RNA激活上调p21~(WAF1/CIP1)基因表达对肺癌细胞增殖和凋亡影响的研究

目的:探讨应用RNA激活(RNAa)技术上调p21WAF1/CIP1(p21)表达对人肺癌H441细胞增殖和凋亡的影响。方法:设计靶向抑癌基因p21WAF1/CIP1启动子DNA序列互补的双链RNA分子(dsp21),转染H441细胞后应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质印迹法检测p21WAF1/CIP1基因mRNA及蛋白质的表达变化,噻唑蓝(MTT)法检测H441细胞增殖速度的变化,流式细胞仪检测H441细胞凋亡率的变化。结果:dsp21转染H441细胞72 h后p21WAF1/CIP1表达显著上调。RT-PCR灰度比值结果显示,空白对照组、阴性对照组和实验组p21WAF1/CIP1mRNA相对表达量分别为(38.1±2.5)%、(33.5±3.9)%和(96.5±2.3)%,差异有统计学意义,F=87.0,P<0.01;蛋白质印迹法结果显示,空白对照组、阴性对照组和实验组p21WAF1/CIP1蛋白相对表达量分别为(45.7±2.2)%、(43.2±3.1)%和(93.6±2.5)%,差异有统计学意义,F=79.0,P<0.01;经dsp21作用的H441细胞增殖受到明显抑制,凋亡率较对照...     

p21WAF1/CIP1和p53蛋白表达在胃癌发生发展过程中的研究

目的研究p21WAF1/CIP1和p53蛋白在胃癌发生发展过程中的作用及表达的临床病理意义.方法采用免疫组化SP法对正常胃粘膜、萎缩性胃炎伴肠上皮化生、萎缩性胃炎伴不典型增生组织各20例和78例胃癌组织标本进行p21WAF1/CIP1和p53蛋白检测.结果胃癌组织中p53蛋白阳性表达率高于正常胃粘膜、萎缩性胃炎伴肠上皮化生和不典型增生组(P＜0.05),而p21WAF1/CIP1蛋白阳性表达低于正常胃粘膜、萎缩性胃炎伴肠上皮化生组(P＜0.01)p21WAF1/CIP1、p53蛋白表达与胃癌的分化程度相关(P＜0.05);有淋巴结转移组p21WAF1/CIP1蛋白表达率低于无淋巴结转移组(P＜0.05),而有淋巴结转移组p53蛋白表达率高于无淋巴结转移组(P＜0.05);p53蛋白表达与胃癌浸润深度有关.结论p53蛋白高表达与p21WAF1/CIP1蛋白失表达可能参与胃癌的发生发展过程;检测p53和p21WAF1/CIP1蛋白作为反映胃癌病理学特点的参考指标可能有一定意义;p21WAF1/CIP1蛋白表达在胃癌可能存在非p53诱导表达途径.     

胃癌中p21WAF1/CIP1、细胞周期素D1、p53表达的相关性

目的探讨p21WAF1/CIP1、细胞周期素D1(cyclin D1)、p53在胃癌中表达之间的相关性.方法应用原位杂交技术检测p21WAF1/CIP1 mRNA、细胞周期素D1 mRNA及免疫组化技术检测p53蛋白在胃癌中的表达.结果 p21WAF1/CIP1 mRNA在癌组织及癌旁正常粘膜中阳性表达率各为93.15%(68/73)及76.71%(56/73),二者相比具有显著差异(P<0.05).Cyclin D1 mRNA在癌组织及癌旁正常粘膜中阳性表达率各为54.79%(40/73)及30.16%(22/73),二者具有显著差异(P<0.05).p53蛋白在胃癌中的阳性表达率为32.87%(24/73), p53过表达者,其p21WAF1/CIP1 mRNA表达较p53阴性者为低,二者存在显著差异(P<0.05).p21WAF1/CIP1表达与细胞周期素D1表达呈负相关.结论 p21WAF1/CIP1、Cyclin D1、p53的异常表达及它们之间可能存在的相互作用,对于胃癌的发生发展具有重要意义.     

