鸭乙肝病毒感染和鸭肝病相关关系的研究

为探索嗜肝DNA病毒同肝病之间的关系,对启东鸭的鸭乙肝病毒(DHBV)感染和鸭肝病进行研究。用分子杂交手段检测鸭子对DHBV的感染,用Southern blot技术分析DHBV-DNA在鸭肝细胞中存在状态,同时做鸭肝病理学研究,分析病理学结果与DHBV感染之间的相关关系。结果表明,65.7%的启东鸭有DHBV感染的证据,肝病发生率是70%,而对照组长春鸭无DHBV感     

鸭乙型肝炎肝纤维化模型的初步研究

目的研制乙型肝炎肝纤维化的动物模型.方法采用1d龄樱桃谷鸭,随机分为正常组、鸭乙型肝炎病毒(DHBV)造模组及CCl4造模组,分别于60、100及112d随机抽样观察两造模组鸭肝组织病理变化,于100d检测3组动物肝组织DHBV、DNA、肝功能和肝纤维化指标.结果CCl4造模组脂肪变性明显,肝细胞水样变性伴中等炎性细胞浸润,纤维组织增生明显;DHBV造模组以水样变性为主,可见肝窦消失或肝窦扩张瘀血,脂肪变性以小脂滴为主,肝细胞坏死程度较轻,但炎性细胞浸润明显,且以淋巴细胞多见,纤维增生形成时间略长,60d尚未见纤维增生,80d时汇管区纤维组织中度增生,100d和112d时纤维组织明显增生,有的形成假小叶,其纤维化形成率与CCl4组(90%)接近(100d为60.7%,112d为87.5%).肝组织DHBVDNA检测结果,DHBV造模组水平较高,其肝功能ALT正常,白蛋白明显降低,球蛋白显著升高,肝纤维化指标如HA、PCⅢ和肝组织Hyp均明显上升.结论采用DHBV阳性血清反复攻击樱桃谷鸭112d以上,可复制形成率较高的鸭乙型肝炎肝纤维化模型.     

鸭乙型肝炎病毒感染模型的研究进展

HBV和DHBV均为嗜肝DNA病毒,它们都有相似的基因组和病毒结构特征,以及通过RNA逆转录复制的特性。DHBV感染鸭模型是研究HBV基因突变、细胞表面病毒受体、病毒清除机制以及筛选新的抗病毒药物的合适的动物模型。文章就鸭乙型肝炎病毒感染模型的研究情况作一简要综述。     

肝康栓抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究

目的：用鸭乙肝模型研究肝康栓对鸭乙型肝炎病毒（DHBV）的体内抗病毒作用。方法：用DHBV阳性血清感染1日龄的樱桃谷鸭，制备鸭乙型肝炎模型。随机分成5组：肝康栓大、中、小3个剂量治疗组，生理盐水模型组和阿昔洛韦（ACV）对照组，每组12只，均连续给药4周。分别于给药前，给药14天、28天，停药7天时取血清，用real-timePCR法检测鸭血清中DHBV DNA拷贝数的变化情况。结果：肝康栓大剂量组给药14天、28天及停药7天，中剂量组给药14天、28天，小剂量组给药28天，鸭血清中DHBV DNA拷贝数的对数值均较给药前降低（〉2个对数级），差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：肝康栓具有有效抑制鸭体内DHBV DNA复制的作用。     

补锌去铁对中药保肝康抗鸭乙肝病毒疗效的影响(摘要)

目的:观察补锌去铁对中药保肝康抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)疗效的影响。方法:采用垂直传播的DHBV DNA阳性的6月龄麻鸭作鸭乙型肝炎病毒模型。以补锌去铁加中药保肝康进行治疗,观察其对DHBV、鸭肝功能及血清锌、铁、肝组织铁的影响。并设保肝康作为中药对照,抗乙肝转移因子作     

