核因子-κB在硫代乙酰胺所致急性肝损伤中的作用及机制研究

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)在硫代乙酰胺(TAA)所致急性肝损伤中的作用及机制.方法 雄性Wistar大鼠78只分为正常组18只,TAA造模组30只及脯氨酸二硫代氨基甲酸酯(PDTC)预处理组30只.PDTC预处理组于建立急性肝损伤模型前1 h腹腔内注射PDTC 100 mg/kg.然后,三组大鼠分别于6、24、48 h处死,TAA造模组及PDTC预处理组每时间点各取10只大鼠,正常组每时间点各取6只大鼠.测定大鼠血浆内毒素、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平,RT-PCR方法检测肝脏组织细胞间粘附因子-1(ICAM-1)mRNA表达,取肝脏行病理学及免疫组化检测NF-κB活性.结果 ①TAA造模组造模后6、24和48 h NF-κB细胞阳性率分别为(87.11±8.23)%、(78.55±6.82)%和(74.27±6.26)%,与正常组相比差异均有统计学意义[(4.64±1.82)%、(4.55±1.67)%和(4.91±2.12)%,P值均＜0.01].PDTC预处理组各时间点NF-κB细胞阳性率分别为(31.88±4.14)%、(27.58±3.44)%和(26.67±3.88)%,与TAA造模组相比阳性率明显降低(P值均＜0.01).②TAA造模组各时间点血浆内毒素和TNF-α水平含量明显较正常组升高(P值均＜0.01),而PDTC预处理组则较TAA造模组降低(P值均＜0.01),但较正常组有所增高(P值均＜0.01).③TAA造模组各时间点IL-6水平较正常组显著升高(P值均＜0.01).PDTC预处理组各时间点IL-6水平较TAA造模组明显降低(P值分别＜0.05和0.01);24和48 h较正常组增加(P值均＜0.01).④TAA造模组各时间点ICAM-lmRNA表达较正常组显著升高(P值均＜0.01).PDTC预处理组各时间点ICAM-lmRNA表达较TAA造模组明显降低(P值均＜0.01).但较正常组增高(P值均＜0.01).⑤TAA造模组各时间段可见肝组织坏死,PDTC预处理组各时间段肝组织病理改变较TAA造模组同时间点明显减轻.结论 NF-κB在TAA所致急性肝损伤中通过促进TNF-α、IL-6及ICAM-1的表达而发挥作用,加重肝损伤.     

二苯乙烯苷对急性酒精性肝损伤小鼠炎症相关因子的影响

目的:研究二苯乙烯苷(tetrahydroxystilbene glucoside,TSG)对急性酒精性肝损伤小鼠炎症相关因子的影响.方法:将昆明种小鼠随机分为正常对照组、模型组、TSG低剂量组(30mg/kg)、TSG高剂量组(60mg/kg)、水飞蓟宾组(50mg/kg);采用白酒灌胃的方式建立小鼠急性酒精性肝损伤模型.光学显微镜观察小鼠肝脏病理变化,采用ELISA法检测各组小鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α、白介素1β(interleukin1β,IL-1β)、IL-6的含量,鲎试剂终点显色法检测小鼠血浆内毒素水平,Real-timePCR法检测肝脏组织TNF-α和iNOS基因表达,Westernblot法检测肝脏组织IκB-α磷酸化水平和NF-κB核移位程度.结果:与正常对照组比较,模型组小鼠肝索排列紊乱,肝脏出现明显的脂肪变性,血清TNF-α、IL-1β、IL-6的含量和血浆内毒素水平均显著升高,TNF-α和iNOS基因表达上调,IκB-α磷酸化水平升高和NF-κB核移位增多,差异具有统计学意义[TNF-α:128.5pg/mL±20.7pg/mLvs45.2pg/mL±14.2pg/mL;IL-1β:71.8pg/mL±9.1pg/mLvs33.1pg/mL±9.5pg/mL;IL-6:59.8pg/mL±13.1pg/mLvs23.7pg/mL±5.9pg/mL;endotoxin:0.35EU/mL±0.09EU/mLvs0.11EU/mL±0.03EU/mL.TNF-α mRNA:1.33±0.11vs0.63±0.10;iNOS mRNA:0.85±0.09vs0.40±0.07;phospho-IκB-α:2.02±0.14vs0.92±0.19;NF-κB P65:1.10±0.14vs0.44±0.13,P<0.05或P<0.01];给予TSG后,小鼠肝脏组织脂肪变性减少,各组小鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6的含量和血浆内毒素水平均明显降低;肝脏组织TNF-α和iNOS基因表达下调,同时IκB-α磷酸化水平和NF-κB核移位减少,差异具有统计学意义[TSG60mg/kg group:TNF-α:65.9pg/mL±13.9pg/mLvs128.5pg/mL±20.7pg/mL;IL-1β:43.0pg/mL±7.1pg/m Lvs 71.8pg/mL±9.1pg/mL;IL-6:36.3pg/mL±10.1pg/mL vs 59.8pg/mL±13.1pg/mL;endotoxin:0.20EU/mL±0.05EU/mL vs 0.35EU/mL±0.09EU/mL;TNF-α mRNA:0.79±0.09vs1.33±0.11;iNOS mRNA:0.53±0.10vs0.85±0.09;phospho-IκB-α:1.35±0.32vs2.02±0.14;NF-κB P65:0.62±0.05vs1.10±0.14,P<0.05或P<0.01].结论:TSG对小鼠急性酒精性肝损伤有良好的保护作用,其机制可能是通过抑制内毒素引起的Kupffer细胞激活,进而抑制下游核因子NF-κB的激活,减少炎性反应级联放大的触发机制,从而产生肝功能保护作用.     

