联合检测胸水细胞p53、p16和K-ras基因突变对于肺癌的诊断价值

目的:研究胸水细胞p53、p16和K-ras基因突变及三者联合检测对肺癌的诊断价值。方法:研究组为54例伴有恶性胸水的肺癌患者,对照组为28例出现胸水的结核性胸膜炎和其他胸膜炎患者。常规抽取胸水,提取胸水细胞DNA,采用PCR-SSCP方法,分别对p16基因和K-ras基因的第1、2外显子以及对p53基因第7、8外显子进行突变分析。结果:研究组p16基因突变率为33.3%,而对照组只有7.1%,明显低于肺癌患者,差异有统计学意义(P<0.05);研究组K-ras基因突变率(31.5%)也明显高于对照组(3.7%),差异有统计学意义(P<0.05);研究组p53基因突变率为40.7%,而对照组只有7.1%,明显低于肺癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。联合应用p53、p16和K-ras基因突变检测可将胸水细胞中肺癌阳性检出率提高至70.4%。结论:p53、p16和K-ras基因突变对良恶性胸水鉴别诊断具有重要价值,三者联合应用可提高肺癌的诊断率。     

痰P16基因甲基化及K-ras基因突变联合检测对周围型肺癌的诊断价值

目的探讨痰脱落细胞P16基因甲基化及K-ras基因突变联合检测对周围型肺癌的诊断价值。方法选择49例周围型肺结节患者的痰液及术后病理标本作为研究对象,同时以15例正常人作为对照组,应用甲基化特异性PC R(m ethylation-specific PC R,M SP)和PC R-测序法检测其P16基因甲基化及K-ras基因突变情况。结果痰脱落细胞及肿瘤标本P16 M SP阳性率分别为51.2%(21/41)和58.5%(24/41),两者比较差异无统计学意义(χ2=0.4432,P>0.05),但明显高于良性肺结节及正常人(χ2分别为4.056、6.513及5.677,P<0.05);痰脱落细胞及肿瘤标本K-ras基因突变率为17.1%(7/41)和22.0%(9/41),两者比较差异无统计学意义(χ2=0.0038,P>0.05),而良性肺结节及正常人痰脱落细胞和肿瘤标本未检测到K-ras基因突变。如果以痰脱落细胞P16M SP阳性和K-ras基因突变分别作为筛选肺癌的标准,则对周围型肺癌诊断的敏感度和阴性预测值P16 M SP阳性为51.2%和25.9%,K-ras基因突变为17.1%和19.0%;而P16 M SP阳性及K-ras基因突变联合检测对肺癌的敏感度和阴性预测值分别上升为61.0%和30.4%。结论痰脱落细胞P16基因甲基化及K-ras基因突变联合检测可以提高周围型肺癌的诊断效率,对周围型肺癌的诊断具有一定价值。     

结直肠癌MICA基因的表达与p53K-ras基因突变的关系研究

目的:分析结直肠癌MICA基因的表达与p53、K-ras基因突变的关系.方法:回顾性分析我院2014年3月至2016年3月收治的66例结直肠癌患者的临床资料,应用半定量PCR-SSCP技术,对癌组织mdr1基因表达量与p53、K-ras进行检测,并分析结直肠癌MICA基因表达与p53、K-ras基因突变间的相互关系.结果:经研究发现,MICA表达与结直肠癌患者肿瘤部位、年龄、性别无相关性(P>0.05).于66例患者中,22例淋巴结转移者的MICA平均表达量明显高于淋巴结未转移者,差异具有统计学意义(P<0.05).8例K-ras、p53基因联合突变者MICA基因平均表达量高于非联合突变者,差异具有显著统计学意义(P<0.05),12例K-ras基因突变者MICA平均表达量稍高于未突变者,但比较差异无统计学意义(P>0.05),16例p53基因突变者MICA平均表达量显著优于p53基因未突变者,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:MICA基因高表达已成为了结直肠癌的关键检测指标,而p53、K-ras基因与其高表达具有相关性.     

P16基因甲基化检测对恶性胸腔积液的诊断价值

目的 检测胸腔积液中沉渣细胞p16基因启动子的甲基化状态,探讨p16基因甲基化检测在良、恶性胸腔积液鉴别诊断中的意义.方法 利用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测66例原因不明的胸腔积液患者胸水沉渣细胞p16基因的甲基化状态.结果 66例胸腔积液患者中36例确诊为恶性胸腔积液,30例为良性胸腔积液.恶性胸腔积液沉渣细胞p16基因启动子甲基化阳性率为69.4%(25/36);在良性胸腔积液中为13.3%(4/30);经统计学检验良、恶性胸腔积液组胸水沉渣细胞的p16基因甲基化阳性率差异有统计学意义(x2=20.915,P<0.01).恶性胸腔积液组沉渣细胞的p16基因异常甲基化阳性率明显高于良性胸腔积液组.恶性胸腔积液组沉渣细胞p16基因甲基化检测的敏感性为69.4%,特异性为86.7%,准确性为77.3%.恶性胸腔积液沉渣细胞p16基因甲基化阳性表达与肿瘤的组织细胞类型及细胞分化程度无关(P均>0.05).结论 MSP检测胸腔积液中沉渣细胞p16基因启动子的甲基化状态,是一种有潜力的鉴别胸腔积液良、恶性的辅助诊断方法.     