肝苏颗粒浸膏粉抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究

目的：观察肝苏颗粒浸膏粉（以下简称肝苏）体内抗鸭乙型肝炎病毒（DHBV）的作用,为临床治疗乙肝病毒感染提供实验依据,方法：采用重庆鸭乙型肝炎动物模型,用肝苏口服治疗4W,停药观察1W,检测用药前后血清的DHBVDNA,DHBsAg,转氨酶（ALT,AST）及肝组织病理变化,结果：肝苏各剂量组用药后血清DHBV DNA滴度显著降低或极显著降低（P＜0．05或P＜0．01）,停药1W后中,小剂量组血清DHBV DNA有明显回升现象,而大剂量组DHBV DNA回升现象不明显,其抗病毒效果与剂量大小有一定的关系,用药前后血清DHBsAg O,D值（490nm)的变化与DNA滴度改变相似,此外,肝脏病理学检查及治疗4W,停药1W后血清ALT,AST检查未发现该药对鸭肝组织有明显的毒性损害,结论：连续用肝苏1个月在鸭体内有抗鸭乙型肝炎病毒的作用。     

肝康栓抗鸭乙型肝炎病毒和改善肝脏病理的作用

[目的]用鸭乙型肝炎（乙肝）模型研究肝康栓抗鸭乙型肝炎病毒（DHBV）和改善肝脏病理的作用。[方法]用DHBV阳性血清感染1d龄的樱桃谷雏鸭，制备鸭乙肝模型。将其中36只感染阳性鸭随机分成3组：肝康栓治疗组，0．85％氯化钠模型组和阿昔洛韦（ACV）对照组，每组12只，均连续给药4周。分别于给药前，给药14、28d和停药7d时取血清，用实时定量PCR法检测鸭血清中DHIWDNA拷贝数。于停药7d时，处死各组雏鸭，取肝脏病理切片苏木精一伊红染色后，观察肝脏炎症情况和肝细胞变性程度。[结果]肝康栓治疗组给药14、28d及停药7d时鸭血清中DHBVDNA拷贝数的对数值均较给药前降低（均P〈0.01）。肝康栓治疗组雏鸭肝脏的肝细胞肿胀率、空泡变率、嗜酸性变率均较同期模型组降低，差异有统计学意义（P〈0.05，〈20．01）。[结论]肝康栓能有效地抑制鸭体内DHBVDNA的复制，并具有改善肝脏病理的作用。     

HBV DNA转染原代鸭肝细胞初步观察

目的：通过观测人HBV DNA在非哺乳动物－－鸭肝细胞中的复制和表达水平，探讨人HBV感染与复制的跨种属特异性，为建立人HBV DNA转染跨种属肝细胞模型奠定基础。方法：获取线性HBV DNA并电转染原代鸭肝细胞，电转后48h采用IMX系统检测鸭肝细胞中HBsAg表达水平，用Southern blot-ting和dot blotting检测HBV DNA复制情况。以单纯电击肝细胞为对照。结果：转染组原代鸭肝细胞裂解液中HBsAg为9．10（P／N值≥2．1为阳性），HBeAg为阴性；上清液中二者均为阴性。转染组原代鸭肝细胞裂解液dot blotting呈强阳性；转染组肝细胞总DNA Southern blotting显示约4.0kb以下分子涂抹带，为游离复制型HBV DNA，包括rcDNA,cccDNA与ssDNA等复制中间体，未见整合型HBV DNA－－高分子区（4.0-24.0kb)涂抹带，对照上述指标均为阴性。结论：人HBV DNA能在原代鸭肝细胞中复制和表达，可能为肝细胞内环境依赖性，无严格种属特异性限制。     

