染料木素促乳癌细胞增生和IGF-1R mRNA表达机制

目的研究染料木素促人乳癌（MCF-7）细胞增生及IGF-1R mRNA表达机制。方法MCF-7细胞常规培养后,用ICI182,780或JB-1与染料木素共同培养,以阻断雌激素受体（ER）或IGF-1R。MTT法观察细胞生长情况,RT-PCR技术观察IGF-1R基因表达情况。结果染料木素对MCF-7细胞具有增生效应,与对照组相比差异有统计学意义（F=14.627,q=3.76,P〈0.05）,此效应可以被ER拮抗剂ICI182,780或IGF-1R拮抗剂JB-1完全阻断（q=3.89、4.25,P〈0.05）;染料木素可增加IGF-1R基因表达（F=21.695,q=4.94,P〈0.01）,此效应也能够被ICI182,780或JB-1完全阻断（q=5.03、5.89,P〈0.01）。结论染料木素可以促进MCF-7细胞的增生和IGF-1R mRNA的表达,此作用可以被ER拮抗剂ICI182,780或IGF-1R拮抗剂JB-1完全阻断。     

雌激素对MCF-7细胞P2Y2 mRNA的抑制作用

目的探讨在MCF-7细胞株中雌激素是否影响P2Y2 mRNA的表达。方法取生长良好的MCF-7细胞,以不同浓度17β-雌二醇(17β-E2)、雌激素受体(ER)拮抗剂ICI182780、ERα拮抗剂MPP和ERβ拮抗剂PHTPP作用于细胞,应用实时定量RT-PCR方法测定细胞中P2Y2受体mRNA表达。结果在MCF-7细胞中,雌激素(1nmol/L～1μmol/L)下调P2Y2 mRNA的表达量从对照组的(73.79±8.91)%减少至对照组的(53.68±5.90)%,这种下调作用可以被ER拮抗剂ICI182780(1μmol/L)拮抗,ERα的拮抗剂MPP(50μmol/L)可以部分阻断雌激素(0.1μmol/L)的作用,而ERβ拮抗剂PHTPP(50μmol/L)对雌激素(0.1μmol/L)的作用无影响。结论雌激素通过ERα抑制P2Y2 mRNA的表达,这一途径可能参与了雌激素对MCF-7细胞的促增殖作用。     

人参皂苷Rg1对多巴胺能神经元的保护作用及ICI182,780的阻断作用

目的研究人参皂苷Rg1对去卵巢（ovariectomized,OVX）帕金森病（Parkinson disease,PD）模型大鼠黑质（substantianigra,SN）酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）表达的影响以及ICI182,780的阻断作用。方法雌性Wistar大鼠随机分为正常组、OVX组、6-hydroxydopamine（6-OHDA）组、Rg1＋6-OHDA组及ICI＋Rg1＋6-OHDA组。大鼠OVX后应用6-OHDA单侧损毁内侧前脑束（medial forebrain bundle,MFB）制备PD模型,腹腔注射Rg1或侧脑室同时给予雌激素受体（estro-gen receptor,ER）拮抗剂ICI182,780,免疫组织化学技术检测TH阳性神经元,RT-PCR技术检测SN内TH基因的表达。结果OVX大鼠SN内TH基因的表达较正常大鼠明显降低（P〈0.05）。6-OHDA制备的PD模型组损毁侧SN内TH阳性神经元数量及TH基因表达较健侧明显降低（P〈0.01）。与模型组相比,Rg1可显著提高损毁侧大鼠SN内TH阳性神经元数量及TH基因的表达（P〈0.01）。此效应可以被ER拮抗剂ICI182,780完全阻断（P〈0.01）。结论ER拮抗剂ICI182,780可以阻断人参皂苷Rg1对OVX PD模型大鼠黑质多巴胺能神经元的保护作用。     

