青蒿素衍生物体外抗卡氏肺孢子虫作用的扫描电镜观察

目的 观察体外培养的卡氏肺孢子虫(Pc)经双氢青蒿素、青蒿琥酯作用后不同时相虫体表面结构变化。方法 将Pc接种入含HepG-2细胞的培养皿内并分别加入双氢青蒿素50μmol/L、青蒿琥酯100μmol/L、喷他脒15μmol/L、0.3％乙醇与空白对照。双氢青蒿素组于用药后1、2、4、8、12、16h作扫描电镜观察,后4组于用药后12h取样作扫描电镜观察。结果 双氢青蒿素作用2h后,Pc表面开始出现损伤,最初为表面绒毛脱落,残存绒毛肿胀呈球状,虫体体积增大。随着时间延长,虫体表面损伤明显,8h后表膜出现大小不等孔洞。青蒿琥酯组改变相同,但较轻微。结论 青蒿素衍生物可引起Pc虫体表膜损伤,通透性增加,功能障碍。     

青蒿素衍生物体外抗卡氏肺孢子虫作用的扫描电镜观察

目的 观察体外培养的卡氏肺孢子虫(Pc)经双氢青蒿素、青蒿琥酯作用后不同时相虫体表面结构变化。方法 将Pc接种人含HepG-2细胞的培养皿内并分别加入双氢青蒿素50μmo1／L、青蒿琥酯100μmo1／L、喷他脒15μmo1／L、0．3％乙醇与空白对照。双氢青蒿素组于用药后1、2、4、8、12、16h作扫描电镜观察，后4组于用药后12h取样作扫描电镜观察。结果 双氢青蒿素作用2h后，Pc表面开始出现损伤，最初为表面绒毛脱落，残存绒毛肿胀呈球状，虫体体积增大。随着时间延长，虫体表面损伤明显，8h后表膜出现大小不等孔洞。青蒿琥酯组改变相同，但较轻微。结论 青蒿素衍生物可引起Pc虫体表膜损伤，通透性增加，功能障碍。     

双氢青蒿素、青蒿琥酯治疗大鼠肺孢子虫肺炎的疗效研究

目的研究双氢青蒿素、青蒿琥酯对实验大鼠肺孢子虫肺炎的疗效.方法以醋酸可的松皮下注射Wistar大鼠诱导建立肺孢子虫肺炎动物模型,用双氢青蒿素、青蒿琥酯治疗实验大鼠,以蒿甲醚、复方磺胺为对照治疗组,通过存活率、存活天数、肺重、肺重/体重比值、肺印片的每视野包囊均数等指标考核疗效.结果双氢青蒿素30mg/kg×5d、60mg/kg×5d治疗组的大鼠存活率提高,存活天数延长,治疗后体重增加,肺重、肺重/体重比值、肺印片的每视野包囊均数低于模型对照组;青蒿琥酯60mg/kg×5d治疗组除存活率外,其余指标接近双氢青蒿素组;各治疗组的减虫率均高于60%,接近复方磺胺组的73.1%.结论双氢青蒿素、青蒿琥酯对大鼠肺孢子虫肺炎具有疗效.     

体外青蒿素衍生物抗卡氏肺孢子虫作用的PCR-SSCP分析

目的　研究双氢青蒿素、青蒿琥酯对卡氏肺孢子虫胸腺嘧啶合成酶基因 (TS)、二氢叶酸还原酶基因 (DHFR)的影响。方法　用不同浓度的双氢青蒿素、青蒿琥酯作用于体外培养的卡氏肺孢子虫。用药 7天后收集培养液提取卡氏肺孢子虫DNA ,分别进行PCR扩增 ,将扩增产物作DNA的单链构象多态性分析 (SSCP)。结果　卡氏肺孢子虫TS基因和DHFR基因的扩增产物分别为 40 3和 2 73bp。经青蒿素衍生物作用后TS基因、DHFR基因在溴化乙锭染色上的强度均有明显减少。继续作SSCP分析发现 ,用药组与不用药组对比DHFR基因DNA条带无明显差别 ,而用TS基因DNA条带中有一条带的位置发生改变 ,提示该基因可能出现变异。结论　SSCP分析结果提示青蒿素衍生物对卡氏肺孢子虫的DHFR基因结构无影响 ,而TS基因则可能出现部分变异。提示TS基因可能是该类药物抗卡氏肺孢子虫的机理之一     

