高三尖杉酯碱对慢性粒细胞白血病细胞及K562细胞端粒酶活性的影响

我们观察了高三尖杉酯碱(HHT)对慢性粒细胞白血病(CML)患白血病细胞及K562细胞端粒酶活性的影响，对HHT治疗CML的作用机制进行初步探讨。     

高三尖杉酯碱启动白血病细胞凋亡的比较蛋白质组学研究

目的：解码高三尖杉酯碱(HHT)启动白血病细胞凋亡相关蛋白。方法：在建立HHT启动HL-60细胞早期凋亡模型的基础上，分别提取未用和经HHT作用的HL-60细胞总蛋白，构建其相应的双向电泳图谱，应用图像扫描仪及图像分析软件获得差异蛋白斑点的信息，运用MALDI-TOF-MS分析呈显著性差异的蛋白斑点，将检测出的肽链质量输入蛋白质数据库获得差异蛋白质信息。结果：MHCI类抗原分子、钙结合蛋白D-28K、氯通道蛋白6、癌蛋白OP18、锌指蛋白HELIOS和凋亡抑制物样蛋白2与HHT启动白血病HL-60细胞凋亡相关。结论：运用比较蛋白质组学技术解码HHT启动白血病细胞凋亡相关蛋白，将有助于揭示HHT治疗白血病的机制，为开发HHT相关的以诱导白血病细胞凋亡为靶位的药物先导化合物提供参考。     

高三尖杉酯碱抗血管新生潜能的探讨

已有研究显示,在体外高三尖杉酯碱(HHT)能诱导不同类型白血病细胞凋亡。HHT主要通过线粒体膜电位下降、细胞色素C释放和半胱天冬酶3激活而诱导细胞凋亡[1 ] 。近年来,白血病与血管新生的关系引起了人们的关注,HHT是否也能通过抗血管新生作用,发挥抗白血病效应?为此,我们以huECV30 4细胞和K5 6 2细胞为对象,初步探讨HHT抗血管新生作用的潜能。材料和方法1　主要试剂　HHT(1mg/ml)购自杭州民生制药厂,使用前用RPMI 1 6 4 0液稀释至所需浓度。兔抗人血管内皮生长因子(VEGF)多克隆抗体、辣根过氧化物酶(HRP)结合的羊抗兔IgG为Sant…     

高三尖杉酯碱治疗慢性髓细胞白血病的研究进展

高三尖杉酯碱(HHT)以持续静脉滴注疗效为最佳,半合成和人工合成HHT每日二次皮下注射的药代动力学和药理学与持续静脉滴注相当.HHT的主要作用机制是诱导白血病细胞凋亡与抑制蛋白合成,并能直接抑制P210BCR-ABL蛋白的表达.HHT单用或与其他药物联用是初诊慢性髓细胞白血病(CML)患者和α-扰素治疗失败的慢性期晚期CML患者的有效治疗方法,加用HHT可使部分伊马替尼治疗失败或疗效处于平台期的CML患者获得疗效,对伊马替尼耐药尤其是T315I突变CML患者,HHT也是有效的补救治疗方法之一.     