壮药汗衣台对鸭乙型肝炎的治疗作用

目的:探讨壮药汗衣台对鸭乙型肝炎病毒(duck hepatitis B virus,DHBV)感染诱导的鸭乙型肝炎模型中肝功能、病毒复制、免疫调控及肝组织炎症方面的作用.方法:本研究采用DHBV阳性血清腹腔注射感染广西1日龄麻鸭诱导鸭乙型肝炎模型.于用药前(T0),用药7 d(T7),14 d(T14)及停药3d(P3)于颈静脉抽血,分别检测鸭血清中的谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、白介素-2(interleukin-2,IL-2)、DHBV DNA及肝组织病理.结果:模型组感染病毒1-2 wk,鸭血清ALT、AST与IL-2水平明显升高(P=0.028,0.036;P=0.005,0.04;P=0.045),病毒载量表达平稳,鸭肝组织病理检测显示重度脂肪样变性;拉米组治疗1-2 wk,鸭血清ALT、IL-2水平明显下降(P=0.001,0.042;P=0.023),但对AST水平无明显影响,病毒载量被显著抑制,停药3 d无反跳(P=0.034;P=0.007;P=0.013),肝组织病理提示中度以上脂肪变性;汗高组治疗1-2 wk,鸭血清ALT、AST和IL-2水平均明显降低(P=0.047,0.035;P=0.007,0.003;P=0.026,0.049),对病毒的抑制疗效与拉米组相似(P=0.025;P=0.012;P=0.011),肝组织病理显示中度脂肪变性;汗常组治疗1-2 wk,鸭血清ALT、AST及IL-2水平均明显降低(P=0.015;P=0.038;P=0.024,0.004),但在T14时,ALT、AST水平均出现回升,病毒载量呈缓慢下降趋势,肝组织病理提示中度以上脂肪变性.结论:汗衣台剂量依赖性的降低转氨酶、抑制DHBV DNA复制、减少IL-2分泌,从而保护肝细胞、减轻肝脂肪变性、降低免疫过强所导致的急性肝损伤.     

肝富集转录因子对HBV基因转录和复制的调控作用

目的建立乙型肝炎病毒（HBV）在非肝源细胞的复制体系,探讨肝富集转录因子对HBV基因转录和复制的调控作用。方法用复制型HBV重组质粒pHBV4.1与肝富集转录因子HNF3、HNF4和RXRα/PPARα的表达质粒分别共转染非肝源细胞株NIH3T3。用Northern吸印杂交检测HBV 3.5 kb、2.4/2.1 kb、0.7 kb mRNA的转录情况,Southern吸印杂交检测HBV DNA复制中间体水平。结果复制型HBV重组质粒pHBV4.1在肝癌细胞中能检测到3.5 kb HBV RNA转录产物和HBV DNA复制中间体;用pHBV4.1转染NIH3T3细胞后,在没有肝富集转录因子表达质粒共转染时未能检出3.5 kb HBV RNA转录产物,也无HBV DNA复制中间体;当用肝富集转录因子共转染时,HNF4和RXRα/PPARα的表达能够激活3.5 kb HBV RNA转录和HBV DNA复制,而HNF3未能激活HBV复制,但在HNF4或RXRα/PPARα介导的病毒复制体系中,均见3.5 kb HBV mRNA的转录和HBV DNA复制水平下降。结论利用肝富集转录因子成功地建立HBV在非肝源细胞中的转录与复制。其中,HNF4和RXRα/PPARα可支持HBV在非肝源细胞中转录与复制;HNF3抑制HBV肝特异性基因转录与复制。     