青蒿素衍生物对卡氏肺孢子虫基因的影响

目的　研究双氢青蒿素、蒿甲醚、青蒿琥酯对卡氏肺孢子虫 5SrRNA基因、线粒体rRNA大亚基基因 (mtLSUrRNA)、胸腺嘧啶核苷酸合成酶 (TS)基因的影响。方法　以上述 3种药物治疗实验大鼠肺孢子虫肺炎 ,治疗结束后收集鼠肺 ,以酚 -氯仿抽提法抽提肺总DNA。以PCR方法扩增肺孢子虫的上述 3基因 ,以双脱氧末端终止法测定PCR产物的核苷酸序列 ,并研究双氢青蒿素对基因序列的影响。结果　 3种药物作用过的虫体均未见TS基因扩增产物 ,部分虫体无 5SrRNA基因、mtLSUrRNA基因扩增产物。经双氢青蒿素作用过的与正常肺孢子虫的 5SrRNA基因、mtLSUrRNA基因分别有16 5 %、15 .2 %序列差异。结论 3种青蒿素衍生物可破坏肺孢子虫TS基因。双氢青蒿素可致 5SrRNA基因、mtLSUrRNA基因序列发生变异     

双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫超微结构的影响

目的　观察双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫超微结构的影响。方法　以醋酸可的松皮下注射 Wistar大鼠 6周 ,诱导建立肺孢子虫肺炎动物模型 ,用双氢青蒿素治疗大鼠 ,并用电镜观察大鼠肺切片中肺孢子虫超微结构。结果　双氢青蒿素可使肺孢子虫滋养体胞浆及包囊内出现空泡 ,线粒体肿胀、核膜破裂、内质网肿胀 ,囊内小体溶解破坏等超微结构改变。结论　双氢青蒿素主要对卡氏肺孢子虫膜系结构产生破坏作用     

白果内酯抗卡氏肺孢子虫体外作用的研究

目的研究不同浓度白果内酯抗体外培养卡氏肺孢子虫的作用。方法接种卡氏肺孢子虫(Pc)于人肝癌细胞(HepG-2)。4h后加入试验药物和对照试剂。白果内酯浓度分别为:150、100、50、25、12.5μM/L;对照药喷他脒:15μM/L;以后每隔1d取1/10培养液观察,分别作对倍稀释PCR和六亚甲基四胺银(GMS)染色计数Pc包囊。结果卡氏肺包子虫在体外培养细胞上的生长高峰出现于第6d,对倍稀释PCR提示,白果内酯50μMol/L以上浓度对Pc均有抑制作用,白果内酯150μMol/L、100μMol/L对Pc的抑制率分别为91.67%和93.75%,与喷他脒95.83%之间比较,P>0.05,提示以上两浓度的白果内酯对Pc的抑制作用与喷他脒15μMol/L相似;白果内酯50μMol/L与各组间差异均有显著性,提示其作用优于空白对照组,而不及白果内酯100μMol/L组,同时随着药物剂量的增加其抗Pc的作用增强;药物对Pc包囊的抑制率白果内酯150μMol/L、100μMol/L分别为58.85%、53.62%,与喷他脒63.01%比较,P>0.05,提示这两个浓度的白果内酯对Pc包囊的抑制作用与喷他脒15μMol/L相似;其余浓度白果内酯与空白对照组间差异无显著性,提示这几种浓度的白果内酯对Pc包囊无明显的抑制作用。结论白果内酯在体外对Pc有明显抑制作用,白果内酯150μMol/L、100μMol/L对Pc的抑制作用与喷他脒相当。     

