缺失型α—地中海贫血中的基因诊断新技术研究

目的 建立诊断我国最常见的三种缺失型α-地中海贫血（α-地贫）,即东南亚型缺失（--^SEA)、右侧缺失（-α^3.7)和左侧缺失（－α^4.2)的PCR技术。方法 设计三组PCR引物,优化PCR反应条件,运用PCR、琼脂糖凝胶电泳、UVP凝胶成像技术,根据电泳图谱检测并诊断三种缺失型α-地贫。结果 成功地检测这三种缺失型的纯合子、杂合子或双重杂合子,结果与Southern blotting分析一致。完成42例α-地贫样本的基因诊断。结论 本研究所建立的检测α-地贫缺失型的技术,准确、简便、重复性好,便于推广应用。     

α-地中海贫血产前基因诊断

目的应用基因诊断技术对139例仪地中海贫血高风险胎儿进行产前诊断,降低出生缺陷。方法应用裂α-聚合酶链反应（裂α-PCR）法及PCR结合反向点杂交技术（RDB—PCR）,对胎儿羊水样本进行中国人常见的仅地中海贫血三种缺失型基因和三种非缺失型基因进行检测。结果在受检的139份羊水样本中,共检出正常胎儿26例,仪地中海贫血113例,其中静止型19例,轻型49例,中间型15例,重型30例。结论基因诊断技术适用于α地中海贫血的产前诊断,可有效避免重度Ⅱ地中海贫血患儿的出生。     

泰国缺失型α-地中海贫血基因诊断和误诊分析

目的探讨如何进行少见的α地中海贫血类型——泰国缺失型α地中海贫血1(泰国缺失型)的基因诊断和避免误诊方法。方法对8例泰国缺失型的误诊进行回顾分析,采用分析常规基因检测和泰国缺失型检测方法进行泰国缺失型基因诊断。结果 1例泰国缺失型复合左侧缺失型双重杂合子误诊为左侧缺失型纯合子;2例泰国缺失型复合右侧缺失型双重杂合子误诊为右侧缺失型纯合子;1例泰国缺失型复合Hbconstantsspring双重杂合子误诊为Hbconstantsspring纯合子;余下4例泰国缺失型杂合子误诊为正常。结论综合分析常规α地中海贫血基因检测和泰国缺失型检测结果,并结合患者的血液学参数、血红蛋白电泳能有效诊断泰国缺失型,避免误诊。     

缺失型α-地中海贫血的基因诊断新技术研究

目的建立诊断我国最常见的三种缺失型α-地中海贫血(α-地贫),即东南亚型缺失(--SEA)、右侧缺失(-α3.7)和左侧缺失(-α4２)的PCR技术。方法设计三组PCR引物,优化PCR反应条件,运用PCR、琼脂糖凝胶电泳、UVP凝胶成像技术,根据电泳图谱检测并诊断三种缺失型α-地贫。结果成功地检测这三种缺失型的纯合子、杂合子或双重杂合子,结果与Southern blotting分析一致。完成42例α-地贫样本的基因诊断。结论本研究所建立的检测α-地贫缺失型的技术方法,准确、简便,重复性好,便于推广应用。     

一种快速诊断东南亚缺失型α地中海贫血1的方法及其临床应用

目的：寻找一种快速诊断东南亚缺失型α地中海贫血（α地贫）１的方法。方法：用多聚酶链反应（ＰＣＲ）检测７６例门诊患者。结果：检出３１例东南亚缺失型α地贫１，其中５６例受检者与检测ζ珠蛋白肽链检测α地贫１的方法相对照，符合率８３．９３％。用该方法对１０例α地贫进行了产前诊断，诊断出１例为Ｂａｒｔ’ｓ水肿胎儿，４例是东南亚缺失型α地贫１的携带者，其余５例是正常胎儿或α地贫２的携带者。结论：该法简捷、易行、准确性高，为α地贫胎儿产前诊断及α地贫基因的检测提供一种新方法。     

19例地中海贫血的基因诊断

目的探讨遗传性血液病地中海贫血(m ed iterranean anem ia)的基因诊断。方法运用聚合酶链式反应(po ly-m erase cha in reaction,PCR)、反向斑点杂交法(reverse dot b lot,RDB)对不明原因的33例溶血性贫血、重型贫血患儿进行基因分型、突变点位检测。结果通过对33例全血标本的检测,19例确诊为地中海贫血,其中4例为α-地中海贫血,15例为β-地中海贫血。β-地中海贫血患儿中,男11例,女4例;α-地中海贫血患儿中,男3例,女1例;19例患儿中单基因位点突变有16例,双重基因位点突变有3例。结论运用基因检测技术对血液病地中海贫血的临床诊断及治疗具有重要意义。     