急性胰腺炎大鼠肝脏核因子κB活化与肝损伤的关系

目的:观察急性胰腺炎大鼠肝脏中核因子κB(nuclear factorkappa B,F-κB)的活化及其与肝损伤之间的关系.方法:Wistar大鼠72只,随机分为3组:急性胰腺炎组(AP),急性胰腺炎PDTC处理组(APP),假手术组(SO).分别于术后3,,12,4 h检测肝组织中NF-κB活性、血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、淀粉酶(AMS)水平,并观察肝脏及胰腺病理改变.结果:SO组术后未见NF-κB活化,血浆ALT及肝脏病理无显著变化.与SO组相比,P组术后3～6 h NF-κB活性显著增加(3.13±0.57 vs 0.71±0.10,.92±0.26 vs 0.67±0.11,＜0.01),血浆ALT在3～24 h也显著高于SO组(1.1±0.2 vs 0.7±0.09,.6±0.2 vs 0.7±0.1,.4±0.4 vs 0.7±0.09,.5±0.7vs 0.8±0.1,＜0.01),肝组织病理改变明显重于SO组.在运用了NF-κB抑制剂PDTC的APP组,F-κB活性显著低于AP组(1.85±0.38 vs 3.13±0.57,.36±0.22 vs 1.92±0.26,＜0.01),血浆ALT较AP组也有了显著下降(1.2±0.2,s 1.6±0.2,.7±0.2 vs 2.4±0.4,.1±0.4 vs 3.5±0.7,＜0.01或P＜0.05)肝脏病理改变较AP组也有明显减轻.结论:急性胰腺炎大鼠肝组织中存在着NF-κB的显著活化,活化的NF-κB参与了肝损伤的发生.     

N-乙酰半胱氨酸对重症急性胰腺炎大鼠肝损伤的保护作用

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对重症急性胰腺炎(severe acute pan-creatitis,SAP)大鼠肝损伤的保护作用及作用机制.方法:Wistar大鼠42只随机分为3组,SAP组(SAP,n=18),采用逆行十二指肠胰胆管注射50 g/L牛黄胆酸钠溶液制备SAP模型;SAP+NAC组(SAP+NAC,n=18),建模前2 h给予NAC 300 mg/kg体质量预处理;假手术组(SO,n=6).建模成功后3、6和12 h,分别取下腔静脉血液、胰腺和肝脏组织.光镜下观察胰腺和肝脏组织病理改变,全自动生化分析仪检测各时段血液ALT和AST水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝脏组织中TNF-αmRNA表达,SP免疫组化法检测肝脏组织中NF-κB活化.结果:SO组血液ALT、AST以及肝胰组织病理无显著性变化.SAP组各时间点肝胰病理改变较SO组严重.术后3、6和12 h时间点ALT及AST均较SO组显著升高(186.67±27.28,321.17±56.14,492.50±69.77 vs 36.83±7.02;255.50±44.15,343.17±43.70,425.33±58.37 vs 41.67±5.35,P<0.05或0.01);TNF-αmRNA表达均显著高于SO组(0.37±0.03,0.77±0.04,0.54±0.04 vs 0.24±0.03,P<0.05或0.01):NF-κB活性术后3、6 h均显著高于SO组(51.95±4.76.24.67±4.93 vs 9.33±2.05,P<0.05或0.01),12 h与SO组相比差异无显著性意义.SAP+NAC组各时间点肝胰组织病理改变均较SAP组减轻,术后3-12 h血液ALT及AST水平(143.67±16.62,203.33±25.41,301.17±26.82;136.33±26.27,221.50±38.31,310.50±38.17)均显著低于SAP组(P<0.05或0.01);各时间点肝脏TNF-αmRNA表达(0.25±0.03,0.50±0.05,0.43±0.03)显著低于SAP组(P<0.05或0.01);术后3-6 h NF-κB活性(37.60±6.37,12.88±2.66)均较SAP组显著降低(P<0.05).结论:NF-κB活化与TNF-αmRNA表达上调参与了SAP大鼠肝损伤过程,NAC 300 mg/kg预处理能够有效减轻SAP大鼠肝损伤,其作用机制可能与抑制NF-κB活化进而下调炎性细胞因子TNF-αmRNA表达水平相关.     