卡氏肺孢子虫的体外培养

卡氏肺孢子虫是引起各种免疫功能受损者肺炎的重要病原体，也是艾滋病患者致死性合并感染的最常见病原体之一，因此，年近来它受到国内外生物及医学界的重视，对其进行的研究越来越多，内容亦越来越深入。为了推动有关研究的发展，本文对国外近年来有关卡氏肺孢子虫体外培养进展情况加以综述，供研究者参考。     

卡氏肺孢子虫肺炎

本文就卡氏肺孢子虫肺炎的病原体 ,感染途径 ,临床表现 ,诊断治疗及预防等方面作一概述 ,为卡氏肺孢子虫肺炎的预防控制提供参考。     

双氢青蒿素对大鼠体内卡氏肺孢子虫作用的超微结构研究

目的 研究双氢青蒿素（DHA）治疗对大鼠体内卡氏肺孢子虫（PC）超微结构的影响。方法 以地塞米松磷酸钠对Wistar大鼠进行皮下注射，建立卡氏肺孢子虫肺炎（PCP）动物模型，用60mg／kgDHA治疗实验大鼠，杀鼠取肺，用透射和扫描电镜观察大鼠肺内PC的超微结构变化，并与感染对照组进行比较。结果 透射电镜发现PC滋养体表膜和核膜破裂，胞质中出现大量空泡和高电子密度颗粒，PC包囊中也出现空泡，囊内小体变性坏死；扫描电镜发现PC滋养体丝状伪足和微绒毛稀疏、变短甚至脱落，表膜出现缺损。结论 DHA可破坏PC滋养体和包囊。     

白果内酯治疗实验大鼠肺孢子虫肺炎电镜观察

目的　观察白果内酯对卡氏肺孢子虫超微结构的影响。方法　地塞米松连续皮下注射Wistar大鼠 6周 ,建立大鼠卡氏肺孢子虫肺炎动物模型 ,腹腔内注射白果内酯 30mg/(kg·d)× 8d。停药 1周后取大鼠肺组织作超薄切片 ,透射电镜观察。结果　白果内酯作用后的卡氏肺孢子虫虫体有大量空泡形成 ,细胞器肿胀破坏 ,髓样结构形成 ,胞膜破坏 ,胞质内出现电子密度较高颗粒。结论　白果内酯可破坏卡氏肺孢子虫的超微结构 ,从而引起虫体死亡。     

卡氏肺囊虫肺炎临床诊治的初步体会

目的提高对卡氏肺囊虫肺炎（ＰＣＰ）的认识。方法回顾性分析６例ＰＣＰ患者资料。结果６例ＰＣＰ基础疾病为白血病、淋巴瘤、肾移植和溶血性贫血。临床表现为呼吸困难、咳嗽和发热。Ｘ线表现为双肺弥漫性肺泡性或间质性改变或无改变。治疗首选复方新诺明（ＳＭＺｃｏ）和氨苯砜。３例并发呼吸衰竭，表现与成人呼吸窘迫综合征（ＡＲＤＳ）相似的低氧血症、肺内分流和顺应性下降。持续气道正压通气／呼气末正压通气（ＣＰＡＰ／ＰＥＥＰ）为常用模式。顽固性低氧血症可试用高水平（＞１４７ｋＰａ）ＰＥＥＰ治疗。结论卡氏肺囊虫肺炎并发急性呼吸衰竭者预后差，争取早期诊断与治疗是提高生存率的关键。     

瑞香素体外抗卡氏肺孢子虫作用的初步研究

目的研究瑞香素在体外抗卡氏肺孢子虫(Pneumocystiscarinii,Pc)的作用。方法建立Wistar大鼠卡氏肺孢子虫肺炎模型;分离、纯化虫体,进行体外培养。测定不同浓度的瑞香素体外抗Pc的作用,观察经FeSO4、MgSO4螯合后的瑞香素对虫体的生长影响情况。用透射电镜观察药物处理后的虫体超微结构改变。结果瑞香素抗Pc作用效应在1～20μmol/L浓度范围呈剂量依赖和时间依赖关系。10μmol/L瑞香素与1.0μg/ml喷他脒对Pc生长影响效果相当。若预先将瑞香素与FeSO4按21比例混合后,瑞香素对Pc的生长抑制作用大大减弱。瑞香素处理后的虫体的超微结构有改变。结论瑞香素在体外对Pc生长有抑制作用。     