高三尖杉酯碱诱导的白血病耐药细胞基因表达谱的变化

目的 探讨高三尖杉酯碱(HHT)诱导的人白血病细胞耐药相关分子.方法 在前期建立的HHT诱导的人白血病多药耐药细胞株K562/HHT的基础上,采用基因芯片技术比较K562/HHT细胞、其亲本K562细胞以及用耐药逆转剂米非司酮(RU486)作用后的K562/HHT(K562/HHT/RU486)细胞三者基因表达谱的差异,选择在这三种细胞中呈动态变化的骨髓细胞X染色体上酪氨酸激酶(BMX)基因用RT-PCR和Western blot法在转录和翻译水平进行验证,进而转染BMX基因到K562和K562/HHT细胞,观察BMX过表达时这两种细胞内柔红霉素(DNR)含量的变化,确定BMX是否在K562/HHT细胞耐药形成中发挥作用.结果 耐药细胞K562/HHT与其亲本K562细胞相比,共有117个基因表达有显著差异,其中57个基因表达明显上调,60个基因表达明显下调,耐药细胞K562/HHT中多药耐药基因mdr1表达明显上调;K562/HHT/RU486细胞与K562/HHT细胞相比,13个基因表达明显上调,37个基因表达明显下调.这些差异表达的基因涉及耐药、细胞信号传导、细胞分化、细胞增殖、转录调节以及离子转运等.基因NM-001721(BMX)、NM-031459(SESN2)、NM-033642(FGF13)和AL 049309(SFRS12)在两组芯片中的表达均有显著差异.其中BMX基因在K562/HHT细胞中的表达与K562细胞相比,明显上调,在K562/HHT/RU486细胞则较K562/HHT细胞减低.进一步用RT-PCR和Western blot法检测得到了相同的结果.RT-PCR和Western blot证实BMX质粒转染的K562及K562/HHT细胞BMX表达均上调,流式细胞术检测到K562及K562/HHT细胞内DNR含量荧光强度分别为79.28±4.04和29.84±2.67,均较转染前荧光强度158.52±8.08和58.58±6.53显著减低.结论 BMX在高三尖杉酯碱诱导的人白血病多药耐药细胞株K562/HHT耐药性产生中发挥作用.     

高三尖杉酯碱对慢性粒细胞白血病患者骨髓CD34+CD7+细胞的影响

近年的研究表明，bcr—abl阳性的CD34^＋CD7^＋造血干细胞与慢性粒细胞白血病（CML）患者的白血病克隆的维持和疾病进展有关，是影响CML患者预后的独立危险因素，也是CML治疗的重要靶标之一。已有研究证实，单用高三尖杉酯碱（HHT）可使近30％的CML患者出现细胞遗传学效应，但HHT的作用机制仍有待进一步研究。我们观察了体内外HHT对CML患者骨髓CD34^＋CD7^＋细胞的影响，     

小剂量高三尖杉酯碱对K62细胞端粒酶活性及其分化的影响

以往的研究认为高三尖杉酯碱 (HHT)主要通过抑制蛋白质合成或诱导白血病细胞凋亡发挥抗肿瘤作用。我们以K5 6 2细胞为对象 ,研究小剂量HHT对白血病细胞端粒酶活性的影响及作用机制。材料和方法1　主要试剂　TRIzol、M MLV和RPMI 16 4 0均为Gibco/BRL公司产品。TaqDNA聚合酶为Promega公司产品。引物均由上海Sangon公司合成。HHT购自杭州民生药厂 ,原液浓度 1mg/ml。牛血红蛋白纯品及Benzidine HCl为Sigma公司产品。2　细胞培养　K5 6 2细胞株引自中国科学院上海细胞研究所 ,置于含 10 %胎牛血清的RPMI 16 4 0培养体系中 ,于 …     

高三尖杉酯碱对慢性粒细胞白血病患者骨髓CD34+细胞酪氨酸激酶活性的影响

高三尖杉酯碱（HHT）已被逐渐地应用于治疗慢性粒细胞白血病（CML）慢性期（CP）患者,但其作用机制仍有待于进一步阐明.血细胞内酪氨酸激酶（TK）活性异常升高是CML的重要生物学特征,升高的TK通过促进细胞增殖、抑制细胞分化和凋亡而导致CML的发生和病情的进展.我们观察了HHT治疗前后CML患者骨髓细胞TK活性的变化以及HHT对患者骨髓CD34^＋细胞TK活性的影响,以期对HHT治疗CML的作用机制进行探讨.     

线粒体膜电位在高三尖杉酯碱诱导T-淋巴细胞白血病细胞Molt-3凋亡中的作用

目的 研究线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential,MMP)改变在高三尖杉酯碱（HHT）诱导的细胞凋亡中的作用。方法 用膜联蛋白V染色,流式细胞仪和共聚焦激光扫描显微镜等手段观察Bax、 细胞色素C等在HHT诱导T－淋巴细胞白血病细胞（Molt-3）凋亡过程中与线粒体膜电位的关系。结果 发现HHT诱导细胞早期凋亡的同时,Bax从胞浆易位至线粒体,线粒体膜电位下降,同时细胞色素C从线粒体膜释放到胞浆。结论 线粒体膜电位下降是HHT诱导T－淋巴细胞凋亡的重要环节。     