牛磺酸对大鼠胰岛活性和功能的保护作用

目的:探讨牛磺酸(taurine,Tau)在大鼠胰岛培养过程中对胰岛的保护作用及其机制.方法:实验Wistar大鼠分为2组,RPMI 1640组和牛磺酸组(Tau组).流式细胞仪检测Caspase-9和磷酸化Akt阳性细胞比例,观察牛磺酸对Caspase-9及Akt的影响.RT-PCR检测单纯1640组和Tau组胰岛细胞的TNF-α、IL-1β、NF-κB和HO-1基因的表达.结果:胰岛单纯用RPMI 1640培养1 wk后激活的Caspase-9与加入牛磺酸后相比有统计学意义(41.03%±4.46% vs 23.85%±3.09%,P<0.05).胰岛分离纯化后有明显的TNF-αmRNA、IL-1βmRNA、NF-κB mRNA、HO-1mRNA表达,随着培养时间的延长TNF-αmRNA、IL-1β mRNA、NF-κB mRNA表达逐渐减弱,HO-1 mRNA表达逐渐增强.加入牛磺酸后胰岛TNF-α mRNA、IL-1β mRNA、NF-κB mRNA表达明显减弱,在6 h,72 h及1 wk时(TNF-α:0.34±0.02.0.24±0.01,0.19±0.02;IL-1β:0.24±0.09,0.09±0.01,0.05±0.01;NF-κB:1.76±0.30,0.93±0.15,0.37±0.02)和单纯培养组(TNF-α:0.57±0.1,0.39±0.02,0.29±0.02;IL-1β:0.34±0.02,0.24±0.01,0.19±0.02;NF-κB:2.52±0.24.1.21±0.14,0.76±0.07)比较差异具有显著性(均P<0.05).HO-1mRNA的表达较单纯培养组明显增强且随着时间的延长表达更明显(3.74±0.10,4.33±0.29.5.28±0.29 vs 2.46±0.30,3.13±0.07,3.59±0.22;均P<0.05).结论:牛磺酸能抑制TNF-α、IL-1β和NF-κB转录并活化Akt,抑制细胞凋亡.     

参附注射液对复苏后大鼠肺组织核转录因子κB及血浆肿瘤坏死因子α的影响

目的:探讨参附注射液对心肺复苏后大鼠肺组织核转录因子κB(NF-κB)及血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法:90只Sprague Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组、参附治疗组,采用窒息合并冰氯化钾致大鼠心跳骤停-心肺复苏模型,运用免疫组化方法观察复苏后肺组织细胞中NF-κB的蛋白表达,采用放射免疫法检测血浆TNF-α水平;通过光镜和电镜观察肺组织细胞结构的变化。结果:与假手术组比较,复苏后肺组织NF-κB表达及血浆TNF-α水平均明显增加(P<0.05)。光镜和电镜观察结果显示参附治疗组肺组织细胞结构受损明显减轻。结论:参附注射液可能通过抑制NF-κB活性及降低TNF-α水平,从而阻断NF-κB调控的炎症反应及细胞凋亡,对复苏后肺组织损伤起到防治作用。     

IκB激酶β在非酒精性脂肪性肝炎发病机制中的作用

目的:探讨IκB激酶β(inhibit kappa B kinase beta,IKKβ)在非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)大鼠肝组织中的表达及意义.方法:健康♂Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组(n=20)和高脂模型组(n=20),分别给予标准饲料喂养和高脂饲料喂养.16 wk末空腹处死全部大鼠,收集血清和肝组织标本.检测血清中ALT、AST及ELISA法检测血清TNF-α水平;光镜下观察肝组织病理变化;RT-PCR和EMSA法分别检测肝组织IKKβmRNA表达和核因子-κB(NF-κB)活性改变.结果:模型组大鼠血清ALT、AST、TNF-α水平、肝组织IKKβmRNA表达及NF-κB活性均较正常对照组明显增强(96.63±14.2 U/L vs 39.50±12.2 U/L,156.13±14.7 U/L vs 71.25±14.4 U/L.48.23±3.4 U/L vs 6.74±1.3 U/L,0.85±0.03 vs 0.22±0.02.10.12±1.34 vs 1.58±1.23,P<0.01);病理则表现不同程度的脂肪变性、炎症、坏死及窦周纤维化与对照组相比有显著差异(25.63±7.21 vs 1.24±3.24,3.21±0.52 vs 0.49±0_36.6.26±1.86 vs 3.02±1.17,P<0.01).相关分析显示:肝组织IKKβmRNA的表达与NF-κB活性(r=0.930)、脂肪变性(r=0.681)和炎症坏死程度(r=0.864)以及血清TNF-α水平(r=0.762)正相关(P<0.05).结论:IKKβmRNA表达增加在NASH发病机制中发挥重要作用,其通过介导NF-κB活化,引起TNF-α的大量生成、释放,诱导加重NASH的发生发展.     

