率及中、重度HIE的发生率.     

NF-κB阻断剂对腹腔镜胆囊切除术后非切口疼痛及应激的防治研究

[目的]探讨核转录因子-κB(NF-κB)阻断剂乌司他丁对减轻腹膜损伤,减少机体应激反应,防治腹腔镜术后非切口疼痛的作用.[方法]通过选取腹腔镜胆囊切除手术病例,随机分为两组,每组20例;A组(腹腔镜手术);B组(乌斯他丁+腹腔镜手术);术中切除腹膜组织,测定NF-κB mRNA表达量变化;术后6 h抽取静脉血,检测I...     

MAPK通路抑制剂PD98059对小鼠急性胰腺炎的影响

目的： MAPK通路抑制剂PD98059对小鼠急性胰腺炎（AP）病程及相关炎症因子的影响。方法72只雄性KM小鼠被随机分为4大组,每大组再根据时间段的不同再分3小组,每小组6只小鼠,即（1）雨蛙肽＋10%二甲基亚砜（DMSO）（AP 组）6 h、12 h、18 h 组,（2）雨蛙肽＋PD98059（干预组）6 h、12 h、18 h 组,（3）NS＋PD98059（对照一组）6 h、12 h、18 h 组,（4）NS＋10%DMSO（对照二组）6 h、12 h、18 h组。雨蛙肽以100μg/kg体重给予小鼠腹腔内注射诱导AP模型,1次/h,共6次。需注射PD98059的两大组在AP诱导前30 min与诱导后1 h将 PD9805910 mg/kg体重溶解于10%的DMSO （1 mg/ml）中,然后进行腹腔注射。作为对照的两大组则腹腔内注射相应剂量的生理盐水以代替雨蛙肽或10%DMSO以代替PD98059。检测各6 h组血清淀粉酶,整个胰腺组织湿干比,各12 h组胰腺组织髓过氧化物酶（MPO）浓度,采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测胰腺组织中细胞间黏附分子-1（ICAM-l） mRNA的表达和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清可溶性ICAM-l （sICAM-1）,肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度,并观察各18 h组胰腺组织的病理学改变。结果在PD98059干预的6 h组,其淀粉酶浓度及湿干比均明显低于AP组[（19783±263）U/L vs.（10919±547）U/L,8.702±0.445 vs.6.800±0.600,P＜0.05];在PD98059干预的12 h组,MPO吸光度值及血清sICAM-1与血清TNF-α水平均低于AP组[（0.171±0.014） U/g vs.（0.040±0.009）U/g,（212.85±22.03）pg/ml vs.（169.31±15.16）pg/ml,（70.9±7.8）pg/ml vs.（50.8±9.8） pg/ml,P＜0.05],ICAM-1 mRNA 也较AP组要低很多（0.42±0.04 vs.0.22±0.03,P＜0.05）;在PD98059干预的18 h组,其病理组织学评分经过Kruskal-Wallis秩和检验检测后,其H值＝18.120,P＜0.05,表明AP 组小鼠病理改变最大,PD98059的干预可减轻炎症程度。各项数据表明 PD98059的干预并不能使胰腺炎病程降到正常。结论 MAPK通路抑制剂PD98059能在一定程度上改善雨蛙肽诱导的小鼠AP,其保护机制可能与抑制部分MAPK信号通路及下调黏附分子的表达有关。