鸭乙型肝炎动物模型考核抗病毒药物的疗效观察

目的 观察马来酸恩替卡韦、恩替卡韦和阿德福韦酯抑制鸭乙型肝炎病毒(DHBV)复制的情况,比较抗病毒疗效的差异,考核药物的抗病毒效果.方法 实验动物为垂直传播感染、DHBVDNA检测阳性的麻鸭.分设马来酸恩替卡韦组、恩替卡韦组、阿德福韦酯对照组和DHBV DNA阳性、阴性对照组.马来酸恩替卡韦和恩替卡韦组各分为高、中、低3个剂量组,每日1次给药;阿德福韦酯组每周3次给药,均为口服,连续6周.分别在实验前、给药第2、4、6周和停药2周后静脉取血.实验结束后以TaqMan实时荧光定量PCR方法进行血清DHBV DNA定量检测,取对数后以配对资料的t检验统计分析.结果 马来酸恩替卡韦、恩替卡韦的低、中、高剂量组以及阿德福韦酯组在治疗前后,血清DHBV DNA的含量均显著降低.马来酸恩替卡韦高剂量组在治疗前及用药6周后的DHBV DNA含量分别为(7.34±1.33)和(2.12±2.50)1g拷贝/mL(P＜0.01);恩替卡韦高剂量组在治疗前及用药6周后的DHBV DNA含量分别为(8.02±0.56)和(4.36±1.64)lg拷贝/mL(P＜0.01).停药2周后各组的:DHBV DNA含量出现一定程度反跳.马来酸恩替卡韦和恩替卡韦起效迅速,抗病毒能力强,各剂量组用药前后DHBV DNA水平的差异大于阿德福韦酯,抗病毒效果优于阿德福韦酯,而马来酸恩替卡韦的抗病毒效果又更为显著,且停药后其持续疗效更好.结论 马来酸恩替卡韦和恩替卡韦的抗DHBV作用强于阿德福韦酯,而马来酸恩替卡韦又优于思替卡韦.鸭乙型肝炎动物模型适用于筛选和评价抗病毒药物及制剂.     

载脂蛋白质B mRNA编辑酶催化多肽3G抑制乙型肝炎病毒和鸭乙型肝炎病毒复制

目的了解载脂蛋白质BmRNA编辑酶催化多肽3G（APOBEC3G）对乙型肝炎病毒（HBV）和鸭乙型肝炎炎病毒（DHBV）复制的抑制作用。方法从健康人外周血单个核细胞提取RNA，逆转录聚合酶链反应扩增APOBEC3G，将产物克隆到pXF3H载体的EcoRⅠ和Hind Ⅲ酶切位点以构建真核表达质粒；以ayw亚型HBV全长质粒构建具有复制能力的1．3倍HBV质粒（pHBV1．3）。不同剂量的APOBEC3G真核表达质粒与pHBV1．3共转染HepG2细胞；酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液的乙型肝炎表面抗原和e抗原水平，Southernblot和Northernblot分析HBV核衣壳相关DNA和RNA的水平变化。不同剂量APOBEC3G真核表达质粒与头尾相接的2倍DHBV质粒共转染LMH鸡肝癌细胞，Southernblot分析DHBV核衣壳相关DNA水平变化。结果成功构建APOBEC3G真核表达质粒和具有复制能力的1．3倍HBV质粒。APOBEC3G抑制乙型肝炎表面抗原和e抗原的分泌，转染细胞内HBV核衣壳相关RNA表达水平下降，而对核心蛋白质的表达没有影响；APOBEC3G对转染细胞内HBV和DHBV核衣壳相关DNA水平具有剂量依赖的抑制效应。结论APOBEC3G对HBV和DHBV复制具有抑制作用。     

鸭乙型肝炎病毒性肝炎模型的研究

由于受HBV宿主范围(人和黑猩猩)的限制及缺乏HBV体外培养系统,乙型病毒性肝炎的研究受到了障碍。因此,人们开始寻找类似于HBV的其它动物肝炎病毒以用于研究。迄今,已发现该类家族的病毒有:土拔鼠肝炎病毒(WHV)、地松鼠肝炎病毒(GSHV)、用鸭乙型肝炎病毒(DHBV)。昆类病毒均能引起慢性感染,属于嗜肝DNA病毒(hepadnavirus)科。由于宿主动物易于获得,特别是感染DHBV鸭的动物模型,近年来已越来越多地被用于探讨HBV发病机理及筛选抗肝炎病毒药物的研究。作者根据可能影响建立DHBV鸭肝炎模型的各种因素作一综述。     