高三尖杉酯碱对HL60细胞程序性凋亡的影响及机制研究

目的探究高三尖杉酯碱(HHT)对人急性髓系白血病HL60细胞凋亡的影响及其机制。方法以人急性髓系白血病HL60细胞系作为研究对象,实验分为对照组和HHT处理组,对照组不加HHT,处理组分别加入0.2、0.4、0.6、1.2mg/L HHT并分别培养24、48、72、96h,制作细胞生长曲线;通过细胞克隆形成试验计算0.1、0.3、0.6mg/L HHT处理后HL60细胞克隆形成率;蛋白质印迹法(Western blot)检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、原癌基因(c-myc)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达;流式细胞仪检测HL60细胞的凋亡情况。结果随着HHT处理浓度的增加,细胞抑制率逐渐升高,与HHT处理成剂量依赖性,1.2mg/L时细胞抑制效果最佳。随着HHT处理浓度的增加,细胞克隆形成率逐渐下降,与处理剂量呈依赖性,0.6mg/L处理时,细胞克隆形成率最低。1.2mg/L HHT处理HL60细胞48h后,Bcl-2、c-myc蛋白表达水平下降,caspase-3、Bax蛋白表达量升高。细胞流式仪检测HL60细胞经0.6mg/L HHT处理48h后,细胞出现大量凋亡。结论 HHT能够抑制HL60细胞增殖、诱导其凋亡,其机制可能与上调caspase-3、Bax蛋白及下调Bcl-2、c-myc蛋白表达相关。     

高三尖杉酯碱对晚期慢性期慢粒白血病病人有治疗作用

高三尖杉酯碱(HHT)是一种对骨髓有显著抑制作用和毒性小的植物生物碱。HHT都用于急粒白血病治疗,但对慢粒白血病(CML)的治疗作用研究较少。作者研究HHT对晚期慢性期CML的治疗作用。 病人和方法 71例CML晚期慢性期病人。其中活动期58例,缓解期13例(从诊断到治疗的时间超过12个月),全部Ph染色体阳性,其中58例曾接受IFN-α治疗,41例对IFN-α耐药。HHT通过中心静脉导管持续输注,剂量2.5mg/m~2·d.连用14天,血液学缓解后维持治疗每月用7天。使用天数则根据粒细胞达最低     

几种抗肿瘤药物诱导Jurkat细胞凋亡的研究

本研究评价几种临床常用的抗肿瘤药物顺铂（CDDP）、羟基喜树碱（HCPT）、高三尖杉酯碱（HHT）和米托蒽醌（MIT）在白血病治疗中的作用，并分析其在诱导Jurkat细胞凋亡的作用，为白血病的临床治疗提供新的理论依据和思路。用Annexin V／PI双参数流式分析方法，检测这几种抗肿瘤药物诱导Jurkat细胞凋亡和死亡的效应。结果表明：MIT和HCPT在加药处理早期4小时（P〈0.05）和后期第8小时（P〈0．05）都有明显的诱导Jurkat细胞凋亡的效应。HHT有明显诱导Jurkat细胞凋亡的效果，但各剂量组之间无显著差异。CDDP在高浓度和长时间作用时才显示较弱的细胞凋亡效应，明显弱于前3者。各种药物作用后均未观察到明显的细胞死亡效应。结论：MIT诱导Jurkat细胞凋亡的作用最显著，Annexin V流式分析方法可作为一种可靠的临床药物筛选的方法。     

HA方案联合化疗对造血细胞超微结构的影响

为进一步探索HA方案[H]:高三尖杉酯碱(HHT) 阿糖胞苷(Ara～c)]联合化疗治疗急性非淋巴细胞白血病过程中可引起明显骨髓抑制的原因;作者选择2001～2002年6例急性非淋巴细胞白血病人采用HA方案联合化疗对造血细胞超微结构的影响,报告如下.     

