共表达ETEC CFA／I、CS6福氏痢疾减毒株与单独表达CFA／I及CS6混合疫苗株的免疫原性比较

目的以减毒志贺菌为载体，研制肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC)多价疫苗可以有效防治细菌性腹泻。方法以共表达肠毒素大肠杆菌定居因子CFA/I和CS6的重组减毒福氏痢疾疫苗株FWL01(pZCF16)和两种混合的表达CFA/I的FWL01(pZHY21)和表达CS5的FWL01(pZLG6)减毒福氏痢疾疫苗株，分别以同等剂量口服免疫BMLB／c小鼠，比较二者肠毒素大肠杆菌定居因子的免疫效果。结果免疫BMLB／c小鼠全部产生了抗CFA/I和CS6的特异性血清抗体IgG和分泌型抗体sIgA，共表达CFA/I、CS6的减毒福氏痢疾菌FWL01(pZCF16)的免疫原性与混合的FWL01(pZHY21)和FWL01(pZLG6)相似或稍高。结论在同一菌株可以表达多种菌毛，构建。ETEC多价疫苗有效可行。     

福氏志贺菌毒力蛋白IpaC的表达、纯化及免疫活性鉴定

目的表达、纯化福氏志贺菌毒力蛋白IpaC并对其免疫活性进行鉴定。方法将含有ipaC基因的pET32a．ipaC表达质粒载体转入大肠杆菌BL21（kDE3）中表达，表达产物进行SDS—PAGE鉴定，并采用QIA expressionist^TM蛋白纯化系统纯化IpaC蛋白；用纯化的蛋白免疫动物获得抗血清，Western-blot检测抗原的免疫活性。结果诱导后的表达产物经SDS—PAGE发现有一相对分子量约为63000的条带，其含量约占总蛋白量的11％，对融合蛋白进行纯化纯度可达90％以上，抗His的抗体Western-blot分析，发现特异性区带出现在63000u处，证明该蛋白是所要表达的融合蛋白，制备的免疫血清可与Ipac发生特异免疫反应。结论pET32a-ipaC重组表达质粒转入大肠杆菌后，可稳定、高效地表达毒力蛋白IpaC，且纯化后的蛋白具有免疫活性。     

表达CS3菌毛和CT—B抗原双价疫苗候选株的构建

肠毒素性大肠杆菌（ＥｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ，ＥＴＥＣ）是引起幼儿腹泻和旅游者腹泻的重要致病菌。本研究的目的是构建既具有抗菌能力又有中和毒素能力的工程菌株。本研究以Ｂｌｕｅ－ｓｃｒｉｐｔ质粒为载体构建了表达ＣＳ３和ＣＴ－Ｂ的双价重组抗原的克隆株。口服免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠和肌肉注射免疫家兔，该重组菌株可以诱发抗ＣＴ－Ｂ和抗ＣＳ３的双重免疫应答，为构建多价腹泻疫苗株奠定了基础。     

结核分枝杆菌Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6融合基因DNA疫苗株的构建及免疫原性研究

目的构建结核分枝杆菌Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA候选疫苗株并鉴定,初步评价其免疫原性。方法从GenBank中获取M. tuberculosis H37Rv的Ag85B、ESAT6和Hsp65基因序列优化后合成,经PCR、酶切、连接与真核表达载体PVAX1重组,构建重组质粒PVAX1-Hsp65-Ag85B和PVAX1-Hsp65-ESAT6。重组质粒体外转染验证其表达后,免疫C57BL/6小鼠,检测特异性细胞免疫应答反应。结果 Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA疫苗株在体内外均能表达,Western blot结果显示,DNA疫苗株体外转染293T细胞,24 h可检测到特异性蛋白条带,48 h蛋白表达量达最高。小鼠体内实验表明,Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA疫苗株均可激发较强的免疫反应,可诱导机体产生分泌高水平TNF-α的Th型免疫应答,且Hsp65-Ag85B优于Hsp65-ESAT6。结论 Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA疫苗株均具有较强的免疫原性,呈Th型细胞介导的免疫应答,推测Hsp65-...     