核因子-κB和细胞因子在溃疡性结肠炎中的表达及其意义

目的: 探讨溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者肠黏膜活检组织中NF-κB的表达及其与细胞因子水平的关系.方法: 用免疫组化SP方法检测60例活动期UC内镜活检标本及30例正常对照石蜡组织中NF-κB表达情况, 同时用放免法检测UC组和正常对照组血清中IL-1β, TNF-α和IL-10的表达水平.结果: 60例UC组中NF-κB p65均为阳性表达,主要分布在结肠黏膜上皮细胞、腺上皮细胞和巨噬细胞. 对照组均为阴性和弱阳性表达,主要分布于上皮细胞. UC组的NF-κB p65表达平均灰度值与正常对照组比较差异有显著性(166.62±14.88 vs 142.30±19.01, P<0.05); 活动期UC组血清中IL-1β、TNF-α表达水平显著高于正常对照组(1.29±0.36 vs 1.29±0.36,4.47±1.08 vs 1.37±0.26, 均P<0.01), 而IL-10表达水平二组间差异无统计学意义. NF-κBp65的表达与活动期UC病情活动性及内镜分级有相关性( P<0.05或0.01).结论: NF-κB诱导、参与了UC的发生、发展过程, 并与UC病情活动性及内镜分级有较好相关性, 可客观反应UC的炎症活动情况; 促炎细胞因子IL-1β、TNF-α与抑炎性细胞因子IL-10的表达水平不一致, 可能与NF-κB诱导调控有直接关系.     

核因子-κB在大鼠实验性溃疡性结肠炎肠组织的表达及其意义

目的:观察大鼠实验性溃疡性结肠炎肠组织核因子-κB(NF-kB)及TNF-α、ICAM-1的表达,探讨NF-κB在溃疡性结肠炎发病过程中的作用.方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)制备大鼠溃疡性结肠炎模型,设正常组、生理盐水组及轻、重模型组共4组.采用免疫组织化学染色检测肠组织NF-κB、TNF-α和ICAM-1表达,生化方法检测MPO含量,并分析NF-κB活性与肠道病理损伤指数、MPO含量、TNF-α及ICAM-1表达的关系.结果:溃疡性结肠炎大鼠肠组织中NF-κB活性,TNF-α、ICAM-1表达及MPO含量较正常组及生理盐水组显著增高(NF-κB:52.14±9.81、30.26±10.20,60.73±13.41、45.24±10.86 vs13.31±4.76、16.95±6.83,11.61±4.85、14.10±5.76;TNF-α:74.50±11.20、48.11±5.95,84.09±14.52、53.40±8.79vs16.99±5.48、20.04±6.76,10.13±1.79、16.03±6.21;ICAM-1:68.15±7.25、44.34±7.54,77.69±8.09、47.01±8.82vs15.34±4.03、17.50±6.95,10.33±2.38、13.41±4.91;MPO:1.69±0.11,0.71±0.06vs0.39±0.07,0.31±0.08;P＜0.01),且在病情严重组增高尤为明显.NF-κB表达水平与TNF-α和ICAM-1阳性细胞密度、MPO含量、肠道病理损伤指数呈显著正相关关系(r分别为0.9 304,0.8 680,0.6 865,0.9 292,0.8 462;P＜0.001或P＜0.005).结论:NF-κB在溃疡性结肠炎发病过程中可能起重要作用.     

