瘦素对LPS诱导的小鼠胸腺细胞凋亡的保护作用

目的：观察瘦素对小鼠胸腺细胞凋亡的保护作用，探讨其作用机制。方法：取出小鼠胸腺细胞，用MTT法检测瘦素对胸腺细胞的毒性作用，采用Annexin V／PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡，以RT-PCR检测caspase 3 mRNA的表达。结果：瘦素可呈剂量依赖性的减少LPS对胸腺细胞的毒性作用，流式细胞仪检测表明瘦素可抑制LPS诱导的细胞凋亡，其浓度〉100ng／ml时有统计学意义。RT-PCR表明加入瘦素后caspase3的表达下降，且呈剂量依赖性。结论：瘦素对LPS诱导的胸腺细胞凋亡有一定的抑制作用。     

PTTG抑制PI3K/AKT信号通路诱导皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的机制

目的探讨垂体肿瘤转化基因(pituitary tumoRtransforming genes,PTTG)对皮肤鳞状细胞癌细胞活力、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法将设计合成的PTTG特异性siRNA(si-PTTG)转染人皮肤鳞癌细胞系A431(si-PTTG组),无干扰作用siRNA(NC组)及未转染的空白细胞(空白组)作为对照组,LY294002作为PI3K/AKT信号通路的抑制剂。通过MTT法、Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒及ROS检测试剂盒分别检测细胞活力、凋亡率和ROS含量。Western blot法检测PTTG、AKT、p-AKT、Cyclin D1和Bax蛋白表达。结果si-PTTG转染A431细胞后,PTTG表达明显降低(P<0.05)。与空白组比较,si-PTTG组和LY294002组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,si-PTTG组ROS含量明显升高,p-AKT和Cyclin D1蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达明显升高(P<0.05)。A431细胞转染si-PTTG,并用LY294002处理,细胞活力明显低于LY294002组,凋亡率高于LY294002组(P<0.05)。结论沉默PTTG表达可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞活力,诱导细胞凋亡,其机制与细胞ROS水平增高及PI3K/AKT通路抑制有关。     

PI3K/AKT通路介导H_2O_2预处理减轻PC12细胞氧化损伤

目的探讨PI3K/AKT信号通路是否参与H2O2预处理诱导的适应性细胞保护作用。方法体外培养PC12细胞,建立H2O2预处理对抗高浓度H2O2诱导细胞损伤的实验模型。应用甲氮甲唑蓝(MTT)法测定细胞的存活率,比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)的活性,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫印迹法(Westernblot)测定AKT的表达。结果 100μmol H2O2预处理PC12细胞90 min可显著地抑制300μmol H2O2引起的损伤,使细胞存活率从50.2%±4.6%升高至83.8%±3.5%,LDH活性由103%±10.2%下降至68.5%±5.3%,细胞凋亡率由65.5%±4.1%下降至37.1%±2.3%(P<0.01)。100μmol H2O2预处理诱导p-AKT的表达,PI3K抑制剂ly294002阻断了H2O2预处理引起的p-AKT表达。同时ly294002拮抗了H2O2预处理诱导的抗细胞损伤和凋亡作用。结论 H2O2预处理通过PI3K途径引起AKT的活化,PI3K/AKT通路的活化介导了H2O2预处理诱导的适应性细胞保护作用。     

靶向TRIM29基因的siRNA通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导鼻咽癌细胞凋亡

目的:探讨沉默TRIM29基因表达对鼻咽癌细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:将人鼻咽癌5-8F细胞分为空白组、阴性对照(NC)组(转染阴性对照siRNA)和si-TRIM29组(转染TRIM29的特异性siRNA),通过CCK-8法检测si-TRIM29转染5-8F细胞0～96 h的细胞活力。通过流式细胞术及Western blot分别检测si-TRIM29转染5-8F细胞48 h的细胞凋亡率及TRIM29、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、Bcl-2、Bax、t-AKT和p-AKT的蛋白水平。10μmol/L的PI3K/AKT信号通路特异性抑制剂LY294002及si-TRIM29单独或联用处理细胞,细胞分为空白组、LY294002组和LY294002+si-TRIM29组,流式细胞术检测3组细胞凋亡率。结果:转染TRIM29 siRNA的5-8F细胞TRIM29蛋白表达明显低于空白组(P0.05)。和空白组比较,si-TRIM29组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax蛋白的水平明显升高,Bcl-2和p-AKT蛋白的水平明显降低(P0.05)。LY294002组的细胞凋亡率高于空白组,而LY294002+si-TRIM29组的细胞凋亡率高于LY294002组(P0.05)。结论:沉默TRIM29基因表达可通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导鼻咽癌细胞凋亡。     