α-地中海贫血的产前基因诊断

目的:对可能生育α-地中海贫血(α-地贫)患儿的高危夫妇进行产前基因诊断,以杜绝重型α-地贫患儿的出生。方法:通过羊膜腔穿刺术或脐带穿刺术获得胎儿样本,提取DNA,进行多重PCR,琼脂糖凝胶电泳以分离PCR产物,根据扩增产物长度判断样本的基因型以得出诊断。结果:我们共对1964例样本进行了α-地贫的基因检测,并对其中263对夫妇α-地贫高风险妊娠进行了产前诊断,检出Bart's水肿胎49例,占18.63%,血红蛋白H病10例,占3.80%,轻型α-地贫117例,占44.49%,静止型α-地贫13例,占4.94%,正常74例,占28.14%。结论:单管多重PCR/琼脂糖凝胶电泳技术简便、快速、准确地同时检测-α3.7,-α4.2及--SEA3种缺失型,大大提高了诊断效率,更适合于广东地区的α-地贫产前诊断。     

3864例新生儿地中海贫血的调查

地中海贫血（简称地贫），是由于珠蛋白基因缺失或突变导致珠蛋白肽链合成障碍，α或β链失衡的遗传性血红蛋白病。在世界范围内广为流行，在我国广东是高发区，通常地贫杂合子除了有轻度贫血，或比较容易疲劳外，一般无明显症状，地贫患儿，尤其是重型地贫患儿，要长期靠输血为生。基因诊断虽然能明确诊断，但耗时长，费用高，一般基层单位难以开展，为了了解新生儿的发病率，我们采用简单、方便、快速、较准确的方法对3864例新生儿的调查，结果报告如下。     

基因芯片检测缺失型α地中海贫血的研究

目的：建立基因芯片检测技术为缺失型α-地中海贫血基因检测诊断提供良好的方法。方法：应用基因芯片检测技术对515例深圳市人民医院进行产前检查及产前诊断的妇女进行筛查。结果：其中85例缺失型α-地贫诊断为：-^SEA型65例占12．62％，-α^3.7型14例占2．72％；-α^4.2型4例占0．78％；-^SEA／-α^3.7型2例占0．39％。结论：应用基因芯片检测技术检测缺失型α-地中海贫血的诊断比用传统方法如：southern杂交、跨越断裂点PCR方法更具备微量、高效、敏感、自动化等特点，更能准确地从分子水平诊断疾病，从而可代替传统检测方法成为筛查的常规方法。     

α-地中海贫血的研究现状

α-地中海贫血(Thalassemia，α-Thal)是一组以珠蛋白合成减少，α-链／非α-链比例失衡为特征的遗传性溶血性血红蛋白病。是我国长江以南发病率最高、影响最大的遗传病之一。根据所减少的珠蛋白类型．可分为α-、β-、δ-、δβ-、γδβ地中海贫血等。α-地中海贫血(α-Thal)是最主要的地中海贫血类型之一。也是全世界最常见的遗传病之一。我国南方为该病的高发区，全国90万人的流行病学调查得出的总发病率为2．46％。其中广西、广东、江西、     

地中海贫血产前基因诊断中的护理配合

目的通过对地中海贫血(地贫)高危孕妇的产前基因诊断,早期发现重症地贫胎儿,以达到优生目的。方法通过Gap-PCR和RDB技术及配合临床医护人员介入,对高危孕妇113例进行α地贫和β-地贫基因诊断。产前诊断术前、术中、术后给予护理配合,解释和心理安慰。结果113例地贫家系中,完全正常胎儿32例,α地贫杂合子14例,β地贫杂合子43例,血红蛋白H病3例,重症胎儿21例。重症胎儿中α地贫5例,β地贫16例。重症总检出率18.6%。结论地贫高危孕妇在与护理良好配合中进行产前基因诊断,可取得更好临床疗效。     