5-脱氧杂氮胞苷抑制肝癌细胞株生物学行为的机制

目的 DNA甲基化模式的改变伴随着永生性细胞系的确立，生长凋控基因CpG岛的重新甲基化可能导致了其转录的不活跃，在体外培养的情况下，使得肿瘤细胞选择了有利于生长的条件．我们用DNA甲基转移酶抑制剂5-脱氧杂氮胞苷处理两株肝癌细胞，研究其对肝癌细胞的影响，探讨DNA甲基化异常与肝细胞癌间的相关性及5-脱氧杂氮胞苷对肝癌细胞株恶性生物学行为的影响及其机制。方法 用5-脱氧杂氮胞苷处理肝癌细胞株SMMC-7721和HePG2，然后采用相差显微镜观察药物处理前后细胞的形态变化，采用MTT法观察细胞的生长速度变化，采用流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率、P16蛋白表达的变化．采用RT-PCR法比较p16和甲基转移酶mRNA表达量的变化，比较裸鼠致瘤性的大小。结果 5-脱氧杂氨胞苷处理后细胞形态趋于规则，生长速度减慢．SMMC-7721细胞，G1期细胞增加了8.5％，而s期和G2／M期细胞分别减少了47．8％和10.4％．HePG2细胞，G1期细胞增加了3．5％，S期减少了46．2％．G2／M期增加了23．7％．两细胞凋亡率分别增加了91．6％和133．3％．P16蛋白表达分别增加了23．4％和20.9％，p16mRNA表达增高，而DNA甲基转移酶mRNA表达明显降低，裸鼠皮下移植瘤生长减慢。结论 肝细胞癌的发生与DNA甲基化异常有关，甲基化酶抑制剂5-脱氧杂氮胞苷可能通过抑制甲基转移酶抑制抑癌基因启动子区域的高甲基化，恢复其生长调控功能，从而使肝癌细胞株的恶性生物学行为发生逆转。     

三种方法诱发鸭肝纤维化模型的对比研究

采用鸭乙型肝炎病毒(DHBV)强毒株感染1日龄鸭,结果85天后均出现纤维增生(6/6),120天有3/5出现肝纤维化,与感染十四氯化碳注射组(65天3/4出现纤维增生,85天3/6出现肝纤维化)、感染 牛血清白蛋白攻击组(85天3/5出现纤维增生,120天8/12出现肝纤维化)相比,均无统计学差异。提示强毒株DHBV是引起肝脏特异性病变的主要原因,造成DHBV持续感染和延长观察时间,可望进一步提高鸭肝纤维化的造模成功率。     

拉米夫定联合泛昔洛韦抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究

观察核苷酸类似物拉米夫定联合泛昔洛韦体内抗鸭乙型肝炎病毒（DHBV）的作用。方法 采用重庆麻鸭乙型肝炎动物模型,用拉米夫定联合泛昔洛韦口服治疗4周,停药观察1周,检测用药前后血清中的DHBV DNA、DHBsAg及血清转氨酶（ALT、AST）、肝组织HE染色病理。并以单用拉米夫定、泛昔洛韦、阿昔洛韦作对照。结果 拉米夫定联合泛昔洛韦用药后能使血清中DHBV DNA含量总体水平显著降低（P＜0．01）,停药1周后DHBV DNA较用药4周时DHBV DNA含量回升现象不明显。用药前后清血DHBsAg的吸光度值（490nm)的变化与DNA含量改变相似;此外,肝脏病理检查及治疗4周、停药1周后血清转氨酶检测未发现联合用药对鸭肝组织有明显的毒性损害。结论 拉米夫定联合泛昔洛韦连续用药4周在鸭体内有抗鸭乙型肝炎病毒的作用,且停药后DHBV DNA无明显“反跳”,二者用药有协同作用。     