姜黄素下调PI3K/AKT/mTOR通路抑制人肝癌细胞系增殖

目的观察姜黄素对体外培养人肝癌细胞系HL-7702增殖的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养HL-7702细胞,不同浓度的姜黄素(0、10、20、40和80μmol/L)处理48 h。PI3K/AKT抑制剂LY294002联合姜黄素处理细胞。分别用MTT法检测细胞增殖,用Western blot法检测细胞内PI3K、AKT、m TOR、Bax、Bcl-2及活化的caspase-3的蛋白含量。结果姜黄素可以浓度依赖性的抑制HL-7702细胞增殖,增加细胞中PI3K、AKT和m TOR的磷酸化水平(P0.05)。姜黄素可诱导HL-7702细胞凋亡,增加Bax和活化的caspase-3的含量(P0.05),减少Bcl-2的含量(P0.05)。LY294002与姜黄素联用后,姜黄素对细胞增殖及凋亡无明显作用。结论姜黄素可抑制人肝癌细胞系HL-7702增殖,诱导细胞凋亡,作用机制可能与其下调PIK/AKT/m TOR信号通路的活性有关。     

载脂蛋白A-I模拟肽L-4F减轻过氧化氢诱导的小鼠骨髓内皮祖细胞损伤

 目的: 研究载脂蛋白A-I模拟肽L-4F是否减轻过氧化氢(hydrogen peroxide,H₂O₂)诱导的小鼠骨髓来源内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)氧化应激损伤及其机制。方法: 通过密度梯度离心法分离小鼠骨髓单个核细胞,条件培养基EGM-2MV诱导分化培养EPCs。对培养EPCs先以PI3K/AKT抑制剂LY294002(30 μmol/L)干预2 h后加入L-4F(75 mg/L)4 h,再加入100 μmol/L H₂O₂ 24 h。MTT 法检测细胞活力,试剂盒检测各实验组培养基超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,以评价细胞氧化与抗氧化平衡及脂质过氧化程度;流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;免疫印迹法检测p-AKT蛋白水平。结果: L-4F预处理显著抑制了H₂O₂诱导的细胞活力降低、SOD活性下降、MDA含量增加及细胞凋亡。H₂O₂下调p-AKT的蛋白水平,L-4F呈浓度依赖性地上调p-AKT的蛋白水平。LY294002抑制了L-4F减轻EPCs损伤的作用。结论: 载脂蛋白A-I 模拟肽L-4F部分通过PI3K/AKT通路减轻H₂O₂诱导的EPCs氧化应激损伤。     

ERK1/2和PI3-K通路在蛛网膜下腔出血大鼠海马区对神经细胞自噬的调控作用

目的:探讨细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)和磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3-K)通路对大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后神经细胞自噬的调控作用。方法:雄性SD大鼠160只,分为假手术(Sham)组、模型(SAH)组、ERK1/2抑制剂U0126组和PI3-K抑制剂LY294002组。采用二次注血法制作SAH大鼠模型,HE染色观察海马区神经细胞的形态变化;免疫组织化学染色法检测海马区磷酸化ERK1/2、PI3-K、自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1轻链(LC3)-II的表达实时荧光定量PCR检测海马区ERK1/2、PI3-K、自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白LC3的表达。结果:SAH组海马区神经细胞存活率低于Sham组,ERK1/2、PI3-K、Beclin-1和LC3的表达水平高于Sham组(P0.05);U0126组和LY294002组海马区神经细胞存活率均高于SAH组,ERK1/2、PI3-K、Beclin-1和LC3表达均低于SAH组(P0.05);U0126组和LY294002组两组间海马区神经细胞存活率差异无统计学意义(P0.05),U0126组ERK1/2、Beclin-1和LC3表达水平低于LY294002组(P0.05),PI3-K表达水平高于LY294002组(P0.05)。结论:ERK1/2和PI3-K通路激活共同参与SAH后神经细胞自噬的调节,且以PI3-K通路更为主要。     