多重PCR用于缺失型α-地中海贫血的基因检测

为了探讨多重PCR技术在检测我国南方常见缺失型α—地中海贫血中的临床应用，观察缺失型α—地中海贫血的基因分布频率，采用单管多重DNA扩增的方法(M—PCR)对经血红蛋白定量分析初步诊断为标准型和静止型α—地中海贫血及血红蛋白H(HbH)病的145例患者进行基因检测。扩增产物经1．2％琼脂糖凝胶电泳，出现1．3及1．8kb条带者，提示为-^SEA／αα；1．6及1．8kb条带者为-α^4.2／αα；1．8及2．0kb条带者为-α^3.7／αα；1．3及1．6或2．0kb条带，提示为缺失型HbH病(-^SEA／-α^4.2或-^SEA／-α^3.7)。结果表明，145例受检者中发现100例-^SEA／αα(68．9％)，15例-α^3.7/ αα(10．3％)，8例-α^4.2/αα(5．52％)，2例-α^3．7／-α^4.2(1．38％)，-α^3.7及-α^4.2纯合子各1例(0．69％)；14例-SEA／αα(9．65％)，2例-SEA／-α^4.2(1．38％)；另有2例患者产前诊断证实为Bart水肿胎儿。结论：运用多重PCR技术可以准确、简便、快速地检测我国南方地区常见的-α^3.7、-α^4.2、-^SEA3种缺失型α-地中海贫血，这一技术对α—地中海贫血的大人群筛查及携带者的检出是一种较为理想的方法。     

中国南方α地中海贫血基因突变型研究

为了进下完善和建立一套筛查我国α地中海贫血基因突变型的方法，研究我国南方两广地区α地中海贫血突变类型及分布情况，采用Gap-PCR，nested-PCR，PCR-SSCP，4P-ASPCR及序列分析等方法，对356例临床初诊为标准型和静止型α地中海贫血患和78例血红蛋白H(HbH)病患进行基因筛查。结果表明：356例标准型和静止型α地中海贫血患中发现-SEA/αα295人（82.87％），αα/α-α^3.71人（0.28％），αα/α-α^4.2 3人（0.84％）αα/αα^CS3人（0.84％），αα/αα^QS1人（0.28％）和αα/α^Westmeadα2人（0.56％），没有发现-α4.2和-α3.7的纯合子患；78例HbH病患中-SEA/αα^-3.7 29人（37.2％），-SEA/αα^-4.2 20人（25.6％），-SEA/αα^CS 19人（24.3％），-SEAαα^QS 2人（2.6％）。在8例未能确定基因突变类型的HbH患中，2例广西籍HbH患的α2基因第65密码子（第二外显子）有一同义突变[CD65(GCC→GCG)。它与HbH病表型究竞竟有无关系，抑或是DNA单核苷酸多态位点（SNPs），有待进一步研究证实。在方法学方面，本研究进一步完善了以PCR为基础的基因诊断方法，建立了一种改进的检出非缺失型点突变的4P-ASPCR方法，能准确、快速地用于诊断我国常见的缺失型和非缺失型α地中海贫血突变基因。结论：我国α地中海贫血的基因背景比较复杂，不同地区点突变类型、频率及其发病机理等仍需进一步研究。本研究对进一步调整我国南方地区α地中海贫血基因诊断和产前基因诊断策略，有效地防止该病患儿的出生具有重要意义。     

86例胎儿地中海贫血产前基因诊断分析

目的探讨产前基因诊断在避免重型地中海贫血儿出生中的临床意义。方法夫妇同型地中海贫血孕妇86例,采用裂隙PCR及PCR结合反向点杂交法对α地中海贫血进行产前基因诊断,采用PCR结合反向点杂交法对β地中海贫血进行产前基因诊断。结果正常基因型14例（16.28%）,α地中海贫血55例（63.95%）（其中Bart’s水肿胎7例）,β地中海贫血15例（17.44%）（其中重型4例）,αβ复合型地中海贫血2例（2.33%）（其中重型1例）,15例胎儿于诊断后1周内终止妊娠,71例胎儿出生,出生后诊断结果与产前诊断结果相符。结论对同型地中海贫血基因携带者进行产前诊断可有效预防Bart’s水肿胎和重型β地中海贫血患儿出生。     

不同样品提取方法对地中海贫血基因诊断的影响

目的:考察不同全血基因组提取方法对地中海贫血基因诊断的影响.方法:使用酚/氯仿抽提法、盐析法、Chelex快速法和硅吸附法提取全血基因组DNA.使用分光光度计和电泳法检测提取DNA的质量.结果:4种方法提取的DNA无明显质量差异,但地中海贫血基因检测试剂盒检测结果标明,除Chelex快速法提取的DNA有时会出现扩增效果不好外,其他方法提取的DNA都可获得满意的效果.结论:4种基因组提取方法均可用于地中海贫血的基因诊断,但在临床应用中应格外小心.     