黄芪多糖对LPS损伤小肠上皮细胞的保护作用

目的:探讨黄芪多糖(APS)在内毒素-脂多糖(LPS)损伤小肠上皮细胞(IEC-6)中的作用机制及对细胞因子和核因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法:以小肠上皮细胞株IEC-6为研究对象, 将培养的细胞分为6组: 对照组、LPS组、LPS APS 50 mg/L组、LPS APS 100 mg/L组、LPS APS 200 mg/L组和LPS APS 500 mg/L组. 采用RT-PCR法检测细胞因子TNF-α和IL-8 mRNA的表达, 采用凝胶电泳迁移率法分析NF-κB蛋白活性.结果: LPS损伤IEC-6细胞后, TNF-α, IL-8 mRNA水平和NF-κB蛋白定量表达均升高, 均显著高于对照组(TNF-a: 1.26±0.06 vs 0.65±0.05, IL-8 mRNA: 1.19±0.05 vs 0.57±0.06, NF-kB: 2.76±0.07 vs 0.07±0.03, P均<0.01). 而黄芪多糖呈浓度和时间依赖性地抑制LPS诱导IEC-6细胞分泌的TNF-α, IL-8等细胞因子的mRNA的表达水平(P<0.01), 并能降低NF-κB的表达活性(P<0.01).结论:APS具有抑制LPS刺激IEC-6细胞产生的TNF-α, IL-8炎性因子的作用, 并能降低NF-κB的表达活性, 其对LPS所致的肠道损伤具有保护作用.     

复方青黛颗粒对溃疡性结肠炎大鼠NF-κBP65、TNF-α表达的影响

目的:探讨复方青黛颗粒治疗溃疡性结肠炎(UC)大鼠的相关机制.方法:用三硝基苯磺酸(TNBS)法制备大鼠UC模型,分为空白对照组、模型对照组、柳氮磺吡啶(SASP)组、复方青黛颗粒低、中、高剂量组.造模后第3天开始灌胃给药,共给药10d,实验第14天,处死大鼠.取大鼠结肠组织及血清,用免疫组织化学SP法检测NF-κBP65蛋白表达,ELISA测定血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量.结果:空白对照组与模型对照组比较,结肠组织中NF-κBP65蛋白表达及血清中TNF-α表达明显增高(0.276±0.0081vs0.138±0.003;67.657±3.580vs18.990±3.964,均P<0.05)复方青黛颗粒高剂量组与模型对照组相比,结肠组织中NF-κBP65蛋白表达及血清中TNF-α表达显著降低(0.217±0.007vs0.276±0.008;27.783±2.867vs67.657±3.580,均P<0.05).结论:复方青黛颗粒对TNBS诱导的UC大鼠的治疗作用可能与通过NF-κB信号传导通路调节TNF-α含量有关.     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对大鼠急性坏死性胰腺炎肝损伤的保护作用

目的:探讨核因子KB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)的预防治疗作用。方法:大鼠80只随机分为正常对照组(Z)、胰腺炎组(Y)和干预纽.干预组又分为建模前1h PDTC干预组(A)、建模后1h PDTC干预组(B)和建模后6h干预组(C).干预组按不同时间ip PDTC.建模后6,12,24 h分批处死,临床全自动生化仪检测血清谷丙转氨酶(ALT)和淀粉酶(AMY),用凝胶迁移率改变分析法(EMSA)测定胰腺和肝脏中NF-κB的活性.同时观察胰腺和肝脏的病理改变.结果:正常大鼠组织中几乎测不到NF-κB的活性,与Z组比较,Y组胰腺和肝脏组织中6,12,24 h NF-κB活性分别明显增加(P<0.001).建模前1h,1h后使用PDTC,胰腺和肝脏组织中NF-κB活性均受到抑制(18.14±3.30,23.79±3.62 vs 24.82±4.57:10.68±2.51,13.83±2.70 vs 16.38±2.50;P<0.05),Y组血清ALT,AMY均高于对照组.病理学检查可以见到Y组和A,B,C组的胰腺和肝脏均有炎性改变,但A组较Y组明显为轻.结论:NF-κB的异常活化与SAP以及肝损伤有明显关系:PDTC对SAP时肝损伤的发生有一定的预防作用.     