槲皮素通过激活PTEN抑制PI3K/AKT及JNK信号通路诱导人乳腺癌细胞凋亡

目的 研究槲皮素对乳腺癌MCF-7细胞增殖活性以及对第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B (PTEN/PI3K/AKT)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的影响。方法 采用CCK-8法检测(0、20、40、60、80、100)μmol/L槲皮素对MCF-7细胞增殖的影响;Hochesst33342染色观察细胞核数量以及核型的变化,流式细胞术检测细胞凋亡;免疫荧光细胞化学染色检测PTEN和磷酸化的JNK(p-JNK)表达,Western blot法检测PTEN、磷酸化的PI3K (p-PI3K)、p-JNK、磷酸化的AKT (p-AKT)蛋白水平;加入PI3K/AKT通路抑制剂LY294002处理后,再次采用以上方法检测对细胞凋亡和相关蛋白表达的影响。结果 随着槲皮素浓度的升高,细胞活性下降,细胞生长受到抑制,且具有浓度依赖性;细胞核浓缩增强、细胞凋亡增加;高浓度槲皮素显著增强PTEN蛋白表达和分布,降低p-PI3K、p-AKT蛋白水平,并抑制p-JNK蛋白的核表达。加入PI3K/AKT信号抑制剂LY294002处理细胞后,LY294002和槲...     

肝细胞生长因子减轻皮质神经元的缺氧/复氧损伤

目的研究肝细胞生长因子(HGF)对缺氧/复氧诱导大鼠皮质神经元凋亡的保护。方法分离培养SD大鼠皮质神经元,经HGF(15、30和60μg/L)预处理后经缺氧/复氧诱导凋亡,用MTT比色法检测细胞存活率;用Hoechst33258染色法和流式细胞仪检测神经元的凋亡;用比色法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)和caspase-3活性变化。结果与正常对照组相比,缺氧/复氧组神经元的细胞存活率显著下降,细胞凋亡率和caspase-3活性升高(均P<0.05);而HGF预处理12 h可显著逆转缺氧/复氧所致的细胞存活率降低、凋亡率增加、LDH活性上升、caspase-3活性升高的改变(均P<0.05),且这些效应与HGF剂量正相关。此外,HGF的抗凋亡效应可被PI3K/Akt通路抑制剂LY294002阻断。结论HGF减轻缺氧/复氧所诱导的神经元凋亡可能与其激活神经元的PI3K/Akt信号通路、减少caspase-3表达有关。     

丹参酮ⅡA抑制马兜铃酸诱导HUVECs凋亡及其可能机制

目的观察丹参酮ⅡA(TSN)对马兜铃酸(AA)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)凋亡的保护作用及其可能机制。方法体外培养HUVECs,设对照组、AA刺激组(AA终浓度为10 mg/L)、TSN干预组(先加入0.2、0.4和0.8 mg/L TSN,1 h后再加入AA)和LY294002预处理组(20μmol/L的PI3K抑制剂LY294002预处理30 min后,再加入TSN)。24 h后,MTT法检测细胞增殖;Hoechst33258荧光染色观察细胞形态;Annexin V-FITC/PI双荧光染色流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞Bcl-2、Bax和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达及比色法测定细胞caspase-3活性。结果与对照组相比,AA引起细胞凋亡率显著增加(P0.05),细胞Bcl-2和p-Akt表达降低(P0.05),细胞Bax表达升高(P0.05);TSN能减轻AA对细胞凋亡率及对细胞Bcl-2、Bax和p-Akt表达的作用(P0.05);PI3K抑制剂LY294002可抑制TSN的抗凋亡作用(P0.05)。结论 TSN可抑制AA诱导的HUVECs凋亡。     

脑益康对D-半乳糖损伤的海马神经元的保护作用

目的：观察脑益康对D-半乳糖（D-gal）诱导的海马神经元损伤的作用。方法:制备脑益康含药血清。应用D-gal诱导海马神经元损伤,MTT法测定细胞活力,生化法测定细胞单胺氧化酶-B（MAO-B）、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活力,RT-PCR法检测细胞bax和bcl-xl mRNA的表达。结果:脑益康含药血清可显著提高细胞活力和ATP酶活力,降低MAO-B活力,上调bcl-xl mRNA的表达,降低bax mRNA的表达。结论:脑益康可通过提高ATP酶活力,降低MAO-B活力,抑制细胞凋亡,对D-gal处理的海马神经元起到保护作用。     