人参皂苷Rg1对Aβ25-35致小鼠海马神经元损伤保护作用

目的探讨人参皂苷Rg1对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)所致小鼠海马神经元损伤的保护作用及ICI182,780的阻断作用。方法 C57BL/6雌性OVX小鼠侧脑室注射Aβ25-35制备Alzheimer病(AD)小鼠模型,在有或无雌激素受体(ER)拮抗剂ICI182,780的情况下,腹腔注射Rg1。Morris水迷宫测试小鼠的空间学习记忆能力,RT-PCR技术检测海马bcl-2基因的表达情况。结果与对照组相比,Aβ25-35可导致小鼠的潜伏期和总路程增长(F=11.34、10.90,q=6.184、5.905,P<0.05),穿越平台次数减少(F=10.90,q=6.023,P<0.05),明显降低海马bcl-2基因的表达(F=18.47,q=6.082,P<0.05);与Aβ25-35组相比,Rg1可降低AD小鼠的潜伏期和总路程(q=5.478、6.097,P<0.05),提高其穿越平台次数(q=6.023,P<0.05),逆转Aβ25-35所致的bcl-2基因表达的降低(q=9.661,P<0.05);Rg1的这些作用可被ICI182,780完全阻断(q=5.360~7.482,P<0.05)。结论 Rg1可减弱Aβ25-35对小鼠海马神经元的损伤,其机制可能与雌激素受体途径的激活有关。     

植物雌激素的筛选及抗皮肤老化的体外研究

目的筛选植物雌激素,并进一步研究植物雌激素对成纤维细胞合成胶原蛋白的影响。方法采用细胞增殖实验(MTT法)观察64种植物提取物或有效部位对雌激素受体(ER)阳性细胞系MCF-7增殖的影响,筛选具有雌激素样作用的植物提取物或有效部位;并用ER阴性的MDA-MB-231细胞和ER拮抗剂ICI 182780,考察促进MCF-7细胞的增殖作用是否由ER介导。采用圆点印迹法评估植物雌激素对成纤维细胞合成1型原胶原蛋白(PC-1)的影响。结果在筛选的64种植物提取物或有效部位中,葛根、决明子、啤酒花、桑叶、甘草植物提取物及大豆异黄酮可有效诱导MCF-7细胞增殖,但对MDA-MB-231细胞无诱导增殖作用;ICI 182780抑制其诱导MCF-7细胞增殖的作用。葛根素和染料木素显著促进人成纤维细胞合成PC-1(P<0.01),其中葛根素的作用较强;黄豆苷元则显著抑制PC-1合成(P<0.01)。结论葛根提取物和大豆异黄酮具有较强的雌激素样活性,主要的活性成分葛根素和染料木素可显著促进人成纤维细胞合成胶原蛋白,提示具有潜在的祛皱、抗皮肤老化的功效。     

睾酮对乳腺癌细胞中FEN1表达的影响

目的 探讨睾酮(testosterone,T)在乳腺癌细胞中对瓣状核酸内切酶(flap endonuclease 1,FEN1)表达的影响及其机制.方法 以MCF-7作为研究对象,采用RT-PCR观察雌二醇(17 β-estradiol,E2)单独作用以及分别与雌激素受体(estrogen receptor,ER)拮抗剂ICI182,780(ICI)和MAPK途径抑制剂U0126共同作用时FEN1表达的变化.以MCF-7aro(芳香化酶过表达的MCF-7)作为研究对象,采用RT-PCR观察加入单独的睾酮以及睾酮和芳香化酶抑制剂来曲唑(letro-zole)共同作用时FEN1表达的变化；采用Western blot观察睾酮单独作用以及分别与来曲唑和U0126共同作用时FEN1、p-ERK和p-Elk的变化.结果 与对照组比较,加入雌二醇后MCF-7细胞中FEN1 mRNA的表达升高2.04倍(P＜0.01),加入ICI和U0126后分别降低10.63倍和2.17倍(P＜0.01).加入睾酮后MCF-7aro细胞中FEN1 mRNA的表达升高1.66倍(P＜0.01),蛋白的表达升高1.80倍(P＜0.01)；加入来曲唑后FEN1 mRNA的表达下降2.38倍,蛋白的表达降低1.84倍,加入U0126后蛋白的表达降低2.28倍(P＜0.01)；加入睾酮后ERK和Elk-1的磷酸化水平分别升高2.28倍和2.60倍(P＜0.01),加入来曲唑后ERK和Elk-1的磷酸化水平分别降低2.60倍和2.37倍(P＜0.01),加入U0126后ERK和Elk-1的磷酸化水平分别降低10.38倍和119.50倍(P＜0.01).结论 睾酮可通过MAPK途径上调MCF-7 aro细胞中FEN1的表达.     