生长抑素对溃疡性结肠炎模型大鼠肠道炎性损伤的治疗作用

目的: 观察生长抑素(奥曲肽)对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠模型的作用,初步探讨其可能机制.方法: ♂SD大鼠随机分为正常对照组、奥曲肽对照组、模型组、治疗组,每组7只. 模型组、治疗组大鼠用三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇溶液灌肠复制UC模型. 观察各组实验大鼠体质量变化、大体及组织病理学改变. 采用酶联免疫吸附法检测细胞因子(IL-6、IL-10、TNF-α)的含量、蛋白质印迹杂交法检测结肠组织NF-κB p65蛋白的表达.结果: 生长抑素可以缓解大鼠体质量的减轻,减少腹泻及便血的发生,并且能够显著改善结肠组织大体和组织学评分. 与正常组比较,模型组大鼠结肠黏膜IL-6、TNF-α表达明显升高(188.27±11.65 ng/L vs 102.13±7.12 ng/L,87.39±6.74 ng/L vs 121.51±8.56 ng/L,均P<0.01);IL-10表达明显下降(71.40±8.28 ng/L vs 202.97±12.26 ng/L,P<0.01);与模型组比较,治疗组大鼠结肠黏膜IL-6、TNF-α表达均明显降低(142.03±12.68 ng/L,90.87±9.26ng/L,均P<0.01),IL-10表达明显升高(124.07±10.05 ng/L,P<0.01). 模型组结肠组织中NF-κB的蛋白含量明显高于治疗组(1059.60±96.35vs 471.23±11.61,P<0.01).结论: 生长抑素对TNBS诱导的大鼠溃疡性结肠炎具有显著治疗作用,其作用机制可能是通过影响炎症反应的信号通路NF-κB的活化,进而下调促炎细胞因子及上调抗炎细胞因子的产生和表达.     

核因子-κB在急性胰腺炎中的激活及NBD多肽的干预作用

目的:探讨核因子-κB(nuclear factor-kappaB.NF-KB),及活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)在大鼠SAP发病过程中的作用:并观察NF-κB必需调节蛋白结合域(NF-κB essential modifier binding domain,NBD)多肽对大鼠SAP的干预作用.方法:逆行胰胆管内注射50 g/L牛磺胆酸钠(1mL/kg)制备大鼠SAP模型.大鼠64R,随机分成4组:假手术组,SAP组,TAT-NBD(WT)多肽组和TAT-NBD(MT)多肽组.术后6,12 h处死大鼠,观察胰腺组织病理、血清淀粉酶和胰腺组织NF-κB P65蛋白的变化.检测胰腺组织MDA含量及T-SOD活力.结果:与假手术组比较,SAP模型组6,12 h大鼠NF-κB P65蛋白表达显著升高(49.3±2.2vs 4.3±1.4,65.8±1.8 vs 5.0±1.3,均P<0.05);MDA生成增加(212.7±12.5 vs 87.7±7.5,296.8±13.3 vs 96.2±8.3,均P<0.05),T-SOD活力下降(88±10 vs 183±10,65±7 vs 194±10,均P<0.05);与SAP模型组比较,TAT-NBD(WT)多肽预处理6,12 h后,NF-κB P65蛋白表达(25.9±2.3,38.9±2.6)显著降低(P<0.05),MDA生成(102.5±10.4,164.5±12.2)降低(P<0.05);T-SOD活力(153±11,168±12)增加(P<0.05),胰腺病理学评分下降(5.04±0.41 vs 8.71±0.45,5.45±0.34 vs 10.31±1.23,均P<0.05),淀粉酶无明显变化.TAT-NBD(MT)多肽组上述指标均无明显变化.结论:SAP时大鼠胰腺组织的NF-κB过度激活,活性氧簇生成增加;NBD多肽预处理可以抑制NF-κB过度活化,减少活性氧簇生成,减轻胰腺局部炎症损伤.     

CO_2气腹对裸鼠胃癌移植瘤NF-κB p65、TNF-α和IL-6表达的影响

目的:探讨CO2气腹对胃癌细胞转录因子(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素6(IL-6)表达的影响.方法:将胃癌细胞MKN45种植于裸鼠腹腔,建立胃癌移植瘤动物模型,实验动物随机分为CO2气腹组、开腹组和对照组,观察各组肿瘤细胞的生长,采用RT-PCR检测NF-κB转录因子p65亚单元、TNF-α和IL-6表达的变化.结果:开腹组肿瘤病灶质量(mg)比CO2气腹组重,组间存在显著差异(0.72±0.02vs0.43±0.06,P<0.05).实验处理后24h,开腹组NF-κBp65、TNF-α和IL-6表达比CO2气腹组高,组间存在显著差异(1.09±0.12vs0.63±0.07;1.14±0.11vs0.31±0.05;0.65±0.08vs0.42±0.04,均P<0.05).结论:腹腔镜手术中,CO2气腹诱导更低的NF-κB p65、TNF-α和IL-6表达,对肿瘤生长的影响较小,本实验支持腹腔镜技术在胃癌治疗中的应用.     