水芹水醇提取物在雏鸭体内对DHBV-DNA的抑制效果

目的观察水芹(Oenanthe Javanica,OJ)水醇提取物在鸭体内对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)-DNA的抑制效果.方法将DHBV感染雏鸭随机分为高、中、低三个剂量组,分别为8,5,3 g/kg组进行药物治疗.每组5～6只,ig,2次/d×10 d;设病毒对照组(DHBV),以生理盐水(NS)代替药物,ig,2次/d×10d.阳性药用阿昔洛韦(ACV)粉剂250mg,ig,100mg/kg,2次/d×10d.在感染7 d后,即用药前(T0),用药后5 d(T5),用药10 d(T10)和停药后3 d(P3),自鸭腿胫静脉分别取血,分离血清,检查DHBV-DNA水平和肝功能.治疗结束经颈静脉放血处死动物,分别切取雏鸭肝脏,作肝病理检查.结果三批实验结果表明,水芹水醇提取物中,高剂量组对感染雏鸭无毒性,给药5,10 d能显著降低DHBV感染鸭血清DHBV-DNA水平,即d5的测定值由1.04分别下降至0.52和0.44,抑制率分别为50.0%和50.6%;d 10由0.85分别下降0.42和0.36,抑制率分别为57.7%和57.6%,与病毒对照组比较,均有显著性差异(P<0.05和P<0.01).低剂量组对鸭血清DHBV-DNA也有一定疗效,并显示明显的量效关系.肝功能改善明显,给药10 d,中剂量雏鸭血中ALT,AST,SB含量下降率分别为44.1%,44.2%,33.3%.高剂量的下降率分别为61.0%,58.3%,64.4%.低剂量虽对肝功能有改善,但无统计显著性.肝组织病理观察证实,中、高剂量对雏鸭肝脏均有保护作用,肝细胞变性坏死均较轻,肝小叶结构基本完整.结论OJ在雏鸭体内有抗DHBV的作用,保肝效果显著.     

鹅脱氧胆酸衍生物HS-1200对肝肿瘤细胞株凋亡及增殖的影响

目的探讨鹅脱氧胆酸衍生物HS-1200诱导肝肿瘤细胞株凋亡及抑制增殖的作用及机制。方法分别用40、60及80p-M的HS-1200作用于肝肿瘤细胞株BEL7402，于作用后12、24及36h采用MTT检测细胞活性，流式细胞术、DNA梯状条带、荧光显微镜检测细胞凋亡，Western—blot法检测bcl-2、bax、细胞色素C及caspase-3的表达。结果HS-1200可有效地抑制BEL7402生长，其作用随药物浓度提高和作用时间延长而增强，呈一定的剂量、时间依赖性；FCM结果表明，随作用浓度和作用时间延长，凋亡率显著增加，有显著性差异（P〈0．05）；Ho-echst33258染色结果显示细胞呈凋亡形态学改变，凝胶电泳显示典型的凋亡梯形条带，Westernblot结果显示为HS-1200可提升bax、细胞色素C及caspase-3的表达，降低bcl-2的蛋白表达水平。结论HS-1200对BEL7402有显著的抑制增殖及诱导凋亡的作用，其机理可能为提升bax、细胞色素C及caspase-3的表达，降低bcl-2的表达；HS-1200可能是一种有效的治疗肝癌的化疗药物。     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人肝癌细胞株端粒酶活性作用的实验研究

观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对肝癌细胞株的作用。用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与肝癌细胞株共同孵育一定时间后,观察细胞形态变化、细胞DNA含量的发布,测定端粒酶活性。端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导肝癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成;电泳呈凋亡特征性Ladder带;流式细胞仪分析显示,在G1期前出现亚2倍体凋亡峰;端粒酶活性抑制,端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导肝癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,抑制端粒合成,从而抑制肝癌细胞的生长。     

补锌去铁对保肝康抗鸭乙肝病毒作用的实验研究

目的：观察补锌去铁对中药保肝康抗鸭乙型肝炎病毒（DHBV）的作用,方法：采用垂直传播的DHBVDNA阳性的6月龄麻鸭作DHBV模型,以补锌去铁加中药保肝康进行治疗,观察其对DNA、肝功能及血清锌、铁、肝组织铁的影响。并设保肝康作为中药对照,抗乙肝移植因子作西药对照,结果：补锌去铁能增强中药抗DHBV,降低肝功能,提高血清锌,降低血清及肝组织铁,结论：补锌去铁有增强中药抗DHBV,改善肝功能的作用。