p21~(WAF1/CIP1)在甲状腺癌组织的表达及临床意义

[目的]探讨 p21WAF1/CIP1与 p53基因在甲状腺癌中的表达与病理类型和分化程度的关系。[方法]应用免疫组化技术检测甲状腺癌组织中的抑癌基因 p21WAF1/CIP1及 p53基因的表达。统计学采用 χ2 检验。[结果]甲状腺腺瘤(TT) ,甲状腺乳头状癌(PTC)、滤泡状癌(FTC)、未分化癌(UDC)组织 p21蛋白阳性率分别为66 7%、62 5 %、58 3 %、50 0% ,各组之间无显著差别(P>0 05) ;高分化癌(WDC)、低分化癌(PDC)、UDC组织p21蛋白阳性率分别为67 7 %、46 2 %、50 0 % ,各组之间无显著差别(P>0 05) ;PTC、FTC、UDC组织 p53蛋白阳性率分别为31 3%、25 0 %、64 3 % ,UDC与PTC、FTC之间存在显著差别(P<0 05) ;WDC、PDC、UDC组织 p53蛋白阳性率分别为16 1 %、61 5 %、64 3 % ,WDC的阳性率明显低于PDC、UDC(P<0 05) ;p53蛋白阳性的癌组织 p21蛋白阳性率为40 9%(9/22) ,p53蛋白阴性的癌组织 p21蛋白阳性率为69 4%(25/36) ,两者之间存在显者差异(P<0 05)。[结论]甲状腺癌中 p21WAF1/CIP1的表达与其病理类型和分化程度无关 ,而 p53基因的表达与甲状腺癌病理类型和分化程度有关 ,p21WAF1/CIP1作为一新的抑癌基因 ,其表达相当程度上依赖于 p53蛋白。     

冷休克对PG、HeLa细胞周期调控及p21WAF1／cipl蛋白表达的影响

目的 研究冷休克对p53基因突变的PG细胞，p53野生型的HeLa细胞的周期调控及p21WAF1/cipl蛋白表达的影响，方法 将PG，HeLa细胞置4℃冷冻4h，使细胞发生冷休克，用流式细胞仪分析细胞DNA含量及凋亡细胞百分率，Western blot检测p21WAF/cipl蛋白的表达。结果 冷休克诱导PG，HeLa细胞发生G2/M期周期阻滞及凋亡，p21WAF/cipl蛋白表达增高（PG以12h,HeLa以18h最为显著），冷休克诱导PG，HeLa细胞发生G2/M期周期阻滞及凋亡与p21WAF/cipl蛋白表达增高同步。结论 冷休克诱导PG，HeLa细胞发生G2/M期阻滞及凋亡，p21WAF/cipl表达的增高与细胞的p53状态无关。     

rhTNFα对鼻咽癌 CNE3细胞p53及p21WAF1/CIP1蛋白表达的影响

瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha, TNF-α)为活化的巨噬细胞分泌的一种蛋白质，具有多种生物活性，其细胞抑制效应（ cytostatic effect）可能由于上调 WAF1表达水平所致 [1， 2]。 p21WAF1/CIP1（简称为 WAF1）与细胞周期抑制蛋白 CIP1完全相同 [3]，能将 DNA失常的细胞阻滞于 G1期进行修复或使之凋亡，其 DNA的启动子区含有一个 p53结合点，受野生型 p53基因（wtp53）调控。我们曾将 wtp53基因导入鼻咽癌细胞株 CNE3[4]并进行裸鼠致瘤抑制实验 [5]，结果表明导入 wtp53基因有明显抑制移植瘤生长作用。现在此基础上进一步研究 CNE3裸鼠移植瘤经注射 TNF-α处理后抑瘤基因 p53及 WAF1表达的变化，为阐明这 3种抑瘤物质的相互作用机理提供实验依据。     