多重PCR检测缺失型α地中海贫血

目的　针对中国人常见的缺失型α地中海贫血建立一种快速、简便、可靠的多重聚合酶链反应 (PCR)基因诊断技术。方法　设计 4对引物 ,利用单管多重PCR方法进行扩增 ,同时检测 3种缺失型和正常的α2 珠蛋白基因。结果　成功检测出正常人及 3种缺失型的杂合子、双重杂合子 ;正常α2 基因的扩增片段为 180 0bp ,东南亚型缺失基因的扩增片段为 70 8bp ,右侧缺失基因的扩增片段为 2 0 2 2bp ,左侧缺失基因的扩增片段为 16 2 8bp , α3 .7/ SEA双重杂合子的扩增片段为 2 0 2 2bp和 70 8bp , α4.2 / SEA双重杂合子的扩增片段为 16 2 8bp和 70 8bp。结论　 790例标本的基因检测结果分析表明 ,该法快速、准确 ,可用于常规临床标本的检测。     

基因芯片用于检测缺失型α地中海贫血

地中海贫血 (珠蛋白生成障碍性贫血 ,地贫 )是我国长江以南发病率最高、危害最大的一种遗传病。我国南方地区常见的 3种缺失型α地贫分别是由 -α3 .7、-α4.2 和 - - ＳＥＡ基因的缺失引起的。传统的缺失型α地贫基因分析检测方法主要是用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、聚合酶链反应 (ＰＣＲ)法。但由于α地贫珠蛋白基因缺失型的不同所需试剂及反应条件也不同 ,须分别进行检测 ,给临床筛查及快速诊断带来不便 ;同时 ,全套检测的累加费用较高 ,给患者造成了一定的经济负担。近年来基因芯片技术的发展给疾病的基因诊断提供了广阔的应用前景。我们运…     

萍乡地区孕妇产前地中海贫血筛查及基因诊断

目的调查萍乡地区孕妇地中海贫血的发生率及突变基因构成。方法以进入萍乡妇幼保健院的产检人群为研究对象,表型分析采用日本希森美康Xi800全自动血细胞分析仪测定平均红细胞体积MCV和平均红细胞血红蛋白量MCH,采用法国Sebia公司的血红蛋白电泳仪进行血红蛋白分析;基因型确诊采用PCR法和PCR反向点杂交（RDB）法进行地中海贫血常见基因突变的分析。结果在1345例产检人群中检出地贫表型阳性者共164例,筛检阳性率占12.19%;其中α地贫表型阳性73例（44.51%）,3种α点突变表型阳性比率为0%。基因诊断阳性病例58例中3种基因缺失型α地贫为18例,3种常见α地贫缺失型基因的构成比是--αSEA占88.89%;-α3.7占0%;-α4.2占11.11%;筛检β地贫表型阳性91例（55.49%）,基因诊断β地贫为40例。6种常见的β地贫基因突变型的构成比：CD41-42（-TTCT）占37.5%,IVS2nt654（C→T）占25%,-28（A→G）占15%,CD17（A→T）占15%,CD71-72（＋A）占5%,-29（A→G）占2.5%。结论本研究获得了萍乡市孕妇地中海贫血的发生率和基因突变类型的分布特点,为我市孕妇开展地贫人群遗传咨询、产前诊断和预防重型地贫胎儿的出生提供了有价值的临床资料。     

多重聚合酶链反应对缺失型α地中海贫血的诊断

目的　探讨一种简便、快速可同时检测东南亚缺失 ( SEA)、右侧缺失 ( α3 .7)和左侧缺失 ( α4.2 )地中海贫血的多重聚合酶链反应 (PCR)技术。方法　采用单管四重聚合酶链反应 (PCR)技术。结果　正常等位基因的扩增产物为 1.8kb ,东南亚缺失基因 ( SEA/αα)的扩增产物为 1.8kb和 1.3kb。右侧缺失 ( α3 .7/αα)扩增产物为 2 .0kb和 1.8kb。左侧缺失 ( α4.2 /αα)扩增产物为 1.8kb和 1.6kb。根据出现的不同条带还可判断杂合子和纯合子及缺失型HbH病。结论　本法简便、快速 ,可作为常规方法用于临床样品的分子筛查及产前诊断。     

云南省红河州141例α地中海贫血患者基因检测结果的分析

目的:了解云南省红河州地区人群α地中海贫血基因的携带率、基因突变的类型及分布特点,分析不同类型α地中海贫血在平均红细胞体积(MCV)和平均红细胞血红蛋白含量(MCH)及血红蛋白等中的差异性.方法:选取并收集2015年至2019年于红河州第一人民医院行血液学筛查阳性的小细胞低色素性携带者或贫血患者及育龄妇女产检的DNA样...