两种hIL-6/GM-CSF融合蛋白基因的构建、表达及活性比较

目的 :构建及表达具有hIL 6和hGM CSF双重生物学活性的hIL 6 /GM CSF融合蛋白分子。方法 :应用PCR技术对hIL 6和hGM CSF的基因分别加以改造 ,同时在两者之间加上连接肽序列 (G G S G S) 3 ,克隆PCR产物 ,并构建成克隆有两种融合蛋白基因的pBV2 2 0表达质粒 ,两种融合蛋白分别是 :IL 6 (1～ 184 ) GM CSF(9～ 12 7) (简称IG1)和IL 6 (2 4～ 184 ) GM CSF(9～ 12 7) (简称IG2 )。将表达质粒分别导入E .coliBL 2 1中诱导表达。通过QSepharoseHP离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化目的蛋白。使用hIL 6依赖细胞株B9和hGM CSF依赖细胞株TF1,通过MTT比色法测定融合蛋白的生物学活性。结果 :对两种融合蛋白基因的测序结果表明 ,其序列与理论设计完全一致。表达质粒在E .coliBL 2 1中均得到高效表达 ,表达的融合蛋白均占总蛋白含量的 2 5 %以上 ,表达产物以包涵体的形式存在 ,通过QSepharoseHP离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化及复性后 ,获得两种目的蛋白 ,其纯度均达到 95 %以上。活性测定结果表明 ,两种融合蛋白均具有较高的hIL 6和hGM CSF的双重生物学活性。结论 :获得了具有较高纯度和双重生物学活性的hIL 6 /GM CSF融合蛋白     

四种hGM-CSF/IL-6融合蛋白的基因构建、表达及活性比较

目的 构建及表达具有hGM-CSF和hIL-6双重生物学活性的hGM-CSF／IL-6融合蛋白分子。方法 应用PCR技术对hGM-CSF和hIL-6的基因分别加以改造，同时在二者之间加上连接肽序列(G-G-S-G-S)3，克隆PCR产物，并构建成克隆有4种融合蛋白基因的pBV220表达质粒，4种融合蛋白分别是GM-CSF(9～127)-IL-6(29～184)(简称GII)、GM-CSF(9～127)-IL-6(1～184)(简称GL2)、GM-CSF(1-127)-IL-6(1—184)(简称GI3)、GM-CSF(9-127)-IL-6(24～184)(简称GI4)，表达质粒分别导入E．coli BL-21中诱导表达。通过Q Sepharose HP离子交换柱和Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白。使用hGM—CSF依赖细胞株TF1和hIL-6依赖细胞株B9通过MTT法测量融合蛋白的生物学活性。结果 对4种融合蛋白基因的测序结果表明，其序列与理论设计完全一致，表达质粒在E．coli BL-21中均得到高效表达，表达的融合蛋白均占到总蛋白含量的30％以上，表达产物以包涵体的形式存在，通过Q Sepharose HP离子交换柱和Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化及复性后获得4种目的蛋白，其纯度均达到95％以上。活性测定结果表明4种融合蛋白均具有较高的hGM-CSF和hIL-6的双重生物学活性。结论 获得了具有较高纯度和双重生物学活性的GM-CSF／IL-6融合蛋白。     

非小细胞肺癌MSCT征象与CD44v6、FHIT及p16表达间的临床意义

目的探讨非小细胞肺癌的MSCT征象与其生物行为,CD44v6、FHIT及p16表达间的关系。方法43例非小细胞肺癌病人术前一周内行MSCT平扫及增强扫描。所有的标本均经10%福尔马林液固定,石蜡包埋,采用SP(streptavidin peroxidase)法检测CD44v6,FHIT及p16的表达。实验数据经SPSS11.0统计软件包进行统计学处理。结果1.MSCT对诊断临近胸膜受侵及淋巴结转移与手术病理有较好的一致性。2.CD44v6在肺癌和癌旁组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。在MSCT上表现为淋巴结转移和胸膜侵犯组与其对照组有显著性差异(P<0.05)。3.p16和FHIT在癌旁组织中的阳性表达明显高于肺癌组织,其差异具有统计学意义(P<0.05)。p16阳性表达率在MSCT上表现为淋巴结转移阳性组和周围胸膜侵犯阳性组,与相应阴性组相比差异具有统计学意义。FHIT在MSCT胸膜侵犯组与相应阴性组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论1.CD44v6的异常高表达与NSCLC的临近结构侵犯和淋巴结转移具有相关性,提示其在肺癌的浸润和转移机制中起重要的作用。2.p16与FHIT在NSCLC中常表达缺失,作为两个抑癌基因,其下调表达参与了NSCLC的发生和发展过程。3.结合非小细胞肺癌的MSCT的表现及CD44v6、p16及FHIT的异常表达对选择理想的治疗方案具有重要的意义。