p33ING1b增强骨肉瘤细胞U2OS对足叶乙甙的敏感性

背景与目的作为一个新的抑癌基因,ING1与p53有许多相似的生物学功能,如细胞生长抑制、DNA修复、凋亡和化疗敏感性等.本实验目的在于研究p33ING1b对骨肉瘤细胞药物敏感性的影响并探讨其作用机制.方法瞬时转染p33ING1b进入骨肉瘤细胞株U2OS后,用足叶乙甙(etoposide,VP-16)处理24 h,然后采用台盼蓝拒染法计数活细胞数并计算细胞生长抑制率,流式细胞仪、DAPI染色等方法检测细胞凋亡率,Western blot技术检测p53、p21WAF1、MDM2和Bax蛋白的表达.结果台盼蓝染色结果表明,瞬时转染p33ING1b进入骨肉瘤细胞株U2OS后,再用VP-16处理24 h,细胞生长抑制率明显增加[(63.1±5.1)%].流式细胞计数和DAPI染色检测结果表明,细胞凋亡率明显增加(62.7%).Western blot检测结果显示,外源性p33 ING1b高表达明显提高了p53及其下游基因p21WAF1和Bax蛋白的表达水平,转染p33ING1b进入骨肉瘤细胞株U2OS后,再用VP-16处理24 h,p53、p21和Bax蛋白表达增加.在各实验组中,MDM2的蛋白表达没有明显变化.结论p33ING1b能够上调p53蛋白,并上调p53下游因子--p21WAF1和Bax的表达水平,通过p53依赖性凋亡信号通路,提高骨肉瘤细胞U2OS对VP-16的敏感性.     

p53和p21WAF1在鼻咽癌rAd-p53瘤内注射前后的表达及其与近期预后的关系

目的探讨重组人p53腺病毒(rAd-p53)瘤内注射前后鼻咽癌(NPC)组织中p53蛋白和p21WAF1蛋白的表达情况,及其与鼻咽癌近期疗效的关系。方法应用免疫组织化学法检测12例鼻咽慢性炎组织和63例确诊中晚期鼻咽癌组织的p53和p21WAF1蛋白表达情况。63例中晚期鼻咽癌随机分为2组:p53治疗组(32例):rAd-p53瘤内注射+同步放化疗;常规治疗组(31例):同步放化疗。分析两组治疗前及放疗至20 Gy时p53和p21WAF1蛋白表达情况及其与预后的关系。结果 NPC组织中p53和p21WAF1蛋白阳性表达率分别为49.21%和46.03%,和鼻咽黏膜慢性炎相比差异有统计学意义(P<0.05)。NPC组织中p53和p21WAF1蛋白表达有相关性(rs=0.556,P=0.000)。放疗前及放疗至20 Gy时,鼻咽癌p53治疗组和p21WAF1蛋白阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05);两组p53蛋白和p21WAF1蛋白阳性表达与1年无瘤生存率有关(P<0.05)。结论 rAd-p53瘤内注射后p53和p21WAF1蛋白的阳性表达可能在抑制鼻咽癌复发或转移进程中起着重要作用,并预示较好的预后。     

白血病中p21WAF1.p53的表达及其关系

目的探讨p21WAF1蛋白在白血病中的表达及白血病中p21WAF1与p53的关系;方法用免疫组化方法检测40例白血病患者骨髓中p21WAF1和p53蛋白表达;结果40例白血病患者p53蛋白表达阳性率为42.5%(17/40);p21WAF1蛋白表达阳性率为17.5%(7/40),其中慢性白血病阳性率占50%(5/10),急性白血病阳性率为6.7%(2/30).二者之间有显著性差异(P＜0.01);p21WAF1蛋白表达情况与p53表达阳性或阴性表达无明显相关(P＞0.05).结论在白血病细胞中p21WAF1的表达与分化密切相关;其表达不一定仅依赖于p53的诱导.     

p21WAF1/CIP1介导肿瘤化疗耐药机制的研究进展

<正>p21WAF1/CIP1是由细胞增殖抑制基因WAF1(wide type p53 activated factor 1)编码的21kDa的蛋白,属于Cip/Kip家族。作为1种细胞周期蛋白激酶(Cds)抑制剂,p21WAF1/CIP1与肿瘤的分化、浸润深度、增生和转移有关,具有判断肿瘤分化程度和预后的价值[1-4],与肿瘤化疗耐药机制的产生密切相关。1 p21WAF1/CIP1介导化疗耐药的作用机制1.1 p21WAF1/CIP1介导细胞周期G1停滞机制p21WAF1/CIP1是细胞周期依赖性激酶抑制蛋白(CDKs)家族中重要的调节因子,其调节细胞周期的作用途径分为p53依赖型途径和p53非依赖型途径[1-2]。     