细胞自噬对高三尖杉酯碱作用K562细胞的影响

目的:探讨高三尖杉酯碱(HHT)单用或与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)联用对K562细胞凋亡及自噬的影响。方法:K562细胞在HHT(10 ng/ml)作用下1-8 d,采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用RT-PCR法、Western blot法和透射电子显微镜检测细胞自噬。结果:在HHT作用前期K562细胞凋亡率逐渐升高,而在后期则下降。HHT作用后,K562细胞的Beclin1表达及LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白比值先下降后升高。HHT单用时,激活型caspase-3蛋白表达前期逐渐上升,而在后期下降。与自噬抑制剂3-MA联用组的K562细胞的Beclin1表达和LC3Ⅱ/Ⅰ的比值持续下降,而激活型caspase-3蛋白表达则逐渐升高。结论:HHT可诱导K562细胞凋亡,但HHT持续作用可诱导K562细胞发生自噬,与3-MA联用则增强HHT的细胞毒作用。     

高三尖杉酯碱联合AG490对HEL细胞JAK2-STAT5相关信号通路的影响

本研究旨在探讨高三尖杉酯碱( homoharringtonine,HHT)联合AG490对HEL细胞JAK2-STAT5信号通路的影响及其机制,为临床应用新方案治疗慢性骨髓增殖性肿瘤( MPN)提供理论依据.以20 ng/ml的HHT,100μmol/L AG490,20 ng/ml HHT+ 100 μmol/L AG490处理HEL细胞24、48、72小时以后,用MTT法和流式细胞术检测细胞生长抑制率和凋亡率,药物处理细胞24小时后用WB法检测JAK2突变激活的信号蛋白P-JAK2,P-STAT5以及BCL-xL表达的变化.结果表明,HHT以及AG490作用HEL24小时均能抑制其增长,Annexin V-PI双染流式细胞图显示均能明显诱导HEL早期凋亡,HHT更为明显;免疫电泳分析显示,P-JAK2和P-STAT5表达下调,而JAK2和STATS总蛋白水平稳定.结论:HHT联合AG490能明显抑制HEL细胞增殖并诱导凋亡,两者具有协同作用,其作用机制是HHT作为一种广谱的蛋白酪氨酸激酶抑制剂,协同AG490抑制JAK2突变引起的信号蛋白的酪氨酸位点的磷酸化,从而下调STAT5反应性基因的转录.     

survivin、XIAP在骨髓增生异常综合征患者及其细胞株MUTZ-1中的表达及意义

目的研究骨髓增生异常综合征(MDS)患者及MDS-RAEB细胞株MUTZ-1凋亡蛋白抑制因子survivin、XIAP的表达和高三尖杉酯碱(HHT)诱导MUTZ-1细胞凋亡的作用机制.方法以47例初发MDS患者及15名异基因骨髓移植志愿供者为研究对象,应用RT-PCR方法检测survivin、XIAP mRNA表达;采用流式细胞术分析MDS-RAEB细胞系MUTZ-1细胞凋亡和细胞周期变化,RT-PCR技术检测survivin、XIAP在MUTZ-1中的表达;研究survivin反义寡脱氧核苷酸(AS-ODN)和HHT对细胞增殖、凋亡的影响.结果 MDS患者survivin mRNA 总阳性率高于正常对照组(分别为38.3%和0,P<0.01),高危组(RAEB、RAEB-t、CMML)阳性率高于低危组(分别为53.6%和16.7%,P<0.05).MDS患者及正常对照均表达XIAP,但表达水平不同,其中低危组XIAP mRNA(0.74±0.24)低于正常对照组(1.01±0.28)(P<0.05),高危组XIAP mRNA表达(1.55±0.34)高于低危组及正常对照组(P值均<0.01).HHT能诱导MUTZ-1细胞凋亡,凋亡率与作用浓度和时间呈正相关,细胞被阻滞在G2期;HHT作用MUTZ-1细胞6?h后细胞内survivin 表达下调,而XIAP表达无明显变化.survivin AS-ODN能明显抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡,并提高MUTZ-1细胞对HHT的敏感性.结论凋亡蛋白抑制因子survivin、XIAP表达在MDS的不同阶段的改变可能与MDS的发生及发展有关.HHT能诱导MUTZ-1细胞凋亡,且能使凋亡蛋白抑制因子survivin mRNA下调,可能是HHT诱导MUTZ-1细胞凋亡的机制之一.     