灯盏花素联合预适应对兔缺血再灌注心肌肿瘤坏死因子α、核因子-κB的影响

目的:探讨灯盏花联合预适应对兔缺血再灌注心肌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子-κB(NF-κB)的影响.方法:采用新西兰大白兔体内心肌缺血再灌注模型,36只动物随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血预适应组(IP组)、灯盏花素联合缺血预适应组(BI组).各组分别进行心肌酶学[肌酸激酶(CK)及乳酸脱氢酶(LDH)]检查,并采用伊文思蓝(EB)/氯化三苯基四氮唑(TTC)测定梗死面积,用免疫组化法检测TNF-α及NF-κB蛋白表达水平.结果:IR、IP及BI组较Sham组均有明显的心肌梗死(P<0.01),IP、BI组较IR组能够明显缩小心肌梗死面积(P<0.01),BI组较IP组疗效显著(P<0.05);IR、IP及BI组心肌酶较Sham组均明显升高(P<0.01),IP、BI组各时间点CK和LDH均较IR组明显降低(P<0.01),且BI组较IP组降低更明显(P<0.05);IR、IP及BI组较Sham组TNF-α及NF-κB蛋白表达均明显增加(P<0.01);IP组、BI组TNF-α及NF-κB蛋白表达均较IR组显著较少(P<0.01),且BI组较IP组更明显(P<0.05).结论:缺血预适应及灯盏花素联合预适应均显著缩小心肌梗死面积,降低心肌酶,减少心肌细胞内TNF-α、NF-κB蛋白的表达.     

大蒜素通过调节Bcl-2,Bax及NF-κB表达而抑制大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡(英文)

目的:探讨大蒜素预处理对在体大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用、对心肌细胞凋亡的影响及Bcl-2,Bax,NF-κB是否参与抗凋亡作用。方法:建立大鼠在体心肌I/R损伤模型,将48只大鼠随机分为正常对照(Con)组、I/R组和大蒜素预处理(AP)组;各组均测定心肌梗死范围[IS/AAR(%),TTC法]、再灌注后血清肌酸磷酸肌酶同工酶MB(CK-MB)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并应用DNA琼脂糖凝胶电泳及TUNEL法检测各组凋亡指数(AI)、Bcl-2,Bax表达及NF-κB核结合活性。结果:AP组较I/R组IS/AAR(%)[(21.8±1.5)%vs.(44.6±4.6)%,P0.01],CK-MB[(16.4±1.6)vs.(34.1±1.8)U/L,P0.01]明显降低,SOD[(2 337±215)vs.(1 219±187)U/mg pro,P0.01]明显增高。AP组AI较I/R组明显降低[(7.0±1.2)%vs.(4.0±3.0)%,P0.01]。Bcl-2表达明显增加,Bax表达明显减少,NF-κB核结合活性明显降低。结论:大蒜素有明显抗大鼠心肌I/R损伤作用能与抗心肌细胞凋亡有关,对Bcl-2,Bax及NF-κB表达的调控起重要作用。     

华夏小葱制剂对脂肪肝大鼠的防治作用

目的:探讨华夏小葱制剂对大鼠脂肪肝的防治作用及其机制.方法:60只SD大鼠随机平均分为6个组:空白对照组,模型对照组,华夏小葱制剂低、中、高剂量组以及东宝肝泰片组.除空白对照组外,其他组用高脂饮食及酒精水喂养,并结合皮下注射小剂量四氯化碳色拉油溶液建立大鼠脂肪肝模型.华夏小葱制剂低、中、高剂量组及东宝肝泰片组分别给予相应剂量的华夏小葱制剂0.06,0.12,0.24 g/kg或东宝肝泰片混悬液0.7 g/kg.8 wk后计算肝脏指数(肝湿质量/体质量),取肝左叶作组织病理学检查,全自动生化分析仪测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)等指标,放射免疫法测定血浆内皮素(ET-1)含量,RT-PCR测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达,Western blot检测核转录因子-κB(NF-κB)p65蛋白的表达.结果:模型对照组肝指数、TC、TG、ET、TNF-αmRNA及NF-κB值分别是2.33%±0.08%,1.39±0.31 mmol/L,0.48±0.08 mmol/L,138.67±21.84 ng/L,0.47±0.01,110.67±12.90)显著高于空白对照组(P＜0.01);华夏小葱低、中、高剂量组及东宝肝泰片组肝指数、TC、TG、ET-1、TNF-αmRNA、NF-κBp65值(肝指数:2.59%±0.12%,2.55%±0.19%,2.65%±0.25%,2.57%±0.16%,P＜0.01;TC:1.67±0.31,1.65±0.17,1.69±0.29,1.52±0.31mmol/L.P＜0.05or P＜0.01;TG:0.65±0.23,0.60±0.29,0.55±0.17,0.61±0.27 mmol/L,P＜0.05 or P＜0.01:ET-1:149.39±17.82.136.91±22.48,130.52±24.93,154.45±18.46 ng/L,P＜0.05 or P＜0.01:TNF-αmRNA:0.79±0.01,0.73±0.03,0.64±0.05,0.71±0.02,P＜0.01或无显著性差异;NF-κB p65:158.67±8.08,141.33±9.29,115.67±14.05,118.00±9.85,P＜0.05 orP＜0.01)低于模型对照组(分别是3.45%±0,20%,2.03±0.38 mmol/L,1.18±0.57 mmol/L,180.22±9.80 ng/L,0.84±0.04,180.33±8.391).结论:华夏小葱制剂对实验性大鼠脂肪肝具有较好的防治作用,其机制可能与降低NF-κB的激活、减少ET-1和TNF-α的损伤有关.     