多发性骨髓瘤患者p15、p16基因甲基化及其与预后的相关性

 目的　探讨p15、p16 基因的高甲基化与多发性骨髓瘤（MM）的发病和预后之间的关系。方法　采用巢式甲基特异性PCR法（nMSP）检测47例MM患者p15、p16基因的甲基化状态,并对患者的临床资料及预后因素进行分析。结果　47例MM患者p15、p16 基因的甲基化比例分别为59.57 %（28／47）、 57. 45 %（27／47）,两者同时存在甲基化者23 例（48.94 %）。Ⅱ、Ⅲ期MM患者p15 、p16基因甲基化率明显高于Ⅰ期患者。结论　p16 、p15 基因的高甲基化与MM的发病及预后相关。     

食管癌p53、p16、PCNA蛋白表达的临床意义

[目的]探讨p53、p16、PCNA蛋白在食管癌中的表达及临床价值。[方法] 用免疫组织化学染色SP法对50例食管癌标本进行p53、p16、PCNA蛋白测定。[结果] 50例食管癌中，p53、PCNA蛋白阳性表达均为74％（37／50），P16缺失率52％（26／50）。p16缺失与肿瘤浸润深度、淋巴结转移密切相关（P〈0．05、p〈0．01）。而p53、PCNA蛋白同时表达56％（28／50），亦与肿瘤浸润深度、淋巴结转移密切相关（P〈0．05、p〈0．01）。[结论] 食管癌p53、PCNA蛋白同时表达及p16缺失可视为危险预后因素。     

食管上皮癌变过程中CDK4、p18、p19的表达及意义

 【摘要】　目的　探讨细胞周期调控蛋白CDK4、p18、p19在食管鳞状细胞癌（SCC）发生、发展中的作用。方法　制作组织芯片,用免疫组织化学EnVision二步法对120例食管癌患者手术标本中CDK4、p18、p19的表达进行检测,并对其结果进行统计分析。结果　CDK4蛋白在正常食管上皮的表达低[28.3 %（34／120）],瘤变上皮中有所增高[32.5 %（39／120）],食管SCC中表达高[84.2 %（101／120）],且随SCC分化程度的降低而逐渐增高,SCC与正常上皮及瘤变上皮中CDK4表达阳性率差异有统计学意义（χ2＝76.004,P＜0.05;χ2＝65.897,P＜0.05）。淋巴结转移组CDK4表达率[93.88 %（46／49）]高于无淋巴结转移组[71.43 %（55／71）]（χ2＝5.860,P＜0.05）。p18、p19 蛋白在正常食管上皮组织阳性表达率分别为34.2 %（41／120）、29.2 %（35／120）,在食管瘤变上皮中表达率分别为19.2 %（23／120）、15.0 %（18／120）,在SCC中表达率分别为63.3 %（76／120）、61.7 %（74／120）,两指标在正常上皮及瘤变上皮间、瘤变上皮与SCC间、正常上皮与SCC间差异均有统计学意义（p18：χ2＝6.903、48.296、20.429,均P＜0.05;p19：χ2＝6.998、55.276、25.565,均P＜0.05）;在食管SCC中随分化程度的降低而逐渐增高。p18、p19分别与CDK4基因表达呈正相关（r＝0.696、0.630,均P＜0.05）。p18与p19二者呈正相关（r＝0.833,P＜0.05）。结论　细胞周期调控基因CDK4 、p18、p19参与食管SCC的发生、发展,其蛋白表达与食管上皮癌变密切相关。     

杠柳苷对BT_549细胞增殖的抑制作用与p16、p27表达关系的研究

背景与目的： 观察杠柳苷对人乳腺癌细胞株BT_549体外增殖抑制的作用,检测p16和p27的表达,探讨杠柳苷抑制乳腺癌细胞的可能作用机制。 材料与方法： 以不同浓度的杠柳苷(2.5、5.0、10.0 μg/ml)干预BT_549细胞,并设空白对照组,干预24、48、72 h后,分别用MTT比色法分析细胞增殖情况;流式细胞技术检测细胞凋亡与周期分布。半定量RT_PCR、流式细胞技术检测细胞p16、p27 mRNA和蛋白表达水平。 结果： 与对照组相比较,杠柳苷各实验组BT_549细胞增殖水平较对照组明显下降(P<0.01),促进细胞凋亡率明显增加(P<0.01),实验组细胞发生G0/G1期阻滞,细胞的p16、p27表达水平显著增高(P<0.01)。 结论： 杠柳苷具有抑制BT_549细胞增殖的作用,其机制可能与促进p16和p27表达水平的增高有关。     