肺动脉血栓栓塞症患者蛋白Z及其相关因子mRNA差异表达的研究

目的:研究蛋白Z(PZ)及其相关因子在肺动脉血栓栓塞症(PTE)患者静脉血栓形成过程中的变化及其作用。方法:采用基因表达谱芯片检测20例PTE患者与20例对照组人群PZ、PZ依赖的蛋白酶抑制剂(ZPI)及凝血因子Ⅹ(FⅩ)的mRNA表达水平及其差异。结果:PTE组与对照组比较, PZ的平均信号值在PTE组为4.55±0.43,对照组为4.92±0.70,P0.05;ZPI的平均信号值在PTE组为5.09±0.57,对照组为5.51±0.73,P0.05;FⅩ的平均信号值在PTE组为4.76±1.11,对照组为4.82±0.66,P0.05。结论:PZ及FⅩ mRNA在静脉血栓形成过程中不起主要作用,而ZPI mRNA表达的显著性差异可能在PTE中有重要意义。     

猪苓汤对肾结石大鼠Osteopotin mRNA表达的影响

目的检测猪苓汤对肾结石大鼠Osteopotin mRNA表达的影响.方法采用乙醛酸溶液制作大鼠肾结石模型,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测肾结石大鼠Osteopotin mRNA的表达.结果诱石剂可使大鼠肾脏OPN mRNA的表达明显增加(P＜0.05);而猪苓汤则可抑制OPN mRNA的表达(P＜0.05).结论猪苓汤对乙醛酸溶液诱发的肾结石形成有抑制作用.     

老年大鼠组织mRNA分析中内参基因的选择

 目的 探讨用于老年大鼠组织基因mRNA表达分析的内参基因选择。方法 用实时反转录PCR技术评价5个管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶（G3pd）、?-肌动蛋白 (ACTB)、H3组氨酸3B（H3f3b）、酸性核糖体磷蛋白P0（Arbp）和18S核糖体RNA (18S)的表达水平。结果 老年大鼠肾组织中表达最稳定的是管家基因ACTB,心脏和肺组织中表达最稳定的是G3pd;而Arbp在不同组织之间的表达差异最小。结论 老年大鼠组织间基因表达mRNA分析应使用至少两个参照基因：一个是核糖体基因18S,另一个适合的内参基因是Arbp。     

清络通痹颗粒对胶原性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡相关基因p53和bcl-2表达的影响

目的：观察清络通痹颗粒对胶原性关节炎大鼠滑膜凋亡相关基因的影响。方法：采用牛Ⅱ型胶原制备大鼠胶原性关节炎模型，提取滑膜细胞总RNA，采用RT—PCR技术，检测药物对滑膜细胞p53 mRNA、bcl-2 mRNA的影响。结果：胶原性关节炎大鼠滑膜细胞ps3mRNA、bcl-2mRNA表达较正常组明显升高（P〈0．01），清络通痹颗粒7．2g／kg可明显下调胶原性关节炎大鼠滑膜细胞p53 mRNA、bcl-2mRNA的水平（P〈0．05，P〈0．01）。结论：清络通痹颗粒可能通过下调滑膜细胞凋亡相关基因p53 mRNA、bcl-2 mRNA表达，促进滑膜细胞的凋亡而发挥治疗作用。     

应用锁式探针滚环扩增检测小鼠畸胎瘤分化过程中单细胞基因表达水平

目的 应用锁式探针介导的滚环扩增技术(Padlock-RCA)原位检测干细胞分化过程中单细胞mRNA表达水平.方法 利用维甲酸(RA)诱导小鼠畸胎瘤细胞F9分化模型,应用锁式探针滚环扩增原位基因检测技术检测Nanog在其分化前后单细胞mRNA表达水平,结合实时定量RT-PCR分析该方法的效果.结果 锁式探针滚环扩增原位基因表达检测方法能够检测单个细胞mRNA表达水平,并能够有效的反映F9细胞分化前较分化后Nanog基因表达水平显著降低(P<0.05).结论 成功应用锁式探针滚环扩增原位基因表达检测技术分析Nanog基因在F9分化前后单细胞中表达水平,为进一步研究单细胞基因表达及细胞亚群功能分析提供了一种可靠的新方法.     