胸水P_(53)基因测序在肺癌诊断中价值的探讨

目的 :评价胸水P53基因测序在肺癌诊断中的价值。方法 :对 46例肺癌合并胸腔积液患者的活检组织标本、胸水标本进行P53基因测序 ,并用 30例非癌性胸水标本作对照。结果 :在 46例肺癌合并胸腔积液患者中 ,活检组织P53基因突变率为41 30 % ,胸水P53基因突变率为 32 6 0 % (P >0 0 5 ) ,而非癌性胸水P53基因突变率仅为 3 33% (P <0 0 0 5 )。结论 :胸水P53基因测序对于肺癌的诊断 ,恶性胸腔积液的鉴别诊断有一定的辅助诊断价值     

脱落细胞癌基因检测在肺癌诊断中的意义

目的用分子生物学检测手段寻求敏感的肺癌诊断新方法.方法应用多聚合酶链反应(PCR)及聚合酶链式反应-单链构型多态(PCR-SSCP)银染技术,检测56例肺癌和36例肺部良性疾病患者肺泡灌洗液和(或)胸水细胞的p53、p16及K-ras基因的突变情况,将检测结果与组织学、脱落细胞形态学诊断结果进行对比分析.结果肺癌患者肺泡灌洗液和(或)胸水脱落细胞形态学检测敏感性为57%,阴性预计值(NPV)为60%;p53阳性表达的敏感性为68%,NPV为61%;p16阳性表达的敏感性为46%,NPV为52%;K-ras阳性表达的敏感性为36%,NPV为83%;p53、p16及K-ras阳性表达的敏感性为82%,NPV为74%;p53、p16及K-ras分子生物学和脱落细胞形态学联合检测敏感性提高至93%(P<0.05),NPV为87%(P<0.05).24例脱落细胞形态学假阴性标本中经分子生物学检测阳性16例(67%).在56例肺癌中,其中有22例同时收取肺泡灌洗液细胞和胸水细胞,结果为细胞病理学检测敏感性由57%提高到68%,细胞病理学检测加分子生物学检测敏感性由93%提高到95%.结论脱落细胞癌基因的分子生物学检测可增加脱落细胞形态学检测的敏感性,提高脱落细胞形态学的诊断价值.     

痰标本检测P53和K—ras基因突变在非小细胞肺癌早期诊断中的价值

目的：研究P53和K-ras基因在非小细胞肺癌（NSCLC）患痰中突变率及其在NSCLC早期诊断中的意义。方法：研究组为经病理证实的非小细胞肺癌患45例，对照组为明确诊断的慢支、 肺 结核等良性病变患15例。两组患均留取痰标本，痰处理后行PCR扩增，扩增物变性后聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）电泳，溴化锭中染色，紫外灯下观察。统计突变与未突变例数,x^2检验，分析结果。结果；研究组和对照组的 P53基因突变率分别为48．8％和20％（P＜0．05），K-ras基因突变率分别为55．6％和26．7％（P＜0．05），P53和K－ras基因同时突变率分别为5％和0（P＜0．05）。结论：研究组P53和K－ras 基因突变率明显高于对照组，研究组P53和K－ras基因同时突变率显高于对照组。P53和K-ras基因突变可以作为NSCLC的早期诊断指标，两联合检测意义更大。     

单链构象多态性分析K-ras和p16基因突变

目的:研究大鼠肺癌组织K-ras和p16 基因突变情况. 方法: 运用聚合酶链反应-单链构象多态性 (PCR-SSCP) 技术分析肺癌组织K-ras和p16 基因突变.结果:未发现正常大鼠肺组织中K-ras和p16 基因突变, 在肿瘤组织中 K-ras和p16均有2例突变发生.结论: K-ras和p16 基因突变与肺癌发生存在一定的相关性.     