干扰素-α联合高三尖杉酯碱对K562细胞增殖及β-catenin基因表达的影响

本研究探讨干扰素-α(IFN-α)联合高三尖杉酯碱(HHT)对K562细胞增殖、凋亡、细胞周期及β-环联蛋白(β-catenin)基因表达的影响。用IFN-α、HHT单药或两药联合处理后,K562细胞的增殖、凋亡、细胞周期及β-catenin mRNA表达水平分别用MTT法,流式细胞术及RT-PCR方法检测。结果显示,单用HHT能明显抑制K562细胞增殖,诱导凋亡,使细胞阻滞在G0/G1期,β-catenin表达下调,呈时间和剂量依赖性,而IFN-α无此作用。HHT组的β-catenin表达水平为0.5576±0.0373,低于空白对照组(0.9369±0.0142)。IFN-α联用HHT组β-catenin表达较单用HHT组下调更显著(0.3737±0.0529 vs 0.5576±0.0373,P<0.05)。HHT联合IFN-α对正常人骨髓单个核细胞未见明显毒性作用。结论:IFN-α联用HHT可明显增强后者的抗K562细胞作用,而β-catenin表达下调可能为其作用机制之一。     

高三尖杉酯碱联合三氧化二砷诱导人急性髓系白血病U937细胞株凋亡的实验研究

目的:本探讨高三尖杉酯碱(HHT)联合三氧化二砷(As_2O_3)对人急性髓系白血病细胞株U937细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用及相关机制。方法:用四甲基偶氮唑(MTT)比色法检测不同浓度HHT及As_2O_3单用及联用对U937细胞增殖的影响;应用Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞术检测二者单用或联用对U937细胞的凋亡诱导作用,Western blot方法检测U937细胞内P-Akt~(Ser473)、P-Akt~(Thr308)、BCL-XL、BID、MCL-1与P-MCL-1等蛋白的表达。结果:HHT和As_2O_3均可明显抑制U937细胞的增殖,诱导其凋亡,两药联合可明显增加U937细胞早期凋亡率,且两药联合作用后U937细胞P-Akt~(Ser473)、P-Akt~(Thr308)、MCL-1、P-MCL-1与BCL-XL蛋白表达明显下调,而BID蛋白表达无明显变化。结论:HHT与As_2O_3联合可通过抑制PI3K/Akt信号通路及下游MCL-1蛋白协同抑制U937细胞。     

白血病耐药机制的研究概况

耐药是影响白血病患者预后和长期生存的主要因素之一.有效逆转白血病耐药,是提高和改善白血病患者预后和长期生存的重要途径之一.早期对白血病耐药机制的研究,主要集中于白血病细胞本身,如多药耐药基因等.随着对骨髓微环境的深入研究发现,在白血病耐药中,骨髓微环境对白血病细胞的保护作用起着重要作用,其影响机制主要为给白血病细胞提供存活或抗凋亡信号,并使白血病细胞处于相对静止状态.笔者拟就白血病耐药机制的研究概况进行综述,旨在为理解和探索逆转白血病耐药拓宽思路.     

家蝇胚胎细胞抗菌肽对人髓样白血病细胞K562的杀伤作用

目的探讨家蝇胚胎细胞抗菌肽和高三尖杉酯碱(HHT)对人髓样白血病细胞K562的抑制、杀伤作用。方法采用脂多糖诱导家蝇胚胎细胞,提取抗菌肽。采用磷酸盐缓冲液(PBS)配制80、160、320及640μg/mL4个浓度,阴性对照组仅加入PBS和培养基。采用流式细胞术检测不同浓度抗菌肽对K562细胞周期和细胞凋亡率的影响。用处于对数生长阶段的K562和人脐静脉血管内皮细胞制备成浓度相同的2个药物组(HHT组和抗菌肽组),不加入药物的2种细胞作为正常对照组。采用流式细胞术检测正常对照组及2个药物组对2种细胞的有效杀伤率。结果 4个浓度组抗菌肽均使K562的S期降低,增殖指数降低,并引起G0/G1期升高,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。4个浓度组K562细胞凋亡率与阴性对照组相比差异无统计学意义(P0.05)。HHT组和抗菌肽组对K562的有效杀伤率显著升高,HHT组和抗菌肽组与正常对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。HHT组对人脐静脉血管内皮细胞的有效杀伤率显著高于正常对照组和抗菌肽组(P0.05)。结论家蝇胚胎细胞抗菌肽能有效抑制肿瘤细胞的生长,对正常人体细胞无抑制、杀伤作用。