罗格列酮对大鼠溃疡性结肠炎肠黏膜NF-κB,ICAM-1表达的影响

目的:探讨罗格列酮对大鼠溃疡性结肠炎肠黏膜核转录因子-κB(NF-κB),细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响.方法:应用三硝基苯磺酸(TNB)/乙醇灌肠制备大鼠溃疡性结肠炎模型.实验设正常对照组,模型对照组,阳性药物组(柳氮磺吡啶SASP组,100mg/kg),罗格列酮组(2,4,8mg/kg),每天灌胃给药1次,给药时间从造模后第2天开始至实验结束共8d,观察大鼠疾病活动指数(DAI)和结肠黏膜损伤指数(CMDI),生化法检测大鼠结肠组织髓过氧化酶(MPO)活性,免疫组化法检测大鼠肠黏膜NF-κBp65和ICAM-1蛋白的表达.结果:与正常组相比,模型组DAI、CMDI评分及结肠组织MPO活性明显升高(2.11±1.29vs0.11±0.17,2.67±0.82vs0.33±0.52,1.26±0.36U/gvs0.27±0.07U/g,P<0.01),结肠黏膜NF-κBp65及ICAM-1表达明显增强(0.7081±0.0671vs0.2293±0.0474;0.4846±0.0366vs0.1783±0.0201,P<0.01).罗格列酮中、高剂量组DAI,CMDI评分及MPO活性较模型组有明显下降(DAI:1.11±0.50,0.61±0.25vs2.11±1.29,P<0.05;CMDI:1.67±0.52,1.17±0.75vs2.67±0.82,P<0.05;MPO:0.82±0.13,0.51±0.10U/gvs1.26±0.36U/g,P<0.01),NF-κB及ICAM-1表达也有不同程度降低(NF-κB:0.4544±0.0379,0.2577±0.0131vs0.7081±0.0671,P<0.01;ICAM-1:0.3854±0.0277,0.2830±0.0234vs0.4846±0.0366,P<0.01).大鼠结肠黏膜NF-κB的表达与ICAM-1表达呈正相关(r=0.927,P<0.01),ICAM-1的表达与结肠组织MPO活性也呈正相关(r=0.580,P<0.01).结论:罗格列酮对大鼠溃疡性结肠炎有保护作用,其作用机制可能与抑制NF-κB活化,减少黏附分子ICAM-1产生以及降低中性粒细胞浸润有关.     

一氧化氮对急性肺损伤发病过程中核因子-κB活化的调节作用

目的:探讨一氧化氮(NO)在急性重症胰腺炎急性肺损伤大鼠发病中的作用及肺泡巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)活化的关系．方法:健康雄性SD大鼠随机分为:假手术组、模型组、硝普钠(SNP)组、左旋精氨酸组、氨基胍组,每组6只．经胰管逆行注入去氧胆酸钠复制大鼠急性重症胰腺炎急性肺损伤模型．采用凝胶电泳迁移率方法检测肺泡巨噬细胞中NF-κB活性,RT-PCR分析iNOS mRNA 的表达,同时亦检测NO、TNF-α、iNOS的水平和肺组织病理学的改变．结果:模型组中NF-κB活性、iNOS mRNA表达及TNF-α、NO、iNOS的含量均显著高于假手术组(P=0．02)．肺组织病理学显示严重损害．NO的供体硝普钠及iNOS选择性抑制剂氨基胍可降低NF-κB活性(213．47±12．34, 222．98±17．69 vs 327．13±13．46,P<0．05),下调iNOS mRNA表达(SNP:2．35±0．34 vs 3．1 ±0．38,P<0．05)以及TNF-α(0．38±0．034, 0．45±0．043 μg/L vs 0．76±0．045 μg/L)、 NO(168．2±0．78,146．4±0．59 mmol/L vs 229．3 ±0．98 mmol/L)的水平,减轻肺组织病理学损伤．而左旋精氨酸组则无明显调节作用．离体实验结果与体内试验一致．结论:外源性NO可抑制NF-κB活化,降低 iNOS mRNA的表达,进而减少NO、TNF-α的释放．同样,经iNOS选择性抑制剂抑制内源性 NO的产生,也可控制机体的过度炎症反应．