肺癌患者痰、BALF及肺癌组织中检测K-ras和p53基因突变的诊断价值

目的 探讨K-ras和p53基因突变在肺癌患者的痰、支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺癌组织等3种标本中的检出和临床应用价值.方法 以组织病理学证据作为肺癌诊断的标准,将207名患者分为肺癌组(101例)和良性肺病组(106例).采用聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性分析法(PCR-RFLP)和聚合酶链反应结合单链构象多态性分析法(PCR-SSCP)分别检测痰、BALF及肺癌组织等3种标本中K-ras和p53基因突变情况,同时检测痰、BALF中的脱落细胞进行比较.结果 3种标本中K-ras和p53基因突变率在肺癌组明显高于良性肺疾病组(P＜0.05);基因突变率高于细胞学阳性率;基因突变率在肺癌组织中最高,在痰中最低,但差异不具显著性.2种基因突变均与吸烟指数的关系最密切;K-ras基因突变率在腺癌中最高,p53基因突变率在鳞癌中最高,但在不同分期的肺癌中分布无差异.结论 K-ras基因激活和p53基因失活在肺癌的发生中是常见事件,将它们作为肿瘤标志物并联合细胞学进行检测,可明显提高肺癌的诊断率.     

直接测序法检测结肠癌患者K-ras基因的灵敏度及其临床价值分析

目的 探讨结肠癌患者应用直接测序法测定K-ras 基因的灵敏度及其临床价值。方法 选取我院2016 年2 月~2017 年4 月收治的结肠癌患者80 例，随机分为研究组和对照组两组，研究组患者通过直接测序法、对照组患者通过sanger 测序法检测患者体内的K-ras 基因突变情况，分析K-ras 基因突变率与患者肿瘤大小、肿瘤部位、患者年龄等一般资料之间的相关性。结果 研究组患者测定K-ras 基因突变的灵敏度明显高于对照组（P<0.05），肿瘤直径在5 cm 以上患者的K-ras 基因突变率明显低于直径在5 cm 以下的患者（P<0.05）研究组检出率与患者肿瘤部位及分化程度、患者年龄等存在相关性。结论 应用直接测序法检测结肠癌患者K-ras 基因的突变情况具有较高的灵敏度，直接测序法的检出率与患者的肿瘤大小、肿瘤分化程度以及患者的年龄等存在较强的相关性，对于临床上结肠癌等恶性肿瘤疾病的诊断具有较强的应用价值，值得临床上广泛推荐使用。     

应用PCR-SSCP方法检测胸水细胞中p53基因突变鉴别良恶性胸水

目的 探讨胸水细胞中ｐ５３基因突变的检测对鉴别良恶性胸水的价值。方法 应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对３４例肺癌患和１６例良性肺部疾病患的胸水细胞中的ｐ５３基因突变情况进行了检测,同时进行了胸水的瘤细胞学检查和部分肺癌组织的ｐ５３基因突变检测,并将结果进行了比较。结果 在４７．０％９１６／３４）的肺癌患的胸水细胞中检测到ｐ５３基因的突变,在３７．５％（６／１６０的瘤细胞学检查阴性的肺癌患的胸水细     

p16基因第二外显子纯合性缺失检测对肺癌所致胸液的临床价值

目的　探讨p16基因第二外显子纯合性缺失检测对肺癌所致胸腔积液的临床价值。方法　用PCR技术检测 31例肺癌胸液及 21例结核性胸腔积液中p16基因第二外显子纯合性缺失的情况,同时送检胸液脱落细胞学作为对照分析。结果　表明所检 21例结核性胸液无p16基因第二外显子纯合性缺失, 31例肺癌胸液标本中有 12例出现第二外显子纯合性缺失,缺失率为 38 7% ( 12 /31 )。同时 16例脱落细胞学检测阳性,阳性率为 51 62% (16 /31)。在 15例脱落细胞学阴性中,有 6例存在p16基因第二外显子纯合性缺失,两者联合检测阳性率提高至 70 97% (22 /31),明显高于单独检测(P<0 05)。另外,p16基因第二外显子纯合性缺失与肿瘤细胞的组织学类型、转移、预后相关。本组研究表明鳞癌出现p16基因第二外显子缺失的机率虽高于腺癌但差异无显著性;而有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(P<0 005)。同时,在 12例p16基因纯合性缺失的患者中有 9例已发生一处以上的肺外转移,预后极差。结论　检测胸液p16基因第二外显子纯合性缺失对肺癌胸腔积液的诊断有重要价值,且特异性高;与脱落细胞学联合检测,可补充和提高其诊断阳性率,对鉴别癌性和结核性胸腔积液及判断肺癌的预后有一定的参考意义。     