卡氏肺孢子虫在八种细胞系上的增殖情况

目的　了解卡氏肺孢子虫在HepG 2 (人肝癌细胞 )等 8种细胞系的增殖状况 ,寻找适合卡氏肺孢子虫 (Pc)增殖的支持细胞系。方法　分别以 5× 10 5个虫体接种于 8种细胞系上。另采用HepG 2细胞 ,分别接种不同数量的Pc ,观察 7d ,比较Pc在不同细胞及不同接种数量的增殖情况。 结果　在HepG 2细胞上Pc滋养体可增殖 7倍左右 ,增殖高峰大多在第 4、5天。接种 5× 10 5个Pc ,包囊和滋养体均可较好增殖。结论　HepG 2细胞是较好的卡氏肺孢子虫体外培养支持细胞系 ,接种量以每孔 5× 10 5个Pc包囊为宜     

卡氏肺孢子虫特异性DNA探针的制备及其实验应用

目的制备特异、敏感的卡氏肺孢子虫(Pc)DNA探针,用于检测卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)患者临床标本中的PcDNA。方法PCR扩增获得Pc的线粒体核糖体RNA大亚基基因,以其为模板,采用随机引物法制备半抗原地高辛标记的探针。检测探针的敏感性和特异性后,用斑点杂交法检测实验大鼠肺组织和PCP患者临床标本中的PcDNA。结果敏感性检测显示该探针可检出2pg水平的PcDNA,特异性检测显示该探针仅与PcDNA杂交,而不与伯氏疟原虫、恶性疟原虫、弓形虫、人白细胞及正常大鼠肺组织DNA反应。斑点杂交检测PCP大鼠肺组织中的PcDNA,检出率为73.7%,低于PCR结合斑点杂交的检出率94.7%。用该探针从1例肾移植术并发PCP患者的支气管肺泡灌洗液中检测到PcDNA。结论制备的PcDNA探针具有敏感性高、特异性好、无放射性污染等优点,对PcDNA有良好的检测效果。     

大鼠肺孢子虫肺炎动物模型的实验研究

目的建立肺孢子虫肺炎(PCP)的大鼠实验动物模型。方法将34只雌性清洁级SD大鼠随机分成实验组和对照组,每组17只。实验组采取每周2次每次每只皮下注射地塞米松1mg诱导的方法建立PCP动物模型;对照组则注射与地塞米松等体积的灭菌生理盐水。所有大鼠的饮水中加入1g/L盐酸四环素预防继发性细菌感染。12周后解剖全部大鼠,并分别制作肺组织印片,姬氏染色,检查肺孢子虫包囊。同时制作肺组织病理切片,HE染色,观察肺组织的病理学变化。结果用地塞米松诱导大鼠5周,肺组织印片均查见肺孢子虫包囊,肺组织也出现典型的病理学改变。连续诱导12周,均未见实验鼠死亡。实验组大鼠体重下降明显,与对照组比较,差异有非常显著性(P<0.01)。结论应用皮下注射地塞米松免疫抑制诱导的方法可成功建立PCP的大鼠动物模型。     

锌对大鼠感染卡氏肺孢子虫的影响初探

目的探讨锌对大鼠感染卡氏肺孢子虫的影响。方法将30只SD大鼠随机等分为A、B、C三组。A、B二组每只大鼠皮下注射地塞米松1mg/次,每周2次,诱导感染卡氏肺孢子虫。B组同时给予硫酸锌。C组为对照组。第8周将各组大鼠处死,取肺组织印片,检查包囊。结果锌对诱导产生的大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的严重程度有所减轻。结论锌对大鼠感染卡氏肺孢子虫有一定影响,值得进一步深入研究。