异黄酮类植物雌激素通过雌激素受体对靶基因的转录调节作用

目的:观察异黄酮类植物雌激素染料木素和大豆苷元通过雌激素受体(estrogen receptor,ER)对靶基因的转录调节作用。方法:采用磷酸钙瞬时转染的方法,利用转染雌激素受体表达质粒的Hela细胞,观察染料木素和大豆苷元对雌激素反应元件(estrogen response element,ERE)报告基因的转录激活作用;此外还观察ER拮抗剂ICI 182780对这两种植物雌激素转录激活作用的影响。结果:染料木素和大豆苷元均可通过ER的两种亚型ERα和ERβ激活ERE报告基因的转录,且这种转录激活作用能被ICI 182780所阻断。结论:染料木素和大豆苷元均能产生类雌激素样作用,通过ERα和ERβ激活ER靶基因的转录。     

氟维司群对雌激素诱导的MCF-7乳腺癌细胞侵袭及基质金属蛋白酶表达的影响

目的:观察氟维司群(ICI)对雌激素(E2)诱导的人乳腺癌细胞(MCF-7)的迁移能力、侵袭能力及基质金属蛋白酶MMP2、MMP9蛋白表达的影响.方法:将对数生长期的MCF-7细胞分为对照组、ICI组、E2组和(ICI+ E2)组,采用伤口愈合实验检测MCF-7细胞迁移率,基质胶包被的transwell小室实验检测细胞的侵袭能力,western-blot法检测MMP2、MMP9的蛋白表达,实时荧光定量PCR检测MMP9 mRNA的水平.结果:(1)与对照组比较,E2组、ICI组及(ICI+ E2)组使MCF-7细胞的迁移和侵袭能力增强(P＜0.05);与E2组比较,(ICI+E2)组不能使MCF-7细胞的侵袭能力增强(P＞0.05);(2)与对照组比较,E2组、ICI组及(ICI+E2)组对MCF-7细胞中MMP2蛋白水平的影响不明显(P＞0.05),但可提高MCF-7细胞中MMP9蛋白的水平(P＜0.05);(3)与对照组比较,E2组、ICI组及(ICI+ E2)组MCF-7细胞MMP9 mRNA增加(P＜0.05).结论:ICI不能抑制E2诱导的乳腺癌细胞的迁移和侵袭,单独作用时可增加细胞的迁移、侵袭能力,这可能与其增加MMP9表达有关.     

雌激素对乳腺癌细胞中PDZK1蛋白表达量的影响

目的观察雌激素17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)及其抑制剂对雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性的乳腺癌细胞株ER-MDA-MB-231、MCF-7中PDZK1(PDZ domain containing1)蛋白表达量的影响。方法应用Western blotting法观察E2及ICI182,780在不同时间、不同浓度作用下2种细胞内PDZK1蛋白表达量的变化。结果浓度为10-8mol/L的E2作用72h可以使MCF-7、ER-MDA-MB-2312株细胞内PDZK1蛋白表达量显著升高;而抑制剂ICI182,780则相反,以10-6mol/L的浓度作用36h即可明显抑制ER-MDA-MB-231细胞中PDZK1蛋白的表达,且以上变化表现出剂量、时间依赖关系。结论PDZK1是雌激素应答蛋白,它在ER阳性的乳腺癌细胞中的表达受雌激素信号转导通路的调节。雌激素及ICI182,780可能通过调节其蛋白表达量来影响肿瘤细胞的生长和耐药性。     

淫羊藿素对LPS诱导原代皮质星形胶质细胞炎性反应影响

目的 探讨淫羊藿素(ICT)对脂多糖(LPS)诱导的原代皮质星形胶质细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达的影响及胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)阻断剂JB-1的阻断作用.方法 常规培养原代皮质星形胶质细胞,将其分为对照组、LPS组、ICT+LPS组和JB-1+ICT+LPS组....     

KNOCKDOWN OF SURVIVIN EXPRESSION BY SMALL INTERFERING RNA SUPPRESSES PROLIFERATION OF TWO HUMAN CANCER CELL LINES

SURVIVIN, a novel member of the inhibitor of ap-optosis protein ( IAP) family, is a bifunctionalprotein that regulates cell division and suppressescell apoptosis·Survivin is expressed in embryonic tissuesas well as in the majority of human cancers, but i…     