痰液中多基因检测在肺癌诊断中的价值

目的：探讨P53,K－ras,P15,P16基因在肺癌组织及相应痰液中的改变情况及其联合检测早期诊断肺癌的价值。方法：应用PCR－SSCP－银染法检测59例肺癌和14例肺良性疾病患者活检组织及相应痰液中P53基因第5－8外显子突变情况;应用PCR－RFLP法对25例肺腺癌和14例肺良性疾病组织及及相应痰液中K－ras基因突变进行了检测;并应用PCR法检测了所有肺癌和良性疾病组织及相应痰液中P15、P16基因纯合缺失情况。结果：肺癌组织中P53,P15、P16基因改变频率分别为37．3％,11．9％,23．8％。而良性病变组织中仅1例出现P16基因缺失。肺癌组织和相应痰液中P53,K-ras,P15,P16等基因的突变基本一致,P＞0．05。对上述基因突变与吸烟关系的分析显示,吸烟者出现P53基因和K-ras基因突变的频率明显高于非吸烟者,P＜0．01。我们还对4种肿瘤相关基因联合检测在肺癌早期诊断中的价值进行了评估,表明4种基因联合检测敏感度为78％,明显高于单一基因（以阳性率最高的P53为例）的敏感度37.3%。结论：P53基因K－ras基因和P15,P16基因在肺癌组织中突变率相对较高;多基因联合检测在肺癌早期诊断中的价值明显优于单基因的检测;痰液多基因的联合检测可能有助于肺癌的早期诊断。     

胸腔积液273例临床分析

目的　探讨胸腔积液的病因分布及癌胚抗原的测定对鉴别良恶性胸腔积液的参考价值。方法　回顾性分析 2 73例胸腔积液的临床资料。结果　良性胸液 12 9例 ,其中结核性 5 5例 ( 4 2 .64 % ) ,心功能不全 2 7例 ( 2 0 .93 % ) ,糖尿病及其合并症 12例( 9.3 % ) ,其他 3 5例。恶性胸腔积液 14 4例 ,其中原发性支气管肺癌 114例 ( 79.17% ) ,乳腺癌 18例 ( 12 .5 % ) ,其他 12例。良恶性两组胸腔积液CEA水平测定 ,差异显著 (P <0 .0 1)。结论　原发性支气管肺癌是导致恶性胸腔积液的主要原因 ;胸液CEA水平的测定不失为初步鉴定良恶性胸液的方法之一。     

端粒酶、p53基因检测在恶性胸水中的应用研究

目的通过对胸水标本进行端粒酶和p53基因变异检测及分析,探讨两项检测鉴别良、恶性胸水的临床价值。方法采用端粒酶重复序列扩增法(TRAP)和PER-SSCP法对胸水标本进行端粒酶和p53基因变异检测及分析,在端粒酶检测结果中,以出现6条间隔6bp的梯形条带者为阳性,少于6条间隔6bp的梯形条带者为阴性。胸水中出现与静脉血白细胞电泳结果不同的电泳区带者为p53基因变异,常规胸水脱落细胞查到癌细胞者为阳性。结果 64例实验组胸水端粒酶检测阳性率为84.38％(54/64),对照组为5％(2/40),实验组与对照组比较有极其显著性差异(x~2=59.25,P<0.01),实验组64例患者p53基因5、6、7、8外显子基因变异检测结果,总阳性率为42.19％(27/64),对照组为0。p53基因变异和端粒酶两项联合检测在实验组中的阳性率为90.06％,高于单项检测端粒酶和p53的阳性率(84.38％和42.19％),与病理检查组(阳性率64.06％)比较有极其显著性差异(x~2=13.38,p<0.01)。结论 p53基因变异和端粒酶两项联合检测可以提高恶性胸水的诊断率。     

胸水细胞端粒酶活性检测对良恶性胸腔积液的鉴别诊断价值

目的：探讨胸水细胞端粒酶活性对良、恶性胸腔积液的鉴别诊断价值。方法：用改良的PCR-ELISA法检测37例恶性、32例良性胸水细胞端粒酶活性,并与胸水细胞学、癌胚抗原（CEA）诊断结果进行比较。结果：37例恶性胸腔积液中有26例端粒酶活性阳性（26/37）,阳性率为70.27%,高于良性胸腔积液中端粒酶海性表达（2/32,P＜0.01);端粒酶活性检测诊断恶性胸水敏感性为70.27%,特异性为93.75%,与胸水细胞学诊断符合率为54.05%;其敏感性高于胸水CEA诊断结果（敏感性为51.35%)。结论：胸水细胞端粒酶活性检测作为细胞学检查的辅助手段能提高恶性胸水的诊断率,有助于良、恶性胸腔积液的鉴别诊断。     

癌性胸腔积液K—ras基因突变检测及临床应用

目的 探讨Ｋ－ｒａｓ基因突变检测用于癌性胸腔积液的诊断价值。方法 采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术对５８例生及３０例结核性胸积液进行Ｋ－ｒａｓ基因突变分析。结果：结核性胸液未发现突变，癌性胸液有１７例突变阳性，突变率２９．３％，其中腺癌所致胸腔积液突变率为３４．１％（１４／２１），鳞癌１６．７％（２／１２）。１７例Ｋ－ｒａｓ基因突变阳性的胸液中，１４例肉眼生，明显高于非血性胸液组，Ｐ〈０．０５。１８例未找