重症肌无力患者肌肉AChR亚单位基因的表达

目的：探讨重症肌无力（MG）患者眼外肌易于受累的机制。方法：采用RT-PCR对正常人眼外肌、其他骨骼肌群（8例）以及MG患者肋间肌（10例）AChRα、β、γ、ε、δ亚单位mRNA的表达进行分析，同时采用ELISA方法检测83例MG患者血清AChR抗体对不同骨骼肌群AChR的反应。结果：①正常人眼外肌与其他骨骼肌一样均可见AChRα、β、γ、ε、δ亚单位mRNA的表达；②全身型MG患者肌肉AChRα P3A^＋／β—actin较正常对照组高（P=O．028）；③眼肌型、全身型MG抗成人腓肠肌AChR抗体显著高于抗胎儿肌肉AChR抗体（P=0．001，0．016）。结论：MG患者眼外肌易受累机制可能与眼外肌AChR亚单位mRNA表达水平及眼外肌的内在易感性有关。     

乳腺癌中微管相关蛋白LC3A和LC3B的表达及意义

目的 探讨微管相关蛋白MAP1LC3(LC3A和LC3B)在乳腺癌组织中的表达,阐明其与乳腺癌发生、发展及转移的关系.方法 以8例正常乳腺组织为对照,采用免疫组化SP法和半定量RT-PCR技术检测在乳腺增生性病变(20例),乳腺非浸润性癌(10例)、乳腺浸润性癌(40例)中MAP1LC3A、MAP1LC3B及其mRNA的表达水平.结果 (1)LC3A和LC3B着色强度及着色细胞百分比和不同组织类型有重要关系.(2)LC3A与LC3B mRNA在正常乳腺组织、乳腺增生性病变、乳腺非浸润性癌和乳腺浸润性癌4组病例中的表达依次呈递增趋势,差异具有统计学意义(P<0.05).根据不同的组织学分级,LC3A在Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级中的表达呈递增趋势,且差异具有统计学意义(P<0.05).(3)LC3A、LC3B表达与临床分期、患者年龄、淋巴结转移之间差异均无显著性.结论 与正常组织相比,LC3A蛋白在乳腺癌组织中表达更多的强阳性和更高的阳性细胞百分比,并且在WHO分级中从Ⅰ～Ⅲ级,其mRNA表达依次呈递增趋势,由此提示LC3A亚型可能与乳腺癌的发生发展有关.     

肺栓塞患者血小板膜糖蛋白相关基因mRNA显著性差异表达的意义

目的:研究血小板膜糖蛋白在静脉血栓形成过程中的作用。方法:基因表达谱芯片检测肺栓塞(PTE)组与对照组血小板膜糖蛋白相关基因的mRNA表达水平及其差异。结果:PTE组血小板膜糖蛋白相关因子的mRNA表达与对照组显著差异(P0.05)者只占所测基因的45.45%。结论:血小板膜糖蛋白相关因子mRNA表达的差异性提示在静脉血栓形成过程中,血小板仅发挥少部分功能,支持了临床大规模试验所述的不提倡单独应用抗血小板药物治疗和预防静脉血栓性疾病的结论。     

脂联素受体在人肾上腺皮髓质及其肿瘤中的不同表达

目的 观察脂联素受体1(AdipoR1)、脂联素受体2(AdipoR2)在正常肾上腺皮、髓质及其肿瘤中的mRNA表达.方法 提取6例正常人肾上腺皮质和髓质、10例皮质醇分泌瘤、14例醛固酮分泌瘤和20例嗜铬细胞瘤组织的总RNA,用RT-PCR方法检测AdipoR1、AdipoR2 mRNA表达;并分析AdipoR2与Adipo1的关系.31例患者曾行3 h葡萄糖耐量试验(OGTF),比较AdipoR1/R2与患者OGTT时血糖和胰岛素曲线下面积(GLU<,AUC>、INS<,AUC>)间的关系.结果 在肾上腺皮、髓质及其肿瘤中存在AdipoR1、AdipoR2的mRNA表达.AdipoR1 mRNA在正常肾上腺皮质内的表达明显低于皮质醇分泌瘤和醛固酮分泌瘤(P<0.01),AdipoR1 mRNA在嗜铬细胞瘤内的表达明显高于正常肾上腺髓质(P<0.01).AdipoR2 mRNA在正常肾上腺皮质内的表达明显低于皮质醇分泌瘤(P<0.05).皮质醇分泌瘤内AdipoR2 mRNA表达明显高于醛固酮分泌瘤(P<0.05).在所有组织中,AdipoR2与AdipoR1 mRNA表达高度相关r=0.335,P<0.01),AdipoR2 mRNA表达与GLU<,AUC>呈正相关(r=0.633,P<0.001).结论 肾上腺皮髓质及其肿瘤广泛表达脂联素受体并存在差异,可能与不同的脂联素水平相关.