慢性粒细胞白血病p53基因功能检测

目的：通过以ｐ２１作为标志物的功能检测方法了解慢性粒细胞白血病中ｐ５３基因功能状况。方法：采用ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ方法检测未经阿霉素诱导及阿霉素诱导后慢粒患者白血病细胞中ｐ５３及ｐ２１蛋白表达。结果;对２５例慢性患者白血病细胞进行了检测,显示５例ｐ５３基因功能异常,其中１例为慢性期,显示ｐ５３基因为野生型,但无功能;１例加速期;３例急变期,分别为急粒变,急单变和多克隆急变,在急淋变中未见。     

涎腺黏液表皮样癌中p16、p15的表达及相关性研究

[目的]研究p16、p15在正常涎腺组织和黏液表皮样癌中的表达,探讨其在黏液表皮样癌发生、发展中的作用及临床意义.[方法]应用免疫组化S-P法检测10例正常涎腺组织、45例黏液表皮样癌中p16、p15蛋白的表达.[结果]黏液表皮样癌中p16、p15的阳性表达率分别为62.2%、73.3%,显著低于其在正常涎腺组织中的表达(100%)(P＜0.05),且随肿瘤分化程度的降低而递减并具有显著性差异,其中p16的阳性率与淋巴结转移有关.p16、p15两基因在黏液表皮样癌的表达中呈显著相关性(P＜0.05).[结论]p16、p15的失表达与黏液表皮样癌的发生和发展关系密切,p16基因的异常可能是更为直接的因素.     

胃癌组织p73基因突变与p21waf2蛋白的检测分析

[目的]探讨胃癌组织中p73基因突变与p21waf2蛋白表达的相关性及其在胃癌发生、发展中的作用.[方法]采用PCR_SSCP及免疫组织化学法,检测60例胃癌新鲜手术标本中癌组织和相应的胃正常粘膜组织p73突变及p21waf2蛋白的表达.[结果]p73突变检出率,在60例胃癌组织中为53.33%(32/60),在相应的胃正常粘膜组织中为1.67%(1/60),差异有显著性(P<0.01);其中25例有淋巴结转移者,p73突变检出率为92.00%(23/25),无淋巴结转移者为25.71%(9/35),差异有非常显著性(P<0.005).p21waf2蛋白检测阳性率,在60例胃癌组织中为33.33%(20/60),在相应的胃正常粘膜组织中为86.67%(52/60),有显著性差异(P<0.01);其中25例有淋巴结转移者,p21waf2蛋白阳性率为4.00%(1/25),无淋巴结转移者为53.45%(19/35),差异有显著性(P<0.01).[结论]胃癌组织中,p73基因突变与p21waf2蛋白低表达有显著的相关性,并与胃癌的发生和胃周淋巴结转移相关,其临床意义值得进一步探讨.     

卵巢癌ras及p16基因异常表达的临床研究

目的：探讨ｒａｓ癌基因及ｐ１６抑癌基因与卵巢癌生物学行为的关系。方法：应用Ｓ－Ｐ免疫组化法及聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术，检测了３６例卵巢癌，２０例卵巢良性肿瘤及１０例正常卵巢ｒａｓ、ｐ１６基因及表达状况。结果：卵巢癌及对照组ｒａｓ癌基因无突变及缺失。卵巢癌ｒａｓ ｐ１６基因阳性表达８０．６％，卵巢良性肿瘤仅有２５％弱阳性表达，正常卵巢阴性表达，Ｐ〈０．０１，Ｐ〈０．００１     

p16、p27蛋白在子宫颈癌中的表达及临床意义

[目的]研究p16、p27蛋白在子宫颈癌发生发展中的作用及其临床意义。[方法]采用单克隆抗体SP免疫组化技术对54例子宫颈癌和20例正常宫颈组织进行p16、p27蛋白表达检测。[结果](1)p16、p27蛋白在子宫颈癌与正常宫颈组织中的阳性表达分别为48.15%、95%和40.7%、100％，其差异有极显著性（P＜0.01)。（2）p16蛋白在中、高分化组中的表达率高于低分化组，差异具显著性（P＜0.05)，p16、p27表达明显与组织分化程度相关（P＜0.01)。（3）p16、p27表达与盆腔淋巴结转移及预后有关（P＜0.05)。[结论]p16、p27蛋白表达可作为子宫颈癌恶性程度的指标，可为正确估计宫颈癌的预后、指导基因治疗提供依据。