淫羊藿苷衍生物的制备及其雌激素样作用研究

目的:研究淫羊藿苷(icariin,ICA)及其衍生物淫羊藿素(icaritin,ICT)和去甲淫羊藿素(desmethyli-caritin,DICT)的雌激素样作用及其相关的构效关系.方法:ICA经纤维素酶水解成ICT,进一步在BBr3和CH2Cl2的体系中反应生成DICT;用不同浓度的化合物与雌激素敏感性人乳腺癌细胞株MCF-7和T47D分别共培养6 d和9 d,MTT法检测其对细胞的促增殖率,以此评价化合物雌激素样作用的强弱.结果:ICT、DICT促细胞增殖作用显著,10-6 mol/L浓度时促MCF-7细胞增殖作用分别是雌二醇(10-9 mol/L)的90.0%和94.0%(P<0.01);促T47D细胞增殖作用分别是雌二醇的65.6%,50.0%(P<0.01).ICA未呈现促MCF-7细胞和T47D细胞增殖作用.ICT、DICT的促细胞增殖作用被10-7 mol/L雌激素受体完全拮抗剂ICI 182、780完全抑制.结论:ICT和DICT具有促MCF-7细胞和T47D细胞增殖的雌激素样作用,而ICA未体现该作用.     

膜雌激素对乳腺癌MCF-7细胞生长的调控及其对其表皮生长因子受体表达水平的影响

目的：探讨膜雌激素持续作用对乳腺癌细胞生长调控的影响及其可能的分子机制。方法采用MTT法测不同浓度的膜雌激素对乳腺癌细胞MCF-7生长的影响。分别采用MTT法和RT-PCR法分析不同的信号抑制剂调控后,膜雌激素对乳腺癌细胞MCF-7生长及其EGFR mRNA表达水平的影响。结果终浓度为10-7M和10-12M的膜雌激素持续作用能诱导乳腺癌MCF-7细胞的增殖。膜G蛋白藕联受体阻断剂苏拉明和EGFR阻断剂AG-1478能明显抑制膜雌激素对MCF-7细胞生长的诱导作用。苏拉明和AG-1478能抑制膜雌激素持续作用上调MCF-7细胞中EGFRmRNA表达的作用。结论雌激素膜持续效应能刺激乳腺癌细胞的增殖,这一作用是通过膜G蛋白藕联受体和EGFR通路来完成的。     

沉默RRM1可逆转乳腺癌细胞MCF-7/R对紫杉醇的耐药性

目的阐明沉默核苷酸还原酶M1亚基（RRM1）对乳腺癌耐药细胞MCF-7/R逆转耐药的作用。方法通过高浓度紫杉醇诱 导耐药株MCF-7/R;运用Kaplan-Meier Plotter绘制RRM1基因的生存曲线;通过siRNA沉默MCF-7/R细胞中RRM1基因表达, 并用Western blot 和qRT-PCR方法检测蛋白和基因水平的表达,筛选出高效特异的si-RRM1 序列;将该si-RRM1 序列转染 MCF-7/R细胞,筛选得到能稳定抑制RRM1基因表达的细胞株MCF-7/R/siRNA;四甲基偶氮唑盐（MTT）法和5-乙炔基-2’脱氧 尿嘧啶核苷（EdU）染色法检测RRM1沉默后MCF-7/R细胞增殖能力的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡,并观察周期、凋 亡相关蛋白的变化;构建裸鼠皮下移植瘤模型,观察沉默RRM1后给予紫杉醇治疗对裸鼠体内抑瘤效果的影响。结果生存曲 线分析显示RRM1基因表达与乳腺癌患者的生存率呈负相关（P=0.000）;MCF-7/R细胞中证实RRM1蛋白和mRNA表达水平 较MCF-7细胞均显著升高（P<0.01）;si-RRM1序列筛选中,转染si-RRM1-04组细胞的RRM1蛋白和mRNA表达量降低最为显 著（P<0.001）;沉默RRM1后,MCF-7/R细胞对紫杉醇的敏感性显著增加,细胞晚期凋亡比例明显升高（P<0.001）,同时降低Akt 蛋白的磷酸化并抑制凋亡蛋白Bcl-2 的表达,促进p53 蛋白表达水平的增加（P<0.001）;裸鼠实验显示,与si-NC组相比,沉默 RRM1后给予紫杉醇治疗可显著抑制裸鼠体内肿瘤的生长（P<0.001）。结论沉默RRM1可通过诱导细胞凋亡增加提高MCF- 7/R细胞化疗敏感性,逆转乳腺癌紫杉醇化疗耐药。     

S 腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因沉默抑制乳腺癌MCF7细胞生长的研究

目的探讨S 腺苷甲硫氨酸脱羧酶（SAMDC）基因沉默对乳腺癌MCF 7细胞增殖及侵袭能力的抑制作用。方法用特异性沉默SAMDC基因表达的RNA干扰真核表达载体SAMDC shRNA表达载体(pGPU6 SAMDC)转染乳腺癌MCF 7细胞,采用RT PCR和Western blot技术分别检测SAMDC mRNA和蛋白质表达水平;细胞增殖实验（CCK 8法）和细胞周期分析评价SAMDC基因沉默对乳腺癌MCF 7细胞增殖的影响,肿瘤侵袭实验观察SAMDC基因沉默对乳腺癌细胞MCF 7侵袭活性的影响。结果SAMDC shRNA表达载体转染后,MCF 7细胞SAMDC mRNA水平下调43.8％,蛋白表达水平下降66.5％;MCF 7细胞的增殖活性和侵袭能力均受到明显抑制,细胞增殖活性下降37%,细胞周期分析G1期细胞增加。结论SAMDC基因沉默可通过延长细胞周期的G1期而抑制乳腺癌MCF7细胞的增殖,并能降低癌细胞侵袭活性,提示SAMDC可作为乳腺癌基因治疗的靶分子。     

ERK/MAPK信号通路激活与乳腺癌细胞浸润性生长的关系

目的：探讨乳腺癌细胞中ERK／MAPK信号转导通路异常激活与乳腺癌细胞浸润性生长的关系及可能机制。方法:采用Western蛋白印迹技术检测乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-435S中磷酸化ERK／MAPK(P-ERK)蛋白表达，以及表皮生长因子(EGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和ERK／MAPK通路抑制剂PD98059对两种细胞ERK／MAPK信号转导通路磷酸化的调节。结果:雌激素受体ER(-)的浸润性乳腺癌细胞系MDA-MB-435S中，p-ERK表达明显高于ER( )的非浸润性乳腺癌细胞系MCF-7；EGF可刺激两种细胞p-ERK的表达增加，但这种刺激作用在MDA-MB-435S细胞中更加明显；IGF-1则仅能刺激MCF-7细胞中p-ERK的表达。PD98059能有效阻滞EGF、IGF-1对p-ERK的激活。结论：ERK／MAPK信号转导通路的异常激活与乳腺癌的浸润性生长有关，而EGF可能是异常激活ERK／MAPK信号转导通路，是刺激ER(-)的乳腺癌细胞浸润性生长的重要因素之一。     

三羟异黄酮对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖和细胞周期的影响

目的:研究三羟异黄酮(genistein,Gen)对乳腺癌细胞株MCF鄄7细胞增殖和细胞周期的影响。方法:采用MTT比色法观察Gen对MCF鄄7细胞增殖的影响,流式细胞仪分析细胞周期分布,Westernblot分别检测周期素B(cyclinB)、周期素E(cyclinE)蛋白表达情况。结果:Gen(≥10μmol/L)对MCF鄄7细胞生长有显著抑制作用,细胞生长阻滞于G2/M期,cyclinB蛋白表达增加,且呈剂量-效应关系;但对cyclinE蛋白表达无影响。结论:Gen抑制MCF鄄7细胞增殖、诱导G2/M期阻滞与其导致cyclinB蛋白积累有关,与cyclinE蛋白表达无明显关系。     

通络散结丸药物血清对乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制作用

目的:通过观察通络散结丸药物血清对乳腺癌MCF-7细胞的芳香化酶和雌激素受体基因的表达、细胞增殖周期及细胞凋亡的影响,探讨通络散结丸治疗乳腺肿块性疾病的可能机制。方法:制备通络散结丸含药动物血清,以体外培养的MCF-7细胞为研究对象,以qRT-PCR法检测乳腺癌细胞芳香化酶CYP19及雌激素受体ER mRNA表达水平;流式细胞术(FCM)测定细胞增殖周期和凋亡水平;MTS实验测定细胞生长曲线。结果:与空白对照组比较,含药血清组作用细胞24 h后能明显抑制乳腺癌细胞株MCF-7的CYP19 mRNA、ER mRNA表达水平,表达水平分别降低0.346和0.128倍;药物血清作用48 h后S期和G2/M期细胞所占比例降低,尤以S期最为显著,相应的G0/G1期细胞增加,药物血清抑制了细胞增殖的正常进行;凋亡实验示细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均增加,药物血清组总体凋亡率高于对照组;药物血清作用细胞48 h以后细胞生长曲线幅度开始明显低于对照组,在96 h时抑制效果最明显。结论:通络散结丸药物血清影响乳腺癌MCF-7细胞的雌激素合成及其作用发挥,同时抑制细胞生长。